圆二色光谱仪操作规程

MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程

1.测量波长小于210nm，需要对仪器进行氮气吹扫处理。打开氮气，调整流量

计流速为16.6L/min，通氮气几分钟。确认ALX-250的电源线插在氙灯的位置，并且氙灯已对准光路，具体操作见光源的选择操作说明。然后打开ALX-250光源开关，将氮气流量计流速设为6.6L/min，预热15分钟后，查看ALX-250面板显示，微调旋钮，将功率确定在150W，光源准备完毕。

2.测量波长大于210nm如果无需氮气吹扫，直接打开ALX-250电源，等待功

率稳定在150W后进行下一步操作。

3.打开ALX-250的同时，打开MM-450和PMS-450电源，一起预热15分钟。

4.将装有待测样品空白溶液（如水或缓冲盐）的石英池放入样品仓，盖上盖子，

（所用的石英池必须经过仔细的清洗）。

5.点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。

6.点击图1主界面的Device/Scanning Spectrometer，进入光谱扫描界面，如图2。

图1 图2

7. 在要测量波长的范围内取一个波长数值，输入到图2下方的Ex处，点击Enter

键。这时确认按钮变为，然后点击，自动调整HV电压，然后再点击按钮，锁定此电压值。

8. 点击主界面上方的按钮，选择光谱测量方法，如图3。

图3

Acquisition mode：选择测量模式CD。

Begin(nm)：扫描初始波长

End(nm）：扫描结束波长

Scan Repeat ：扫描次数

Acquisition duration：每个nm的测量持续时间，范围0.05s-20s。圆二色扫描

推荐值20s，建议最小大于1 s。

ShutterAutomatic mode：选择Always open，挡板处于始终打开的状态。

PM gain*10：当在非常低的信号测量，可选择此项，进行信号的增益。

CD parameters：CD的灵敏度，根据信号的振幅设置，有四个不同的选项，1000、

300、100和30 mdeg。

其他选项根据需要可以选择。

以上参数都设置好后，点击OK按钮，参数设置完成，回到主界面。

9. 空白的测量

点击图2主界面Blank spectum区域的Record按钮，记录第一步添加的空白样品谱图，空白谱图显示在主界面中。测量后选择Subtract复选框，将在随后的样品光谱的测量中扣除空白值。

10. 样品的测量

再点击按钮，关闭挡板，取出样品池，将空白样品换成被测样品，然

后再放回到样品支架上，盖好样品仓盖。这时再点击，打开挡板。点

击图2主界面Acquisition control区域的按钮，记录样品的园二色谱图，显示在图2主界面中。

11. 谱图的数据处理

第十步测量的谱图为样品园二色原始测量图，需要经过数据处理，得到优化的曲线图，操作如下：

选择主界面Analysis菜单，这时界面变为分析界面，选择Tools菜单下的Smoothing，Savitzky-Golay Smooth命令，如图4。

图4

点击Proceed按钮，这时经计算优化后的曲线出现在界面中。

12. 保存数据

选择主界面的File菜单下的Save As…，出现图5界面。

图5

选择要保存文件到哪个文件夹，并给文件命名，选择Save As Text，然后点击Save按钮，文件保存到指定的文件夹中。

13. 如果对园二色数据需要进行蛋白质二级结构分析，进行如下操作：

在BioKine软件中选择File菜单的Load data file命令，打开要进行分析的文件，然后选择File菜单的Exprot data to/Dicroprot file命令，如图6，导出数据文件为Dicroprot的文件。

图6

出现图7所示界面，选择导出数据要保存的文件夹并命名此导出数据，并根据测量的具体情况填入相应的信息，点击Export按钮，数据导出结束，关闭图7

界面。

图7

在http://dicroprot-pbil.ibcp.fr网站上下载蛋白质二级结构分析软件，然后将导出的数据在此软件中打开进行相应的二级结构分析。