唾液淀粉酶最适pH测定小论文
探究人唾液淀粉酶的最适PH
（碘-淀粉比色法）
摘要：唾液淀粉酶是由唾液腺分泌的一种水解酶，可作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖原等α-1,4-葡聚糖等，属于α-淀粉酶的一种。酶学与医学联系紧密，测定酶的最适pH，有利于我们把酶学知识运用于临床诊断与应用治疗。本实验尝试用碘-淀粉比色法测定唾液淀粉酶最适pH，加深对酶学知识的理解。
关键词：缓冲液；唾液淀粉酶；分光光度计
前言：人体内各种代谢反应，都离不开酶的催化作用，酶量的改变以及酶活性的改变都会引起人体化学反应的异常或紊乱，因此酶在人体内是否能发挥正常活性关系着人体内环境的稳定。而pH是影响酶活性的一个重要因素，因此，通过探究实验探究人唾液淀粉酶的最适pH，不仅可以检测我们的生物化学实验操作能力和探究能力，也可以加深我们对酶学知识的理解。
正文:
【实验原理】
酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，其化学结构上具有许多极性基团，在不同酸碱环境中，这些基团的解离状态不同，所带电荷也不同。只有当酶处于一定的解离状态，才能和作用物结合。因此，溶液的pH对酶活性影响很大。若其他条件不变，酶只有在一定的pH范围内才能表现出催化活性。在某pH时，酶催化活性最大，此pH称为酶作用的最适pH。当溶液的pH偏离最适pH时，酶活性降低，甚至失活。
淀粉经唾液中淀粉酶的水解，生成糊精和麦芽糖。在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其颜色深浅与空白管颜色的差值和唾液淀粉酶的活力成正比。
在底物过量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同、pH不同的条件下，越接近
最适pH的反应体系中酶活性越高，消耗淀粉的量越大，剩余淀粉与过量碘液生成的颜色
越浅，吸光度越小。本实验利用分光光度计测出各管的吸光度后，取处于降低与升高趋势
之间的较小吸光度范围对应的pH值即为唾液淀粉酶的最适pH。
【仪器与试剂】
仪器材料：试管架，试管，烧杯，一次性纸杯，移液枪，刻度吸管，洗耳球，胶头滴管，pH试纸，恒温
水浴箱，分光光度计
试剂药品：2.5g/L淀粉溶液，碘液，0.2mol/L NaH2PO4、0.2mol/LNa2HPO4，唾液，纯净水
【实验步骤】
1、唾液的获取
纯净水先漱口1～2次，然后含一大口水约2分钟，其间做咀嚼运动，然后将水和唾液一同收集至烧杯中。【1】
2、不同pH缓冲液的配制【2】
取8支试管，编号，按表1-1操作，再加蒸馏水至10mL。用pH试纸检测各缓冲液pH。（pH7.0的缓冲液配制2次）
表1-1 不同pH缓冲液配制（用量：ml）
试管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4
0.400 0.615 0.925 1.325 1.875 2.450 3.050 3.600 4.050 0.2mol/L
Na2HPO4
4.600 4.385 4.075 3.675 3.125 2.550 1.950 1.400 0.950 0.2mol/L
NaH2PO4
H2O 5.0
3、淀粉用量的确定
取5支试管，按表1-2淀粉用量进行配制，之后比较选出适当颜色深浅的那支试管。【3】
表1-2 淀粉用量的确定(用量：ml)
试管 1 2 3 4 5
pH 7.0缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L 淀粉液 0.05 0.1 0.2 0.3 - 稀释10倍唾液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
混匀，37℃水浴5min 后每管加2滴碘液
H 2O 2.95 2.9 2.8 2.7 3.0
混匀，观察现象，选颜色适中一支，并记录淀粉用量
实验结果：加碘液后加水，1号试管（-）颜色淡紫近无色，2号试管（+）颜色淡蓝色适中，3、4试管（++）蓝色较2号深，5号淡黄近无色（-）。即确定2.5g/L 淀粉用量0.1g 。
4、酶液稀释倍数确定【4】
取4支试管，按表1-3进行配制。
表1-3 酶液稀释用量 （用量：ml ）
试管
1 2 3 4 稀释倍数 酶液 H 2O
5 1.0 4.0
10 0.5 4.5
15 0.4 4.6
20 0.25 4.75
再取5支试管，按表1-4进行配制。
表1-4 酶液稀释倍数确定 （用量：ml ）
实验结果：1（近）、2（+）、3（++）、4（++）、5（++++）号试管蓝
试管
1 2 3 4 5 稀释倍数 5 10 15 20 空白 酶液
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 pH 7.0缓冲液 0.9
0.9
0.9 0.9 0.9
2.5g/L 淀粉
0.1 （由步骤3确定）
混匀，37℃水浴5min 后每管加2滴碘液
H 2O 3 3 3 3 3
混匀，观察现象，选适中一支，并记录稀释倍数【5】
色颜色依次逐渐加深，2号淡蓝色适中，即确定酶液稀释倍数为稀释
10倍。
5. 最适pH的确定
取9支试管，取步骤2的1-9管的缓冲液，根据表1-5进行配制。
表1-5 最适pH的确定（用量：ml）
试管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4
pH缓冲液0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉0.1（由步骤3确定）
0.1 0.10.10.10.10.10.10.10.1某稀释倍数酶液
（步骤4确定）
混匀，37℃水浴5min后每管加2滴碘液
H2O 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
混匀，用蒸馏水调零测定A660
吸光度A6600.183 0.212 0.359 0.323 0.238 0.206 0.192 0.262 0.263
用肉眼观察时，也能观察出1、2、5、6这几支试管颜色明显比其他
的浅，而且接近浅紫色而非浅蓝色，可能是淀粉已经被水解较多引
起淀粉不足而显示浅紫色。
6、数据记录和整理
以A660为纵坐标，pH为横坐标作图，找出唾液淀粉酶的最适pH值【6】。
【实验注意事项】
【1】唾液的获取在适宜时间后将纯净水和唾液一同放置于事先准备好的烧杯中即可，在实验过程中应注意酶的失活，为了防止此现象发生，如有条件可将此液体置于冰水中冷却。【2】本实验中准确配制相关溶液非常重要，溶液配制出错会极大的影响实验结果，为了避免这种情况，可采取小组明确分工，采用精细仪器，提高实验操作能力等手段。
【3】如果底物太少，与碘液几乎无现象，不能判断实验结果；如果底物过多，碘的颜色太深，又会掩盖实验反映出来的现象，所以要取浓度适中的底物浓度。
【4】本实验中测定酶的稀释倍数，是为了找出酶的最适稀释倍数，在该状态下，酶催化的作用最好，实验现象相对明显，有利于实验结果的测定。
【5】在确定最适稀释倍数时，若所有试管颜色都是蓝色或黄色或颜色梯度不明显，可以适当扩大或减少稀释倍数重新选取。
【6】若绘图时出现了数据偏差较大的点，要综合分析原因，并予以取舍，原则上绘图应不少于5个点。
【实验结果与结论】
以A660为纵坐标，pH为横坐标作图，如下：
实验结论：根据实验图像，处于大多数实验数据降低与升高趋势之
间的较小吸光度对应的pH为7.0。因此本实验人唾液淀粉酶的最适pH为7.0，在正常的唾液淀粉酶活性范围。
值得说明的是，第1组pH为5.8缓冲液相对应的吸光度值0.183在整个实验中已经严重偏离正常值，实验误差可能较大，比如pH为5.8的缓冲液配制出错或者pH不准(用pH 试纸粗测缓冲液pH时pH为6.4～7.2的缓冲液的pH比较准确，其他试管的pH偏差较大可以支持这个分析），也有可能是加碘液的时候该试管加的碘液相对少了如粘在试管壁没和溶液混合或者加碘液的时候每一滴的量不一致。因此，第1组数据作为逸出值处理，不在绘图中出现。
至于结果所得的图不是预料的标准Ｕ形图，在保证pH为7.0是最适pH这个前提下，误差数据就出现1、2两组，结合上述分析，极有可能是出现了操作误差甚至错误，但是当时回忆相关操作时并没有想到哪里出了问题，所以无法定论。
【实验误差分析】
1、不同pH缓冲液的配制时每种缓冲液的pH可能不严格对应，给最终结果带来较大的误差。在我们实验过程中，因移液枪不够，所以配制缓冲液要多次移液，用pH试纸粗测缓冲液pH 时pH为6.4～7.2这几支两种母液配比合适的缓冲液的pH比较准确，其他试管的pH都有一定偏差。
2、进行淀粉用量和酶稀释倍数确定实验时，水浴加热后再加碘液后，有些试管颜色肉眼难以分辨，加水稀释后如果加水过多又会稀释过度，因此带来了颜色判断上的困难，从而带来实验误差。在本实验中，发现原来设定加水稀释时的水的量就过多，从而导致了稀释过度，后来临时改了水的用量，颜色对比才比较明显。
3、本实验没有进行最适反应时间的探索，也可能给实验带来一定的系统误差。同时，由于滴加试剂的先后顺序不同，导致各个试管的加热时间和酶促反应时间可能存在些许差别。
4、本实验是小组合作实验，多人共同操作，由于不同同学的操作习惯、实验素养不一，加上关键仪器移液枪数量有限，可能存在一定的“混乱”，如漏加、多加、少加某些试剂，或者在滴加溶液时不慎把溶液滴在试管壁上，在配置不同pH缓冲液和测定唾液淀粉酶最适pH 中加入试剂时未混匀，都会造成一定影响。
5、不同人群的唾液淀粉酶存在个人差异，最适pH也相应地存在一定差异。而且本实验时间较长，酶活性可能会有变化，因此每一步的酶活性可能会有所区别，影响结果。
结语：
正如实验指导老师所言，探究实验重在实验过程中的发现问题和解决问题，能出结果最好，不能也不是非常要紧。我们小组本次探究实验中勉强可以得出结果，但是更重要的是从这次实验中对“实验”有了更多理解。
实践是检验真理的唯一标准，实验则是验证理论的重要途径，近现代很多重要理论都是通过实验去推翻或者证明的。
作为医学生，我们少不了“实验”，因此对我们的实验操作能力、反思总结能力都提出了很高的要求。而实验素养靠积累，在每一次实验中都能有所收获有所感悟，都能发现问题、解决问题，进而全面提升我们学生的实验能力和实验素养，为以后的进一步学习打下基础，或许是本探究实验的另一个重要目的。
参考文献
[1]吴耀生.医学生物化学与分子生物学实验指南.人民卫生出版社.2007年.
[2]查锡良，周春燕.生物化学.第8版.人民卫生出版社.
生物化学实验报告 题目：酶性质——最适pH选择 姓名：学号：班级：时间： 一、实验原理： 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH。高于或低于此pH时酶的活性逐渐降低。值得指出的是，不同的酶最适pH也不同，如胃蛋白酶的最适pH为1.5~2.5，胰蛋白酶的最适pH为8。 酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于同一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。如唾液淀粉酶最适pH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4~6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。 二、实验试剂： 1.0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液； 2.用0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液配制pH分别为5.4， 6.0，6.4，6.8， 7.2，7.6， 8.0的缓冲液。 表1 各pH值的缓冲液所需两种溶液配比 保温时间指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一段时间。摸准保温时间是实验的关键步骤之一。 取一支试管，加入0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液2ml，加入pH6.8磷酸氢二钠—柠檬酸钠缓冲液3ml，及稀释100~300倍的唾液2ml。充分摇匀后，放入37℃水浴中保温并记时，每隔1min用滴管取1滴混合液，至于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，待呈橙黄色时，为进一步确定保温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录所需保温时间。 若2~3min内，取出的保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数，若保温时间超过15min，说明酶活力太低，要提高酶的浓度。最佳保温时间8~12min以内，因此要掌握好唾液淀粉酶的稀释倍数，确定准确的保温时间才能进行下步实验。取7支试管按下表操作，保温时间参考以上操作：
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响 一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。 二、实验原理 酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。酶催化的反应称为酶促反应。生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。 能提高酶活力的物质，称为激活剂。激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。 酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。 食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。 本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。 三、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活力的影响
影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉 酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有 高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多 种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。 关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素 （一）实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 （二）实验原理 人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下： 淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖 淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。 淀粉与糊精无还原性，或还原性很弱，对班氏试剂呈阴性反应。麦芽糖与葡萄糖是还原性糖，与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。 唾液淀粉酶的最适温度为37-40°C，最适pH为6.8.偏离此最适环境时，酶的活性减弱。 低浓度的Cl-离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。Cu2+等金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。 （三）器材及试剂 1、器材：试管、酒精灯、烧杯、恒温水浴锅、量筒、冰浴、玻璃棒、试管夹、白磁板、试管架、铁三脚架、唾液淀粉酶 2、试剂：1％淀粉溶液、碘液、班氏试剂、0.4％HCl溶液、0.1％的乳酸溶液、1％NaCl溶液、1％CuSO4溶液、0.1％淀粉溶液 （四）操作步骤
[最新]测定唾液淀粉酶的最适ph值测定唾液淀粉酶的最适PH值 制作人:叶小晴学号:201140095 班组:15-4 学院:护理学院 摘要:酶催化活性最大时相应的环境PH称为酶促反应的最适PH值。虽然不同酶的最适PH值各不相同，但大多数酶的最适PH值接近中性，本论文主要在一定浓度、温度等条件下研究唾液淀粉酶的最适PH值，从而知道唾液淀粉酶的最适PH 值，进而了解影响酶的活性的因素。关键词:唾液淀粉酶、最适PH值、活性前言:生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质或核酸，酶是机体内最重要的生物催化剂。在不同PH条件下，酶分子的许多极性基团的解离状态不同，受到PH变化的影响，从而影响酶对它们的亲和力。PH还会影响酶的活性中心的空间构象，从而影响酶的活性，因而PH的改变对酶的催化作用影响很大。 材料与方法: 1、材料:唾液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水、温水、 试管、试管架、洗耳球、烧杯、胶头滴管、水浴箱、分光光度计、吸量管、坐标纸 2、方法:(1)缓冲溶液的配置:根据各个PH值的缓冲溶液(用量:ml)表 1: PH5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 值 磷酸0.40 0.62 0.93 1.33 1.88 2.45 3.05 3.60 4.05 4.35 4.58 4.74 氢二 钠 磷酸4.60 4.39 4.08 3.68 3.13 2.55 1.95 1.40 0.95 0.65 0.43 0.27 二氢
钠 蒸馏5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 水 (2)唾液的获取:温的水漱口，将蒸馏水含于口中2min后吐于烧杯中，取5ml 唾液20ml水配成1/5的唾液，从中取5ml的1/5的唾液再加入10ml水配成1/10 的唾液。 (3)测量PH:取12支管，分别标上1~12，按下表操作: 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1/50.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 唾液 淀粉0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 溶液 0.5ml5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 缓冲 溶液 PH 蒸馏3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 水 表2: 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1/100.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 唾液 淀粉0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 溶液 0.5ml5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 缓冲 溶液
淀粉酶活力测定实验报告 淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告 实验四、淀粉酶活性的测定 一、实验目的: 1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义; 2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。 二、实验原理: 淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。 淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。 三、实验用具: 1、实验设备 研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热 恒温水浴锅，离心机，电磁炉。 2、实验材料与试剂 (1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至 1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。 (2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6
的柠檬酸缓冲液; (3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入; (4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中; (5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用 0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至 6.8，加水稀释至1000ml即得。 (6)0.4mol/L的NaOH溶液; (7)1%NaCl溶液。 (8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm) 四、操作步骤 1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。取上清液1.0ml，用pH 为6.8的缓冲溶液稀释5倍，所得酶液。 2、a- 淀粉酶活力测定 (1) 取试管4支,标明2支为对照管,2支为测定管。 (2) 于每管中各加酶液lml ,在 70?士0.5? 恒温水浴中准确加热15min ,取出后迅速用流水冷却。 (3) 在对照管中加入4m1 0.4mol/L氢氧化钠。 (4) 在4支试管中各加入1ml pH5.6的柠檬酸缓冲液。 (5) 将4支试管置另一个40?士 0.5? 恒温水浴中保温15min ,再向各管分别加入40?下预热的1,淀粉溶液 2m1,摇匀,立即放入40?恒温水浴准确计时保温 5min。取出后向测定管迅速加入4ml 0.4mol/L氢氧化钠,终止酶 活动,准备测糖。
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文 唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。 二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦
芽糖+少量葡萄糖 加碘后：蓝色 紫红色 暗褐色红棕色 黄色 三、试剂与器材 影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉 酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有 高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多 种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。 关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素 实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 实验原理 人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：03 淀粉酶活性的测定 一、研究背景及目的 酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。 α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内 二、实验原理 萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在下则发生钝化。本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。 酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。 在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过程中，四支测定管及空白管不要混淆。
酶性质——最适PH选择 姓名：任建南 学号：201300140073 班级：13级生科四班 同组者：周光明 时间：2015年5月25日 【实验目的】 1、熟悉并掌握用酶最适PH选择的方法。 2、学会寻找酶最适反应时间的方法。 【实验原理】 酶的催化活性与环境PH有密切关系，通常各种酶只在一定PH范围内才有活性，酶活性最高时的PH，称为酶的最适PH。高于或者低于此PH时酶的活性逐渐降低。值得指出的是，不同的酶最适PH也不同，如胃蛋白酶的最适PH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适PH为8.0。 酶的最适PH不是一个特征性的物理常数，而对于同一个酶，其最适PH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。如唾液淀粉酶的最适PH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适PH为6.4-6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。 【实验试剂】 1.0.3%NaCl‘ 2.0.5%的淀粉 3.用0.2M Na2HPO4和0.1M的柠檬酸溶液配制的PH为5.4、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8.0的缓冲液 【实验步骤】 1、确定合适的保温时间 保温时间是指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一般时间。 取一支试管，加入0.3%NaCl、0.5%淀粉各2ml，PH6.8的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液3ml和稀释
100-300倍的唾液2ml，充分摇匀，放入37度水浴保温。 计时，每隔1min滴一滴混合液于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，呈橙黄色时，加一滴碘液于试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录保温时间。 若2-3min内，保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数。若保温时间超过15min，说明酶活力太低，需要提高酶的浓度。最佳保温时间为8-15min内。 2、确定最适PH 取7支试管按下表操作，保温时间参考步骤1 从各管呈现的颜色，判断不同PH对淀粉水解和淀粉酶活性的影响，并确定其最适PH。 【实验结果】 实验用唾液淀粉酶稀释倍数为200倍，PH 6.8 37°C水浴的时间7min，各试管最终试剂颜色依次深→浅→深，且PH为6.8时颜色最浅，可见唾液淀粉酶最适PH在6.8左右且过高或者过低都会使其活力下降 【思考讨论】 结果分析： 由颜色梯度可以看出，在PH=6.8时，加入碘液后混合液的颜色最浅，因此，唾液淀粉酶的最适PH为6.8，PH值高于或者低于6.8，唾液淀粉酶的活力都会受到抑制。 注意事项： （1）本次实验成功的关键点之一就是缓冲溶液，一定要保证加入的Na2HPO4和柠檬酸的体积完全符合要求，并且充分混匀。 （2）实验操作过程中，一定要保证唾液淀粉酶酶液一直处于低温状态，这样有利于保证酶的活力，可以防止酶失活。
唾液淀粉酶最适pH值的测定 陆绍龙 广西医科大学七年制临床医学10级4班 摘要：目的：1）掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理；2）熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用；方法：通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉，测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值，根据实验数据判断酶的最适pH；结果:当pH=6.6时，唾液淀粉酶的活性最高。 关键词:唾液淀粉酶 pH 分光光度计 前言：酶学与医学的关系密切。人体的许多疾病和酶都密切相关。酶分子中的许多极性基团，在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。此外，pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。人的唾液中99%是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水分解为麦芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内，唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。食物进入胃后，唾液淀粉酶还可继续使用一段时间，直至胃内容物变为pH值约为4.3~4.8的酸性反应为止。 正文： 1.材料与方法： 仪器：吸量管（5mL，1mL），试管若干，试管架，小烧杯，洗耳球，721G-722G分光光度计，恒温箱（含温度计），一次性纸杯，pH试纸。 试剂：2.5g/L淀粉，0.2mol/L Na2HPO4溶液，0.2mol/L NaH2PO4 溶液,蒸馏水，唾液，碘液。 2.操作步骤 1）1. 不同pH缓冲液配制 按下表加样，最后加蒸馏水稀释至10ml。
报告编号：YT-FS-5572-78 唾液淀粉酶活性观察实验报告范本(完整版) After Completing The T ask According To The Original Plan, A Report Will Be Formed T o Reflect The Basic Situation Encountered, Reveal The Existing Problems And Put Forward Future Ideas. 互惠互利共同繁荣 Mutual Benefit And Common Prosperity
唾液淀粉酶活性观察实验报告范本 (完整版) 备注：该报告书文本主要按照原定计划完成任务后形成报告，并反映遇到的基本情况、实际取得的成功和过程中取得的经验教训、揭露存在的问题以及提出今后设想。文档可根据实际情况进行修改和使用。 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。 二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此
时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH 值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色 三、试剂与器材 这里填写您企业或者单位的信息 Fill In The Information Of Your Enterprise Or Unit Here
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 小组成员:刘倍材何标才揭春晓李芮 实验目的： 1.掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 2.掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。 3.熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理： 1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm 处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH 对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。
实验步骤： 1.缓冲溶液的配制。取12支试管进行编号1-12，分别按下表加入试剂。 2.唾液的采集。 先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。 3.唾液的稀释。取10支试管，进行编号1＇-10＇,进行稀释。
4.唾液稀释倍数的选取。 另取10支试管，分别编上A-K号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。 5.最适PH的测定。 另取12支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。
淀粉酶活力的测定 一、目的 学习和掌握测定淀粉酶（包括a -淀粉酶和B -淀粉酶）活力的原理和方法。 二、原理 淀粉是植物最主要的贮藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。淀粉酶主要包括a -淀粉酶和B -淀粉酶两种。a -淀粉酶可随机地作用于淀粉中的a -1,4- 糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。B -淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使 3,5- 二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5- 硝基水杨酸，其反应如下： 淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。 淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是a -淀粉酶和B -淀粉酶。两种淀粉酶特性不同，a-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化。B -淀粉酶不耐热，在70C 15min钝化。根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。本实验采用加热的方法钝化B -淀粉酶，测出a-淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（a -淀粉酶活力+B -淀粉酶活力），再减去a -淀粉酶的活力，就可求出B-淀粉酶的活力。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1 ．实验材料 萌发的小麦种子（芽长约1cm） 2．仪器 （1）离心机（2）离心管（3）研钵（4）电炉（5）容量瓶：50mL X 1,100mL X 1 （6）恒温水浴（7）20mL具塞刻度试管X 13 （8）试管架（9）刻度吸管： 2mL X 3,1mL X 2,10mL X 1 （10）分光光度计 3．试剂（均为分析纯）
碘-淀粉比色法测定唾液淀粉酶 一 实验目的 1、 掌握比色法测定a-淀粉酶的原理； 2、 掌握分光光度计的正确使用方法； 二 实验原理 1、比色法作为一种定量分析的方法，是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯-比尔定律 (A ＝εbc)为基础。 2、血清中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1，6糖苷键支链的糊精。 ａ-淀粉酶 淀粉 葡萄糖+麦芽糖+糊精 + 碘液 蓝色复合物 在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而推算出淀粉酶的含量。 3、酶活力的大小、即酶量的多少用酶活力单位（U ）（active unit ）表示。1961年国际生物化学学会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”（IU ）来表示酶的活力，规定为：在最适条件（25℃）下，每分钟内催化1微摩尔（μmol ）底物转化为产物所需的酶量定为一个活力单位，即1IU = 1μmol /min 。这样酶的含量就可用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶活力单位来表示（U/g 或U/ml ）。 4、 计算公式： A A 1.65100AMY A 55X -=???空白管吸光度测试管吸光度空白管吸光度 其中，A A A -空白管吸光度测试管吸光度 空白管吸光度 代表测定管淀粉的大致水解程度，大小范围为0～l 。当测定管淀粉未被水解时，其蛋白酶活性为0；当测定管淀粉被完全水解时，其值为1。1.61515151100 X ????中，5151100??”为碘一淀粉比色法中淀粉酶活性的单位定义-100ml 唾液中的淀粉酶，在37度5min 水解淀粉5mg 为1个单位，1.6151X ??表示实验的测试条件：X 代表稀释后的唾液量，稀释倍数根据个人的情况而定，若50倍稀释唾液0.1ml ，则唾液量为0.002ml ，反应时间为5分钟，1.6g/L 淀粉溶液1.0ml ，即淀粉量为1.6mg 。1.61515151100 X ????含义即为在实验条件下， Xml 唾液中的淀粉酶在5分钟内水解1.6mg 淀粉，则其活性为32/X 个单位，再将其乘以水解程度，则整个公式代表了测定管淀粉酶的活性。 三 仪器与试剂 仪器：分光光度计及1cm 比色皿；吸量管；水浴锅；量筒；移液器等
唾液淀粉酶的性质和活力测定 一．实验目的 （一）1 通过唾液淀粉酶性质的测定，了解酶的专一性和多种因素对酶粗反应的影响，pH，底物浓度，温度，激活剂，抑制剂等 2 学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定，加深对概念的理解； 3 学会用考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量，学会用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的含量，熟练操作分光光度计。 二．实验试剂和器材器材：可见光分光光度计，试管，移液管，恒温水浴锅，pH 试 纸，1000ml 容量瓶和100ml 的容量瓶各一只；药品：可溶性淀粉，考马斯亮蓝试剂G-250，3,5-二硝基水杨酸， NaoH,HCL ，标准牛血清白蛋白溶液，醋酸，醋酸钠，蒸馏水，95% 乙醇，85%磷,;0.15molNaCL/ml, 0.15mol/L硫酸铜溶液，碘化钾- 碘溶液：将碘化钾20 克和碘10 克溶解在100ml 水中，使用前稀释10 倍。 注：（1 ）考马斯亮蓝G-250 试剂：考马斯亮蓝试剂G-250100mg 溶于95%乙醇中，加入100ml85%磷酸，加水稀释至1000ml,过滤即 可。 （2）标准牛血清白蛋白溶液：结晶牛血清白蛋白用凯式定氮法测蛋白含量,根据其纯度用0.15mol/L Nacl 配置成0.1mg/L 的蛋白液； （3）配置0.01%g/ml,0.1%g/ml,, 0.5%g/ml,1%g/ml,2%g/ml,3%g/ml 的的溶性淀粉溶液;
（4）配置一系列pH2的缓冲溶液 0.2MOI/L磷酸氢二钠溶液为28.40g/L,Mr=141.98,称取2.84g溶于100ml的水中 0.1MOI/L 柠檬酸溶液21.01g/I,Mr=210.14,称取2.1 溶于100ml 水中; 锥形瓶 号0.2MOI/L磷酸氢二钠 （毫升） 0.1MOI/L柠檬酸 （毫升） 缓冲液pH 10.419.60 2.2 2 4.1115.89 3.0 37.7112.29 4.0 410.309.70 5.0 511.158.85 5.4 612.097.91 5.8 713.22 6.78 6.2 814.55 5.45 6.6 916.47 3.537.0 1018.17 1.837.4 1119.150.857.8 1219.450.558.0 5配置0.15moI/L的NaCL溶液和0.15moI/L硫酸铜溶液 三.实验步骤 （一） 1 pH的对酶的影响 1）葡萄糖标准曲线的制定 准确称取100mgAR纯的葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容于100ml的容量瓶中，配成1.0mg/L的溶液，水浴加热5min，迅速取出冷却，在向每管加入21.5ml的蒸馏水于550nm处测吸光度;
唾液淀粉酶的活性观察 【实验目的】 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性。 2.掌握酶定性分析和注意事项。 【基本原理】 酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，具催化率比一般催化剂高106~1013。在生物体内，过氧化氢酶能催化过氧化氢很快地分解成为H2O和O2，使H2O2不致在体内大量积累。铁粉也是过氧化氢分解反应的催化剂，但其催化效率仅为过氧化氢的100亿分之一。 酶的催化作用受到温度的影响。在一定的温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至最大值。由于酶是一种蛋白质，温度过高会导致酶的失活，因此，反应速度到达最高值以后，温度继续升高，酶促反应速度反而急剧下降，直至完全停止酶促反应。反应速度达到最大值时的温度称为酶作用的最适温度。 酶活性受环境pH值的影响。通常各种酶只有在一定的pH值范围才表现出活力。酶活性达到最高的pH值，称为最适pH值。低于或者高于最适pH值时，酶的活性均降低或者失去活性。唾液淀粉酶的最适pH值为。 酶活性受环境中某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂。值得注意的是，激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，%的氯化钠是唾液淀粉酶的激活剂，但氯化钠达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活力。 本实验以唾液淀粉酶为材料来观察环境因素对酶活性的影响情况。唾液中含有α-淀粉酶，该酶属于内切酶。淀粉在该酶的催化作用下或随着时间的延长而出现不同程度的水解产物，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等产物。 而碘液能指示淀粉的水解程度，淀粉及淀粉不同程度的水解产物遇到碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，而麦芽糖遇碘液则不呈颜色反应。如图所示： 淀粉酶淀粉酶 淀粉紫色糊精暗褐色糊精红色糊精麦芽糖+少量葡萄糖 加碘后：
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 实验目的 1．掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。 3．熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理 1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。
实验器材 仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。 试剂药品：0.02％淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。
实验步骤： 1、缓冲液的配置 pH 0.2mol/L 0.2mol/L NaH2PO4(ml) Na2HPO4(ml) 5.7 93.5 6.5 5.8 92.0 8.0 5.9 90.0 10.0 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85.0 15.0 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51.0 49.0
淀粉酶活力的测定方法 淀粉酶主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和R-酶，它们广泛存在于动物、植物和微生物界。不同来源的淀粉酶，性质有所不同。植物中最重要的淀粉酶是α -淀粉酶和β-淀粉酶。 α -淀粉酶随机作用于直链淀粉和支链淀粉的直链部分α -1,4糖苷键，单独使用时最终生成寡聚葡萄糖、α-极限糊精和少量葡萄糖。Ca 2+能使α-淀粉酶活化和稳定，它比较耐热但不耐酸，pH 3.6 以下可使其钝化。 β-淀粉酶从非还原端作用于α-1,4糖苷键，遇到支链淀粉的α -1,6键时停止。单独作用时产物为麦芽糖和β-极限糊精。β-淀粉酶是一种巯基酶，不需要Ca 2+ 及Cl —等辅助因子，最适pH偏酸，与α -淀粉酶相反，它不耐热但觉耐酸，60 ℃保温15min 可使其钝化。 通常提取液中α -淀粉酶和β-淀粉酶同时存在。可以先测定（α + β）淀粉酶总活力，然后在60 ℃加热15 min ，钝化β-淀粉酶，测出α -淀粉酶活力，用总活力减去α - 淀粉酶活力，就可求出β- 淀粉酶活力。 淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5- 二硝基水杨酸的显色反应来测定。还原糖作用于黄色的3,5- 二硝基水杨酸生成棕红色的3- 氨基-5- 硝基水杨酸，生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比。以每克样品在一定时间内生成的还原糖（麦芽糖）量表示酶活大小。 1 酶活测定方法 （1）标准曲线的制作(见下表) ①取7支20 ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号,按表加入试剂。②摇匀,至沸水浴中煮沸5 min。取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20 ml,以1号管作为空白调零点,在520 nm的波长下比色测定吸光度值。并建立通过吸光度值求麦芽糖含量的回归方程。 表1 标准麦芽糖溶液成分表及OD测定值 试剂 1 2 3 4 5 6 7 麦芽糖标准液（mL）0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 H2O（mL） 2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 0 3,5-二硝基水杨酸（mL） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 麦芽糖含量（mg）0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 OD520 (2)粗酶液淀粉酶活力测定 ①待测粗酶液的制备： 发酵24 h后发酵液4000 r/ min离心10 min,去除菌体，在上清液中加入65％饱和度的硫酸铵，待硫酸铵充分溶解后于4℃盐析2h，然后5000r/min离心20min，得到初步
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文 篇一：唾液淀粉酶活性观察实验报告 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。 二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色
三、试剂与器材 篇二：唾液淀粉酶活性的测定 影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉 酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有 高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多 种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。 关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素 （一）实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 （二）实验原理 人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下： 淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖 淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 实验目的： 1、掌握用碘-淀粉比色法的方法精测唾液淀粉酶最适pH值。 2、学会常用的缓冲溶液配制的方法。 3、进一步熟悉分光光度计的使用。 一、实验原理： 1、酶催化活性最高时反应体系的pH值称为酶的最适pH值。人体正常唾液pH值为6.6～7.1，吸光度值在6.0～8.0范围内并且随着pH的增大先减小后增大。 2、在不同pH条件下，淀粉经淀粉酶水解后不同程度的水解产物能与碘液反应呈现不同颜色，可用分光光度计测量出反应后各溶液在660nm 处的吸光度A，由朗伯－比尔定律可知，吸光度A值越大，其相应的酶活力越低，从而可间接得出唾液淀粉酶的最适pH值。 三、仪器材料和试剂： 仪器材料： 1. 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、烧杯、漱口水 2. 37 C恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴 3.1ml吸量管、5ml吸量管，胶头滴管、100ul移液器 实验试剂： 0.02％淀粉溶液、 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水
四、实验步骤： 1、试剂的配制： 0.02％淀粉溶液—取2.5g/L的淀粉溶液4ml，置于50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释到50mL。 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液—准确称取14.200g，加入20ml蒸馏水溶解在烧杯，然后置于500ml容量瓶中稀释至刻度备用。 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液—准确称取12.000g，加入20ml蒸馏水溶解在烧杯，然后置于500ml容量瓶中稀释至刻度备用。 根据下表，混合溶液至50.00ml后用蒸馏水稀释到100.00ml. pH 值 0.2mol/LNa2HPO4(ml)（丁） 0.2mol/LNaH2PO4 (ml)（霞） 5.8 4.00 4 6.00 6.0 6.15 43.85 6.2 9.25 40.75 6.4 13.25 36.75 6.6 18.75 31.25 6.8 24.50 25.50 7.0 30.50 19.50 7.2 36.00 14.50 7.4 40.50 9.50 7.6 43.50 6.50 7.8 45.75 4.25 8.0 47.35 2.65
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇 An experimental report on salivary amylase activity
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇 小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。本文档根据实验报告内容要求展开说明，具有实践指导意义，便于学习和使用，本文下载后内容可随意修改调整及打印。 本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】 1、篇章1：唾液淀粉酶活性观察实验报告文档 2、篇章2：唾液淀粉酶活性的测定文档 3、篇章3：淀粉酶活性测定实验报告文档 篇章1:唾液淀粉酶活性观察实验报告文档 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。
二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色