PCR仪操作说明
Mastercycler Personal PCR仪操作手册
1 简介
Eppendorf的Mastercycler Personal是适用于所有分子生物学和生化实
验室研究的PCR仪。
样品温度在4-90度间快速可调（最大速度每秒3度）。
设计有特殊的“离心管控制”模式，从而对装有不同体积溶液的不同离心管中的样
本进行温度控制。
加热槽为一通用模块，可适用5X5的微孔板、25个0.2ml的Eppendorf PCR管、16个0.5ml薄壁的Eppendorf PCR管或其他相应的试管，而无须更换模块。
为避免样本蒸发浓缩，本仪器设计有可适应各种试管高度的热盖。
本仪器易于操作，有完整的八线显示，并可连接打印机。
Mastercycler Personal是Perkin-Elmer公司授权许可生产的PCR仪。
2 安全警告
3 安装
3.1 包装
一个包装内应含有以下物品：
1台小型PCR仪
1条主电源线
1本操作指南
1张个人存储卡
1包0.2mlPCR管（100个）
3.2 装机
安装时请确保通气孔通畅，四周有足够的空间散热；并请确保仪器下部无其他异物。
搬动仪器时无须其他装置，可抓住仪器两侧将其提起。
所需空间：宽18cm
深：35cm
高：25cm
电源连接：1个防电击插座。
如需连接打印机，则需用另一电源连接。
3.3 启动仪器
拆除热盖上的胶条并取出热盖下的泡沫塑料。
连接电源线。启动仪器前请核对用户电源是否与铭牌要求相符。
连接和启动打印机的步骤见第9部分。
4 技术说明
4.1 仪器结构
图1：前面观
1 热盖
2 热盖锁
3 显示与控制面板
4 个人存储卡读取器
图2：侧面观
图3：背面观1
热盖
2 加热槽（此图中未显示）
3 通气孔
4 PC连接插孔
5 打印机连接插孔
1 通气孔
2 主电源开关
3 保险丝
4 主电源插孔
5 铭牌
图4：显示与控制面板
1 编辑键
2 光标键
3 控制键
4 小数点和顺序颠倒标志键
5 显示屏
4.2 按键
1、编辑键
Opt —在运行过程中按opt键可显示程序运行的剩余时间
—编程时选择温度指令（ramp、梯度、增量）
Del —删除程序条，数据字母或重新设定参数：按住此键可删除整条信息
Sel —选择程序指令
—选择菜单信息
—可选择字母（用±键决定正逆序）
Ins —在程序编辑中插入程序条
2、光标键▲?▼?
用于移动光标，显示为黑色方块。
—选择某菜单时将光标移至该菜单，按Enter键确认
—也可用于移入和改变间隔，字自动存储，无须Enter确认，可立即储存
3、控制键
Exit —退出当前菜单或返回更高一级菜单
—启动程序后退出该程序的显示，可以回到编程状态
Enter—调用光标选中的菜单功能
—确认输入
Start/Stop—直接启动FILES/Edit状态下的程序：若要启动其他程序须在“Start”菜单
下进行
—取消或中断程序
4.3 菜单结构及显示
打开仪器后部的主开关。屏幕显示仪器名称和软件版本，随后显示主菜单。
5 菜单描述
5.1 主菜单（MAIN MENU）
Start 启动程序
菜单目录名
子目录名
运行中程序名
时间
热盖温度
设定/实际温度
FILES 编辑
OPTIONS 系统设置
Lid 预热热盖
Incubate 温育
大写字母标注的目录下有子目录，为方便查找，共有三种方法选择目录子目录，目录名或标题显示在屏幕左边，（1）用光标选择，按Enter确认；（2）用Sel选择，按Enter确认；（3）用内部位置号选择，按Enter确认。
Exit键用于退出当前状态，连按数次可回到主菜单。
完整的菜单结构为
Start （1）
FILES （2）——Edit
Load
Standard
New
Delete
OPTIONS (3)------ Editor
Printer
GENERAL------Clock
Remote
Sound
Etc.
VAL
LID (4)
Incu (5)
5.2 启动（START）
启动程序需在“START”菜单下进行。
显示为进行水平（processing level）的程序可由直接按压“START/STOP”启动。“START”菜单下无子目录。选择“START”后以“ENTER”键确认，则进入该目录下，用光标选择所需启动的程序，按“ENTER”键确认，可启动此程序。
5.3 文件编辑（FILES）
“FILES”菜单用于修改、下载、新建或删除某程序。
5.3.1 编辑（EDIT）
用于修改已有的程序。被修改的程序或者已处于进行水平，或者可由“LOAD”菜单下载为进行水平的程序。这些程序可来源于主机存储器或个人存储卡。
修改后的程序可在保存为新名称后通过按“START/STOP”键进行检测。该程序保存后在进行水平的程序不会被删除。注意：如果某一程序被修改而未被存于新文件名下，被启动时将有两个不同的程序具有相同的名称（其一存于仪器内存中，另一处于进行水平）。
5.3.2 下载（LOAD）
用于调出已存的程序清单（包括仪器内存和个人存储卡中的程序）。选出的程序被下载到“EDIT”进行水平。
如果使用者不保存原程序，则下载新程序后原程序被覆盖。
5.3.3 标准程序（STANDARD）
随机储存一个名为“STANDARD”的样板程序，有新程序下载时该程序被覆盖。该程序可被用于模板进行修改从而编辑新的程序。
5.3.4 新建（NEW）
“NEW”用于编辑新的程序。PCR仪缺省显示CNTRL BLOCK，Lid=0°，NOWAIT AUTO，程序名自动起名为UNNAMED。
5.3.5 删除（DELETE）
可从内存或个人程序卡上删除程序，屏幕上显示程序清单，用光标选中某程序后按Enter可删除该程序。
5.4 系统设置
“OPTIONS”菜单用于定义程序编辑器、打印机、时间/日期等常用系统参数的设置。通过“SEL”键选择YES/NO，ON/OFF及其他设置。
按“ENTER”键可退出该菜单。
5.4.1 编辑器（Editor）
YES：屏幕上显示多种参数（温度增量、时间增量、RAMP、RAMP增量、梯度）
NO：只显示设定温度和循环时间。
5.4.2 打印机（Printer）
仅在连接打印机后方可进入。
“PRINT OUT EDITOR”：选择“YES”时可打印处于“编辑”菜单下进行水平的程序。“PRINT PROTOCOL”：选择“ON”则在程序启动时打印出指令；在运行时打印每一完整
的指令和时间。
5.4.3 常用系统设置
CLOCK Format：用Sel键选择24小时制/12小时制
Time：当前时间，时：分：秒
Date：当前日期，日/月/年
REMOTE 波特率：以“SEL”选择传输速率。
SOUND Keyclick ON：敲击键盘有声响
OFF：敲击键盘无声
Warning ON：报警时声音文字同时出
OFF：报警时无声音
ETC Start with MAIN：接通电源后屏幕显示主菜单
LAST：接通电源后屏幕显示上次关机前的菜单
Auto restart YES：断电后如果电源在3分钟内重新接通，正在执行的程序会继续运行
NO：程序运行时断电该程序终止。
VALID…用于校准仪器。
5.5 热盖（LID）
用于对热盖进行预热。
5.6 温育（INCUBATE）
用于温育实验或预热加热槽。
6 操作
6.1 准备
6.1.1 加样
加样槽适用于三种试管：25个0.2ml试管，16个0.5ml薄壁管（Eppendorf管）或一个
5X5微孔板。为了使温度传递良好建议使用V型底的试管。试管应与加热槽紧密接触，并有耐
120度高温的能力。
6.1.2 加样量
温度控制可选择针对加热槽或样品。如果选择控制样品温度，本机要求样品加样量不超过100ul（针对0.5ml管）或50ul（针对0.2ml管和微孔板）。使用CNTRL TUBE指令，参数可调整至符合实际的加样量和试管型号。
6.1.3 加热热盖
加样后盖上热盖，并根据使用的试管不同类型，把热盖锁在相应的位置上。因此不同类
型的试管不能同时加盖，这种情况下要求使用油膜。
使用热盖可防止试管内液体蒸发浓缩，样品不必用油膜覆盖。热盖温度可由程序自动控制（最大110度）或设置，另可设置WAIT/NOWAIT（是否等待热盖升温后在启动程序）指令。注意：不要触摸热盖内表面和加热槽表面，以免烫伤。
6.2 打开仪器
打开仪器后面的主开关，屏幕显示仪器型号和软件版本及主菜单。
6.3 启动/停止程序
处于进行水平的程序可直接按START/STOP键启动。
启动其他程序时，用光标选中Start状态，按Enter确认。屏幕显示程序清单，光标停在
刚执行过的程序名前，将光标移到要执行的程序前，按Enter可直接启动。在程序运行期间程序名和Running交替显示，主菜单上Start变成Stop。用Stop指令可在任意位置中止暂停或继续运行程序，Start/Stop键同样适用。
如果程序设置为“CNTRL TUBE”，则在启动后需选择所用PCR管的大小、类型和管内容
物的体积。
6.4 显示程序运行时间
按压“opt”键可在程序运行时显示运行时间和程序结束时间，opt键只在程序运行时按压有效，在主菜单、其他菜单及子菜单状态下按压无效。
6.5 暂停程序的运行
按Start/Stop键或调出Stop！…用Sel选择Pause…确认后程序中断。
6.6 结束暂停
要想继续执行只需按Start/Stop键或调出Stop！，用Sel选择Resume确认。
6.7 终止程序
按Start/Stop键或调出Stop，Enter确认后程序终止。
6.8 关断电源
程序结束后按Exit键退回主菜单，关断电源即可。
7 编程
内存中最多可存100个程序，程序存储数量与程序长度有关。
使用“SEL”键选择字母和不同的编程语句。程序名由数字或字母定义（最多8位）。
7.1 程序指令
7.1.1 CNTRL
控制加热槽或样品温度。参数设置可选
BLOCK：设置温度与加热槽温度有关
TUBE：仪器可自动根据试管型号和加样量大小调整温度使管内液体达到所设
温度，因此程序启动后相关数据应立即输入。
7.1.2 LID
LID指定热盖温度，如果设0度则温度功能关闭。设置范围0-110度。参数可选：
NOWAIT：程序直接启动与热盖温度无关
WAIT：热盖温度达到预定值程序才可启动
FIX：热盖温度与加热槽温度无关热盖升温持续到程序结束
AUTO：如果室温保持22度5分钟以上，热盖自动停止升温
另有六条高级指令（可通过“SEL”键选出或直接按固定的数字调出）。
7.1.3 T（亦可按1键）
设定温度（范围4.0-99.0度，最小单位为0.1度），时间（范围0:00:01-9:59:59，最小单
位为秒）。温度单位是摄氏度，时间顺序为小时、分钟、秒，可选指令：
●TEMPRETURE INCREMENT：每个循环温度修整量。“+”表示升温，“-”表示降温，
设置范围0.0-10.0度，最小输入单位0.1度。
●TIME INCREMENT：每个循环时间修整量。“+”表示时间增加，“-”表示时间减少，
设置范围0:00:01-0:01:00，最小单位为1秒。
●RAMP：加热/冷却的最大梯度。设置范围0.3-3.0度/秒，最小单位0.1度/秒。
●RAMP INCREMENT：每个循环的梯度修整量。设置范围0.0-1.0度/秒，
最小单位0.1度/秒。
7.1.4 HOLD （亦可按2键）
指加热槽保持在指定温度不变。按下“ENTER”键可结束或继续执行程序。设置
范围4.0-99.0度，最小单位0.1度。
7.1.5 PAUSE （亦可按3键）
暂时中断程序，温度维持在暂停时的值。
7.1.6 GOTO（亦可按4键）
跳转到另一程序行。其后跟循环的重复次数。程序行号1-40，重复次数1-99。
7.1.7 SOUND（亦可按5键）
在显示程序暂停或程序结束时发出声音信号，允许重复次数为1-10声。
7.1.8 LINK（亦可按6键）
跳转到内存的其他程序。执行该指令时，现运行的程序停止而开始一个新的程序。
LINK指令最多调用5个程序。并且不能跳转到“Edit”方式下的程序及个人卡上的程序（但可由个人卡转接主机程序）。必须输入另一要调用的程序名（用Sel键输入），如果输入当前程序名将陷入死循环，此时只能用“Stop”终止。
7.1.9 END
自动写在程序结尾关断加热槽和热盖温度调节，终止程序。
7.2 编制新程序
7.2.1 编程
选择“FILES”方式下的“New”按“Enter”键调出。
程序开始时要先设定加热槽和热盖温度：
●根据屏幕提示，按Enter键调出温度控制状态，用Sel键选择TUBE或BLOCK，
按Enter确认：
●再按Enter选中LID，输入温度值：用Sel键选中AUTO或NOWAIT，按Enter确认。
●其他所有指令可以用Sel键选择，也可直接输入该指令的位置号，然后按Enter确认，
再输入相应数据。（如果输入的数据不合理，屏幕显示“Value out of range”并自动给出上下限）。
●温度指令用OPT键选出（TEMPRETURE INCREMENT，TIME INCREMENT，RAMP，
RAMP INCREMENT，*GRADIENT），将光标移到输入区，键入数值。
（只有光标在程序行号上OPT键才有效）
7.2.2 存储程序
程序编好后按Exit键退出，屏幕提示：“Save：yes”，按“Enter”确认。仪器缺省显示储存于“UNNAMED”名下，根据需要可用“Del”键删除掉原有程序名，用“Sel”键选择字母组成新程序名输入，再按“Enter”确认。
如果程序被保存于一个以存在的程序名下，则屏幕显示“Overwrite：YES”，按“Enter”确认可覆盖原程序：若不想覆盖则可选择“NO”，再输入新程序名进行存储。
如果选择不存储，程序会保存在Edit方式下，调出Edit即可修改，在其他目录下也不会被意外覆盖。
7.3 修改程序
内存和个人卡上的程序可下载到Edit方式下修改，Edit下原有程序则被删除。Edit中若有未保存的程序，删除前会自动存储。
选中FILES下的Load菜单，屏幕显示程序清单，从清单中选程序名确认，则可进入修改状态。
将光标移到含有待更改的指令或数值的程序段号上，用Sel键选择指令或为现有指令更改数值。
需要插入程序条时将光标移到要插入新指令的程序行前，按Ins键插入空行再选出指令编程。删除程序段只需将光标移到程序行号上，按Del键删除。
程序修改后按Exit键退出，确认存储。程序存在同一名下，按Enter确认覆盖；
如不想覆盖，答复“Overwrite”指令时选择“No”再送入一个新程序名。
7.4 删除程序
选择“FILES”方式下的“Delete”，按“Enter”调出。屏幕显示程序清单，用光标选中程序名，按“Enter”确认删除。
8 个人程序卡
个人程序卡最多可存10个程序，程序个数与程序长度有关。从个人程序卡上启动程序，该程序不进入内存而是载入临时存储器中。使用个人程序卡可与其他的仪器传输程序。
注意个人程序卡上的金黄色区域应避免任何形式的损坏、刮伤、污染。
8.1 操作
●插卡：将卡上箭头朝前金黄色感印区朝上插入控制面板下的槽里一直到插不动为止，
卡自动接入工作状态。
●取卡：再往里推一下卡被弹出。
●格式化（FORMAT）：新卡必须格式化，程序卡写错也要格式化。需要格式化根据屏幕
提示进行确认操作。
8.2 编程
1、启动卡上程序：
用光标选择“Start”方式下的
如果显示
用光标选中某段程序，确认启动。（启动时程序并不进入内存，运行后程序也不保留在仪器中）
2、删除卡上程序
用光标选择“FILES/Del”方式下的
如果显示
用光标选中某段程序，确认删除。
3、从卡上装载程序
用光标选择“FILES/Load”方式下的
如果显示
用光标选中某段程序，确认装载。
4、卡上程序存储
程序编好后用Exit退出，提示存储“Save：YES”，在“Target：INTERN”下选择
5、LINK指令编程
如果卡上的程序中含有连接卡上其他程序的LINK指令，不能由卡上直接启动；如果连接的是内存中的程序则可以启动。内存中的程序不能调用卡中含有LINK指令的程序。
9 打印机/PC的连接
打印机连接插槽在仪器右边的PC插口下，用普通PC打印电缆连接。安装时应关掉电源。如果打印机不经常使用也应关掉电源。打印机参数在OPTIONS/Printer下设置：
Printout Editor：NO 关断打印；YES “Edit”下的程序立即打印
Print Protocol：YES 打印协议；NO 不打印协议
PC 连接：9针连接插槽在仪器右边的打印机口上。计算机参数在OPTIONS/GEN/Remote 下设置。有关详细资料备索。
10 维护及保养
1）平时可用水或中性实验室清洗液清洗
2）本机不能不能用于接触有机溶液或活性溶液
3）仪器内不应进液体，清洗时应关断电源
4）本机的保险管在机身后电源开关和电源插座间，拆下可直接更换，但只能换同样型号的保险管（保险管型号见机身后标识）。
5）仪器只能由专业人员拆装，任何未经授权的维修造成的损坏厂家不予负责。
注：错误信息及对策详见随机说明书
PCR仪使用手册
P C R仪使用手册 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
Biometra T gradient 用户手册 型号 050-810 T gradient48 050-811 T gradient96 Biometra biomedizinische Analytik GmbH Rudolf-Wissell-Str. 30, D-37079 Goettingen Tel.: 0551/50 686-0; Fax: 0551/50 686-66 email: 1 目录 1 目录 2 介绍 3 使用前 安全警告 警告标志 4 T gradient的初始操作步骤 T gradient前视图 T gradient后视图 T gradient控制板 初始自检 T gradient的显示 操作可调节的热盖
盖子卡住时如何放开转轮 5 创建一个程序 选择一个目录 选择一个程序储存库 输入子目录的名称 输入程序名 输入热盖的温度 选择/取消热盖预热 输入温度和时间设置 设置温度梯度 查看模块的温度梯度值 设置循环次数 冷却到环境温度以下 储存程序 6 浏览/编辑程序数据 删除/插入程序档 拷贝程序 删除程序 7 其他选项的设置 设置时间增量 设置“触地”（touch down）PCR 调节加热和冷却坡度
8 运行程序 选择和开始程序 操作过程中的显示 浏览剩余的运行时间 察看当前的温度梯度 暂停/停止程序 9 特别功能 打印协议 警报声的开关 选择语言 标准模式/测试模式 RS232-控制器 10 微板的密封 在PCR中密封微板 取下热封膜 11 维护 12 问题解答 减慢加热和冷却的速度 由于断电重新启动 来自其他PCR仪的协议的更改13. Tg radient 96技术参数 2 介绍
ABI Veriti 梯度PCR仪使用说明
ABI Veriti 梯度PCR仪使用说明 哈尔滨德远科技开发有限公司
操作步骤： 1、打开PCR仪的热盖，插入0.2ml的样品管。盖好热盖。 2、打开PCR仪的电源，仪器程序开始初始化，需等待几分钟。 3、初始化完成后，显示主菜单： 4、点“Browse/New Methods”，进入PCR程序列表：
5、可以直接点一个PCR程序，选择“Start Run”运行；点右边的符号，可以选 择不同的文件夹。如要新建一个PCR程序，点“New”，出现PCR程序： 6、添加一段程序：点中上方的“Stage”位置，该位置变红；再点“Add”，软件将 加入一段新的程序。
7、修改循环数、温度、时间：点中循环次数、温度或时间位置，下方出现数字键。 依次点数字键，出现合适数字后，点“Done”确定。 8、增加一个步骤：点“Step”位置，该位置变红；再点“Add”，软件将加入一个新的步骤。 9、删除一个步骤：点“Step”位置，在点“Delete”，软件将该步骤删除。
1）点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项如下 2）点“VeriFlex step”，出现梯度创建窗口： 输入6个梯度温度，温度下方的“1－2”是指对应的1、2两行加热孔，全部输好后，点“Done”确定。注意：相邻的两个梯度温度之差最大不能超过5℃！
1）点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项如下 2）点“Auto Delta”，出现渐变模式创建窗口。 点“Staring Cycle”，输入起始循环数；点“Delta Temperature”，输入温度变化值；点“Delta Time”，输入时间变化值。渐变模式适用于touchdown PCR，可以提高PCR 反应的特异性。例：输入起始循环数为2，温度变化值为＋0.5℃，时间变化值为＋5s，则表示从第2个循环开始，每循环一次升温0.5℃，时间增加5s。
PCR扩增原理及操作
PCR扩增反应的操作 第一节PCR扩增反应的基本原理 一、聚合酶链式反应（PCR）的基本构成 PCR是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由酶催化的对特定模板（克隆或基因组DNA）的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应用，包括用于DNA作图、DNA测序、分子系统遗传学等。 PCR基本原理是以单链DNA为模板，4种dNTP为底物，在模板3’末端有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。在微量离心管中，加入与待扩增的DNA片段两端已知序列分别互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA 膜板、四种dNTP溶液、耐热Taq DNA聚合酶、Mg2+等。反应时先将上述溶液加热，使模板DNA 在高温下变性，双链解开为单链状态；然后降低溶液温度，使合成引物在低温下与其靶序列配对，形成部分双链，称为退火；再将温度升至合适温度，在Taq DNA聚合酶的催化下，以dNTP为原料，引物沿5’→3’方向延伸，形成新的DNA片段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此重复改变温度，由高温变性、低温复性和适温延伸组成一个周期，反复循环，使目的基因得以迅速扩增。因此PCR循环过程为三部分构成：模板变性、引物退火、热稳定DNA聚合酶在适当温度下催化DNA链延伸合成（见图）。 1．模板DNA的变性 模板DNA加热到90~95℃时，双螺旋结构的氢键断裂，双链解开成为单链，称为DNA的变性，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。变性温度与DNA中G-C含量有关，G-C间由三个氢键连接，而A-T间只有两个氢键相连，所以G-C含量较高的模板，其解链温度相对要高些。故PCR 中DNA变性需要的温度和时间与模板DNA的二级结构的复杂性、G-C含量高低等均有关。对于高G-C含量的模板DNA在实验中需添加一定量二甲基亚砜（DMSO），并且在PCR循环中起始阶段热变性温度可以采用97℃，时间适当延长，即所谓的热启动。 2．模板DNA与引物的退火 将反应混合物温度降低至37~65℃时，寡核苷酸引物与单链模板杂交，形成DNA模板-引物复合物。退火所需要的温度和时间取决于引物与靶序列的同源性程度及寡核苷酸的碱基组成。一般要求引物的浓度大大高于模板DNA的浓度，并由于引物的长度显著短于模板的长度，因此在退火时，引物与模板中的互补序列的配对速度比模板之间重新配对成双链的速度要快得多，退火时间一般为1～2min。 3．引物的延伸 DNA模板-引物复合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条与模板DNA链互补的新链。重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。延伸所需要的时间取决于模板DNA的长度。在72℃条件下，Taq DNA聚合酶催化的合成速度大约为40～60个碱基/秒。经过一轮“变性-退火-延伸”循环，模板拷贝数增加了一倍。在以后的循环中，新合成的DNA都可以起模板作用，因此每一轮循环以后，DNA拷贝数就增加一倍。每完成一个循环需2～4min，一次PCR经过30～40次循环，约2～3h。扩增初期，扩增的量呈直线上升，但是当引物、模板、聚合酶达到一定比值时，酶的催化反应趋于饱和，便出现所谓的“平台效应”，即靶DNA产物的浓度不再增加。 PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA扩增量可用Y ＝（1＋X）n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平（Y）均每次的扩增效率，n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%，但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期，
PCR仪操作说明
Mastercycler Personal PCR仪操作手册
1 简介 Eppendorf的Mastercycler Personal是适用于所有分子生物学和生化实 验室研究的PCR仪。 样品温度在4-90度间快速可调（最大速度每秒3度）。 设计有特殊的“离心管控制”模式，从而对装有不同体积溶液的不同离心管中的样 本进行温度控制。 加热槽为一通用模块，可适用5X5的微孔板、25个0.2ml的Eppendorf PCR管、16个0.5ml薄壁的Eppendorf PCR管或其他相应的试管，而无须更换模块。 为避免样本蒸发浓缩，本仪器设计有可适应各种试管高度的热盖。 本仪器易于操作，有完整的八线显示，并可连接打印机。 Mastercycler Personal是Perkin-Elmer公司授权许可生产的PCR仪。 2 安全警告 3 安装 3.1 包装 一个包装内应含有以下物品： 1台小型PCR仪 1条主电源线 1本操作指南 1张个人存储卡 1包0.2mlPCR管（100个） 3.2 装机 安装时请确保通气孔通畅，四周有足够的空间散热；并请确保仪器下部无其他异物。 搬动仪器时无须其他装置，可抓住仪器两侧将其提起。 所需空间：宽 18cm 深：35cm 高： 25cm 电源连接：1个防电击插座。 如需连接打印机，则需用另一电源连接。 3.3 启动仪器 拆除热盖上的胶条并取出热盖下的泡沫塑料。 连接电源线。启动仪器前请核对用户电源是否与铭牌要求相符。 连接和启动打印机的步骤见第9部分。 4 技术说明 4.1 仪器结构 图1：前面观 1 热盖 2 热盖锁 3 显示与控制面板 4 个人存储卡读取器
PCR基本原理及方法_图文.
Medical Molecular Biology Principle and Applications of PCR （Polymerase Chain Reaction） Department of Biochemistry and Molecular Biology 1 Contents History of PCR Concept and principle of PCR PCR reaction system Types and Applications of PCR 2 Replication Substances Involved in DNA replication and Functions substrate (底物: 4 dNTP。合成新链的原料。 template (模板: 解开成单链的DNA母链。指引dNTP按碱基互补配对原则合成新链。 primer (引物: 一段寡核苷酸序列。提供3′-OH末端使dNTP 可以依次聚合。 polymerase (聚合酶: 依赖DNA的DNA聚合酶( DNA-pol Other enzymes & protein factors： Helicase, Topoisomerase：解链解旋，防止打结。 SSB （单链DNA结合蛋白）：稳定已解开的单链。 Primase：催化RNA引物生成。DNA ligase：连接两段相邻的岡崎片段。 4 一、History of PCR 1、Khorana(1971等提出在体外经DNA变性,与适当引物 杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 2、1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。 3、1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR 技术。 4、1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。 5
pcr仪使用说明
一. 开机 打开 PCR 仪的电源，需等待一小段时间，大概几十秒，仪器程序开始初始化。初始化完成后，显示主菜单， 二. 建立新方法 1. 点击“N ew Methods ”，进入以下界面，点击“open template ”进入创建程序界面，可以通过已存在的模板创建程序，如果没有使用其中的模板， 请选择“Blank Template ”，在选择“General PCR ”进入下边第三幅图界面。 2. 温度，时间，循环等体积等的设置：点击”Edit ”进入如下“edit ”界面，可以通过点击页面上的步骤温度、时间、热盖温度、反应体积和循环数，来设定每个步骤时间和温度；点击“Save ”保存当前程序，可以设定程序名称，保存位置。程序保存后选择模块，直接运行程序。
3. 添加步骤和阶段。点击“Manage Stages ”进入如下界面，点击“Add Stage ”出现“+”，点击“+”则在该Stage 之前添加一个相同的Stage ，点击“Remove Stage ”在程序界面上出现“-”，点击“-”则移除当前Stage ；点击“add step ”出现“+”，点击“+”则在该Step 之前添加一个相同的Step ，点击“Remove Step ”在程序界面上出现“-”，点击“-”则移除当前Step ； 4. 高级设置。点击“Advanced Options ”进入高等设置界面，如下图： 点击“Simulation Mode ”进入模拟界面，可以选择需要模拟的机器。当选择模拟机器时，仪器的变温速率是不可以调整的。 通过“VeriFlex ”设定仪器的梯度，点击，设置梯度，两个梯度范围间隔最小0.1℃，最大5℃ 三、运行已有的程序 点击“Open method ”，进入“Select Method ”菜单项，选择左侧的文件夹，查看文件夹中的程序，选择要运行的程序直接点击，进入程序界面，在此界面下也可以对程序进行编辑，如果无需编辑选择要使用的模块，直接点击“Start RUN ”,运行当前程序。
pcr实验原理及注意事项
PCR疑难解答 当PCR结果不甚满意时，首先检查以下几方面并遵照执行： 将PCR反应的试管与反应板紧贴。 当酶反应混合物以70℃“热启动”开始循环时，切记在加入酶后稍微振荡一下，因为在0.2-ml 的PCR管中不能均匀传热。 不要随意减少dNTP的用量，它是一个系统的因素，必须与其它成份保持平衡。 对于有问题的PCR反应，例如模板的量少，模板不纯和环状模板等，先尝试加Taq酶前的体系进行预变性，后加模板进行正常PCR扩增。 没有扩增产物： 在提供MgCl2缓冲液中，以0.25mmol/L为梯度增加MgCl2浓度；无MgCl2的缓冲液以0.5 mmol/L为梯度增加MgCl2浓度。 泳道中出现模糊条带，如果DNA模板中存在RNA，则按上述提示浓度补加MgCl2，因为在PCR反应中可能缺少游离的Mg2+。 检查退火温度和变性条件，如果有需要的话，可降低退火温度。 检查模板和引物的用量。 增加循环次数和/或模板DNA的用量。 泳道中出现模糊条带： 减少循环次数或模板DNA的用量。 提高退火温度，但不要超过68℃。 重新设计引物或设计更长的引物。 其他值得注意的条件： 建议使用0.2-ml薄壁管。厚壁管在92℃时不能有效地使模板变性。 最佳反应体积为50ml，推荐用30ml矿物油覆盖（对盖子加热的PCR仪可以不加）。 大多数反应中，0.75ml（0.5~1ml）的酶量在大多数情况下可以得到满意的结果。 建议使用1.75mmol/L MgCl2∶350mmol/L dNTP或2.25mmol/L MgCl2∶500mmol/L dNTP 组合的混合物。然而要得到最佳结果，优化Mg2+的浓度是必需的。 基因组DNA模板的质量显著影响PCR反应。因此推荐使用琼脂糖凝胶电泳来检测DNA的长度。DNA片段长度可以超过50kb，传统的基因组DNA能扩增片段至10kb。 要扩增更长的片段应使用超纯或高分子量的DNA。请查阅高分子量DNA提取操作过程相关文献。 降低二级结构和引物二聚物形成的可能性。进行长片段PCR扩增时，引物长度一般为24~34个核苷酸，溶点在60~68℃间。使用这类引物可提高PCR反应的退火温度来增加反应的特异性。这点非常重要，长片段扩增的效果往往受到非特异性短片段优先扩增的影响。 变性：第一步变性在94℃下进行2分钟。在循环过程中尽可能缩短变性时间（94℃下进行20--30秒），除非模板中富含GC，则95℃下变性30秒。这可以防止DNA脱嘌啉和链断裂，对于所需扩增的基因组DNA片段终长度超过12 kb时，应该尽可能的降低变性温度。 延伸：68--72℃下进行延伸操作。 循环延伸：尽量采用循环延伸的条件，若PCR仪无此功能，则必须增加延伸的时间，例如在扩增10kb片断时，延伸时间用10分钟替代原来的8分钟。 长片断PCR系统扩增的片断其3’-末端带有一个突出的A，因此建议采用T/A克隆。若要进行平端可隆，可用Klenow酶和T4 DNA多聚酶将PCR产物补平后再进行。 测序时因酶的混合物带有3’→5’外切酶活性，用Sanger方法进行测序不能产生均一的（染色体）带型。
PCR仪使用说明及注意事项
PCR仪使用说明及注意事项开机：PCR仪的开关在仪器的背面 将开关打开后仪器显示如下界面 F1（Run）选择一个程序并开始运行； F2（Create）Ｆ3（Ｅdit）建立一个新程序或修改已有程序； Ｆ４(Ｕtil) 查看仪器最后运行的程序； Ｆ５（Ｕser）建立、编辑或删除新用户。 建立新用户：
选择Ｆ５ 选择Ｆ２ 用户名可以用字母、数字或它们的组合命名，通过方向键选择字母、通过数字键选择数字。 命名完成后选择Ｆ１，用户名建立完成。 程序设置：1、新建程序 选择用户名后，选择Ｆ２
通过光标移动及数字键设定程序的各个参数（包括各反应阶段的事件、温度及循环数），完成后选择Ｆ２储存程序，出现以下界面，选择Ｆ３为程序命名 选择Ｆ１保存。 ２、编辑程序：在主菜单的界面下选择Ｆ２，选择需要编辑的程序 选择Ｆ１编辑 编辑完成后，选择Ｆ２保存程序信息。 运行程序：在主菜单下选择Ｆ１，然后选择运行的程序 选择Ｆ１
在此界面下需确定样品的体积，选择Ｆ１开始运行。 程序运行结束后出现以下界面 退出到主菜单，取出样品并关闭电源。 注意事项： １、使用PCR仪需提前预订，预订的程序要标明退火温度和延伸时间：如果不用要及时取消或通知接下来要做的人。 ２、不得无故拖延反应开始的时间，如无故拖延超过半小时，该时间段即刻取消，其他同学可协商使用。 ３、PCR反应结束后请及时收取PCR产物，或交代同学及时帮忙收取。若后续反应不能及时跟上，请务必关机！因为开机状态下，热盖将持续工作，长此以往，热盖容易损坏。４、PCR反应最后一步请务必设置为：16℃，2 min。（切忌4℃，∞，避免压缩机过度耗损！）５、PCR仪不能同一温度设置较长时间，16℃３小时。 ６、PCR仪不能开机运行过夜。
pcr技术原理简介
PCR技术的基本原理 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA 双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。 PCR的反应动力学 PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA 扩增量可用Y＝(1＋X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%，但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA 片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应” ，这种效应称平台期数、PCR 扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。大多 数情况下，平台期的到来是不可避免的。 PCR扩增产物 可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间，是需要扩增的特定片段。短产物片段和长产物片段是由于引
PCR仪操作方法
美国伯乐公司MyCycler PCR仪操作步骤： 1．接通电源，打开开关，如果仪器处于备用状态，可直接按显示屏上的standby键，在通过一个快速自动诊断程序后，初始界面将会出现。 2．按F2键，初始界面上将会出现选择菜单。 3．选择“Custom”项，并按Enter键以建立新的运行程序。如果菜单已有的程序与你需要的程序相近，那么你也可以在选择菜单对已有的模板程序进行编辑。 4．编辑运行程序： 仪器默设的运行程序有3个简单的步骤组成。95℃30秒，55℃30秒，72℃0秒。你将根据需要按如下步骤更改。 （1）按F4键增加或删除部分步骤，注意竖线把不同的循环周期搁开，正在运行的循环次数在第一次循环的左下脚标出。 （2）采用方向键在不同的步骤之间转换，调定点温度将显示在温度曲线上方。相反运行时间将显示在温度曲线下方。循环次数将在每一个循环最后一步的右下角，后跟随“x”符号。（3）在用方向键选择要更改的温度调定点以及运行时间后，按F3，选择要更改的操作，此时会弹出一个新的界面，在此界面下，可以输入所需的时间或温度。 （4）程序编辑完成后按F5。 5．在选择菜单中点“Save Protocol As…”保存编辑程序，以字母与数字组合命名。然后按Enter键完成操作。 6．此时初始界面会出现，按F1键进入程序储存库，用箭头键选择你新编辑的程序，随后按Enter键，将会出现一个选择菜单。选择“Run Protocol” 7．随之出现运行方案界面。提示是否想热启动（如果你选择“YES”将会进一步提示你所需要的热启动温度），如果你选择“Algorithmic Measurement”，界面上还会让你选择温度标准以及取样容积标准。 8．按F5开始运行程序。 9．运行完毕后按Stop键完成操作。
PCR原理及过程
PCR技术原理、实验步骤和应用 来源：易生物实验浏览次数：3623 网友评论0 条 PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速获取大量单一核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义，极大地推动了生命科学的研究进展。 关键词：PCR技术PCR聚合酶链反应 一、实验目的 1.掌握聚合酶链式反应的原理。 2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。 二、实验原理 PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus 公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速获取大量单一核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义，极大地推动了生命科学的研究进展。它不仅是DNA分析最常用的技术，而且在DNA重组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。 PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术，其结果都是以原来的DNA为模板产生新的互补DNA片段。细胞中DNA的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR是在试管中进行的DNA复制反应，基本原理与细胞内DNA复制相似，但反应体系相对较简单。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA 经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。 重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 三、实验试剂与器材 模板DNA、L dNTP Taq DNA聚合酶（5U/μL）、SSR引物 O 10 ×buffer、15mmol/L Mg2+、ddH 2 PCR仪、移液枪、PCR板 四、实验步骤 1、配制20μL反应体系，在PCR板中依次加入下列溶液： 模板DNA 2μL 引物1 1μL 引物2 1μL dNTP μL
荧光定量PCR仪操作指南eppendorf
目录： 1 安全预防法 2 安装 2.1 交货包装 2.2 仪器的安装 2.3 功能性单元 2.3.1 Mastercycler ep realplex 2.4 启动 2.4.1 realplex模块与热模块之间的连接 2.4.2 Mastercycler ep realplex 与计算机之间的连接2.4.3 与其它部件的连接 2.4.4 realplex软件的安装 2.4.4.1 安装主程序 2.4.4.2 数据恢复 2.4.4.3 开始realplex软件的运行 3. 操作 3.1 管理者登陆 3.2 登陆 3.3 用户变更 3.4 系统配置 3.4.1 对使用者的管理 3.4.1.1 新用户建立 3.4.1.2 编辑用户 3.4.1.3删除用户 3.4.2 用户层 3.4.3 循环仪 3.4.4 realplex 模块 3.4.5 系统层 3.4.5.1 特性 3.4.5.2 登陆出错信息 3.4.5.3 用户登陆 3.4.5.4 软件更新 3.5 检测项目管理 3.5.1 建立检测项目 3.5.2 打开检测项目 3.5.3 保存检测项目 3.5.4 保存模板文件 3.5.5 模板文件的使用 3.5.6 复制检测项目 3.5.7 检测项目的输出 3.5.8 检测项目的输入 3.5.9 建立文件夹
3.5.10 删除检测项目和文件夹 3.6 探针管理 3.7 染料管理 3.8 校准 3.8.1 背景校准 3.8.2 颜色校准 3.8.2.1 使用商业的校准工具包进行的颜色校准3.8.2.2 客户特有的染料的校准 3.9 数据库管理 3.9.1 当前数据库的自动保存 3.9.2 当前数据库的保存 3.9.3 输入数据库 3.9.4 数据库的归档 4 编程（检测项目的建立） 4.1 建立一个新的检测项目 4.2 建立板布局 4.2.1 染料的确定 4.2.2 参考染料的选择 4.2.3 样本容积输入 4.2.4 探针类型的确定 4.2.5 背景的确定 4.2.6 样品类型的定义 4.2.6.1 标准 4.2.6.2 阳性对照 4.2.6.3 阴性对照 4.2.6.4 未知样品 4.2.7 复制和标准系列的自动建立 4.2.8 定量的样品类型 4.2.9 相对定量的样品类型 4.2.9.1 多plex分析例子 4.2.9.2 单plex分析的例子 4.2.10 熔点分析中的样品类型 4.2.11 终点测定中的样品类型 4.2.12 +/-检测项目中的样品类型 4.2.13 基因辨识中的样品类型 4.2.12 样品的复制与剪切 4.2.15 删除样品 4.2.16 几个样品的归组 4.2.17 子检测项目的测定 4.2.18 板布局的删除 4.2.19 完整检测项目的板布局编辑 4.3 pcr程序的建立 4.3.1 用模板程序建立一个pcr程序 4.3.2 不用模板程序建立pcr程序
PCR仪使用方法
步骤： 1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单：“-RUN ENTER PROGRAM PROGRAM”准备执行程序。 2、放入样本管，关紧盖子。 3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：“-ENABLE DISABLE HEATED LID”按《Proceed》选 择ENABLE，则开始执行程序。 4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM，按《Proceed》，屏幕显示“-NEW LIST EDIT DELET”，按《Proceed》，1）选择NEW，命名新的程序， 最多8个字母，输入后按《Proceed》确认。 2）输入程序步骤：名字输入后，显示“STEP1 _TEMP GOTO OPITON END”，按《Proceed》则可以输入温度（0～100℃），按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上。 3）选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步（循环数最多可达9999次）（为实际循环数 -1)。 4) 选择option，显示“STEP EXTENDI NCREMENT SLOPE”再选择increment，按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值（-0.1℃～6℃），按《Proceed》确认。选择extend，按《Proceed》确认，输入每个循环增加或减少的时间（-60～60秒），按《Proceed》确认。 选择slop（指温度上升或下降的速率），输入温度的改变值（-0.1～1.5℃）按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认。 4）选择End，输入结束步骤。 5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。 6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。 编辑程序： 1、可以用《Cancel》键删除输错的值，输入新的值后按《Proceed》确认。 2、对于未输完的程序，要先输入END，按《Proceed》将程序储存后才能删除。 3、删除已经储存的程序：从RUN-ENTER菜单中选择RUN－PROGRAM，按《Proceed》，显示 主菜单，选择DELET，用《Select》选择删除。 4、查看程序的步骤：在主菜单上选择LIST，按《Proceed》，用《Select》将选择名称， 再按《Proceed》，显示程序的第一步，用《Select》键向前、向后翻页查看，此时不能改变程序的值。
Biometra梯度PCR仪使用说明
Manual Software Version 5.00gr April 2005 Order-No. 050-800 TGradient 48 050-801 TGradient 96 Biometra biomedizinische Analytik GmbH Rudolf-Wissell-Str. 30, D-37079 Goettingen Tel.: 0551/50 686-0; Fax: 0551/50 686-66 email: info@https://www.360docs.net/doc/e316783000.html, https://www.360docs.net/doc/e316783000.html,
TG RADIENT Manual____________________________________________________________I 1INTRODUCTION (1) 2BEFORE YOU START (2) 2.1S AFETY PRECAUTIONS (2) 3FIRST STEPS WITH THE TGRADIENT (3) 3.1T HE TG RADIENT T HERMOCYCLER FRONT V IEW (3) 3.2T HE TG RADIENT REAR VIEW (4) 3.3T HE TG RADIENT CONTROL PANEL (5) 3.4I NITIAL SELF TEST (6) 3.5T HE TG RADIENT DISPLAY (6) 3.6H ANDLING OF THE ADJUSTABLE HEATED L ID (6) 3.7R ELEASING WHEEL IN CASE OF BLOCKED LID (7) 4CREATING A PROGRAM (8) 4.1S ELECT A DIRECTORY (8) 4.2S ELECT A PROGRAM STORE (8) 4.3E NTER NAME FOR SUBDIRECTORY (9) 4.4E NTER A PROGRAM NAME (9) 4.5E NTER THE LID TEMPERATURE (10) 4.6S ELECT / DESELECT PRE-HEATING OF THE LID (10) 4.7E NTER TEMPERATURE AND TIME SETTINGS (11) 4.8S ET TEMPERATURE GRADIENT (12) 4.9V IEW DIFFERENT TEMPERATURES OF THE GRADIENT IN THE BLOCK (12) 4.10S ET CYCLE NUMBER (13) 4.11C OOL BELOW AMBIENT TEMPERATURE (13) 4.12S AVE PROGRAM (14) 5VIEW/EDIT PROGRAM DATA (15) 5.1D ELETE / INSERT PROGRAM STEPS (15) 5.2C OPY PROGRAM (16) 5.3D ELETE PROGRAM (17) 6FURTHER PROGRAMMING OPTIONS (19) 6.1P ROGRAM TIME INCREMENTS (19) 6.2P ROGRAM TOUCH DOWN (20) 6.3A DJUST HEATING AND COOLING RAMPS (20) 7RUN PROGRAM (21) 7.1S ELECT AND START PROGRAM (21) 7.2D ISPLAY DURING OPERATION (22) 7.3V IEW REMAINING RUN TIME (23) 7.4V IEW CURRENT GRADIENT TEMPERATURES (23) 7.5P AUSE / STOP PROGRAM (24) 8SPECIAL FUNCTIONS (25) 8.1P RINT PROTOCOLS (25) 8.2S WITCH BEEP ON/OFF (25) 8.3S ELECT LANGUAGE (26) 8.4RS232 C ONTROL (26) 8.5B LOCK TYPE (26) 9MAINTENANCE (27) 10EXCHANGE OF MODULES (27) 11TROUBLE SHOOTING (28) 11.1S LOW HEATING AND COOLING (28) 11.2A DAPTATION OF PROTOCOLS FROM OTHER CYCLERS (28)
steponeplus型pcr仪操作规程和pcr仪简易设置指南
1.StepOnePlus上机可由两种方式来进行： 由StepOne Software Quick Start进行上机或由StepOnePlus 机器面板直接触控上机。 2. 由StepOne Software Quick Start进行上机： 开启StepOne Software 进入主画面后点选 Quick Start 窗口进行快速上机设定。进入Experiment Properties后输入：Experiment Name及档案储存位置；选择Experiment Type选择使用荧光系统；选择Ramp Speed选择实验样品种类；点选Run Method确定PCR 反应条件是否需要修改后，按下START RUN。 如欲使用StepOnePlus机器上VeriFlex Block的功能，请由左方Setup功能列上点Plate Stepup窗口，在“Assign Targets and Samples”窗口下，勾选Enable VeriFlex Block选项，此时Block即被分成六个区块。 接着点选Run Method，在run program上点一下欲调整的温度步骤，选择“Set different temperatures for one or more zones”并设定每个区块的温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度，第一和第六区块最多可差异25度。 按下Start Run Now进行data 收集，反应结束后，则会回到“Main Menu”画面，触控Collect Result将data 存出。 2.由StepOnePlus 机器面板直接触控上机： 开启电源后，进入主画面，由触控式屏幕来进行StepOnePlus 的设定。 按下TaqMan cDNA（Standard）进入PCR Thermal Cycle Program，可利用下面工具列再重新编辑反应条件，如果条件相同则直接按下Save。 如欲使用StepOnePlus机型上VeriFlex Block的功能，请点选Options下的VeriFlex step并设定每个区块温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度以上，第一和第六区块最多可差异25度。 触控需要更改之处则会跳出触控式键盘，重新给予实验名称、选择档案储存的Folder、并更改实际反应样品体积，按下Save & Exit；然后在Browse Last Accessed Experiments 下选择刚设定好的实验，按下Start Run。此时跳出
PCR技术原理模板
PCR技术原理 PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 一.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。 酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq 酶或溴乙锭。 引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖
凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。 Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。 反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。 物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR 失败的原因之一。 靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，其
PCR仪操作手册
Mastercycler Personal PCR 仪操作手册 1 简介 Eppendorf 的Mastercycler Personal 是适用于所有分子生物学和生化实验室研究的PCR 仪。 样品温度在4-90 度间快速可调（最大速度每秒3 度）。 设计有特殊的?离心管控制?模式，从而对装有不同体积溶液的不同离心管中的样本进行 温度控制。 加热槽为一通用模块，可适用5X5 的微孔板、25 个0.2ml 的Eppendorf PCR 管、16 个0.5ml 薄壁的Eppendorf PCR 管或其他相应的试管，而无须更换模块。 为避免样本蒸发浓缩，本仪器设计有可适应各种试管高度的热盖。 本仪器易于操作，有完整的八线显示，并可连接打印机。 Mastercycler Personal 是Perkin-Elmer 公司授权许可生产的PCR 仪。 2 安全警告 3 安装 3.1 包装 一个包装内应含有以下物品： 1 台小型PCR 仪 1 条主电源线 1 本操作指南 1 张个人存储卡 1 包0.2mlPCR 管（100 个） 3.2 装机 安装时请确保通气孔通畅，四周有足够的空间散热；并请确保仪器下部无其他异物。搬动仪器时无须其他装置，可抓住仪器两侧将其提起。 所需空间：宽18cm 深：35cm 高：25cm 电源连接：1 个防电击插座。 如需连接打印机，则需用另一电源连接。 3.3 启动仪器 拆除热盖上的胶条并取出热盖下的泡沫塑料。 连接电源线。启动仪器前请核对用户电源是否与铭牌要求相符。 连接和启动打印机的步骤见第9 部分。 4 技术说明 4.1 仪器结构 图1：前面观 1 热盖 2 热盖锁 3 显示与控制面板
PCR技术及原理
PCR定义：PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA 体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。 PCR技术的基本原理 一、PCR反应成分： 1、模板DNA； 2、引物； 3、四种脱氧核糖核苷酸； 4、DNA聚合酶； 5、反应缓冲液、Mg2+等。 二、PCR反应基本步骤： 1、变性(denaturation)：通过加热使模板DNA的双链之间的氢键断裂，双链分开而成单链的过程，高温使双链DNA解离形成单链（94℃，30s）。 2、退火(annealling)：当温度降低时，引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子，低温下，引物与模板DNA互补区结合（55℃，30s）。 3、延伸(extension)：在DNA聚合酶、dNTPs、 Mg2+存在下，DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸，合成出与模板DNA 链互补的DNA子链，中温延伸，DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（70～72℃，30～60s）以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加。 PCR扩增的基本方法 PCR反应的成分和作用
总体积：一般为25μl～100μl 一、无Mg2+buffer：由纯水、kcl、Tris组成。Tris用于调节反应体系pH值，使Taq酶在偏碱性环境中反挥活性。kcl可降低退火温度，但不能超过50?mmol/L，否则会抑制DNA聚合酶活性。二、Mg2+:终浓度为1.5～2.0mmol/L，其对应dNTP 为200?μmol/L，注意Mg2+与dNTPs之间的浓度关系，由于dNTP与Taq酶竟争Mg2+，当dNTP浓度达到1?mmol/L时会抑制Taq酶的活性。?Mg2+能影响反应的特异性和产率。、 三、BSA：一般用乙酰化的BSA，起着减少PCR管对Taq酶的吸附作用，对Taq酶有保护作用。 四、底物（dNTPs）：dNTPs具有较强酸性，其储存液用NaOH调pH值至7.0～7.5，一般存储浓度为10 mmol/L，各成份以等当量配制，反应终浓度为20～200μmol/L。高浓度可加速反应，但同时增加错误掺入和实验成本；低浓度可提高精确性，而反应速度会降低。 五、Taq酶：能耐95℃高温而不失活，其最适pH值为8.3～8.5，最适温度为75～80℃，一般用72℃。能催化以DNA 单链为模板，以碱基互补原则为基础，按5’→3’方向逐个将dNTP分子连接到引物的3’端，合成一条与模板DNA互补的新的DNA子链。无3’→5’的外切酶活性，没有校正功能。某种dNTP或Mg2+浓度过高,会增加其错配率。用量一般为0.5～5个单位/100μl。 六、模板：PCR对模板DNA的纯度不要求很高，但应尽量不含有对PCR反应有抑制作用的杂质存在，如蛋白酶、核酸酶、TqaDNA聚合酶抑制剂、能与DNA结合的蛋白质。模板DNA的量不能太高，否则扩增可能不会成功，在此情况下可适当稀释模板。 七、引物：引物浓度一般为0.1～0.5μmol/L，浓度过高会引起错配和非特异扩增，浓度过低则得不到产物或产量过低。引物长度一般15～30个碱基，引物过长或过短都会降低特异性。其3’末端一定要与模板DNA配对，末位碱基最好选用A、C、G（因T错配也能引发链的延伸）。 引物G+C约占45～55%，碱基应尽量随机分布，避免嘧啶或嘌呤堆积，两引物之间不应有互补链存在，不能与非目的扩增区有同源性。 PCR反应条件的选择（影响因素） 温度参数： 1、变性：模板变性完全与否是PCR成功的关键，一般先于94℃（或95℃）变性3～10min，接着94℃变性30～60s。 2、退火：退火温度一般低于引物本身变性温度5℃。引物长度在15～25bp可通过公Tm=(G+C)×4℃+(A+T)×2℃计算退火温度，一般退火温度在40～60℃之间，时间为30～45s。如果(G+C)低于50%，退火温度应低于55℃。较高的退火温度可提高反应的特异性。 3、延伸：延伸温度应在Taq酶的最适温度范围之内，一般在70～75℃。延伸时间要根据DNA聚合酶的延伸速度和目的扩增片段的长度确定，通常对于1kb以内的片段1min是够用的。 循环数： PCR的循环数主要由模板DNA的量决定，一般20～30次循环数较合适，过多的循环数会增加非特异扩增产物，具体要多少循环数可通过预试验确定。 PCR产物积累规律： 反应初期产物以2n呈指数形式增加，至一定的循环数后，引物、模板、DNA聚合酶形成一种平衡，产物进入一个缓慢增长时期（“停滞效应”），即“平台期”。到达平台期所需PCR循环数与模板量、PCR扩增效率、聚合酶种类、非特异产物竟争有关。