四色流式细胞术分析骨髓增生异常综合征原始细胞免疫表型(精)

四色流式细胞术分析骨髓增生异常综合征原始细胞

免疫表型

作者：吴雨洁，李建勇，仇海荣，肖冰，张建富，宋君红

【摘要】为了研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓原始细胞免疫表型特征，应用四色流式细胞术对常规设门及二次设门策略选取的29例MDS患者的骨髓细胞悬液中，CD34+细胞进行免疫表型分析。结果表明：①随着MDS的进展（RA/RAS→RAEB→RAEB-T），根据CD45/SSC图中选取的原始细胞群中，

CD34+细胞比例逐渐增高，分别为8.0%、46.4%、76.8%，各亚型之间差别有显

著意义（P<0.05）。②在CD45 vs SSC散点图上，设门所取的原始细胞抗原表达随着RA/RAS→RAEB→RAEBT的进展，HLA-DR、CD13、CD33、CD117表达逐渐

增高，CD15表达逐渐减低，差别均有显著意义（P<0.05）。③在CD45 vs CD34散点图上二次设门取CD34+原始细胞行抗原表达的分析，同样异常表达HLA-DR 及髓系抗原CD13、CD33和CD117，比例高于常规分析法（P<0.05），CD15比例减低，在RA/RAS中CD13、CD33、CD117和HLA-DR的表达较常规分析的原始细胞比例明显增高（P<0.05），相关抗原的表达率在各亚型间差别无显著意义（P>0.05）。结论：常规设门法能反映MDS疾病的进展，而二次设门策略则更能反映MDS原始细胞的生物学特征，CD34的异常表达代表原始细胞的不成熟性和异质性，在临床高度怀疑但形态学和细胞遗传学不能诊断时，原始细胞免疫分型对MDS的诊断更具意义。

【关键词】骨髓增生异常综合征

Four-color Flow Cytometric Immunophenotypic Features of Blasts in Myelodysplastic Syndromes

AbstractThis study was aimed at exploring the immunophenotypic features of blasts in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). Four-color flow cytometry using conventional and secondary gating strategies was used to immunophenotype blasts

and the CD34 positive cells in bone marrow nucleated cells of 29 patients with MDS. The results showed: (1) with progression of MDS from RA/RAS，RAEB to RAEB-T，the proportion of CD34+ cells were gradually increased from 8.0%，46.4% to 76.8% (P<0.05)；(2) using

CD45 vs SSC gating strategy，with the transformation of RA/RAS，RAEB to RAEB-T，the expression of HLA-DR，CD13，CD33，CD117 were also gradually increased (P<0.05)，and the expression of CD15 was gradually decreased (P<0.05)；(3) using CD45 vs CD34 gating strategy，the expression of HLA-DR，CD13，CD33，CD117 on blasts were higher by secondary gating method than those by conventional

gating (P<0.05). However，there were no significant difference

(P>0.05) in the expression of above-mentioned antigens on CD34+ cells among different MDS subtypes. It is concluded that conventional gating method can reflect MDS progression from RA/RAS，RAEB to RAEB-T，and secondary gating strategy may accurately reflect the biological features of blasts in MDS. Abnormal expression of CD34 is related to the immaturity level and heterogeneity of blast cells，which is beneficial to the diagnosis of clinically suspected MDS incapable of diagnosing with morphology and cytogenetics.

Key words myelodysplastic syndrome；immunophenotype；four-color flow cytometry；CD34+ cell

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组起源于造血干/祖细胞的恶性克隆性疾病，以外周血一系或多系细胞减少，骨髓一系或多系病态造血和高风险进展成急性髓细胞白血病为特征。我们应用一组单克隆抗体、四色六参数流式细胞术和常规和/或二次设门策略提取原始细胞、CD34阳性（CD34+）细胞，对其进行了免疫表型分析，以期为临床提供合理的诊断和治疗依据。

材料和方法

病例选择

29例MDS患者，男17例，女12例，年龄20-71岁，其中RA/RAS 17例、RAEB 6例和RAEB-T 6例。MDS的诊断参照《血液病诊断与疗效标准》（张之南，第2版）。

材料

单克隆抗体包括HLA-DR-FITC、CD15-FITC、CD2-FITC、CD10-FITC、CD20-FITC、CD33-PE、CD13-PE、CD7-PE、CD19-PE、CD117-PE、CD34-ECD和CD45-PY5等及其相应的标记荧光素的同型对照，所有单克隆抗体均为法国Immunotech公司产品。流式细胞仪为Beckman-Coulter公司的Epics XL 型，采用Expo32-ADC分析软件。

骨髓原始细胞的表达

对29例MDS患者同时进行了形态学及免疫分型检测，其中26例(89.7%)形态学诊断为MDS，此26例骨髓原始细胞在形态学上和流式细胞术上所占百分比见表1，两者无统计学差异（P>0.05）。余3例（10.3%）形态学无法诊断的患者免疫分型均提示为RA/RAS。Table 1. Correlation between analysis of flow cytometry and morphology in 26 cases（略）

流式细胞术检测

新鲜抽取的肝素抗凝骨髓（6小时内），调整细胞数至（0.5-1）

×106/ml，分6管标记抗体后，行流式细胞术分析测定。6管抗体组合分别为CD15/CD33/CD34/CD45、HLA-DR/CD13/CD34/CD45、CD2/CD7/CD34/CD45、

CD10/CD19/CD34/CD45、CD20/CD117/CD34/CD45及阴性对照管IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-ECD/CD45-PC5。

常规的分析方法

在CD45 vs SSC散点图上，至少分析10 000个细胞，取常规原始细胞的位置设A门后对A门细胞行不同抗原表达的分析（图1）。

二次设门分析方法

T门为在CD34直方图上对A门原始细胞上行二次设门取得的CD34+原始细胞群，对T门细胞行不同抗原表达的分析（图2）。

结果判定

抗原表达结果为各标本管抗原表达率减去阴性对照管自发荧光表达率。

CD34>5%，髓系、淋系抗原>20%为阳性。

统计学处理t检验。

结果

免疫表型表达

29例MDS各种抗原表达结果见表2和表3。表2显示常规方法直接对原始细胞设门后的表达结果，表3显示二次设门后各种抗原在CD34+原始细胞上的表达结果。

CD34在原始细胞中的表达

随着RA/RAS→RAEB→RAEB-T的进展，CD34+细胞比例逐渐增高，分别为8.0%、46.4%和76.8%，各亚型之间差别有显著意义（P<0.05）

两种分析方法抗原表达

检测结果显示，两种分析方法均异常表达HLA-DR及髓系抗原，不表达淋系相关抗原。常规获取的原始细胞随着RA/RAS→RAEB→RAEB-T的进展，HLA-DR、CD13、CD33和CD117表达逐渐增高，CD15表达逐渐减低，差别均有显著意义（P<0.05）。二次设门提取CD34+原始细胞同样异常表达HLA-DR及髓系抗原CD13、CD33和CD117，比例较常规分析结果增高，尤其在RA/RAS中，CD13、CD33、CD117和HLA-DR的表达率分别为87%、65.6%、56.6%和44.2%（表3），显著高于常规分析的原始细胞比例的51.6%、37.6%、17.1%及23.3%（表2）（P<0.05），但上述抗原的表达率在MDS各亚型间差别无显著意义

（P>0.05）。Table 2. Immunophenotypic features of blasts in MDS（略）Table 3. Immunophenotypic features of CD34 positive cells in MDS （略）

近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 1．流式细胞仪诊断白血病的依据 ⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达 ⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。 ⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。 2．流式细胞仪诊断白血病的意义 ⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。 ⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。 ⑶疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。二、免疫分型常用的免疫标志及其意义 1．白血病系列分化抗原 T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。 B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。 NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。 2．白血病系列非特异性抗原 CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34－、HLA－DR－、CD38＋。 3．白血病分化阶段抗原 T细胞抗原CD4、CD8。 B细胞抗原：CD10、Cyμ（胞浆μ链）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞浆免疫球蛋白）、CD11C。 4．白细胞共同抗原 CD45为白细胞共同抗原，其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。用SSC/CD45 PerCP双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两个系列或阶段特异性McAb加CD45进行三色免疫荧光染色，经FSC、SSC、McAbl-FITC、McAb2-PE、CD45 PerCP五参数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰。

流式细胞术的临床应用一、在肿瘤学中的应用这是FCM在临床医学中应用最早的一个领域。首先需要把实体瘤组织解聚、分散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化吡啶PI)染色后对细胞的DNA含量进行分析，PI可以与细胞内DNA和RNA结合，采用RNA抑制剂将RNA消化后，通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1 / GO期具有二倍体细胞的DNA含量((2 N)，而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量((4 N)，而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此，通过流式细胞术PI 染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1 / GO 期，S期和G2/ M期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率，DNA含量直接代表细胞的倍体状态，非倍体细胞与肿瘤恶性程度有关。 1、发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断人体正常组织发生癌变要经过一个由量变到质变的漫长过程，而癌前细胞即处于量变过程中向癌细胞转化阶段。人体正常的体细胞均具有比较稳定的DNA二倍体含量。当人体发生癌变或具有恶性潜能的癌前病变时，在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量的异常改变，FCM可精确定量DNA含量的改变，作为诊断癌前病变发展至癌变中的一个有价值的标志，能对癌前病变的性质及发展趋势作出估价，有助于癌变的早期诊断。有资料证实，癌前病变的癌变发生率与细胞不典型增生程度有密切关系，增生程度越重，癌变发生率越高。随着细胞不典型增生程度的加重，DNA非整倍体出现率增高，这是癌变的一个重要标志。 2、在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用 FCM在肿瘤诊断中的重要作用已经被认可，DNA非整倍体细胞峰的存在可为肿瘤诊断提供有力的依据，FCM分析病理细胞具有速度快、信息量大，敏感度高等优点，已被用在常规工作中。肿瘤细胞DNA倍体分析对病人预后的判断有重要作用，异倍体肿瘤恶性病变的复发率高、转移率高、死亡率也高，而二倍体及近二倍体肿瘤的预后则较好。FCM不仅可对恶性肿瘤DNA含量进行分析，还可根据化疗过程中肿瘤DNA分布直方图的变化去评估疗效，了解细胞动力学变化，对肿瘤化疗具有重要的意义。临床医师可以根据细胞周期各时相的分布情况，依据化疗药物对细胞动力学的干扰理论，设计最佳的治疗方案，从DNA直方图直接地看到瘤细胞的杀伤变化，及时选用有效的药物，对瘤细胞达到最大的杀伤效果。 3、FCM在细胞凋亡和多药耐药基因的研究中的作用研究如何用药物诱导癌细胞死亡。通过对细胞体积、光散射、DNA含量及特异性抗原基因(如bcl-2, Fas等)测定分析出细胞凋亡情况。如可用Annexin V结合PI或7- AAD双染色法进行细胞凋亡分析。在凋亡的早期阶段，胞浆膜磷脂的不对称性丧失，导致膜内侧磷脂酞丝氨酸(PS)从细胞膜内层暴露于外层，从而可被PS特异的Annexin- V探针所标记。PS转移到细胞膜外不是细胞凋亡特有的，也可发生在细胞坏死中。但在凋亡的早期细胞膜是完整的，而细胞坏死时细胞膜的完整性被破坏。由于碘化丙锭(PI)或7-AAD对细胞膜完整的活细胞和早期凋亡细胞是拒染的，而对膜完整性被破坏的晚期凋亡细胞或坏死细胞可以染色。因此，Annexin- V结合PI或7-AAD进行双染色可以用于检测活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。正常活细胞不会被染色，凋亡细胞可被标记上Annexin-V，坏死和凋亡晚

诊断标准建议参照维也纳标准(表2)。MDS诊断需要满足两个必要条件和一个确定标准。表2 MDS的诊断标准条件一、必要条件 1 持续(≥6月)一系或多系血细胞减少：红细胞(Hb<110g/L);中性粒细胞(ANC<1.5×10^9/L);血小板(BPC<100×10^9/L) 2 排除其他可以导致血细胞减少和病态造血的造血及非造血系统疾患二、确定标准 1 病态造血：骨髓涂片红细胞系、中性粒细胞系、巨核细胞系中任一系至少达10%; 2环状铁粒幼细胞占有核红细胞比例≥15% 3 原始细胞：骨髓涂片中达5～19% 4 染色体异常(参考表6) 三、辅助标准 (用于符合必要标准，未达确定标准，临床呈典型MDS表现者) 1 流式细胞术显示骨髓细胞表型异常，提示红细胞系或/和髓系存在单克隆细胞群 2 单克隆细胞群存在明确的分子学标志：HUMARA(人类雄激素受体)分析，基因芯片谱型或点突变(如RAS突变) 3 骨髓或/和循环中祖细胞的CFU集落(±集簇)形成显著和持久减少当患者未达到确定标准，如：不典型的染色体异常，病态造血<10%，原始细胞比例4%等，而临床表现高度疑似MDS，如输血依赖的大细胞性贫血，应进行MDS辅助诊断标准的检测(见表2)，符合者基本为伴有骨髓功能衰竭的克隆性髓系疾病，此类患者诊断为高度疑似MDS。若辅助检测未能够进行，或结果呈阴性，则对患者进行随访，或暂时归为意义未明的特发性血细胞减少症，定期检查以明确诊断。 MDS的形态学异常原始细胞标准：Ⅰ型为无嗜天青颗粒的原始细胞，Ⅱ型为含有嗜天青颗粒但未出现核旁高尔基区的原始细胞。出现核旁高尔基区者则为早幼粒细胞。

2013版WHO软组织肿瘤免疫表型大全2014-11-06艾迪康病理诊断主要根据2013年“WHO肿瘤分类——软组织和骨肿瘤”翻译而来第1章脂肪细胞肿瘤（adipocytictumours）良性 1、脂肪瘤（lipoma）免疫表型：成熟脂肪细胞表达S-100、leptin和HMGA2阳性。 2、脂肪瘤病（lipomatosis）免疫表型：和正常脂肪相似。 3、神经脂肪瘤病（lipomatosisof nerve）

免疫表型：因为病变的所有成分均存在于正常神经内，故免疫组化对诊断没有帮助。 4、脂肪母细胞瘤（lipoblastoma）/脂肪母细胞瘤病（lipoblastomatosis）免疫表型：脂肪细胞表达S-100和CD34，原始间叶细胞常表达desmin。 5、血管脂肪瘤（angiolipoma）免疫表型：血管内皮成分CD31等内皮标记阳性，细胞性血管脂肪瘤增生的梭形细胞CD31阳性，证明为血管内皮。 6、软组织平滑肌脂肪瘤（myolipomaof soft tissue）免疫表型：梭形细胞SMA和desmin染色弥漫强阳性，证明为平滑肌分化；ER 和PR阳性也有报道；HMB-45阴性。 7、软骨样脂肪瘤（chondroidlipoma）免疫表型：成熟脂肪细胞S-100强阳性，脂肪母细胞S-100弱阳性，随脂肪细胞逐渐成熟S-100染色逐渐增强。无脂肪母细胞分化特征的细胞S-100阴性。少数病例角蛋白阳性，但EMA一致阴性。 8、梭形细胞脂肪瘤/多形性脂肪瘤（spindlecell lipoma/pleomorphic lipoma）免疫表型：梭形细胞脂肪瘤和多形性脂肪瘤中的梭形细胞均为CD34强阳性， S-100罕见阳性，偶见desmin阳性。

骨髓增生异常综合征题库1-1-8

问题： [单选]以下属于MDS的病态造血的是（） A.骨髓红系增生活跃 B.粒细胞核固缩，有空泡 C.可见Auer小体 D.呈裂孔现象 E.可见淋巴样小巨核细胞

问题： [单选]骨髓增生异常综合征的临床表现描述正确的是（） A.RA以全血细胞减少为主 B.RAEB以贫血为主，可见环形铁粒幼细胞 C.RAEB骨髓中原始细胞20％～30％ D.RAEB-T全血细胞减少的进程缓慢 E.CMML的Ph染色体阳性

问题： [单选]以下措施不宜于骨髓增生异常综合征的治疗的是（） A.输血 B.阿糖胞苷化疗 C.维A酸 D.ATG E.干扰素 (羽毛球教学视频 https://www.360docs.net/doc/e317632484.html,/)

问题： [单选]男性，62岁，头昏苍白半年，发热伴鼻出血1周。体检：体温39℃，贫血貌，胸骨压痛（-）。HGB50g／L，WBC3×109／L，PLT20×109／L。骨髓象增生明显活跃，红系出现有核细胞和巨大红细胞，粒系分叶过多，见巨大血小板。本例的诊断是（） A.再生障碍性贫血 B.骨髓增生异常综合征 C.急性单核细胞白血病 D.急性红白血病 E.急性淋巴细胞向血病

问题： [单选]女性，65岁，头昏苍白半年。贫血貌，胸骨压痛（-），肝脾不大。HGB76g／L，WBC3×109／L，PLT100×109／L。骨髓象增生明显活跃，红系出现有核细胞和巨大红细胞及环形铁粒幼细胞15％，本例的诊断是（） A.再生障碍性贫血 B.巨幼细胞贫血 C.慢性病性贫血 D.急性红白血病 E.骨髓增生异常综合征

骨髓增生异常综合征题库1-0-8

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]关于骨髓增生异常综合征（MIYS）叙述不正确的是（） A.主要好发于老年人 B.年轻人发病与烷化剂有关 C.患者主要表现为贫血 D.骨髓增生低下 E.有向白血病转化的高风险

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]以下属于MDS的病态造血的是（） A.骨髓红系增生活跃 B.粒细胞核固缩，有空泡 C.可见Auer小体 D.呈裂孔现象 E.可见淋巴样小巨核细胞

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]骨髓增生异常综合征的临床表现描述正确的是（） A.RA以全血细胞减少为主 B.RAEB以贫血为主，可见环形铁粒幼细胞 C.RAEB骨髓中原始细胞20％～30％ D.RAEB-T全血细胞减少的进程缓慢 E.CMML的Ph染色体阳性出处：辽宁11选5 https://www.360docs.net/doc/e317632484.html,;

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]以下措施不宜于骨髓增生异常综合征的治疗的是（） A.输血 B.阿糖胞苷化疗 C.维A酸 D.ATG E.干扰素

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]男性，62岁，头昏苍白半年，发热伴鼻出血1周。体检：体温39℃，贫血貌，胸骨压痛（-）。HGB50g／L，WBC3×109／L，PLT20×109／L。骨髓象增生明显活跃，红系出现有核细胞和巨大红细胞，粒系分叶过多，见巨大血小板。本例的诊断是（） A.再生障碍性贫血 B.骨髓增生异常综合征 C.急性单核细胞白血病 D.急性红白血病 E.急性淋巴细胞向血病

免疫学分型的进展人们识别白血病已有160多年的历史，在诊断分型上经历了五个阶段。第一阶段是肉眼观察，第二阶段是19世纪后期发明细胞染色技术，开始镜下分类诊断；第三阶段为自20世纪30年代后期相继建立起细胞化学染色技术，应用与白血病分型诊断，至20世纪80年代成为FAB白血病分类分型的基础；第四阶段为在FAB分型细胞形态学和细胞化学的基础上应用细胞免疫化学染色技术和细胞遗传学技术进行白血病分型诊断；第五阶段为最近十余年，应用分子生物学技术对白血病进行病理机制、诊断分型方面的深层次研究，使白血病的分类分型诊断日臻完善，对此认识也不断深入。当前研究白血病分型趋向细胞形态学、细胞免疫学、细胞遗传学和分子生物学，简称MICM分型。但是由于白血病细胞具有异源性和异质性的特点，用免疫学手段检测细胞表面分化抗原常有紊乱现象，而且它们尚未达到实用、普及意义上的应用要求。因此，细胞形态学检验仍为当今最根本性的诊断手段，而理想的分类便是以细胞形态学为基础，结合细胞免疫学、细胞遗传学和分子生物学提供的信息，或把新技术作为临床诊断的辅助性手段，相互结合，进行综合判断，不断发现和认识每一个白血病类型的异质性差异和临床之间的联系。因此细胞遗传学和分子生物学是当今研究探索白血病本质极其重要的方法，对于形态学来说又是亟须充实的新学科知识。造血细胞分化为成熟细胞过程中会出现一系列的免疫表型变化，白血病是造血细胞的某一克隆被阻滞在某一分化阶段上并异常增殖的结果，故白血病细胞往往停滞在细胞分化的某一抗原表达阶段，因此可以利用单克隆抗体检测相应白细胞表面抗原或胞质内的分化抗原进行白血病类型、细胞发育阶段的鉴别，从而指导治疗，判断预后。近来采用急性白血病的一线单抗来筛选急性髓系白血病及T、B淋巴系白血病，用二线单抗进一步确定系内亚型。 ALL的免疫学亚型与FAB亚型之间除L3外，无相关性，有报道78%的B-ALL为L3型。急淋免疫学分型不同，临床表现及预后有差异。急性白血病免疫诊断标志一线单抗二线单抗髓系CD13、CD117 CD33、CD14、CD15、CD11、CD61 Anti-MPO CD41、CD42、血型糖蛋白A B淋巴系CD22浆、CD19、CD10、CD79a浆CD20、CD24、Cyμ、Smlg T淋巴系CD3浆、CD7、CD2 CD1、CD4、CD5、CD8 非系列特异性TdT核、HLA-DR CD34 筛选急性白血病的免疫标记 CD10 CD19 CD22c/m* TdT HLA-DR CD3c/m CD7 CD13 CD17 MPO B系-ALL + + +/—+ + —————T系-ALL ———+ —+/—+ ———AML ————+ ——+ + + 1.ALL免疫分型急性淋巴细胞白血病的免疫分型可分成三个阶段：1986年以前的五分法，1986~1994年的两大类七分法，1994年法国召开了国际白血病欧洲免疫学分型协作组（EGIL）提四型21类法。目前较常用将ALL分为T细胞系{占20%}和B细胞系（80%）两大型，T细胞系ALL又分为两亚型：早T前体-ALL和T细胞ALL；也有将T-cell-ALL 分为三个亚型：I型幼稚胸腺细胞型、II型中间胸腺细胞型、III型成熟胸腺细胞型；B细胞

临床上常见的恶性淋巴瘤免疫表型特征: 1、T细胞和NK细胞淋巴瘤 (1)前体T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)：此型淋巴瘤TDT，CD7，cCD3表达最具特征。同时还可表达CD38，CD2，CD5，CD10;LCA，CD3常阴性。髓系相关抗原CD13和/或CD33在此型中常有表达。 (2)T前淋巴细胞淋巴瘤(T-PLL)：表达T细胞相关抗原，约60%病例CD4+/CD8-，而CD4+/CD8+或CD4-/CD8+较少，不表达TDT，CD10可与T-LBL区别。 (3)成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)：表达T细胞相关抗原，绝大部分病例呈CD4+/CD8-，通常不表达CD7，特征为几乎全部病例CD25阳性，粒酶B，TIA-1阴性。 (4)NK-T细胞淋巴瘤：瘤细胞表达CD56、CD3，多数病例表达粒酶B、穿孔系，约90%以上病例表达细胞毒性颗粒相关蛋白TIA-1。一般不表达CD4/CD8、CD25、CD57，B细胞和组织细胞分化抗原阴性。 (5)血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AILT)：CD45R0、CD3阳性，通常CD4阳性细胞多于CD8+，滤泡树突状细胞标记物CD21阳性，常可异常表达CD5、CD7。 (6)外周T细胞淋巴瘤(PTL)：T细胞相关抗原阳性，但常有部分丢失，尤以CD7、CD5多见，以大细胞为主者，可见CD30+/-，但ALK、EMA阴性可与ALCL区别。 (7)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)：特征性肿瘤大细胞表达CD30，多数表达EMA，约10-20%表达CD15，须注意与HL区别。60-80%表达ALK，据报导此标记物阳性表达者5年生成率可达80%，儿童常ALK、EMA共表达，成人多为ALK+/EMA-或ALK-/EMA+。ALCL 在多数情况下仅表达少数T细胞相关抗原，通常CD45R0，CD2、CD4阳性，而CD3、CD5、CD7常不表达。 2.B细胞恶性淋巴瘤： (1)前B淋巴母细胞淋巴瘤(B-LBL)：瘤细胞表达TdT、HLA-DR，CD79a，几乎全部病例表达CD19、大多数病例表达CD10，还不同程度表达cCD22。LCA、CD20常阴性。 (2)B前淋巴细胞淋巴瘤(B-PLL)：强表达B细胞相关抗原，1/3病例可异常表达CD5，SIg阳性。不表达CD23可与CLL/SLL鉴别。 (3)慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤(CLL/SLL)：同时表达CD5、CD23、CD43及B 细胞相关抗原，但CD20表达可能很弱。不表达CD10、CyclinD1。CD5异常表达为其持征，但CD5对组织处理，尤其是组织固定要求较高，要注意假阴性。 (4)套细胞淋巴瘤(MCL)：同时表达CyclinD1、CD5和B细胞相关抗原，但CyclinD1敏感性较差，组织固定和抗原修复方式是染色的关键。近年推出的兔源性单抗效果好些。KI-67的高表达与不良预后有关。此型不表达CD10、CD23，可与CLL/SLL、FL鉴别。

一、流式细胞仪在白血病免疫分型诊断的概述近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 1．流式细胞仪诊断白血病的依据 ⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达 ⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。 ⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。 2．流式细胞仪诊断白血病的意义 ⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。 ⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。 ⑶疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。二、免疫分型常用的免疫标志及其意义 1．白血病系列分化抗原 T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。 B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。 NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。 2．白血病系列非特异性抗原 CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34＋、HLA－D R＋、CD38－，原始细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34－、HLA－D R－、CD38＋。 3．白血病分化阶段抗原 T细胞抗原CD4、CD8。 B细胞抗原：CD10、Cyμ（胞浆μ链）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞浆

骨髓增生异常综合征的精确诊断肖志坚骨髓增生异常综合征（myelodysplastic symdrome, MDS）是一组克隆性造血干细胞疾病，其特征是血细胞减少，主要髓系细胞一系或多系发育异常（dysplasia）,无效造血，以及演变为急性髓系白血病（AML）的风险增高。自1982年FAB协作组首次定义ＭＤＳ的诊断与分型标准，在过去的三十多年里，几经补充修改，日趋完善。近年，随着细胞遗传学、流式细胞术骨髓单个核细胞免疫表型分析和第2代测序技术检测基因突变等新的诊断技术在临床的推广应用，MDS的诊断已进入一个精细化时代。一个高度怀疑MDS患者，在病史询问时以下几点应引起高度重视：①由于实体肿瘤患者的生存已有显著提高，远期并发症的治疗相关性MDS/AML也愈且多见，治疗药物及其累计量和放射治疗的累计量和剂量率等，都应有详尽的记录；②如果患者此前有血制品输注史，则应记录输血的频率和累计总量；③如果患者有长期血常规检查，其中平均红细胞体积（ＭＣＶ）是一个非常有助于ＭＤＳ诊断的指标，ＭＤＳ患者ＭＣＶ有一个不断增大的变化过程，此过程伴随着血红蛋白的逐渐下降。对于那些骨髓原始细胞＜５％的ＭＤＳ患者的诊断，需除外那些可有血细胞计数减少且伴有血细胞发育异常的其他血液和非血液系统疾病，以下几种疾病尤应引起注意：①大颗粒淋巴细胞白血病（ＬＧＬ），Ｔ－ＬＧＬ可合并纯红细胞再生障碍性贫血（ＰＲＣＡ）、中性粒细胞减少，甚至血小板减少，与MDS的RCUD应进行鉴别诊断，通过外周血淋巴细胞免疫表型分析（包括TCR Vβ分析）及TCR基因重排不难做出鉴别；②HIV感染，特别是艾滋病晚期患者，可有血细胞减少和血细胞发育异常形态学改变，HIV病毒检测和外周血T细胞亚群分析有助于HIV感染和艾滋病的诊断；③先天性红系发育异常性贫血（CDA），对儿童和青少年MDS的鉴别诊断更为重要。 “骨髓涂片中红细胞系、中性粒细胞系或巨核细胞系中细胞发育异常的比例≥10%”是MDS的确定诊断标准之一，WHO ＭＤＳ诊断标准（2008）对血细胞发育异常的形态学特征进行了具体描述，但已有研究证实由于不同的形态学分析者对原始粒细胞和有核红细胞巨幼样变掌握的标准不同，诊断一致率不足80%。为了进一步规范粒细胞发育异常的形态学，最近, 基金资助：国家自然科学基金（81470295）；高等学校博士学科点专项科研基金（20121106130005）作者单位：300020 天津，中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院血液学研究所；实

中国人血液淋巴细胞免疫表型参考值调查来源:https://www.360docs.net/doc/e317632484.html,时间:2007-10-06 字体:[大中小] 收藏我要投稿文章出处：朱敏转载请注明出处【摘要】目的建立健康中国成人血液淋巴细胞免疫表型分析参考值。方法用Simultest IMK-Lymphocyte试剂盒的荧光抗体对102例健康中国成人血液进行染色，以FACSort流式细胞仪进行分析，Simulset程序获取数据并分析结果，SPSS软件进行统计。结果18～65岁健康中国成人淋巴细胞参考值范围CD+3细胞是50%～84%（955～2 860/μl），CD-3CD+19细胞为5%～18%(90～560/μl)，CD+3CD+4细胞为27%～51%(550～1 440/μl)，CD+3CD+8细胞为15%～44%(320～1 250/μl)，CD-3、CD+16和/或CD+56细胞为7%～40%(150～1 100/μl)，CD+3CD+4/CD+3CD+8比值为0.71～2.87。随着年龄增长CD+3CD+4细胞略有升高，CD+3CD+8细胞略有降低。NK细胞在大年龄组女性低于男性，且有统计学差异(P＜0.05)。与高加索人和美国人相比，中国人的CD+3CD+8细胞和NK细胞(CD-3，CD+16和/或CD+56)的相对值(百分率)与绝对值均高，CD-3CD+19细胞和CD+3CD+4细胞仅相对值较低，但绝对值不少。CD+3CD+4/CD+3CD+8比值向低值漂移。结论种族、性别、年龄和环境因素可影响健康人淋巴细胞表型分布。 Reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adult Zhu Lihua, Wang Jianzhong, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing,100034 【Abstruct】Objective To establish the reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adults.Method Staining whole blood with fluorescein-conjugated monoclonal antibodies supplied by simultest TM IMK lymphocyte kit, we analyzed 102 healthy Chinese residents (age range 18～65 years) by FACSort flow cytometer, acquired results by Simultest programme, and performed statistical analysis by SPSS software.Results The 95% reference ranges in absolute counts per microliter of whole blood (percentage of lymphocytes) for CD+3, CD+3CD+4, CD+3CD+8, CD-3CD+19, CD-3/CD+16 and/or CD+56 cells were 955 to 2 860 (50% to 84%), 550 to 1 440 (27% to 51%), 320 to 1250 (15% to 44%), 90 to 560 (5% to 18%), 150 to 1 100 (7% to 40%) respectively. The CD+3CD+4/CD+3CD+8 ratio was 0.71 to 2.87. CD+3CD+4 cells increased and CD+3CD+8 cells decreased slightly with age. Women were compared to men in old age group, NK cells (CD-3/CD+16 and/or CD+56) were lower (P＜0.05). Compared with Caucasians and Americans, Chinese had higher percentage and absolute numbers of CD+3CD+8 and NK cells, but had lower percentage of CD-3CD+19 and CD+3CD+4 cells without absolute number change. So CD+3CD+4/CD+3CD+8ratio skew to the lower values.Conclusion The race, age and environment could influence the reference value of lymphocyte immunophenotype. 【Key words】Lymphocyte immunophenotype Reference value Flow cytometry 淋巴细胞免疫表型分析在原发或获得性免疫缺陷病、自身免疫性疾病的辅助诊断和移植免疫的监测中具有重要作用。随着流式细胞仪的广泛应用，采用流式细胞术进行淋巴细胞免疫表型分析已逐渐成为临床检验的常规工作之一。各国的流式细胞术实验室均建立了自己的参考值，并对其种族、性别、年龄等影响因素进行了探讨。目前我国还没有用流式细胞术、采用双染色分析淋巴细胞免疫表型参考值的报告。为此我们对102例健康成人进行了淋巴细胞免疫表型分析，现报告如下。材料和方法一、研究对象 102例标本均取自于无免疫性疾病、无现症、不吸烟、体检健康、血细胞计数及肝、肾功能检查正常的成人。年龄18～65岁，其中男性54人，女性48人。首先按男女性别分为两大组，每组中又以40岁为界，≤40岁者为小年龄组（男24人，女19人），＞40岁者为大年龄组（男30人，女29人）。

免疫细胞分型常见标志物大串烧（一）——T细胞分型标志物免疫分型（immunophenotyping）是指根据存在于细胞表面、核或细胞质中的标记物或抗原的类型，利用基于抗体的对异质细胞群进行分析，以鉴定多种目标细胞群的存在及比例。通过使用特异性识别不同细胞类型标记物或抗原的抗体，从而帮助鉴定细胞的谱系。例如肿瘤标志物的检测、浸润免疫细胞的分析、白血病的诊断等。免疫分型可以利用组织切片(新鲜或固定组织)通过免疫组化方法以及利用细胞悬液通过流式细胞术进行分析。流式细胞术可以说是用于探测人类免疫表型的首选技术，特别是由于它可以在诸如血液的复杂混合物中通过测量许多单个细胞上的多个参数，从而鉴定和分析包括稀有亚群在内的许多细胞亚群。并且由于可用的抗体试剂的扩大和实验方案的不断调整，流式细胞术不仅可用于评估细胞表面蛋白的表达，还可以用于评估胞内蛋白的表达或修饰水平以及细胞因子的水平。使用细胞表面标记的特定组合对免疫细胞亚群进行定义是一个不断发展的过程，特别是那些高频研究的细胞类型。这些类型包括调节性T细胞(Treg)、分泌IL-17的T辅助细胞(Th17)、树突状细胞(DC)和自然杀伤细胞(NK)。尽管新标记的发现和新的细胞子集将在未来一段时间内持续下去，然而，我们还是希望细胞免疫学领域具有足够的成熟程度，以达到对大多数共同研究的免疫细胞亚群的定义达成共识。换句话说，应当能够定义一种相对稳定的标记集合，其描绘T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和DC细胞等主要类型。因此，我们通过总结文献确定各个细胞类型的关键分化标记，并且总结目前用于人体免疫监测的标准化免疫表型分型组合。 T细胞 T淋巴细胞可在CD3表达的基础上被免疫表型化，随后进一步细分(如CD8+杀伤性T细胞和CD4+辅助性T细胞)。此外，T细胞表型是灵活的，可以随不同的微环境发生变化；表

流式细胞术免疫分型基础

免疫分型组成

系别相关标志干/祖细胞：CD34，CD38，HLA-DR，TdT 髓系：CD33，CD13，CD15，CD11b，CD14，CD64，cMPO，CD117, CD11c, CD36 红系：CD71，glyA 巨核系：CD41，CD61 B 细胞：CD10，CD19，CD20，CD22，CD23，k，λ, cCD79a,cIgM, (CD5, CD11c, CD103, CD25, FMC7) T细胞：CD2，CD3，CD5，CD7，CD4/8，cCD3, TCR NK细胞：CD16，CD56，（CD3 -/CD56+）浆细胞：CD138，CD38,c k，cλ

原始细胞（Blast）早幼粒细胞（有颗粒原粒？）

髓系幼稚细胞 ?幼稚细胞包括原粒、原单、原始巨核、幼单。?异常单核不能算幼稚单核，在鉴别急性粒单细胞白血病、急性单核细胞白血病、慢性粒单细胞白血病中有重要作用。 ?小的异常增生巨核和微巨核不能算幼稚细胞。?在APL中，异常早幼粒也算幼稚细胞。 ?原红一般不计在内，除非罕见的急性纯红细胞白血病。

髓系幼稚细胞免疫标志 ?原粒、原单：CD34、CD117、HLA-DR、CD13、CD33、MPO+/- ?原始巨核:CD61、CD41a、CD9、CD36（不特异）?幼单：CD15dim、HLA-DRstr、CD64、CD11c、CD4dim、CD11b、CD33str、CD13、CD14-?APL：HLA-DR-、CD34-、CD117+、CD9+、 CD15-/+、CD33str、CD64+、CD13dim

四色流式细胞术分析骨髓增生异常综合征原始细胞免疫表型作者：吴雨洁，李建勇，仇海荣，肖冰，张建富，宋君红【摘要】为了研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓原始细胞免疫表型特征，应用四色流式细胞术对常规设门及二次设门策略选取的29例MDS患者的骨髓细胞悬液中，CD34+细胞进行免疫表型分析。结果表明：①随着MDS的进展（RA/RAS→RAEB→RAEB-T），根据CD45/SSC图中选取的原始细胞群中， CD34+细胞比例逐渐增高，分别为8.0%、46.4%、76.8%，各亚型之间差别有显著意义（P<0.05）。②在CD45 vs SSC散点图上，设门所取的原始细胞抗原表达随着RA/RAS→RAEB→RAEBT的进展，HLA-DR、CD13、CD33、CD117表达逐渐增高，CD15表达逐渐减低，差别均有显著意义（P<0.05）。③在CD45 vs CD34散点图上二次设门取CD34+原始细胞行抗原表达的分析，同样异常表达HLA-DR 及髓系抗原CD13、CD33和CD117，比例高于常规分析法（P<0.05），CD15比例减低，在RA/RAS中CD13、CD33、CD117和HLA-DR的表达较常规分析的原始细胞比例明显增高（P<0.05），相关抗原的表达率在各亚型间差别无显著意义（P>0.05）。结论：常规设门法能反映MDS疾病的进展，而二次设门策略则更能反映MDS原始细胞的生物学特征，CD34的异常表达代表原始细胞的不成熟性和异质性，在临床高度怀疑但形态学和细胞遗传学不能诊断时，原始细胞免疫分型对MDS的诊断更具意义。【关键词】骨髓增生异常综合征 Four-color Flow Cytometric Immunophenotypic Features of Blasts in Myelodysplastic Syndromes AbstractThis study was aimed at exploring the immunophenotypic features of blasts in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). Four-color flow cytometry using conventional and secondary gating strategies was used to immunophenotype blasts and the CD34 positive cells in bone marrow nucleated cells of 29 patients with MDS. The results showed: (1) with progression of MDS from RA/RAS，RAEB to RAEB-T，the proportion of CD34+ cells were gradually increased from 8.0%，46.4% to 76.8% (P<0.05)；(2) using CD45 vs SSC gating strategy，with the transformation of RA/RAS，RAEB to RAEB-T，the expression of HLA-DR，CD13，CD33，CD117 were also gradually increased (P<0.05)，and the expression of CD15 was gradually decreased (P<0.05)；(3) using CD45 vs CD34 gating strategy，the expression of HLA-DR，CD13，CD33，CD117 on blasts were higher by secondary gating method than those by conventional

流式细胞仪在白血病免疫分型诊断一、概述近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 1．流式细胞仪诊断白血病的依据 ⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达 ⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。 ⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。 2．流式细胞仪诊断白血病的意义 ⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。 ⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。 ⑶疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。二、免疫分型常用的免疫标志及其意义

BD FACScanto ll白血病免疫分型六色试剂搭配六色试剂第一管 CD7 FITC 340737 CD33 PE 347787 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD10 PE-CY7 341092 CD20 APC 340941 CD19 APC-CY7 348794 第二管 CD15 FITC 347423 CD11b 347557 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD34 PE-CY7 348791 CD56 APC 341025 HLA-DR APC-CY7 335796 第三管 CD2 FITC 347593 CD13 PE 347837 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD5 PE-CY7 348790 CD22 APC 340933

CD14 APC-CY7 333945 溶血素 349202 7 color setup beads 335775 流式上样管，无菌无盖125支/包 352052 6 color TBNK reagent kit 337166 第一管 CD7 FITC 340737 CD33 PE 347787 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD10 PE-CY7 341092 CD20 APC 340941 CD19 APC-CY7 348794 第二管 CD15 FITC 347423 CD11b 347557 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD34 PE-CY7 348791 CD56 APC 341025 HLA-DR APC-CY7 335796 第三管 CD2 FITC 347593

流式细胞术科技名词定义中文名称：流式细胞术英文名称：flow cytometry assay;flow cytometry;FCM 其他名称：荧光激活细胞分选法(fluorescence-activated cell sorting,FACS) 定义1：一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞，用激光束激发单行流动的细胞，根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。应用学科：免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科）；免疫学检测和诊断（三级学科）定义2：一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。用以分析细胞大小、细胞周期、DNA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）定义3：用荧光剂对细胞特定成分染色，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，并能对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。应用学科：细胞生物学（一级学科）；细胞生物学技术（二级学科）流式细胞术（Flow CytoMeter，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，

并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。简介一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术。其特点是通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数。根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体。目前最高分选速度已达到每秒钟3万个细胞。特点