科学家发现肠道病菌致病机制

发表时间：2017-02-06T14:11:50.760Z 来源：《医药前沿》2017年1月第01期作者：

[导读] 该研究发表在近日出版的《科学》杂志上。

加州大学戴维斯医学院的科学家发现，肠道致病菌入侵肠道时引发免疫反应会对肠壁进行修复。新发现对开发防治肠道致病菌的新手段，缓解因滥用抗生素所导致的耐药性增加的严峻局面具有十分重要的意义。该研究发表在近日出版的《科学》杂志上。

人类健康的大肠是无氧环境，有益微生物可在此繁殖生长，而致病肠道菌如大肠杆菌则需要在有氧环境中生存。加州大学戴维斯医学院的科学家发现，肠道致病菌可释放毒素，损伤肠壁，引发腹泻。为了修复损伤，人体将加速上皮细胞的分裂，形成新的肠壁，这将使黏膜表面产生许多不成熟的细胞。这些新细胞富含氧气，可提高大肠环境的氧气水平。在这一新环境中，肠道致病菌将在优胜劣汰的竞争中战胜厌氧微生物，从而导致人类生病。

随着耐药菌株的不断出现，一些耐药菌已开始对一些特异性药物不再产生反应，人类近50年来在抗击感染性疾病上所取得的突出成绩已处于危险之中。耐药性问题已渐渐演变为全球重大的公共卫生威胁。今年，美国疾病控制和预防中心已确定了三株需引发关注的耐药菌，分别是难辨梭状芽孢杆菌、碳青霉烯类肠杆菌科细菌和淋球菌。今年5月，英国政府的研究报告预测，到2050年全球每年将有1000万人口因产生耐药性而感染致死，其经济成本将高达100万亿美元。

有关肠道菌的研究亦属新兴研究领域，被视为有力竞争诺贝尔奖的热门研究领域。其研究涉及耐药性研究、肠道菌群失衡、肥胖症、炎性肠病、肠易激综合征、胃肠道癌症、心血管病、脂肪肝脏疾病、孤独症、关节炎和哮喘等诸多疾病。

新发现对开发新的肠道疾病治疗策略意义重大。科学家认为，新治疗手段可重点针对肠道功能的损伤，为有益微生物提供其组成成分，或加强其阻止肠道致病菌入侵的能力方面着手。

人体各部位常见的致病菌

人体各部位常见的致病菌一、人体中的常见的致病菌： 1、葡萄球菌：属革兰氏阳性球菌。是人体皮肤上寄居最多的致病菌，也见于鼻咽等处。金黄色葡萄球菌致病力最强，主要产生溶血素、杀白细胞素和血浆凝固酶等，造成许多种感染，如疖、痈、脓肿和伤口感染等。金黄色葡萄球菌感染的特点是局限性组织坏死，脓液稠厚、黄色、不臭。也能引起全身性感染。 2、链球菌：属革兰氏染色阳性球菌。存在于口、鼻、咽和肠腔内。链球菌的种类很多，溶血性链球菌、绿色链球菌和粪链球菌是常见的致病菌。溶血性链球菌能产生溶血素和透明质酸酶、链激酶等，溶解破坏细胞间质中的透明质酸、纤维蛋白和其他蛋白质，使炎症易扩散而缺乏局限化的倾向。脓液特点是比较稀薄，淡红色，量较多。典型的感染是急性蜂窝织炎、淋巴管炎等。绿色链球菌是一些胆道感染和亚急性心内膜炎的致病菌。粪链球菌属厌氧菌，常和大肠杆菌一同引起混合感染。 3、大肠杆菌：革兰氏染色阴性。寄居于肠道内。对维生素K的合成有重要作用。它的单独致病力不大，若和其他致病菌在一起时，可造成严重的混合感染，如大面积烧伤感染、阑尾脓肿、急性胆囊炎等，产生的脓液稠厚，有粪臭。 4、绿脓杆菌：革兰氏染色阴性。常寄居于肠道和皮肤上，它对大多数抗菌药物不敏感，故成为继发感染中的重要致病菌，特别是大面积烧伤感染时，可引起难以控制的绿脓杆菌败血症。绿脓杆菌感染的伤口常不易愈合，其脓液呈淡绿色，有腥臭味。 5、变形杆菌：革兰氏染色阴性。存在于肠道和前尿道，为尿路感染、急性腹膜炎和大面积烧伤感染的致病菌之一。变形杆菌对大多数抗菌药物有耐药性。脓液具有特殊的恶臭。 6、无芽胞厌氧菌：革兰氏染色阴性的专性厌氧菌。在一般外科感染中，此类细菌为重要的病原体之一。具有临床意义的有脆弱类杆菌、核梭形菌、消化球菌和消化链球菌等多种。这些无芽胞厌氧菌寄生在人体内的腔道，特别是胃肠道（结肠内的数量最多）、口腔、阴道等处。它们与需氧菌共同构成机体的正常菌群。正常情况下保持菌群相对平衡，对人体无害。其致病条件是：当某些原因（如血液供应障碍、组织坏死、需氧菌共生等）造成局部组织的氧化还原电势降低，便有利于无芽胞厌氧菌的繁殖。在机体许多封闭部位，单纯厌氧菌可造成感染，但多数厌氧菌是与其他需氧菌共生而引起感染的。厌氧菌感染脓液有恶臭。目前有效的治疗药是甲硝哒哇（灭滴灵）。二、食品中常见的致病菌： 1、肉毒杆菌：偏爱高蛋白食物。肉毒杆菌是自然界广泛存在的一种细菌，在土壤、动物粪便等地方经常可以见到它。它尤其喜欢肉肠、火腿等富含蛋白质的食品，同时在豆制品和煮熟的黄豆、豆酱类食品中也可能含有。在我国的新疆、青海等少数民族地区，几乎每年都会出现因自制发酵肉制品而导致中毒甚至死亡的事件。 2、沙门氏菌：多在动物性食品中出现。它是导致我国食物中毒的主要元凶之一，通常寄居在人或动物肠道内。它主要污染动物性食品，包括禽畜类、蛋类、奶类及其制品，如果没有彻底加热，则可能感染。美国曾多次出现大规模沙门氏菌污染事件，包括鸡蛋等。

食品致病菌检测

食品致病菌快速检测技术时间:2004-05-11 10:24:00 来源:食品商务网沙门氏菌、李斯特氏菌、大肠杆菌O157、弯曲杆菌等食物致病菌已成为危害食品安全的头号杀手。如何快速而准确地检测这些致病菌，是有效遏制这些杀手、确保食品安全的首要任务。常规食品微生物检测方法包括反复增菌、菌落分离及多种生化和血清学鉴别实验，不仅步骤复杂，而且耗费时间，难以适应飞速发展的现代食品生产和流通领域。因此为了确保食品的安全性，开发快速检测致病菌的方法非常重要。随着生物、化学、材料科学以及计算机领域的进步，新的快速检测和识别方法层出不穷，这些方法主要包括微量生化试剂盒、抗原－抗体检测、DNA检测，以及常规检测的改进方法。微量生化试剂盒主要用于食品微生物的纯培养的生化鉴别上，与常规方法原理相同。一般是特别针对肠道菌或非肠道菌（如弯曲杆菌、李斯特氏菌、厌氧菌、非发酵性G－菌和G ＋菌）而设计，采用鉴别某种微生物的多种微量培养基及底物，其结果可人工识读；如结合自动保温、监测并记录设备，再与计算机中储存的数据库比较而自动鉴别的话，则可进行多样品大规模快速检测。 DNA检测方法包括应用探针、PCR技术和噬菌体技术，这些检测方法已商品化。探针检测一般是检测rRNA，因其rRNA在细菌中的高拷贝数，无须扩增，检测灵敏。PCR技术是用小片段的 DNA探针或引物，与特异性模板杂交，并用Taq酶扩增。几次循环后，PCR可以在2h 内扩增单拷贝DNA到1百万倍，所以从理论上说无须增菌培养。但由于食品和培养基中存在的抑制剂，可能阻止引物连接和减低扩增效率，所以在检测食品时，还是需要在检测前先进行增菌培养。应用噬菌体对其宿主的高度专一性的特点，进行食品致病菌的检测的实例就是沙门氏菌的检测，其中所使用的噬菌体经过基因工程改造而携带有可检测标记。如有沙门氏菌存在，此噬菌体将标记带给宿主并表达，从而被检出。抗体检测方法是利用抗原－抗体的高度专一性结合的特点。由于反应简单和易操作，现已开发了许多方法用于食品检测。最简单的是乳胶凝集（LA），此法采用抗体包埋的有颜色的乳胶珠或胶体金颗粒，用于从食品中分离的纯培养的快速血清学识别或分型，LA的改良方法是反向被动乳胶凝集（RPLA），法常用于检测食品萃取液中的毒素。例如，食品中金黄色葡萄球菌即可采用此法检出：葡萄球菌的表面存在A蛋白，具有种属特异性，该A 蛋白能与人及多种哺乳动物的免疫球蛋白IgG的Fc段结合，因此可采用IgG包埋的乳胶颗粒，结合血浆纤维蛋白原与凝集因子的凝集反应，来检测金葡菌的有无。酶联免疫分析（ELISA）是食品病原菌检测最常用的抗体分析方法。常设计成“三明治夹心”实验：固体基质上连接抗体，用来捕获增菌培养物中的抗原，与酶相连的第二抗体用于检测。塑料微孔板的侧壁、涂抹棒等检测用具常作为固体基质。在食品微生物检测的国家标准中，金葡菌肠毒素即是采用此法检出的。免疫沉淀或免疫层析也是采用“夹心法”，但是没有采用酶连接物，而是用耦联在有色乳胶珠或胶体金上的抗体来检测。该方法简便易行，无须洗涤或操作，在获得增菌样品后，短短十来分钟即可完成。现已商品化的李斯特氏菌检测试剂盒即采用此方法。此外，用含脱水培养基的一次性板卡，以替代传统的琼脂平板；用荧光法检测细菌ATP，以快速在线检测细菌总数；将生色物质和荧光物质加入到培养基内，以快速检测特征酶活力———这些方法，在食品微生物的快速检测中都已成为常用方法。快速方法的优点是可从大量食品样品中快速筛选某致病菌或毒素。但要注意的是，快速

肠道菌群小知识

1代谢作用 ? 提供热量 ? 生产短链脂肪酸 ? 合成维生素K 和叶酸 ? 胆汁酸的分泌 ? 参与药物代谢 2. 免疫效果：正常菌群能刺激宿主产生免疫及清除功能 ? 刺激免疫球蛋白A （IgA ）的生产 ? 促进抗炎细胞因子的分泌和下调促炎细胞因子 ? 诱导调节性T 细胞 3. 预防病原体入侵：正常菌群在人体某一特定位粘附，定植和繁殖，形成一层菌膜屏障。通过菌群间存在的生物拮抗作用，抑制并排斥病原体的入侵和群集，调整人体与微生物之间的平衡状态人类肠道菌群什么是肠道菌群？人的肠道内寄居着种类繁多的微生物，这些微生物称为肠道菌群。肠道菌群按一定的比例组合，各种菌间互相制约，互相依存，它们与宿主存在着共生关系，共同维护着宿主的生理平衡。肠道菌群并非是生来就有的，当胎儿还在母体子宫内时，胎儿所处的环境几乎是无菌的，因此胎儿肠道内是无菌的，婴儿出生时迅速暴露在母体阴道或皮肤的微生物下，随着从婴儿到老年的发展变化，我们的肠道菌群在出生后几个月迅速增多，多样性增加，到成年后达到稳定状态，之后老年时期多样性渐渐减少[1]。这些微小的生物群体就这样不知不觉伴随着我们的一生。肠道菌群的数量和分类据推测，正常健康成人肠道菌群总数高达1×1014，种类超过1000种，而一个成年人自身的细胞数量约为 1×1013个，也就是说居住在我们肠道内的菌群数量是人体细胞总和的10倍。在胃和小肠中，细菌的种类相对较少。结肠中，每克肠道内容物存在1012个细菌细胞，细菌种类达300-1000种，而其中99%的细菌来自于其中30-40种[2] 。正常人肠道中包括四种主要的细菌门类：厚壁菌门 Firmicutes （约50-75%，包括梭菌属），拟杆菌门Bacteroidetes （约10-50%，包括拟杆菌属、普氏菌属和卟啉单胞菌属），放线菌门 Fusobacteria （约1-10%，包括双歧杆菌），变形菌门 Proteobacteria （常常约少于1%，包括大肠杆菌），其中厚壁菌门和拟杆菌门是人类肠道菌群的主要组成部分。大多数细菌属于拟杆菌属、梭菌属、真杆菌属、瘤胃球菌属、消化球菌属、消化链球菌属、双歧杆菌属。其他属，如埃希氏菌属和乳杆菌属较少。拟杆菌属约占肠道中所有细菌的30%[][3]。我国科学家在健康年轻人体内观察到的9个属的细菌广泛存在，分别为厚壁菌门的考拉杆菌属、罗氏菌属、Blautia 、 Faecalibacterium 、梭菌属、Subdoligranulum 、瘤胃球菌属和粪球菌属以及来自拟杆菌门的拟杆菌属。这9个属的细菌均具有在人体肠道内发酵产生短链脂肪酸的能力，而短链脂肪酸具有维持人体健康的多重作用，例如充当肠道上皮特殊营养和能量组分，保护肠道黏膜屏障，降低人体炎症水平和增强胃肠道运动机能等[4] 。 Phylum Proporti on （%） [3] 厚壁菌门 Firmicutes 50-75% 拟杆菌门 Bacteroidetes 10-50% 放线菌门 Fusobacteria 1-10% 变形菌门Proteobacteri a 少于1% 肠道菌群的作用正常肠道菌群具有重要的自我平衡功能[5]。肠型未来某一天，当你走进医院的时候，医生可能不仅会询问你的过敏史、血型，还会问到你的肠型。来自德国海德堡欧洲分子生物学实验室（EMBL ）的科学家们提出了这个概念 ——肠型，他们通过全球性实验国际人体肠道元基因组研究计划，发现以肠道内的细菌种类和数量划分，人类拥有三种肠型，研究人员把这3种肠型命名为拟杆菌型（Bacteroides ）（肠型Ⅰ）、普雷沃氏菌型（Prevotella ）（肠型Ⅱ）和瘤胃球菌型（Ruminococcus ）（肠型Ⅲ），

肠道致病菌(本科)

第7章肠道杆菌(Enteric bacilli) 第一节概述肠道杆菌是指寄生在人和动物肠道中的大群革兰氏阴性杆菌, 它们为兼性厌氧菌, 属于肠杆菌科。本科细菌不产生芽孢, 形态相似,? 但含有多种酶类, 故生化反应繁多, 根据它们的特殊构造、生化特性和抗原结构等方面的特点, 可将肠杆菌科的细菌分为6族13属。志贺氏菌属、沙门氏菌属及部分埃希氏菌属是人类的重要致病菌。其它各属细菌大多是肠内常居菌或机会致病菌。一、生物学性状 (一)形态肠杆菌科的细菌皆为革兰氏阴性的短小杆菌, 多数有周鞭毛, 有些菌株有性菌毛可传递质粒。 (二)生化特性生化反应活泼, 能分解多种糖类和蛋白质, 形成不同的代谢产物, 这都可作为鉴别细菌的依据。一般说来非致病性的埃希氏菌属和肠杆菌属细菌具有β-半乳糖甘酶,而致病性的志贺氏菌属和沙门氏菌属细菌无此酶, 可利用乳糖发酵试验作为鉴别肠道致病菌与非致病菌的重要依据。 (三)抗原构造与血清学分型 1.抗原构造复杂: 有菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(K)抗原三和种。 (1)O抗原: 脂多糖分子最外层, 由重复的低聚糖所组成的聚合体 (2)H抗原: 是组成细菌鞭毛的蛋白质成分, ?按多肽链的氨基酸排列顺序及空间构型决定鞭毛抗原的特异性。 (3)K抗原: 是多糖质, 它存在于荚膜或微荚膜中。 2.血清学分型是用血清学方法检查待测菌株细菌表面的特异性群或型抗原, 这需要单因子血清做凝集试验。 (四)抵抗力肠杆菌科的细菌无芽孢, 对热力和一般消毒剂的抵抗力都不强。雾化器,是医院感染中重要的传染来源。二、微生物学诊断原则粪便是最常采取的标本, 初次分离时, 一般采用具有选择和鉴别性质的培养基, 如S.S.琼脂和中国兰培基。对肠科细菌的鉴定, 主要是根据生化反应。第二节埃希氏菌属(Escherichia) 大肠埃希氏菌可分为致病性和非致病性两大类,非致病菌是人和哺乳动物肠道中的正常菌群,且可帮助机体合成维生素B、K和大肠菌素(colicins)等, ?甚至在一定程度上还能阻止外来的病原体生长、繁殖及引起疾病。生物间若失去平衡或因机体过度虚弱或外伤而其它无菌部位时,它们也会乘机侵害, ?成为机会致病菌。一、致病性 (一)致病物质： 1.定居因子（或称粘附素）：为大肠杆菌一种特殊菌毛，抗原性强，可粘附于宿主体肠壁。 2.肠毒素分耐热不耐热两种。 a 不耐热肠毒素（heat labile enterotoxin,LT）60C时30分钟灭活。与霍乱弧菌外

常见致病菌的检测

常见致病菌的检测摘要：近年来食品药品安全的问题屡见不鲜，做好致病菌的检测，是防范于未然的措施，因而显得尤为的重要，也越来越受到人们的重视。这就要求我们对一些常见的致病菌检测技术的要有一定的了解。关键词：致病菌，肠球菌，霉菌和酵母菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌。一.肠球菌（1）、形态与染色【1】肠球菌为革兰阳性（G+）球菌,广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。本菌对营养要求较高，在含有血清的培养基上生长良好。（3）致病性【1】一般而言，肠球菌的毒力不高。与金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌相比，肠球菌对大多数动物的半数致死量（LD50）值相当高，而且肠球菌很少引起蜂窝织炎和呼吸道感染。肠球菌只有在宿主组织寄殖，耐机体非特异及免疫防御机制，并引起病理改变，才能导致感染。粘附测定显示肠球菌可通过细菌表面表达的为粘附素，吸附至肠道、尿路上皮细胞及心脏细胞。这些粘附素的表达亦受细菌生长环境的影响。另外，肠球菌可产生一种聚合物质（系一种蛋白表面物质，可聚集供体与受体菌，以利质粒转移），在体外增强其对肾小管上皮细胞的粘附。细菌生长环境亦影响肠球菌与多形核白细胞反应。血清中生长的肠球菌与多形核白细胞反应较弱，而肉汤中生长的细菌反应较强。体外多形核白细胞对肠球菌的有效杀灭作用需血清补体蛋白参与，而抗肠球菌抗体可增强该作用。（4）、肠球菌属主要检测步骤如下：【2】方法一：肠球菌平板计数法检验程序 25g (mL) + 225 mL 缓冲蛋白胨水

常见肠道传染病基本知识

常见肠道传染病基本知识一、常见肠道传染病的类型肠道传染病是由相应的肠道致病菌引起的急性肠道传染病。以发病急，传播快，波及范围广为特征。它可以引起散发、流行、暴发、甚至世界性大流行，不仅危害人民健康，而且影响人民正常的生活、生产、旅游、经贸、交通运输，甚至社会安定。肠道传染病全年均可发生，但多发生在夏秋季。 1、细菌性痢疾细菌性痢疾是指由痢疾杆菌引起的肠道传染病，简称菌痢。传染源是痢疾患者和带菌者。主要通过肠道传播。病原菌随病人粪便排出，污染食物、水、生活用品或手，经口使人感染。儿童发病率最高，其次为中青年。主要临床表现：腹痛、腹泻、里急后重和粘液脓血便，可伴有发热及全身毒血症，严重者可出现感染性休克和（或）中毒性脑病。 2、伤寒和副伤寒伤寒和副伤寒是分别由伤寒杆菌和副伤寒杆菌甲、乙、丙引起的急性肠道传染病。传染源是伤寒或副伤寒患者和带菌者。主要通过肠道传播。伤寒杆菌和副伤寒杆菌通过病人或带菌者的粪便排出，污染水、食物，经口使人感染；还可通过日常生活接触、苍蝇与蟑螂等传递病原菌而传播。伤寒杆菌在水中不仅可以存活并保持毒力，而且还可以繁殖，因此，水源被污染后，易造成伤寒和副伤寒的流行。人群普遍易感，以儿童和青壮年发病率最高。病后免疫力持久。主要临床表现：持续发热，相对缓脉，有腹胀、便秘、腹泻等肠道症状，还可出现精神恍惚、表情淡漠等神经系统症状，部分病人全身可出现玫瑰色皮疹。 3、急性胃肠炎多由被细菌及其毒素或病毒污染的食物引起，致病菌主要为致病性大肠杆菌群、空肠弯曲菌、沙门氏菌等。其媒介食物主要为肉类、蛋类、水产品、凉拌菜等。患者可出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发热等症状 4、甲型肝炎甲型肝炎是由甲型肝炎病毒引起的一种病毒性肝炎。传染源是甲型肝炎患者和病毒携带者。主要传播途径以粪便排出，经口使人

梅里埃快速病原体检测解决方案

梅里埃快速病原体检测解决方案多重呼吸道病原体检测项目建议书提供精准快速的病原体结果

流行病数据与现状呼吸道感染：呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。呼吸道感染通常由病毒、细菌、非典型病原体等引起，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择对应的治疗方案。呼吸道感染是临床的常见病，其发病具有着明显的季节性：甲型流感在中国北方多出现于每年1-2月，而在中部地区亦可多出现于6-8月，在南方地区则多现于每年的4-6月；而乙型流感则多发于寒冷季节。中国各个地区流感发病率表格引自Yu H等“Characterization of Regional Influenza Seasonality Patterns in China and Implications for Vaccination Strategies: Spatio-Temporal Modeling of Surveillance Data” 我国主要的流感病原体是甲型流感H1和H3型以及乙型流感。除了甲型流感和乙型流感之外，其他多种病原体也能造成呼吸道感染，比如鼻病毒、肠病毒、冠状病毒、腺病毒、副流感病毒、偏肺病毒及呼吸道合胞病毒等。急性呼吸道感染的发生同人体免疫力降低有着直接的关系，儿童和老年人都是易感人群。一项针对儿童患者的流行病学研究发现：肠病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒是造成儿童急性上呼吸道感染的主要病原体。

引起儿童急性呼吸道感染的致病体表格引自顾艳红等“儿童急性呼吸道感染夏季和冬季病毒病原学分析” 中国儿童普通感冒规范诊治专家共识（2013年）中指出，病毒的病原学地位突出,其中以鼻病毒最常见(30%~ 50%),其次为冠状病毒(10% ~15%)、呼吸道合胞病毒( 5 % ) 、副流感病毒( 5 % ) 、腺病毒( < 5 % ) 和肠道病毒( <5%)等。对于新生儿和低龄儿童，呼吸道合胞病毒具有非常强的传染性和致病性，因此对于呼吸道合胞病毒的爆发和医院内感染需要特别的重视；另外由于腺病毒造成的呼吸道感染往往病情较重，所以对于腺病毒感染的快速病原体确认也是十分重要的。一项2015 年WHO 在12 个国家开展的调查显示，64% 的大众受调查者认为抗菌药物可以用来治疗病毒及病毒感染所导致的流感和普通感冒。常识的缺乏，导致了患者和一些医生，滥用抗菌药物。WHO的统计数据表明，中国真正需要使用抗生素的病人不到20%, 抗生素的不合理使用会引起细菌的耐药性，耐药性往往会导致很多严重感染治疗无效，给患者健康乃至生命造成重大影响. WHO曾发表全球抗菌素耐药性报告称，如果不能迅速采取措施应对这一问题，世界将迈向“后抗生素时代”，呼吁各国加强在抗生素耐药方面的合作。病原体的明确诊断对于指导有效合理使用抗生素发挥着至关重要的作用, 这是遏制抗生素耐药出现的关键. 抗击抗生素耐药性需要涵盖全方面的临床诊断方案: 微生物鉴定和药敏试验, 感染性疾病筛查和主动监测,疫情管理和监测,细菌以及病毒感染的病原确定和分型. 2016中国儿童流感指南中提出，在流感病人出现症状的48小时之内使用奥司他韦（达菲）可以明显提高治疗成功率、缩短病程。非典型病原体，如社区性获得

肠道感染细菌简述

第11章肠道感染细菌测试题一、选择题 A型题； 1．肠道杆菌所没有的一种抗原是 A. M抗原 B. H抗原 C. O抗原 D. K抗原 E. Vi抗原 2. 关于肠杆菌科的论述，不正确的是 A. 所有肠道杆菌都不形成芽胞 B. 肠道杆菌均为G—杆菌 C. 肠道杆菌中致病菌一般可分解乳糖 D. 肠道杆菌中非致病菌一般可分解乳糖 E. 肠道杆菌中少数致病菌可迟缓分解乳糖 3. 鉴别肠道致病菌与非致病菌主要依据 A. 是否发酵葡萄糖 B. 是否分解乳糖 C. 是否具有鞭毛 D. 是否具有菌毛 E. 是否具有芽胞 4. 大肠杆菌IMViC试验结果应是； A. +、—、+、— B. —、+、—、+ C. +、+、—、— D.—、—、+、+ E.+、—、—、— 5. 能产生外毒素的志贺菌是 A. 痢疾志贺菌 B. 福氏志贺菌 C. 鲍氏志贺菌 D. 宋氏志贺菌 E. 以上都不是 6. 伤寒杆菌Vi抗原变异属于 A．毒力变异 B．耐药性变异 C．菌落变异 D．形态变异 E．对外界抵抗力变异 7. 与立克次体有共同抗原的肠道杆菌是A．沙门菌的某些菌株

B．志贺菌的某些菌株 C．埃希菌的某些菌株 D．变形杆菌的某些菌株 E．克雷伯菌的某些菌株 8．分解葡萄糖产酸产气、不分解乳糖、产生H2S+++，动力试验+、尿素酶试验－，可能是下列肠道菌中的 A．大肠埃希菌 B．伤寒沙门菌 C．志贺菌 D．变形杆菌 E．肖氏沙门菌（乙型副伤寒杆菌） 9. 主要流行的肠出血性大肠杆菌的O血清型是 A. O6 B. O25 C. O157 D. O111 E. O158 10. 关于伤寒与副伤寒沙门菌致病特点的说法，正确的是 A. 潜伏期，可在肠系膜淋巴结繁殖 B. 不引起菌血症 C. 发病2周内没有第二次菌血症 D. 不侵犯肝、脾、肾等器官 E. 患病后机体获得的免疫力不强 11. 志贺菌属常引起: A. 阿米巴痢疾 B. 细菌性痢疾 C. 慢性肠炎 D. 假膜性肠炎 E. 肠热症 12. 机体抗伤寒的免疫主要依赖于 A. 体液免疫 B. 补体的作用 C. 中性粒细胞的吞噬作用 D. 抗生素的使用 E. 细胞免疫 13. 肠热症病人发病1周内，检出伤寒沙门菌阳性率最高的方法是 A. 尿培养 B. 血培养 C. 粪便培养 D. 痰培养 E. 胆汁培养 14. 疑为肠热症的病人常需抽血做细菌学检查,什么时期采血样最好 A. 发病第1周 B. 发病第2周 C. 发病第3周 D. 发病第4周 E. 疾病恢复期 15. 肠热症并发症之一是肠穿孔,其原因是 A. 细菌的直接作用 B. 肠梗阻所致 C. 肠壁淋巴组织发生超敏反应

肠道益生菌常见种类

肠道益生菌常见种类 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】

益生菌种类：到目前为止，已有芽孢杆菌属、乳杆菌属、弧菌属、假单孢菌属的众多种类及硝化细菌、光合细菌等应用于水产养殖业。根据中国农业部2013年发布的《饲料添加剂品种目录（2013）（征求意见稿）》，可用于养殖动物的饲料级微生物添加剂菌种有：地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母、沼泽红假单胞菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌、动物双歧杆菌、黑曲霉、米曲霉、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、纤维二糖乳杆菌、发酵乳杆菌、保加利亚乳杆菌等。 1.乳酸菌乳酸菌是最早用作微生物饲料添加剂的益生菌，种类繁多。从微生物特性来说，乳酸菌为革兰阳性、分解糖类产生乳酸、无芽胞; 通常在厌氧或者兼性厌氧条件下生长; 耐酸，在pH 3． 0 ～ 4． 5 下仍能够生存; 不耐高温，经80 ℃处理5 min，损失达70% ～ 80%; 包括乳杆菌属、链球菌属、明串珠菌属、片球菌属［15］。作为微生物饲料添加剂，乳酸菌在动物体内发挥的作用主要有: ①维持肠道微生态平衡，阻止和抑制致病菌，降解消化道内的有害物质; ②产生超氧化物歧化酶，增强动物的非特异性免疫; ③产生淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶等消化酶; ④产生细菌素，抑制致病菌的生长。 2.芽胞杆菌芽胞杆菌是应用很广泛的一类微生物饲料添加剂，如枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌，属于需氧菌，以内孢子的形式零星存在于动物肠道的微生物群落中［1］。与乳酸菌相比，由于芽胞杆菌能够耐受高温、高压，经过饲料制粒等过程依然可保持良好的活性，更加适宜在饲料加工过程中添加应用，在饲料中比较稳定。芽胞杆菌在一定条件下产生芽胞，作为微生物饲料添加剂，具有以下优点: ①抗性强，耐高温、酸碱、高压，对颗粒饲料加工具有良好的耐受力; ②贮藏过程中以孢子形式存在，不消耗饲料的营养成分; ③在肠道上部迅速复活，复活率接近100%; ④可产生多种氨基酸及淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等多种消化酶; ⑤消耗肠道内的氧，维持厌氧环境，抑制致病菌生长。2013饲料添加剂目录中允许使用的芽胞杆菌有枯草芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌、短小芽胞杆菌、迟缓芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌、侧孢短芽胞杆菌等。 3.酵母菌饲料添加剂目录( 2013) 中，作为微生物饲料添加剂使用的酵母主要有产朊假丝酵母、酿酒酵母等。酵母在动物肠道的作用包括: ①改善肠道微生态环境; ②提高动物体免疫功能，增强抗病力; ③可直接和肠道病原体结合，中和肠道中毒素; ④促进动物生长。 4.光合细菌光合细菌作为微生物饲料添加剂主要应用于水产方面。该类细菌是一类能够进行光合作用的微生物，在厌氧条件下利用光能同化二氧化碳。光合细菌作为微生物饲料添加剂，在水产养殖方面发挥的作用主要有: ①净化水质条件，提高水产动物生产性能; ②菌体蛋白中含有多种必需氨基酸，为水产动物提供丰富的营养物质; ③产生生物活性物质，增强动物的免疫力。

病原微生物的检验项目及结果解释教程文件

病原微生物的检验项目及结果解释

病原微生物的检验项目及结果解释微生物检查包括：细菌、真菌、衣原体、支原体及病毒等。这对于查明致病原因和选择用药十分重要。但除细菌和真菌外，直接查找方法比较复杂。细菌培养，采集血、痰、咽试子、大便、小便、创面分泌物等标本进行培养，看有无致病菌生长，正常应为阴性或少量非致病菌；真菌检查，标本涂片或培养，检出真菌为不正常。病原微生物的检验主要是检测与l临床患者致病性有关的病原性微生物，对感染性疾病进行快速、准确地诊断，密切结合临床提出及时有效的治疗方案，防止微生物产生耐药性和医院内感染的发生。基础知识 1.什么是微生物?什么是病原微生物? 微生物是需借助光学显微镜或电-y：显微镜放大观察到的结构简单，个体微小的生物的总称。微生物的种类很多，医学微生物尤其是临床微生物主要有细菌、病毒、真菌、支原体、衣原体等。微生物在自然界中广泛存在，与人类和自然界其他生物共生共存，绝大多数对人类和自然界是有益的，只有少部分可以引起人类和动植物发生疾病，这部分微生物才称为病原微生物，比如结核分枝杆菌可引起结核病，痢疾杆菌可以引起痢疾等。 2.什么是细菌?细菌分哪几种? 细菌是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。其体积微小，以微米作为测量单位，无色半透明，只有经过染色才能观察到细菌的轮廓及其结构。经革兰染色，可将细菌分为两大类，即革兰阳性菌和革兰阴性菌。细菌主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成，有的细菌还有夹膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。根据形状则可分为三类，即：球菌、杆菌和螺旋菌(包括弧形菌)。 3.什么是病毒?病毒分哪几种? 病毒是结构最简单、体积最微小(纳米)的一类非细胞型微生物，介于生命和非生命之间的一种物质形式，其必须严格寄生在活细胞内，含有单一种核酸即脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)的基因组和蛋白质外壳，没有细胞结构，对抗生素不敏感，但对于干扰素敏感。按传播途径病毒可分为呼吸道病毒、胃肠道病毒、经性传播感染的病毒和狂犬病毒等。按感染部位与症状特征则分为肝炎病毒、出血热病毒、疱疹病毒、侵犯神经系统的病毒和肿瘤病毒等。

生活中有哪些常见的致病菌

生活中有哪些常见的致病菌一、人体中的常见的致病菌： 1、葡萄球菌：属革兰氏阳性球菌。是人体皮肤上寄居最多的致病菌，也见于鼻咽等处。金黄色葡萄球菌致病力最强，主要产生溶血素、杀白细胞素和血浆凝固酶等，造成许多种感染，如疖、痈、脓肿和伤口感染等。金黄色葡萄球菌感染的特点是局限性组织坏死，脓液稠厚、黄色、不臭。也能引起全身性感染。 2、链球菌：属革兰氏染色阳性球菌。存在于口、鼻、咽和肠腔内。链球菌的种类很多，溶血性链球菌、绿色链球菌和粪链球菌是常见的致病菌。溶血性链球菌能产生溶血素和透明质酸酶、链激酶等，溶解破坏细胞间质中的透明质酸、纤维蛋白和其他蛋白质，使炎症易扩散而缺乏局限化的倾向。脓液特点是比较稀薄，淡红色，量较多。典型的感染是急性蜂窝织炎、淋巴管炎等。绿色链球菌是一些胆道感染和亚急性心内膜炎的致病菌。粪链球菌属厌氧菌，常和大肠杆菌一同引起混合感染。 3、大肠杆菌：革兰氏染色阴性。寄居于肠道内。对维生素K的合成有重要作用。它的单独致病力不大，若和其他致病菌在一起时，可造成严重的混合感染，如大面积烧伤感染、阑尾脓肿、急性胆囊炎等，产生的脓液稠厚，有粪臭。 4、绿脓杆菌：革兰氏染色阴性。常寄居于肠道和皮肤上，它对大多数抗菌药物不敏感，故成为继发感染中的重要致病菌，特别是大面积烧伤感染时，可引起难以控制的绿脓杆菌败血症。绿脓杆菌感染的伤口常不易愈合，其脓液呈淡绿色，有腥臭味。 5、变形杆菌：革兰氏染色阴性。存在于肠道和前尿道，为尿路感染、急性腹膜炎和大面积烧伤感染的致病菌之一。变形杆菌对大多数抗菌药物有耐药性。脓液具有特殊的恶臭。 6、无芽胞厌氧菌：革兰氏染色阴性的专性厌氧菌。在一般外科感染中，此类细菌为重要的病原体之一。具有临床意义的有脆弱类杆菌、核梭形菌、消化球菌和消化链球菌等多种。这些无芽胞厌氧菌寄生在人体内的腔道，特别是胃肠道（结肠内的数量最多）、口腔、阴道等处。它们与需氧菌共同构成机体的正常菌群。正常情况下保持菌群相对平衡，对人体无害。其致病条件是：当某些原因（如血液供应障碍、组织坏死、需氧菌共生等）造成局部组织的氧化还原电势降低，便有利于无芽胞厌氧菌的繁殖。在机体许多封闭部位，单纯厌氧菌可造成感染，但多数厌氧菌是与其他需氧菌共生而引起感染的。厌氧菌感染脓液有恶臭。目前有效的治疗药是甲硝哒哇（灭滴灵）。二、食品中常见的致病菌： 1、肉毒杆菌：偏爱高蛋白食物。肉毒杆菌是自然界广泛存在的一种细菌，在土壤、动物粪便等地方经常可以见到它。它尤其喜欢肉肠、火腿等富含蛋白质的食品，同时在豆制品和煮熟的黄豆、豆酱类食品中也可能含有。在我国的新疆、青海等少数民族地区，几乎每年都会出现因自制发酵肉制品而导致中毒甚至死亡的事件。 2、沙门氏菌：多在动物性食品中出现。它是导致我国食物中毒的主要元凶之一，通常寄居在人或动物肠道内。它主要污染动物性食品，包括禽畜类、蛋类、奶类及其制品，如果没有彻底加热，则可能感染。美国曾多次出现大规模沙门氏菌污染事件，包括鸡蛋等。

致病菌的检测(国标法与PCR法)

我先来说几句，我觉得我们现有的各致病菌国标检测方法检测时间太长，象我们CDC的实验室，特别是在突发性事件中，其检测结果只能是做为这一事件的流调报告来使用，对于指导临床诊断和治疗起来了大作用，这对现在的抗生素普遍耐药有着不可推卸的责任，所以我觉得快速方法应该被列入国标又想到一个，先进方法也应作为国标方法，象现在PCR技术已经很成熟，而且方法快速又准确，应该考虑列入建议采用最新的国际标准如FDA、AOAC等，选用一些快速方法。大家说得好，我也要说几句。现在的GB太古老了，现在有那么多好的方法为什么国标还不改改呢？不是一直在讲与时俱进吗？为什么就不能吸取别人的精华呢？AOAC AFNOR 等都是很有名气的，食品的出口时外商也非常信任这些认证。为什么中国就不能作出一个与世界同步得认证呢？这样很大大体高我们的国际市场竞争力的。不知道大家有没有支持我的？（；有就顶一下！！！ PCR灵敏度太高，易造成假阳性，因此现在临床上也对PCR检查作了一定限制。建议采用一些AOAC批准的快速方法，使用一些免疫试剂盒检测，如TECRA等。加入快速检测方法是大势所趋，但是我们的国标要求将原理与配方公布，我想很多产品的生产商是不愿这样的，另外GB是我们的国标，国家有关部门也要考虑成本和扶植民族企业啊！与国际接轨是方向，不过步调太快是不行的，我们太多的企业连最基本的非致病菌都不能很好的控制，要一下提高到对致病菌检测的国际标准恐怕太难，基于国情应该是首要问题吧！用国标法检测的话需要6个工作日北京中科测试中心用国标法测试要7个工作日通过查阅各种资料，对于食品中的致病菌的检测用PCR仪检测基本在24小时以内，而国标法检测需要在

常见致病菌

革兰阳性致病菌革兰阴性致病菌葡萄球菌属（金黄色葡萄球菌）链球菌属（化脓性链球菌）支原体目(肺炎支原体) 放线菌目(结核分支杆菌) 埃希菌属（大肠杆菌）沙门菌属（伤寒杆菌）志贺菌属（痢疾杆菌）螺旋体目(苍白螺旋体) 衣原体科生物学特性形态与结构球形，多呈葡萄串状排列。无鞭毛，无芽胞，有的有荚膜。G+ 球形，链状排列。无鞭毛，无芽胞，幼龄菌多由荚膜。G+ 无细胞壁，呈高度多形性，吉姆萨染色呈淡紫色，胞外繁殖最小微生物，细胞膜，荚膜，环状双链DNA 有菌丝和孢子，具有原始核质，无核膜核仁，肽聚糖和磷壁酸组成细胞壁细胞壁(分支菌酸) 杆状，多数有周身鞭毛，有菌毛，无芽胞。G- 具有周身鞭毛，无芽胞，有菌毛，有荚膜。G- 短小杆状，有菌毛，无芽胞，无鞭毛。 G- 体纤细，螺旋致密规则，两端尖直，Fontana镀银染色为棕褐色，菌体弯曲成S或C 形体积微小，呈圆形或椭圆形体，肽聚糖细胞壁，有原体(胞外，高度感染性)和网状体抗原构造有葡萄球菌蛋白A （SPA）、磷壁酸等。 A群链球菌细胞壁上多有多糖抗原，再外层有蛋白质表面抗原。 1、蛋白质抗原：血清学分型依据 2、糖脂抗原细胞壁含有独特的分枝酸主要有菌体（O）、鞭毛（H）和K抗原三种。 O抗原产生IgM；H 抗原产生IgG；Vi 抗原有助于诊断。有O、K抗原，依据 O抗原将志贺菌属分为4群密螺旋体抗原（属共同抗原） 1、脂多糖抗原：属特异性 2、外膜蛋白抗原：种特异性、型特异性代谢与培养需氧或兼性厌氧，在普通培养基上生长良好，耐高温。兼性厌氧，血平板或含血清的培养基培养。 1、兼性厌氧/厌氧 2、营养要求高， 10-12%血清培养基 3、高pH （7.8-8.0） 4、荷包蛋样典型菌落正常寄生菌，培养困难，血平板，厌氧/微需氧代谢活跃能发酵乳糖，产酸、产气； IMViC：+ + - - 对营养要求不高，兼性厌氧/需氧，普通培养基，无色半透明S型菌落，可根据生化反应的不同区分种与亚种， IMViC为-+-+ 能分解葡萄糖，产酸、不产气，不发酵乳糖。普通平板 IMViC试验为-+-- 厌氧、毒力株：家兔单层上皮细胞非毒力株：活细胞人工培养基专性细胞内生长，6-8天鸡胚卵黄囊或Hela299 细胞培养抵抗力较强，80℃30min 可杀死，对青霉素、红霉素、庆大霉素等过敏。不强，60℃30min即被杀死，对消毒剂、青霉素、红霉素、磺胺敏感。 1、弱，对理化因素较细菌敏感。2、对醋酸铊、结晶紫有抵抗3、化学消毒剂敏感。4、对干扰细胞壁的抗菌素耐药。5、对干扰蛋白质合成的抗菌素敏感抗理化因素,抗干燥和酸碱,对结晶紫和孔雀绿有抵抗力,对乙醇、湿热、紫外线、结核治疗药物敏感,抗菌素敏感强，56℃60min、 60℃15min有些仍可存活。对化学消毒剂敏感,胆盐、煌绿等对其有抑制作用,对磺胺类、链霉素、氯霉素敏感, 但易耐药不强，60℃15min 可被杀死，对氯霉素敏感水中存活 2-3周、粪便存活 1-2月，理化因素敏感(60℃30min )，氯霉素等敏感，消毒剂敏感较其他肠道杆菌弱，60℃10min即被杀死，对酸敏感极弱，对热、冷、干燥、消毒剂和肥皂水敏感，对青霉素、四环素和庆大霉素敏感。对热和消毒剂敏感，耐低温，在室温下迅速丧失传染性，60℃ 5-10分钟、75% 乙醇半分钟或2% 苏打水5分钟即可被杀死

致病菌检验

9.2检测方法 9.2.1有害物质的检测方法 9.2.1.1产品中砷含量的检测方法：按照GB/T 5009.76—2003中的第一法：二乙氨基二硫代甲酸银比色法原理：在碘化钾和氯化亚锡存在下，将样液中的高价砷还原为三价砷，三价砷与锌粒和酸产生的新生态氢作用，生成砷化氢气体，经乙酸铅棉花除去硫化氢干扰后，被溶于三乙醇胺一三氯甲烷中或吡啶中的二乙氨基二硫代甲酸银溶液吸收并作用，生成紫红色络和物，与标准比较定量。试剂硝酸硫酸【（1+1）、（1mol/L）、65％浓硫酸】盐酸 20％氢氧化钠溶液 15％碘化钾溶液，贮于棕色瓶内（临用前配制） 40%氯化亚锡溶液：称取20g氯化亚锡（Sncl2·2H20)，溶于50ml盐酸乙酸铅棉花：将脱脂棉浸于10％乙酸铅溶液中，2h后取出晾干无砷金属锌三氯甲烷

吸收液A：称取25g二乙氨基二硫代甲酸银，研碎后用适量三氯甲烷溶解。加人1.0mL一三乙醇胺，再用三氯甲烷稀释至100mL。静置后过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内备用。酚酞：1％乙醇溶液。仪器分光光度计。试样处理干灰化法：本法适合于含有有机物的试样。取5.0g试样于瓷坩埚中，加10ml 15％硝酸镁溶液，加入1g氧化镁粉末，混匀，浸泡4h，于低温或水浴上蒸干，用小火加热置炭化完全，将坩埚移至高温炉中，在550℃以下灼烧至灰化完全，冷却后取出，加适量水湿润灰分，加人酚酞溶液数滴，再缓缓加人盐酸（(1十1)溶液至酚酞红色褪去，然后将溶液移人50mL容量瓶中（必要时过滤），用少量水洗涤增祸3次，洗液并人容量瓶中，加水至刻度，混匀。每10mL试样液相当于1. 0 g试样。取相同量的氧化镁、硝酸镁，按上述方法做试剂空白试验。测定定量测定吸取25 ml.（或适量）试样液及同量的试剂空白液，分别置于砷发生瓶A中，补加硫酸至总量为5m l，加水至50mL，混匀。向试样液和试剂空白液中各加3mL15％碘化钾溶液，混匀，

几种常见肠道致病菌多重PCR检测的效果评价

龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/e412324857.html, 几种常见肠道致病菌多重PCR检测的效果评价作者：傅翔来源：《医学信息》2016年第01期摘要：目的评价几种常见肠道致病菌多重PCR检测的效果。方法根据大肠杆菌O157、副溶血性弧菌、普通变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌的特异基因作为目的基因，设计相应的引物，并进行实验优化以确立对4种肠道致病菌的检测体系。并对市售经果汁样品人工随机染菌后进行模拟样品验证。结果该多重PCR方法能够有效地扩增出相应致病菌的目的基因片段，且特异性较强。同时能够检测出模拟样品中随机接种的任意3种细菌。结论利用建立的多重PCR可以快速、准确地筛查大肠杆菌O157、副溶血弧菌、普通变形杆菌和单核细胞增生李斯特菌。关键词：肠道致病菌；多重PCR检测；效果评价随着人们健康意识的提升，对于食品安全问题关注度逐渐提升。对于食品安全事件来说，其中最大的元凶在于食源性致病菌的存在。这些食源性致病菌的组成是多样性的，其中，金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、志贺氏菌、肠出血性大肠杆菌O157：H7、空肠弯曲杆菌、副溶血弧菌、沙门氏菌（伤寒沙门菌、肠炎沙门菌）、产气荚膜梭菌及变形杆菌等引起的食源性疾病居于世界前列。在这种情况下，引起了医学界广泛的重视[1]。在传统的致病菌检测过程中，常用的方法为生理生化、血清型水平等等，但是，以上种种方法具有测试时间较长，费时、费力等特点，在灵敏度测试方面具有一定的局限性。故应建立一种较为快速、简便并具有一定灵敏度的检测方式，其中，以多重PCR检测最具效力，并成为研究的热门。本次研究拟建一种多重PCR检测方式，可以有效的检测出单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌 O157、副溶血性弧菌及普通变形杆菌4种肠道致病菌，以期达到临床检测效果，现报道如下。 1 资料与方法 1.1一般资料菌种以及来源：副溶血性弧菌、普通变形杆菌、蜡样芽孢杆菌等均购于北京兰博瑞公司。单核细胞增生李斯特菌、伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、志贺氏、空肠弯曲菌及大肠杆菌O157等均保存于重庆市疾病预防控制中心。主要试剂及仪器：DNA的提取试剂盒、PCR试剂都是由北京全式金生物有限公司提供。营养琼脂培养基以及胰酪胨大豆琼脂培养基、血平板以及溶菌肉汤液体培养基、革兰阴性增菌液等都是由北京陆桥技术有限责任公司成品配置而成。其中，为了有效培育菌群，还准备了恒温培养箱以及水浴箱，均为德国进口产品，同时，所用的离心机3K30型号、梯度PCR仪器

肠道致病菌的分离与鉴定

肠道致病菌的分离与鉴定一、实验目的（1）掌握肠道致病菌的分离、鉴定的主要步骤（2）掌握平板划线分离法（3）掌握玻片凝集试验的操作方法以及实际意义二、实验材料（1）实验仪器：试管、玻片、酒精灯、接种针、接种环、试管架、（2）实验试剂：生理盐水、细菌培养基、伤寒诊断血清、伊红美蓝培养基（EMB）、克氏双糖铁培养基（KIA）、葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、甘露醇发酵管、尿素培养基、蛋白胨水、半固体培养基三、实验流程（1）肠道致病菌的分离 ①待测标本的制作：把接种环放置于点燃的酒精灯火焰处对其进行灭菌，用已灭菌的接种环在细菌培养基中取少量待测细菌于盛有5ml生理盐水的试管中，混匀。 ②细菌的分离接种：用接种环取适量配置好的细菌悬液，在酒精灯附近进行划线分离法接种细菌于EMB培养基。将培养基置于37℃培养18~24小时。（2）肠道致病菌的纯化 ①单菌落接种：从已培养待测细菌的EMB培养基上用已灭菌的接种针挑取某单个菌落接种到KIA培养基上，一部分直接深入培养基中底部，一部分直接涂抹于斜面处，置于37℃培养18~24小时。 ②待测细菌的初步判断：取出已纯化培养待测细菌的KIA培养基，观察现象，初步断定该细菌是致病菌或是非致病菌。

（3）肠道致病菌的鉴定 ①生化鉴定：分别取葡萄糖、乳糖、甘露醇发酵管各一只（注意管内的小倒管则应充满液体，不含气泡），用已灭菌的接种针取已培养的KIA培养基上的培养物接种于各发酵管，将各发酵管于37℃培养18~24小时。取出并观察记录现象。（注意每次使用接种针前都应用酒精灯火焰进行灭菌） ②动力检查：用已灭菌的接种针取KIA培养基上的培养物分别接种于蛋白胨水、尿素培养基、半固体培养基中，将各个培养基于37℃培养18~24小时。取出后将靛基质（吲哚）加入到蛋白胨水培养基中，并观察记录现象。（注意每次使用接种针前都应用酒精灯火焰进行灭菌） ③血清学鉴定：取洁净玻片一张，将其用蜡笔分为两格，两边各取生理盐水一滴，再用已灭菌的接种环分别取KIA培养基上的培养物加入两格中，与生理盐水混匀不摊开。（注意每次使用接种环前都应用酒精灯火焰进行灭菌）然后在第二格中滴入一滴伤寒诊断血清，混匀不摊开，轻轻摇动玻片，经1~2min观察两格中有无凝集现象。注：本实验涉及细菌接种都应在无菌条件下进行，由于条件有限，因而可在燃烧的酒精灯附近进行实验操作。四、实验结果与分析（1）EMB培养基现象与分析： ①培养基下部呈现黑色现象，上部培养基仍为红色，培养基斜面有细菌明显蔓延生长。 ②分析：培养基下部出现黑色现象，说明该细菌能够分解培养基中的物质并产出硫化氢气体，由于培养基中含铁，因而硫化氢能够与其