(完整版)微生物的实验室培养经典练习
微生物的实验室培养
班级姓名
1．下列有关微生物实验室培养的叙述,正确的是（）
A．在熔化琼脂时,需要控制火力并不断搅拌,以免发生焦糊
B．灼烧、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等都属于无菌技术
C．样品中活菌数量统计时,接种方法应采用划线法
D．用平板培养基培养微生物时,应将平板倒过来放置
2．一位同学要探究土壤微生物能否分解农药，并尽快得出实验结论，用“敌草隆”（一种除草剂）进行实验：取等量砂土分装于相同的两个容器中，a组高压灭菌，b组不灭菌。下列有关事项的叙述中正确的是（）
A．向a、b中喷入等量的“敌草隆”，再置于同一恒温箱中培养相同时间
B．检测“敌草隆”的消失情况，预计a的“敌草隆”全部消失，b的基本不变
C．只用砂土实验效果比用几种典型土壤混合后的好
D．再增加c组作为对照，不喷入“敌草隆”，其他处理与a、b组相同
3．做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是（）
A．高压灭菌加热结束时,立即开启锅盖，拿出培养基和工具待用
B．倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上
4．甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（）
粉状硫10g K2HPO4
4g
FeS04
0．5g
蔗糖
10g
（NH4）2SO
0．4g
H20
100ml
MgS04
9．25g
CaCl2
0．5g
I++++-+++
Ⅱ+++-++++
Ⅲ++++++++
A．甲、乙、丙都是异养微生物
B．甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物
C．甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
D．甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
5．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方
法依次是（）
①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥
B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤
D．③④②①⑥⑤
6．细菌培养基的配制过程中，下列操作不正确的是( )
A．在培养基分装完毕后把pH调节到5.4～6.0为宜
B．培养基中的牛肉膏可以为细菌提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素
C．培养基配置的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
D．琼脂是一种从红藻中提取的多糖，常作为凝固剂
7．MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别为（）
A．MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素
B．MS培养基不需要氨基酸，微生物培养基含各种氨基酸
C．MS培养基不需要碳源，微生物培养基含碳源
D．MS培养基含维生素B1和维生素B6，微生物培养基不含有
8．不同微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中不正确的是（）
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B．该碳源物质也是该微生物的能源物质
C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D．水是该微生物的营养要素之一
9．下列有关平板划线接种法的操作错误的是（）
A．将接种环放在火焰上灼烧
B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液
C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行
D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
10．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释
B．需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面
C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落
D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理
11．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时①都需要用固体培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种④都可以用菌落数来计数活菌
A．①② B．①③
C．②④ D．③④
12．培养甲型H1N1病毒时，应选用
A．无菌的牛肉汤 B．含多种无机盐的培养液
C．固体培养基 D．适宜温度和湿度条件下的活鸡胚
13．如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是（）
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B．划线操作应在火焰上进行
C．在5区域中才可以得到所需菌落
D．在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌
14．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是（）
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C．等培养基冷却至50 ℃左右时进行倒平板
D．待平板冷却凝固5～10 min后将平板倒过来放置
15．由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。
（1）图甲中，过程①需要的酶有___________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以__________作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是_______ 。（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_____；推测该同学接种时可能的操作失误是____ ____。该操作过程中需要对哪些实验器材进行灭菌（）
A、玻璃刮铲
B、接种针
C、培养基
D、工程酵母菌种
E、酒精灯
（3）对于实验结果分析正确的是：（）
A．在培养基中添加碘液进行染色，菌落周围会出现透明圈，颜色较浅。
B．可挑选透明圈较大的工程菌进行培养。
C．在密闭和不密闭的情况下培养，酵母菌出现的透明圈大小不同。
D．在实验条件适宜时，酵母菌进行孢子生殖，繁殖迅速。
（4）以淀粉为原料，用工程酵母菌在适宜条件下密闭发酵，隔一段时间需要进行排气，其原因是_______ 。
16．请回答下列有关微生物培养和分离的问题。
（1）筛选石油分解菌一般要经过如下的步骤：海水取样→______→梯度稀释→将样品涂布到培养基上→挑选菌落，其中第二步的目的是______。
（2）培养微生物时，获得纯洁培养物的关键是_________。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_________附近进行。采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿____培养。
（3）在菌种保藏时，对于我们频繁使用的菌种一般采用临时保藏的方法，但这种方法有两个缺点：__________________；_________________。
（4）做完实验将培养基倒掉之前，一定要进行______处理。
（5）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序，于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。
根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是________________。
17．生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）
（1）用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用_______、_______方法从油料作物中提取。
（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供______，培养基灭菌采用的最适方法是________法。
（3）测定培养液中微生物数量，可选用________法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测________，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。
（4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的__________技术。18．（10 分）从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。请回答筛选过程中的问题。
（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从合适的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从的环境采集，培养厌氧菌的菌样应从的环境采集。
（2）富集培养是指创设仅适应该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而实现从自然界中分离出所需的特定微生物的培养方法。对固氮菌富集培养的培养基应是培养基；对耐高温淀粉酶菌的富集培养应选择的培养基，并在条件下培养。
（3）实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高
温使微生物的等物质发生。在微生物研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法是灭菌法。
（4）下图中 A、B 是采用纯化微生物培养、用两种接种方法接种产生的效果图解，请分析接种的具体方法：
AB获得图 A 效果的接种方法是；获得图 B 效果的接种方法是。
参考答案
1．ABD
【解析】
试题分析：琼脂属于多糖，在熔化琼脂时要控制火力并不断搅拌,以免发生焦糊，A项正确；灭菌和消毒都属于无菌技术，常用的灭菌方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌，实验室可以用紫外线照射或化学药物进行消毒，B项正确；样品中活菌数量统计时,应用稀释涂布平板法进行接种,而不是用划线法，C项错误；用平板培养基培养微生物时,为防止冷凝水滴在培养基造成污染，需要将平板倒过来放置，D项正确。
考点：本题考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。
2．A
【解析】本实验的自变量的有无土壤微生物，而敌草隆的使用量和培养条件是无关变量，无关变量应保持一致且适宜，所以应向a、b中喷入等量敌草隆，再置于同一温箱中培养相同时间，A正确；
B、a组土壤经过高压灭菌，不含微生物，不能将“敌草隆”分解，预计a的“敌草隆”基本不变，b组不灭菌，存在土壤微生物，可能将“敌草隆”分解，预计b的“敌草隆”含量减少，但不会全部消失，B错误；不同的土壤微生物的种类和数量不同，只用砂土实验效果不如几种典型土壤混合后的好，C错误；本实验是验证土壤中的微生物能对农药“敌草隆”具有分解作用，若不喷入“敌草隆”，则不能证明土壤中的微生物的此种作用，D错误。
【考点定位】培养基对微生物的选择作用
【名师点睛】解题思路：1、生物实验中的变量：实验过程中可以变化的因素称为变量；自变量：想研究且可人为改变的变量称为自变量；因变量：随着自变量的变化而变化的变量称为因变量；无关变量：在实验中，除了自变量外，实验过程中存在一些可变因素，能对实验结果造成影响，这些变量称为无关变量。2、分析题干可知，本题是通过实验探究土壤微生物能否分解农药，a组高压灭菌，没有微生物，b组不灭菌，存在土壤微生物，所以a组为实验组，b组为对照组。3．D
【解析】高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；倒平板过程中不能打开培养皿的皿盖，
B错误；接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。
【考点定位】微生物的分离和培养
【名师点睛】1、无菌操作，包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。2、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。3、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。
4．D
【解析】从表中所列的三种培养基成分着手，培养基I 中缺少氮源，培养基Ⅱ中缺少有机碳，培养基Ⅲ中营养成分最全．由题意中所给的情况分析，只有甲能在培养基I 中生长，而乙、丙不能说明甲能自行固氮；乙能在Ⅱ中生长，说明乙可自行合成有机碳，是一种自养微生物；而丙只能在Ⅲ中生长，说明它既不能固氮也不能自行合成有机物．由此可知甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物。答案是D。
【考点定位】微生物的培养
5．A
【解析】
试题分析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏其营养成分，对牛奶可采用巴氏消毒法，故选：A。
考点：本题主要考查灭菌与消毒的区别于联系，关键是熟记各自的方法与适用范围。
6．A
【解析】
试题分析：在培养基分装前，先pH调节到5.4～6.0，在来分装，A错误；培养基中的牛肉膏可以为细菌提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素，B正确；培养基配置的步骤一般是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，C正确；琼脂是一种从红藻中提取的多糖，常作为凝固剂，D 正确。
考点：本题主要考查微生物培养的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
7．A
【解析】
试题分析：植物组织培养所用的MS培养基和微生物培养所用的培养基的主要区别是MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素．A正确，BCD错误，故选：A。
考点：本题主要考查组织培养常用的MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
8．B
【解析】
试题分析：氮源物质为该微生物提供必要的氮素．A正确；该碳源是二氧化碳，属于无机物，不能作为微生物的能源物质，B错误；无机盐是该微生物不可缺少的营养物质，C正确；水是该微生物的营养要素之一，D正确。
考点：本题主要考查微生物的分离和培养相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
9．D
【解析】要将接种环在火焰上灼烧灭菌，A正确；应将冷却的接种环伸入菌液蘸取，温度高会杀死菌种，B正确；蘸取菌液和划线都要在火焰旁进行，防止杂菌的污染，C正确；划线时最后一区的划线与第一区划线不能相连，D错误；答案是D。
【考点定位】接种方法
10．C
【解析】稀释涂布平板法，包括系列稀释和涂布平板两个过程，涂布平板之前需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，A正确．涂布平板时，需要将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，B正确；只有稀释度足够大的菌液才能在培养基表面形成单个的菌落，C错误；操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防止杂菌污染，D正确；答案是C。
【考点定位】微生物的分离和培养
【名师点睛】技巧点拨：阅读题干可知，本题是考查稀释涂布平板法的具体过程，先梳理稀释涂布平板法的具体操作，然后根据选项描述分析判断。
11．B
【解析】
试题分析：①正确，固体培养基上面可以获得大肠杆菌的单菌落；②错误，分离纯化大肠杆菌可使用接种环或涂布器进行划线法或涂布平板法接种；③正确，在火焰旁会形成一个相对无菌区来进行接种，可以避免杂菌感染；④错误，平板划线法只能用来分离纯化获得单菌落，而不能用来计数。故答案选B。
考点：本题考查微生物培养的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。
12．D
【解析】
试题分析：病毒必须寄生在活细胞中才能生存，A、B、C都是普通的培养基，故错误。活鸡胚是细胞，故D正确。
考点：本题考查病毒相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握程度。
13．D
【解析】
试题分析：进行微生物平板划线操作之前，要将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，直到接种环烧红，A项错误；划线操作应在火焰旁进行，不能在火焰上进行，B项错误；平板划线分离微生物的原理就是通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。5区域是最后一个区域，因此，有可能在5区域得到所需菌落，但在4区域也有可能得到所需菌落，C项错误；操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，因此，在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌，D项正确。
考点：本题考查平板划线操作的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
14．A
【解析】
试题分析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，A项错误；首先将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热，B项正确；高压蒸汽灭菌后，等培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行倒平板，C项正确；待平板冷却凝固5～10 min后将平板倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上，D项正确。
考点：本题考查制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
15．（1）限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶淀粉
进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌
（2）稀释涂布平板法涂布不均匀 AC
（3）AC
（4）酒精发酵产生CO2需要排出，否则压力过大
【解析】（1）图甲过程①表示基因表达载体的构建，该过程先要用同种限制性核酸内切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来形成重组质粒．普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌．②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌。
（2）由图乙可知，该同学采用的是稀释涂布平板法，但菌落比较集中，没有很好的分散开来，可能是涂布不均匀导致的。玻璃刮铲和培养基要严格灭菌，否则会有杂菌。
（3）培养基中添加碘液进行染色，先用颜色反应，后面淀粉被分解后，会出现菌落周围会出现透明圈，颜色较浅。在密闭和不密闭的情况下培养，酵母菌进行的呼吸方式不同，数量也不同，淀粉分解的程度不同，酵母菌出现的透明圈大小也不同。
（4）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即将淀粉分解产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵速率快，产生二氧化碳的速率更快，所以接种工程酵母菌的发酵罐要先排气。
【考点定位】因工程的原理及技术；微生物的分离和培养
16．（1）选择培养增加石油分解菌浓度
（2）无菌操作（防止杂菌污染）酒精灯火焰倒置
（3）保存的时间不长菌种易被污染或产生变异
（4）灭菌
（5）EACBDG
【解析】（1）在实验室筛选所要的特定菌种一般步骤为海水取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到培养基上→挑选菌落，其中选择培养就是利用制成的富含石油选择培养基来培养细菌，以增加石油分解菌浓度。
（2）要从海水中筛选出石油分解菌，需要配置选择培养基，并且这种选择培养基只能是以石油为唯一碳源，使得其他微生物因为无法利用石油，而缺少碳源无法生存，在这个过程中必须严格按照微生物实验室培养的原则，在接种细菌前，培养基要用高压蒸汽进行灭菌，分离和纯化石油分解菌时最常用的接种方法是稀释涂布平板法。
（3）菌种保存的时候，一般长期保存使用甘油管藏，在零下20℃。
（4）做完实验将培养基倒掉之前，一定要进行灭菌处理，防止环境污染。
（5）由于题中给出G是必需的物质，在5种突变菌株中只要加入G，都可以活下来，则G 必然是最后的产物；凡是只加了E的都没能存活，则E就是最开头的产物，加A物质，1、2、3、4均没有存活，说明A物质处于第二位；其他类推，C物质处于第三位，B物质处于第四位，D物质处于第五位，因此这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G。
【考点定位】微生物培养和分离
17．（1）压榨、萃取
（2）唯一碳源高压蒸汽灭菌
（3）普微镜直接计数酶活性因定化酶
（4）PCR
【解析】（1）因为植物油不挥发，所以不适合采用蒸馏法提取，应采用压榨法或萃取法提取。
（2）植物油中不含有矿质元素，只为微生物提供碳源；培养基适合用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
（3）测定微生物的数量，可以用显微镜直接计数；分离出的脂肪酶要对其活性进行检测，以确定其实用价值；可以利用酶固定技术重复使用脂肪酶。
（4）利用PCR技术可以扩增基因。
【考点定位】提取芳香油；培养基对微生物的选择作用；制备和应用固相化酶；PCR技术的基本操作和应用
18．（每空1分，10分）
（1）含盐高（或高盐度）缺氧（或厌氧、无氧）
（2）缺氮（或无氮）含有淀粉高温
（3）蛋白质、DNA 变性（或结构改变）高压蒸汽
（4）涂布分离法划线分离法
【解析】（1）噬盐菌的菌样应从高盐环境采集，如高盐海滩等。
（2）目的微生物能够产生淀粉酶说明其碳源是淀粉，筛选菌株时应选择以淀粉为唯一碳源的培养基，并在高温条件下培养。
（3）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整pH，接种前要进行高压蒸汽灭菌，在实验中要注意在无菌条件下进行。
（4）图A菌落分布较均匀，接种方法是稀释涂布平板，图B菌落集中呈线状，接种方法是平板划线法。
【考点定位】微生物实验
医疗器械微生物实验室装修建设方案
随着医疗器械生产质量管理规范的实施，对无菌和植入类医疗器械的微生物实验室已做出相应要求，其中《医疗器械生产质量管理规范无菌医疗器械实施细则》和《医疗器械生产质量管理规范植入性医疗器械实施细则》中第八章监视和测量规定：生产企业应当建立符合要求并与生产产品相适应的无菌检验室。但实际还包括阳性对照室、微生物限度检查室等，总体称之为微生物实验室更加符合实际。目前医疗器械微生物实验室法规要求起步晚，依据不够细化，加之产品的复杂性，因此微生物实验室的规范化设计并不成熟，SICOLAB对微生物实验室的设计和布局进行初步探讨。 1.微生物实验室功能医疗器械的检验通常分为物理性能、化学性能、生物性能检验。理化检验需要设置理化检验室或在相应工位设检验装置；生物性能检验，对其中的生物学评价检验，企业一般不设检验室，而是委托检测机构进行检测，而微生物检测按法规要求需自行建立微生物检验室。微生物实验室应实现以下功能： (1)按照该产品的标准要求(引用GB/方法或药典方法)，对产品进行无菌检验； (2)对洁净环境(空气、水、工艺用气、台面、手)进行微生物检验； (3)对原材料、半成品、成品的初始污染菌检测； (4)部分含药的医疗器械还需满足药品检验需要(无菌、微生物限度、抗生素效价的微生物检定)，如含药敷料、含有庆大霉素的骨水泥、药物涂层产品等；此外，部分产品标准规定需要进行细菌内毒素检查(如注射器、输液器等一次性使用无菌医疗器械产品，氧合器、血液透析器、冠脉支架系统等部分人工器官和植入物产品)该类检查虽不是微生物检查，但对检查环境有较高的要求的，操作间应设有紫外线灯，并有控制温度、湿度的设备。应有书面操作规程，并有防止污染的措施。 2.微生物实验室设计要求SICOLAB 微生物实验室设计包括以下几个方面：人员，培养基，菌种，设备，实验室的布局和运行，器具及工作服洗涤、存放要求，更衣流程。 人员从事微生物实验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。检验人员数量和素质应能满足检验工作的需要。检验人员必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价。保证人员在上岗前接受胜任工作所必须的设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗。 培养基培养基质量稳定可靠，有良好的促菌生长能力，具备适宜的灭菌方式，在规定的条件和环境下贮藏，通过不同菌种的接种试验并观察生长状态，进行灵敏度试验。
微生物实验室建设标准
微生物实验室建设标准 一、设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。 二、微生物实验室基本要求 一准备室准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。 二洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 三灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。 四无菌室无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。 1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点： （1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。 （2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。
（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。 （4）无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。 2. 无菌室内设备和用具 （1）无菌室内的工作台，不论是什么材质、用途的，都要求表面光滑和台面水平。（2）在内室和外室各安装一个紫外灯（多为30W）。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方，离地面2m，外室的紫外线灯可安装在外室中央。 （3）外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏儿水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。 （4）内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。 3. 无菌室的灭菌消毒 （1）薰蒸：这是无菌室彻底灭菌的措施。无菌室使用了较长时间，污染比较严重时，应进行薰蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。 （2）喷雾：在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微尘飞场，并有杀菌作用。可用5%石炭酸喷雾。 （3）紫外线照射：在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的杀菌效果。通常应开启紫外线灯照射30～60min。
微生物实验室设计规划
微生物实验室设计规划 1、用于微生物学、生物医学、生物化学、动物实验、基因重组以及生物制品等研究使用的实验室统称生物安全实验室。 2、生物安全实验室由主实功能验室与其他实验室及辅助功能用房组成。 3、生物安全实验室必须保证人身安全、环境安全、废弃物安全和样本安全，能长期而安全地运行，同时还为需要实验室工作人员提供一个舒适、而良好的工作环境。 4、生物安全实验室的分级 5、生物安全实验室的技术指标 方案的组成 生物安全实验室的建设方案包括：建筑布局和装修、空气调节、给排水、气体供应、电气设计、集中控制、安防、施工工艺、检测、培训等多方面内容，特别是对该方案的以下几个方面要做极为充分考虑： 1．建筑布局和装修方案：是生物安全实验室安全运行的基础。由于微生物病菌的危险性，必须防止危险性微生物向外界扩散，全面地阻断危险性微生物与外部环境的接触途径，同时避免微生物受外界污染，影响实验结果的准确性，必须采取合理的实验室布局和装修方案。实验室布局按照安全要求合理地划分成清洁区、半污染区和污染区，采用人与物分别设置专用通道，设置必要的缓冲间，采用一次隔离和二次隔离等措施，能有效的避免交叉污染，从根本上防止危险性微生物的扩散；实验室装修采用可靠的材料，合理的施工措施，保证生物安全实验室始终处于相对密封的环境，防止微生物的外逸，易于实验室的清洁消毒，同时避免外部对实验室环境的破坏。 2．空气调节系统：是生物安全实验室安全运行的关键。由于生物安全实验室内操作对象是危险性的微生物，对人体、动植物或环境具有危害，必须通过采用合理的空气调节系统，保持生物安全实验室的相对负压环境无论何时都不被破坏，以保证实验室内
微生物实验室要求
微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、
普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位pH计、高速离心机。 2．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。 3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。 4．各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。 5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。 6．仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。 7．使用仪器时，应严格按操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏，要追究当事者责任。 三、药品管理、使用制度 1．依据本室检测任务，制定各种药品试剂采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格，出厂日期等，领回后建立帐目，专人管理，每半年做出消耗表，并清点剩余药品。 2．药品试剂陈列整齐，放置有序、避光、防潮、通风干燥，瓶签完整，剧毒药品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。
2020年(生物科技行业)CLSI临床微生物实验室标准解读
（生物科技行业）CLSI临床微生物实验室标准解读
CLSI临床微生物实验室标准解读 CLSI2010更新 CLSI临床微生物实验室标准解读第三辑 2010年CLSI药敏试验的更新 中国医学科学院北京协和医学院杨启文王辉 美国临床和实验室标准化研究所(TheClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI)是壹个国际性、跨学科、非营利的、致力于发展操作标准的教育组织。其抗菌药物敏感性试验小组委员会(SubcommitteeonAntimicrobialSusceptibilitytesting)每年组织该领域专家和药厂代表等对药敏相关文件M100进行壹次修订。目前我国的临床微生物实验室均以CLSI文件作为药敏指导文件进行试验操作和报告，本文将CLSIM100-S20(2010年)的主要更新点总结如下： 壹、主要格式的更新： 下表显示了壹些在M100-S19(2009年)中位于最后的附录在M100-S20(2010年)文件中新的命名、编号和位置。表1.M100-S20的格式更新 (1)修订了“非敏感”的定义：M100-S20中对“非敏感”的定义是由于耐药菌株缺失或稀少因而仅确立了敏感性解释标准。当药物对菌株的MIC高于或抑菌圈直径低于此折点时需报告为非敏感。非敏感且不意味着菌株携带某种耐药机制。有可能MIC高于敏感折点的菌株缺乏耐药机制且且属于野生菌株，只不过其出现于敏感性折点确立后。对于“非敏感”的菌株，菌株鉴定和药敏结果需被再次确认。 (2)对“使用头孢噻吩的折点仅用于预测对其他头孢菌素的敏感性”增加注释：在M100-S20中，头孢噻吩的折点仅可用于预测菌株对口服药物，包括孢羟氨苄，头孢泊肟，头孢氨苄和氯碳头孢的敏感性。旧的数据认为头孢噻吩的结果能够预测某些其他头孢菌素的敏感性可能仍然正确，但目前的数据尚不能支持此论点。 (3)在M100-S20的第26页增加第VII部分来描述筛选试验且总结他们的局限性以及对应的确证试验。该部分总结了 肠杆菌科菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌和肺炎链球菌的耐药表型初筛试验和对应的确证试验。 (4)在表1和1A的警告框内，M100-S20将头霉素类药物加入脑脊液分离菌株中不能常规报告的抗菌药物列表中。在M100-S19中，口服抗菌药物、第壹代和第二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、克林霉素、大环内酯类、四环素类和氟喹诺酮类被列为脑脊液分离菌株中不能常规报告的抗菌药物，因为这些药物不是脑脊髓感染的选择药物，在M100-S20中，头霉素类药物(如头孢西丁、头孢美唑和头孢替坦)也被纳入此类药物。 三、肠杆菌科菌相关的更新 (1)修订了头孢唑啉、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟、头孢曲松和氨曲南的折点，且在折点后增加了对应 的用药方案。
(仅供参考)9203 药品微生物实验室质量管理指导原则
9203药品微生物实验室质量管理指导原则 药品微生物实验室质量管理指导原则用于指导药品微生物检验实验室的质量控制。 药品微生物的检验结果受很多因素的影响，如样品中微生物可能分布不均匀、微生物检验方法的误差较大等。因此，在药品微生物检验中，为保证检验结果的可靠性，必须使用经验证的检测方法并严格按照药品微生物实验室质量管理指导原则要求进行检验。 药品微生物实验室质量管理指导原则包括以下几个方面：人员、培养基、试剂、菌种、环境、设备、样品、检验方法、污染废弃物处理、检测结果质量保证和检测过程质量控制、实验记录、结果的判断和检测报告、文件等。 人员 从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。 实验人员应依据所在岗位和职责接受相应的培训，在确认他们可以承担某一试验前，他们不能独立从事该项微生物试验。应保证所有人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术等方面的培训，如无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种的转种、传代和保藏、微生物检查方法和鉴定基本技术等，经考核合格后方可上岗。 实验人员应经过实验室生物安全方面的培训，保证自身安全，防止微生物在实验室内部污染。 实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划，保证知识与技能不断的更新。 检验人员必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价。微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相符，如：管理技能、实验室安全、试验安排、预算、实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调查、技术报告书写等。 实验室应通过参加内部质量控制、能力验证或使用标准菌株等方法客观评估检验人员的能力，必要时对其进行再培训并重新评估。当使用一种非经常使用的方法或技术时，有必要在检测前确认微生物检测人员的操作技能。
微生物实验室设计
一、微生物实验室设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。 二、微生物实验室基本要求 （一）准备室 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。 （二）洗涤室 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。（三）灭菌室 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。 （四）无菌室 无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。 1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点： （1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。 （2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。 （3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。 （4）无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。 2. 无菌室内设备和用具 （1）无菌室内的工作台，不论是什么材质、用途的，都要求表面光滑和台面水平。 （2）在内室和外室各安装一个紫外灯（多为30W）。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方，离地面2m，外室的紫外线灯可安装在外室中央。 （3）外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏儿水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。 （4）内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。
微生物的实验室培养 教学设计
《微生物的实验室培养》第二课时教学设计 一．教材分析 1.教材的地位 “微生物的实验室培养”是选修1专题2“微生物的培养与应用”中的第1个课题，既承接传统的发酵技术，又为学生实践其他的生物技术实验做好铺垫。因此，可用“承前启后”这个词语来概括本课题的地位。 2.教学目标与重难点 依据课程标准及教学要求确立本课题教学目标如下： （1）知识目标：培养基的制备 纯化大肠杆菌的方法 （2）能力目标：尝试培养基的制备 平板划线法等基本操作技术 熟练规范地进行无菌操作 （3）情感态度价值观方面：体验实验操作领悟实验原理，交流实验体会 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神（4）教学重难点：无菌技术的操作 二．教学过程 1.课前复习 由于本节课为第二课时，用课前复习来代替导课环节。 形式：小组间互相提问 内容：（1）培养基的类型、用途及成分（2）无菌技术 教学意图：在加强掌握第一课时知识以外，为本节课培养基的制备，以及一些具体的无菌技术操作作基础。 小组间相互提问的形式比较新颖，增加学生自主学习的能动性，使 课堂气氛更加积极活跃。 2.新课讲授 （1）播放一段视频，学生观看并了解本节课所学习的内容，总结出本节课的教学内容包括两方面 1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 2）纯化大肠杆菌（2）第一部分制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①形式：小组活动探究1 由PPT给出牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方，根据牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方，请各小组研究讨论该如何制备100ml的此培养基。并派出代表作答，不完整的部分，其他小组补充。 内容：建立流程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 （除倒平板外口述详细过程） 教师与学生利用PPT进一步详细学习，并引导学生自行总结每一步 的注意事项。 教学意图：充分利用小组合作的力量，通过讨论，锻炼学生利用已有的知
微生物实验室的要求
微生物实验室的基本要求 实验室总体面积应在70平米以上，要求水、电供应充足，畅通，排污设施与安全措施齐备。 一、选址： 1. 实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道； 2. 实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离； 3. 实验室应选择在方便取样与检验，距离车间较近的工作场所。 二、结构和布局： 应设置细菌与理化检验兼有的综合实验室，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室。 1. 办公室 2. 理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并） ①理化分析室（兼作感观检验室） ②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器） 3．细菌实验室： ①细菌检验操作室； ②无菌室； ③培养基制作室； ④洗涮消毒室； 一般布局要求如下： 1. 办公室：办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。 2. 细菌检验操作室（常规操作）细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。 对实验台的要求： a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m； b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。
c.实验台两侧安装小盆与水龙头； d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座； e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜； f. 实验室围护结构采用彩钢板材料，表面光滑、耐腐蚀、防水，所有缝隙可靠密封，便于清洁消毒，且防震、防火； g. 墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜。 3. 无菌室：无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局： a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内； b.与操作室用两道缓冲间隔开； c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏； d.无菌室内设有工作台（中心与边台皆可），紫外灯距工作台面要小于1.5m； e. 微生物室结构应坚固、严密、防尘、光线明亮，地面应光滑，并应有缓冲间，设双层传递窗传递物件； f.门窗应是不锈钢的； g．室内温度18～26℃，相对湿度为45～65%，室内必须保持整洁； h．墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜； i. 地面采用PVC材料，防渗漏、无接缝、光洁、防滑。 4. 培养基制作室：培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品橱。 a.边台上要放置电炉，以满足熔化煮沸培养基时用； b.边台材料要耐高热、耐酸碱； c.药橱分门别类存放一些一般药品及试剂； d.危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放； e.边台上要放天平，以称取药品用。 5. 洗涮消毒室：洗涮消毒室用以消毒洗涮待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物，其面积应大于10平米。 为满足洗涮消毒的功能，洗涮消毒室应设有： a.1-2个洗涮池，洗涮池上下水网要畅通；
微生物实验室设计规划时需要考虑的事情
微生物实验室简单来说就是，主要用于微生物学、生物医学、生物化学等研究使用的实验室。它的建造必须保证人身安全、环境安全、废弃物安全和样本安全。因此，我们在建造它之前就需要进行全面充分地设计和规划，尤其是在以下这五个方面。 一、选址 制药微生物实验室的选址应在大气含尘浓度低、含菌浓度低、自然环境好、无明显的异味、无污染源（水、气、土壤、垃圾）的地方。远离铁路、码头、交通要道，周围无散发大量粉尘、有毒有害气体的工厂。 二、建筑布局/装修方案 由于微生物病菌的危险性，必须防止危险性微生物向外界扩散，全面地阻断危险性微生物与外部环境的接触途径。同时避免微生物受外界污染，影响实验结果的准确性。 实验室布局按照安全要求合理地划分成清洁区、半污染区和污染区，采用人与物分别设置专用通道，设置必要的缓冲间，采用一次隔离和二次隔离等措施，
能有效的避免交叉污染。实验室装修采用可靠的材料，合理的施工措施，保证生物安全实验室始终处于相对密封的环境，防止微生物的外逸，易于实验室的清洁消毒。 三、空气调节系统 由于微生物实验室内操作对象是危险性的微生物，对人体、动植物或环境具有危害，必须通过采用合理的空气调节系统，保持生物安全实验室的相对负压。 四、控制系统 由于微生物实验室的实验对象是危险性的微生物，出于严格控制污染的原则，它要求以最少的维护人员，运用最优化的管理维护手段，来实时监控每一个实验室中设备所处的物理环境，保证实验室运行过程中始终处于相对负压环境，防止危险性微生物外泄。 五、检测方案 由于生物安全实验室的特殊性，除了进行严格的设计、施工、调试外，为确保其安全性，必须对其进行必要的工程检测和严格的验收。另外，使用过程中的一些因素，如非专业的管理和使用，高效过滤器的更换等，都会对实验室的安全性产生影响。因此，使用中的定期检测与同样重要。 杭州声翔净化设备工程有限公司，可以为客户提供设计、施工、安装、调试检测、维护保养、售后服务等全面的解决方案。服务涉及电子厂房、医药、食品饮料、化妆品、生物工程、实验室、洁净手术室、ICU、洁净与隔离病房、医院供应室、净化装饰、工业及民用空调通风等。
微生物的实验室培养(导学案)
【课题】：微生物的实验室培养 1．基础知识 1．1培养基的种类包括培养基和培养基等。 〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的，在配制培养基中用作为。【补充】培养基的类型及其应用：
〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加，培养霉菌时需要将培养基pH调节为，培养细菌时需要将pH调节为。 活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： 1．4获得纯净培养物的关键是。 1．5无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与相接触。 1．6比较消毒和灭菌（填表）
用进行物理消毒。 （4）实验操作者的双手使用进行消毒； （5）饮水水源用进行消毒。 1．8灭菌方法： （1）接种环、接种针、试管口等使用灭菌法； （2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是； （3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽，所用器械是。 （4）表面灭菌和空气灭菌等使用灭菌法，所用器械是。 〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。 〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是__________________。 〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止。 【补充】培养基的配制原则：
①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。 ②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。 ③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。 〖思考1〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是。 〖思考2〗倒平板的目的是。 〖思考3〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？ 〖思考4〗配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的________________________。 〖思考5〗试管培养基形成斜面的作用是。 2．7接种 2．7．1微生物接种的最常用方法是和，另外还有和_____种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是： 〖思考6〗取菌种前灼烧接种环的目的是；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是_________________________；取菌种和划线前都要求接种环冷却后
微生物实验室技术操作规范
实验室技术操作规范 一、无菌操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还
要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 ???
食品卫生微生物检验实验室操作要求
食品卫生微生物检验实验室操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条 件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员 安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 一、无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精 棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃 烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min， 再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求
1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备 进入无菌间后传递物品。 2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球 轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养 物等，必须经灭菌后方能使用。 (一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1．灭菌前准备 (1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包 装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 (2)装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2．装放 (1)干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。
微生物实验室规划
一、选址： 1. 实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道； 2. 实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离； 3. 实验室应选择在方便扦样与检验，距离车间较近的工作场所。 二、结构和布局： 根据生产实际需要，一般工厂应设置细菌与理化检验兼有的综合实验室，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室。 1. 办公室 2. 理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并） ①理化分析室（兼作感观检验室）②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器）3．细菌实验室：①细菌检验操作室；②无菌室；③培养基制作室；④洗涤消毒室； 一般布局要求如下： 1. 办公室： 办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。 2. 细菌检验操作室（常规操作） 细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。 对实验台的要求： a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m； b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。 c.实验台两侧安装小盆与水龙头； d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座； e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜。 3. 无菌室： 无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境，无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局：
a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内； b.与操作室用两道缓冲间隔开； c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏； d.无菌室内设有实验台中央（实验台与边台皆可），紫外灯距实验台面要小于 1.5m； e.无菌室与操作室之间设有双层窗构成小通道。 4. 培养基制作室： 培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品柜。 a.边台上要放置电炉，以满足熔化煮沸培养基时用； b.边台材料要耐高热、耐酸碱； c.药品柜分门别类存放一些一般药品及试剂； d.危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放； e.边台上要放天平，以称取药品用。 5. 洗涤消毒室： 洗涤消毒室用以消毒洗涤待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物，其面积应大于10m2 。 为满足洗涤消毒的功能，洗涤消毒室应设有： a.1-2个洗涤池，洗涤池上下水网要畅通； b.器皿柜或实验台，以放置洗涤好器皿； c.高压灭菌锅，其所用电源应满足用电负荷； d.室内安有通风装置（通风柜）或换气扇； e.有条件的单位还可在该室内，设供日常检验用水蒸馏水器装置。 6. 理化分析室： （如果没有条件，这个可以和微生物常规实验室合并）理化分析室是物理化学分析的主要操作室 a.实验台与细菌操作室要求相同 b.设置通风柜以满足加热、消化、干燥、烧灼和化学处理等工作需要； c.洗涤池。 7. 仪器室： 如果没有条件，这个可以和微生物常规实验室合并，用以放置显微镜、电子天平
《微生物的实验室培养》教案
微生物的实验室培养 一、课题目标 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 二、课题重点与难点 课题重点：无菌技术的操作。 课题难点：无菌技术的操作。 三、课题背景分析 课题背景通过生产中的实例，首先引导学生认识在微生物的培养过程中，保持培养物纯净的重要性。教师不必拘泥于教材中列举的实例，可以充分发挥学生的主动性，让学生搜集列举更多的生产生活中的实例，从中体会培养物纯净对于微生物培养的重要性。在此基础上，教材让学生进一步明确培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。 四、基础知识分析与教学建议 （一）培养基 知识要点：1.培养基的用途和种类，指出培养基可分为液体和固体两大类； 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方； 3.尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。 教学建议：教师在介绍液体和固体培养基时，宜结合教材提供的图片进行讲解，以增进学生的感性认识。教材以表格的形式提供了一个培养基配方的实例。教师可以采用资料分析的形式，让学生通过主动的分析，认识培养基的基本组成成分，并结合必修模块“分子与细胞”中的知识，让学生从生物体构成的基本元素这一角度理解培养基中为什么都需要具备这些基本成分。 （二）无菌技术 知识要点：1.无菌技术的含义；消毒与灭菌的概念及两者的区别；3.常用的消毒与灭菌的方法，接种环灼烧灭菌的方法。
教学建议：教师可以首先结合学生的生活经验，让学生意识到日常的生活环境中，每时每刻每处都存在着微生物，任何一个不经意的动作都可能将某种微生物引入到培养物中，然后再强调无菌操作的重要性。无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 教材中提供了阅读材料“实验室常用的消毒和灭菌方法”，教师可以让学生通过阅读了解这些常用方法，并回答旁栏中的两道思考题，根据回答的情况，检查学生是否真正理解了上述内容。在此基础上，教师再介绍无菌操作的具体内容，让学生进一步熟悉培养微生物的规范操作，以及实验中将要用到的材料与器具。 五、实验安排及注意事项 （一）从菌种保藏中心购买菌种后，教师首先需要用平板划线法纯化培养 所得菌种，并根据学生小组的数目，准备好数个平板。 （二）第1 课时完成基础知识的教学，学习各种操作方法，并制备培养基。高压蒸汽灭菌所需要的时间较长，因此需要利用课下时间完成。课下完成后，再于第2课时完成大肠杆菌的纯化培养。此后安排学生连续观察记录3?4 d。 （三）配制培养基时，教师需要提示学生按照每个培养基消耗15?20 mL 的量来估算总用量。全班同学的培养基可以集中起来，分批灭菌。 （四）灭菌后，培养基冷却到55C后应及时进行倒平板操作。如果不能及时操作，需要将培养基放到55 C左右的电热箱中保温，以防止琼脂凝固。 （五）如果打算做本专题的第2或第3课题，建议此课题不仅要练习平板划线操作，还要练习稀释涂布平板法操作。为此，教师需要提前 1 天用液体培养基培养大肠杆菌，培养一夜后，于第2 天将培养液分发到各小组。 （六）实验后，所有用过的培养基、培养液等都需要统一进行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则将会造成环境污染。 六、课题成果评价
微生物的实验室培养学案(有答案)
专题二微生物的培养和应用 课题1微生物的实验室培养 【目标定位】 了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。 【自主预习】 一、培养基： 1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。 2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。 3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。 〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分 二、无菌技术： 阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： (一)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下： 1．对实验操作的、操作者的和进行。 2．将用于微生物培养的、和等器具进行。 3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。 4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。 (二)消毒和灭菌 1．消毒是指。 常用的方法有、、消毒法。 2．灭菌是指。 常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具 〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么 〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么 〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止。 三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是，本实验可分成和 两个阶段进行。 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、、、、。 〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么 〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质 2．倒平板：待培养基冷却至℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。 其过程是： ①在火焰旁右手拿，左手； ②使锥形瓶的瓶口； ③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板。 〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么 〖思考8〗平板倒置的目的是什么 〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物为什么 （二）纯化大肠杆菌 微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 1．平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 其操作步骤是： ①将在酒精灯火焰上灼烧直至。 ②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。 ③将菌种试管口通过火焰达到的目的。 ④将冷却的接种环伸入到。 ⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。 ⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程， 完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。 ⑧将平板培养。 〖思考10〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是
微生物实验室管理规定
微生物实验室管理规定 微生物实验室包括无菌试验室、微生物限度检查室及阳性菌接种室。一．微生物实验室洁净度要求： 微生物实验室洁净度应符合相应的医药洁净室设计规范和验收要求。 1. 操作室洁净度应符合洁净万级要求。 2. 操作台洁净度应符合洁净百级要求。 二．微生物实验室的使用： 1. 微生物实验室使用前应确保操作室的洁净程度。 1.1.使用30分钟前应先开启操作台及操作室的净化和消毒系统，关闭消毒系统后10~15分钟再进入操作室；操作结束后，开启消毒系统30分钟后再关闭消毒系统和净化系统。 1.2.试验开始前应做好相关试验的准备工作，确保在试验过程中不离开操作室。 1.3.进入操作室的任何东西外包装均需消毒处理。 1.4.与试验样品接触的任何器具均应预先灭菌处理。 1.5.清洁消毒用器具应专室专用，不得混用。 2. 微生物实验室操作人员应严格遵守洁净工作区域净化控制规定。 2.1. 保持个人卫生，不得佩带饰物，不得涂抹化妆品。 2.2. 室内应穿戴专用衣帽、口罩及鞋子。 2.3.手部应进行2次消毒，宜带无菌手套。 2.4. 在操作中，操作台面应垫上消毒布巾，以防操作中有滴落液污染台面。 3. 试验操作中应进行沉降菌检测，以便判断操作环境是否符合要求。 3.1.在进行微生物试验时，在操作区域左、中、右分别打开3个培养平板直至试验结束，关闭平板。 3.2.大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA平板）倒置于30℃~35℃的培养箱中培养；沙氏培养基（SDA平板）倒置于20℃~25℃的培养箱中培养。 4. 不同的微生物试验项目不得在同一时段同一区域操作台中进行。 4.1.产品初始污染菌检查，不得与产品无菌试验同时进行。 4.2.工艺用水微生物检查，不得与产品无菌试验同时进行。 4.3.有菌培养物试验必须在阳性菌接种室生物安全柜内操作。 三、微生物实验室的维护： 1. 微生物实验室应定期清洁消毒。 1.1. 每次操作前用消毒液擦拭台面。 1.2. 每次操作结束，做好清场，不遗留本次试验用具和物品。 1.3. 每次操作结束，用消毒液擦拭操作台面、消毒灯、操作台内外表面、操作室门把手等凸出面及辅助房间的地面。 1.4. 每月用消毒液擦拭操作室及辅助房间的墙面、门窗及门顶和房间顶棚、操作台底部。 2. 定期按洁净室控制要求检测房间及操作台环境洁净度，视检测结果采取相应的措施。 2.1.微粒浓度达到相应等级要求的50%，重新大扫除；达到相应等级要求的80%时，如通过大扫除还不能下降粒子数，则应考虑更换高效过滤器。