RhD血型鉴定操作规程
血型鉴定
ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展 来源：本站原创作者：陈琦1张嘉敏2李厚达1朱自严2（1．扬州大学医学院生理教研室，江苏扬 州 225001； 2．上…发布时间：2009-12-2 红细胞血型系统非常复杂，ABO血型之后，目前已发现了29个血型系统，700余种血型抗原。血型抗原的正确鉴别在保证输血安全、调查人种分布、建立稀有血型库及许多疾病的诊断、分型甚至治疗方面都有极其重要的作用［1］。抗原的鉴别有赖于相应抗体的获得。血型鉴定用抗体的制备也经历了多克隆、单克隆及基因工程抗体3个发展阶段。现将ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展综述如下。 1 ABO血型鉴定用抗体 1.1ABO抗血清人源抗血清即多克隆抗体是人体内天然存在的或免疫反应检测到的抗体，ABO血型抗血清属于天然抗体，于出生后2—8个月开始产生，8—10岁达高峰。将通过全血制备的抗血清用于ABO血型的鉴定，方法简单、血凝明显、特异性强，长期以来一直是国内外血型检测机构及医院使用的ABO定型试剂。但它们存在的突出问题是：需耗费大量血液、不能做到标准化、难以规模化生产［2］。基于以上原因，科学家们一直希望找到可代替人抗血清用于ABO血型鉴定的理想试剂。杂交瘤技术问世，使这一愿望成为现实。 1.2ABO mAbs 1975年杂交瘤技术发明以后，Voak(1980)和Sachs (1981)等先后建立了能分泌抗 A和抗 B mAbs的杂交瘤细胞株，并将其成功用于ABO系统的血型鉴定。此后，其发展十分迅速，各国均建成了多株能稳定分泌抗 A、抗 B mAbs的瘤株细胞，为保证不同来源的ABO血型mAbs定型试剂质量的稳定性、结果判断的统一性及使用有效性，1987年，国际输血协会(ISBT)在第一届“红细胞及相关抗原单克隆抗体国际专题会议”中，对ABO 血型mAbs制品的生产、使用提出了明确的质量标准和规范［3］。2000年，我国也出台了相应的政策法规，加强了质量管理与监督。目前高效价、质量稳定的ABO血型mAbs定型试剂，已完全取代抗血清，广泛用于ABO血型的临床鉴定［4］。值得注意的是：用mAbs 进行ABO血型鉴定时会有漏检、假阳性、假阴性现象的发生，对此，国内外文献均有报道。1996年，Garatty等［5］报道了1例使用mAbs定型试剂，误将含获得性B抗原的A型患者错定为AB型，导致患者因错输AB型血死亡的病例；国内孙爱农等［6］也有类似发现。究其原因，主要是因为不同个体的红细胞A、B抗原，尤其是亚型决定簇的结构和数量存在不均一性，1个mAb只识别1个抗原结合位点，因此用单一mAb制品进行复杂血型鉴定时，可能导致误判。因此专家建议：可将抗原结合部位不同的mAbs混合组成检测试剂盒，进行复杂血型的鉴定，以确保输血治疗的安全性。 1.3基因工程抗体近年来，基因工程抗体的制备成为抗体工程的重要发展方向。Siegel 等［7］用噬菌体抗体库技术获得了针对ABO血型抗原的Fab和ScFv抗体，国内王长军等［8］也制备出A抗原的ScFv抗体。与mAbs相比，这些基因工程抗 A、抗 B在反应亲合力和效价等方面均未达到临床使用的要求，因此，有关这方面的研究进展不大。 2 Rh血型鉴定用抗体 在Rh血型系统中，常见的有D、C、E、c、e5种抗原，其中D抗原性最强，因此，一般制备的Rh抗体以抗 D为主。 2.1Rh抗血清与ABO血型系统不同，Rh阴性个体血清中没有天然的Rh抗体。只有在接受了Rh阳性血后，Rh抗体才能产生。传统的Rh抗体以Rh阴性志愿者为主要来源，即
ABO 血型鉴定操作规程
1.0 原理 ABO 血型鉴定操作规程 2.0 3.0 4.0 5.0 5.1 5.2 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 7.0 7.1 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无 A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、 B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血 型。正定型正定是指用已知抗-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和（或） B 抗原；反定型反定是指用已知 A1型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相 应的抗-A 和（或）抗-B。 原始样品要求 5 mL 静脉全血。 样品容器和添加剂 真空试管，EDTA.K2抗凝/普通试管，不抗凝。 检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 所需材料和设备 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。 检测操作过程 将受检标本以 1000g 离心 5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS 洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。 取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50 L ，其余管加入受检血浆/血清各100 L 。 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50 L ，摇匀。 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入 A1、B、O 红细胞试剂各 50 L ，摇匀。 1000g 离心 15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在 4℃、37℃下观察结果。 结果判断 凝集强度判断标准见表 1。 表1 凝集强度判断标准表
abo血型鉴定及分析()
实验8 ABO血型鉴定及分析 1 实验原理 血型通常是指红细胞膜上特异性抗原的类型，其分类的依据是红细胞表面是否存在某些可遗传的抗原物质。若将血型不相容的两个人的血液滴加在玻片上并使之混合，则红细胞可凝集成簇，这一现象称为红细胞凝集。造成凝集的机制是抗原-抗体反应。红细胞表面还有特异性糖蛋白抗原物质统称为凝集原（Agglutinogen）。在血浆中则含有与之相应的特异性抗体，称为凝集素（Agglutinin）。其中常用血型系统有ABO系统和Rh系统。 在ABO血型系统中，红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B 凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A 的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。 2 实验结果 从下表和图1可知：人血与标准A血清（含抗B抗体）混合后不发生凝集（反应10分钟后，仍然没有发生凝集）；人血与标准B血清（含抗A抗体）混合后发生凝集（反应迅速）。因此可以判定我的血型为A型血。 图1 血型检测实验结果 表1 实验情况 标准A血清（抗B）标准B血清（抗 A） 人血凝集情况不凝集凝集
3分析与讨论 红细胞凝集的本质是抗原-抗体反应。红细胞膜上抗原的特异性取决于抗原决定簇，这些抗原在凝集反应中被称为凝集原。能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体则称为凝集素。凝集素为γ-球蛋白，存在于血浆中。发生抗原-抗体反应时，由于每个抗体上具有2～10个抗原结合位点，因此抗体可在若干个带有相应抗原的红细胞之间形成桥梁，使它们聚集成簇，从而发生凝血。根据红细胞膜上是否存在A抗原和B抗原可将血液分为四种ABO血型：红细胞膜上只含有A抗原者为A型；只含B抗原者为B型；含有A与B两种抗原者为AB型；A和B两种抗原均无者为O型。不同血型的人的血清中含有不同的抗体，但不会含有与自身红细胞抗原相对应的抗体。在A型血的血清中，只含有抗B抗体；B型血的血清中只含有抗A抗体；AB型血的血清中没有抗A和抗B抗体；而O型血的血清中则含有抗A和抗B两种抗体。 表1 ABO血型中的抗原和抗体 血型红细胞膜上所含的 抗原 （凝集原）血清中所含的抗 体 （凝集素） A A 抗B B B 抗A AB A、B 无 O 无抗A、抗B 正确鉴定血型是保证输血安全的基础。常规ABO血型的定型包括正向定型和反向定型。正向定型是用抗A与抗B抗体检测来检查红细胞上有无A或B抗体；
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一. 原理 根据红细胞上有或无 A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、 AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABC血型。所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一 A或抗一B。 二. 试剂和材料 1.抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血清（制备方法见本节附注） 2.5%A B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注； 3.受检者血清； 4.受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三. 方法 1 .试管法 （1）取洁净小试管3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A抗一B和抗一A十Bo分型血清各I滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。 （2）另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入A B和O型5% 试剂红细胞悬液I滴，混和。 （3）立即以 1000r ／min 离心 1mino
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、 B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 (1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗 -A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
血型鉴定
ABO血型试验(正反定型) 一原理 利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 二试剂和材料 1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3．受检者血清。 4．受检者5%红细胞盐水悬液。 三操作（玻片法） 1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。 四结果判定：见表1 表1 ABO血型正反定型结果 五注意事项 1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。 2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。
4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。 5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。 注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。 六血型鉴定中常见的假阳性反应 1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。 2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。 七血型鉴定中常见的假阴性反应 1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致 效价减弱是最常见原因。 2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏 感性下降,或红细胞标本贮藏时间过久(红细胞敏感性在血块中下降相对较快),易将A亚型错定为O型。 3.红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液 液过浓时,标准血清中的抗体全部被吸收,呈后带现象,以致凝集不明显或不凝集。红细胞浓度太淡,抗体浓度相对增高,呈前带现象而不易凝集,或凝集很弱,未被发现。克服方法: 按规定配制红细胞悬液,悬液太浓时可多加1滴血清,转动玻片,增加红细胞接触的机会.微弱凝集必须用显微镜观察。 4.溶血反应: 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇,在补体存在时就可发生 溶血。溶血反应与凝集反应在血型鉴定上意义相同,都是抗原抗体反应。克服方法: 玻片法看结果时,片底最好衬以白纸,溶血时液滴边缘呈透明红色,试验前后两次镜下观察,可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血,要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。
血型鉴定操作规程
血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试
剂； 5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬 液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物 均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm的面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。
ABO血型鉴定操作规程-9页文档资料
ABO血型鉴定操作规程 111.01.0.0.0 原理原理原理原理 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、 B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血 型。正定型正定型正定型是指用已知抗正定型 -A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A 抗原和（或） B 抗原；反定型反定型是指用已知反定型反定型 A1 型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相 应的抗-A和（或）抗-B。 222.02.0.0.0 原始样品要求原始样品要求原始样品要求原始样品要求 5 mL静脉全血。 333.03.0.0.0 样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂 真空试管，EDTA.K2 抗凝/普通试管，不抗凝。 444.04.0.0.0 检测环境要求检测环境要求检测环境要求检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 555.05.0.0.0 所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备
5.1 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 5.2 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。 666.06.0.0.0 检测操作过程检测操作过程检测操作过程检测操作过程 6.1 将受检标本以 1000g离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS 洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。 6.2 取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 6.3 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50μL ，其余管加入受检血浆/血清各 100μL 。 6.4 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50μL ，摇匀。 6.5 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O红细胞试剂各 50μL ，摇匀。 6.6 1000g离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。 6.7 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。
微柱凝胶法血型鉴定操作规程精选版
微柱凝胶法血型鉴定操 作规程 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
微柱凝胶法 1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml 2原理： 2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）； 2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶； 2.3凝胶间隙具有分子筛作用。凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部； 2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。 3操作： 3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。 3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul 3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟 3.4离心结束后在白色背景前观察结果 4结果判断： A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
5.注意事项 5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。 5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。 5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。 5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。 5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。 5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。 6.方法评价 卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。
1.ABO血型鉴定操作规程复习课程
ABO血型鉴定操作规程 1.目的:定性鉴定患者ABO血型 2.适用范围:适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测 3.方法及原理: 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A 型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。可用已知的抗A、抗B试剂血清鉴定红细胞上有无对应的A抗原/B抗原（正定型），采用已知A型红细胞和B行红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/ 和抗-B抗体（反定型），必须从正定型和反定型两项试验来确定样本的ABO血型。 4.试剂与设备 4.1试剂抗-A、抗-B定型试剂（单克隆抗体）；0.9%生理盐水；2%—5%A、B和O型试剂红细胞悬液 4.2试剂组成 试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、 B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。 红细胞悬液的配制 悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴） 2 5 10 20 1 1 1 1 2ml（40） 0.8ml（16） 0.4ml（8） 0.2ml（4） 为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。 4.3设备透明光洁试管、显微镜、血清学专用水平离心机 5.样本采集与处理: 5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 5.2标本要求：
ABO血型鉴定(生理盐水法).
ABO血型鉴定（生理盐水法） 1. 原理 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB 型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A 试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。 2. 标本采集 2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 2.2 标本要求： 2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。 2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有 冻疮，则主张采耳垂血。 3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃ 保存不超过48小时。 4. 标本运输：室温运输 5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定 6. 试剂 6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂 6.2 试剂生产厂家：长春博德生物技术有限责任公司上海血液生物医药有限责任公司 6.3 试剂组成 试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓
ABO血型鉴定操作规程
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页 1 目的 指导工作人员进行ABO血型实验。 2 适用范围 血型检验岗位工作人员 3 职责 负责送检标本ABO血型的检测工作。 4 【原理】 ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。 【标本】 1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。 【器材】 载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。 【试剂】 1.1 抗-A、抗-B试剂 1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液 1.3 受检者血清 1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液 1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管 【操作步骤】 2.1 试管法 2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A 和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。 2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。 2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。 2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程 1.目的： 为准确鉴定ABO血型 2.要求： 要求全科人员熟练掌握原理及操作，对有疑问的结果能够做出解释及妥善解决。 3.原理： 根据红细胞上有无A抗原和/或B抗原，将血型分为A型、B型、O型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和/或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和/或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。 4.试剂和材料 4.1 A、抗B分型血清，效价1：128以上 4.2 2%~5%A、B、O标准红细胞。 4.3 受检者血样 5.方法．（试管法） 5.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B分型血清1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。 5.2 另取洁净小试管3支，标明A C、B C、O C，各加入受检者血清2滴
于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%标准红细胞1滴，混匀。 5.3 以1000g离心15秒，将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，以肉眼观察有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，这将有助于A、B亚型、类B、或CisAB的发现。★ 6.结果判断： 血型抗A血 清 抗B血 清 A细 胞 B细 胞 O细胞 A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - - 7.正反定型不一致的原因： 有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下数种： 7 1 分型血清效价太低，亲和力不强。 7.2 红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当（出现前带或 后带现象），使反应不明显误判为阴性反应 7.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 白血病或恶性肿瘤）以及类B或CisAB等。 7.4 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血病）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。 7.5 受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏
Rh血型鉴定操作规程
抗D血型鉴定操作规程 1.目的： 定性鉴定患者Rh（D）血型 2.适用范围： 适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。 3.方法及原理; 该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。其鉴定方法，由抗血清的性质而定。如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。 4.试剂及设备: 4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠 4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱 5.样本的采集与处理: 5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。 5.2标本储存： 2℃-8℃保存。 5.3标本运输： 室温运输 5.4.标本拒收标准： 细菌污染、溶血标本不能作测定。 6.操作步骤： 6.1试管法 6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。 6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。 6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。 6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。
6.2玻片法 6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。 6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。 6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。 6.2.4记录结果 6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。 8.干扰因素: 8.1假阳性因素 8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步试验的必要。 8.1.2多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。 8.1.3当用未经洗涤的红细胞做试验时，标本中的自由凝集素和异常蛋白质可能引起假阳性结果。 8.1.4试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染. 8.2假阴性因素
血型自我鉴定
血型自我鉴定 篇一：血型鉴定 人类血型与血型鉴定 一、目的 1、了解人类血型的遗传特性及其遗传方式；掌握人体血型（aBo型）的检验方法。同时了解自己的血型。 2、观察红细胞凝集现象，掌握aBo血型鉴定的原理。二、原理1、血型 通常所说的血型就是红细胞的血型，是根据红细胞表面的抗原特异性确定的。已知人类的红胞有15个主要血型系统，其中最主要的是aBo 血型系统（1901年Landsteiner发现的第一个血型系统），其次Rh血型系统。 血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的。抗体或凝集素存在于血清中，它与红细胞的不同抗原起反应，产生凝集，最后溶解，由于这种现象，临床上在输血前必须注意鉴定血型，以确保安全输血。通常输血反应中大多数注意aBo 血型系统。 2、aBo血型系统 人类aBo血型抗原是根据红细胞膜上有无特异性抗原（凝集原）a或
B来划分的血液类型系统，将血型分为a型、B型、aB型、o型四种。 a、B抗原的特异性决定于糖蛋白上所含的糖链。在人类的血液里含有凝集原（又称抗原）a、B和凝集素（又称抗体）a、B。凝集原附着在红细胞表面，凝集素存在于血浆（或血清）中。同名的凝集原和凝集素相遇（如凝集原a和凝集素B）会发生红细胞凝集现象（凝血反应）。所以在人体的血液中，所含的凝集原和凝集素的类型不同,可分为a、B、aB、o四种血型。所谓a型指红细胞膜上只存在a抗原，其血清中存在抗B抗体（凝集素），B型指红细胞膜上只存在B抗原，其血清中存在抗a抗体,aB型指红细胞膜上同时存在a和B抗原，其血清中没有抗a或抗B抗体，o型则红细胞膜上没有a和B抗原，血清中同时存在抗a抗B抗体。 父母的血型与子女的血型关系： 人类血型有数十亿种之多。人类除同卵双生子女外，再也找不到两个血型完全相同的人。Rh是恒河猴（Rhesusmacacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。 凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称d抗原）的，称为Rh阴性。这样就使已发现的红细胞a、B、o及aB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为Rh阳性和阴性两种。 随着对Rh血型的不断研究，认为Rh血型系统可能是红细胞血型中最为复杂的一个血型系。Rh血型的发现，对更加科学地指导输血工作和进一步提高新生儿溶血病的实验诊断和维护母婴健康，都有非常
血型鉴定操作规程教学文案
血型鉴定操作规程
血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；
5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可 以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开， 使其覆盖大约直径20mm的面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
血型鉴定
A B O血型试验(正反定型) 一原理 利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 二试剂和材料 1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。 2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3．受检者血清。 4．受检者5%红细胞盐水悬液。 三操作（玻片法） 1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。 四结果判定：见表1 表1 ABO血型正反定型结果 注：+ =凝集；- =不凝集
五注意事项 1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。 2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。 4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。 5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。 六血型鉴定中常见的假阳性反应 1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。 2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。 七血型鉴定中常见的假阴性反应 1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致效价减弱是最常见 原因。 2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏感性下降,或红细胞
血型测定实验报告
. ..血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B 抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B 抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 三 消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5）10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A 型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。 (4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有
无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。