PCR protocol
实时荧光定量PCR流程
一RNA提取
1，实验前准备：
组织研磨所需手术器械，球磨仪钢管（可用厚壁离心管）钢珠，提前四小时于250℃保温2h，充分灭火RNA酶。
2，球磨仪研磨
冰上取组织50-100mg，于液氮中冷冻，同时将钢管或厚壁离心管、钢珠珠放入液氮中冷冻，将充分冷冻的钢珠和组织放入钢管或厚壁离心管后。仍然需要冷冻，将钢管或离心管放入球磨仪配套离心管架（此整体部分仍需冷冻，于液氮中拿出时切记倒出其中液氮以免冻伤，离心管架中两边质量配平即可，单个离心管架可不配平），后放入球磨仪中拧紧，30Hz振荡研磨仪5min
3，处理
4，浓度测定：
1）打开仪器选择RNA测定，parameter设置001+0049enter键确定
2）TE缓冲液冲洗比色皿后，加入49μL TE缓冲液，blank 校准清零
3）加入1μL样品后，sample测定，得到样品总RNA浓度及吸光度值。
二逆转录
1，变性：14μL 体系
2， 逆转录：25μL 体系
荧光PCR
1，模板稀释：得到的cDNA 梯度稀释100倍（10*10 水） 2， 构建体系：20μL
3，程序设置：
四跑胶验证:
1，2%琼脂糖配胶，微波炉中火熔化后灌入制胶模具
2，上样：胶凝固后取出，放入电泳槽内，梳子对黑色电板，在胶内加入TAE ，在上样空中加入5μL
Marker或10μL PCR产物，恒压110V 电泳至Marker跑至2/3位置停止。
3，取出胶清洗，凝胶成像系统成像，打开软件选择DNA进行荧光显影和光密度分析。
学习这几招让你高效完成教学任务 01 铭记有效训练四原则 （一）整体性原则：一学期的学段总目标、学生的成长目标应该清晰地 刻在每一个老师的头脑里。老师可以在开学初熟读教材，画出目标树。从整体把握课程层次和阶段教学目标。 （二）计划性原则：一学期的时间里，达成所有目标的时间分配一定要细化到每一节课。老师需要制定详细的日程规划，严格督促自己按计划推进教学任务。 （三）规律性原则：根据学生的身心发展规律，以便更好地调动学生的内驱动力，激发学生对知识强烈的渴求，让学生主动去探究出知识的规律。 （四）针对性原则：根据学生的个体差异，设计不同层次的练习，具体针对个人情况调整教学计划，使每一位同学都能跟着老师的教学节奏有 所进步和提高。 02 抓住有效训练三阶段 （一）课前有效训练： 在正式授课之前，老师可以提前布置预习作业，在针对文本中的训练点进行梳理的基础上，设计出训练试题。让同学们在老师授课之前有方向性地对即将学习的内容有整体上的把握。这就要求老师在备课过程中下足功夫，备课需要从两个方面入手：一是备教材，二是备学生。 备教材是要求老师先吃透教材，认真学习课程标准，通读教材，研究和了解教材的编写意图、思想内容、知识基础和基础训练的要点，从而确定教学中的重点和难点，以便设计科学的教学方法，为完成教学目标做必要的准备工作。老师只有深入钻研教材，精心设计课堂教学，才能取得良好的教学效果。只有课堂教学目标明确，才可以有效地克服
教学中的随意性和盲目性，加强教学的针对性;明确教学的重点是什么，就可以避免眉毛胡子一把抓，当详则详，当略则略，主次分明;抓住课堂的难点，教学设计的形式，问题的处理方式才不会单一。 备学生则要求老师要了解学生的实际情况，有的放矢，做到因材施教。学生的知识水平及接受能力的差异是我们必须接受的一个现实，如何认识及处理这个问题，也是我们成功的课堂的关键所在。 宜宾市南溪区复兴小学语文老师郭丽在教授语文学科第九册第三单元的略读课文《假如没有灰尘》设计了预习训练：1、假如的意思是什么？你是通过什么方法知道的？2、抄写课文中带拼音的二类词语两遍。你觉得在哪些方面要提醒同学们注意？3、用多种方法解释下列词语的意思：干涸、庞然大物、气象万千、湿漉漉、古往今来；4、仿写词语：古往今来（）湿漉漉（）；5、用“﹏”勾出本文的问题。用波浪线勾出答案，用双横线勾出感叹句；6、填空。人们总是“时时勤拂拭。”灰尘的主要来源是（）、（）、（）；7、思考：灰尘的特点是作用是；说明方法是；8、给多音字注音：单调调节朝晖削弱。如此一来，同学们在后续学习的过程中在头脑中就有了初步的框架结构，效率也会相应提升。 （二）课时之中有效训练： 课堂40分钟非常重要。老师一定要高度重视新知识的有效训练。第一遍传授知识时要做到准确有效，反复确认基本保证班级同学理解新知识的内容，避免做成“夹生饭”。针对课堂时间给大家提供五条方法建议： 1、把握提问艺术，给学生成功的愉悦。 课堂提问，问题不宜过难或过易。问题太难，学生无从下手，可望而不可及，长此以往学生容易丧失信心和兴趣，影响课堂效率。问题过易，学生不用思考便能回答，不具挑战性，即使答对，也无成功感，同样也会影响课堂效率。因此，教师在设置问题、提出问题时要全面了解每一位学生的实际学习情况，让不同程度的学生回答不同难度的问题，
学会任务管理，提升执行力 彭科 --导读：有效的任务管理能让个人理清思路，抓住工作重点，提高工作效率；能让项目协作顺畅，统一管控；能让组织管理透明高效，提升执行力。 总体介绍 组织中经常听到管理者抱怨，组织执行力不强，很多既定的战略目标想的很明确，商业模式也很清晰，但是就是没法落地。通过与所在公司及外部企业各级管理层及员工的沟通和访谈，执行力不强的原因，除了业务能力不强、资源不够等客观原因外，很重要的原因是任务管理混乱。个人任务管理方面，总是感觉事情越来越多、压力越来越大，心情变得焦虑，效率不高；在项目任务方面，既定的计划总会出现拖延，预定的项目目标没法达成；在组织任务管理方面，总是觉得抓不住工作重点，业务推进缓慢，好的商业机会白白错过。
为了更好的提升执行力，我基于互联网、新零售及新能源行业的工作经验，在个人时间管理、项目管理、团队管理方面的心得体会，以任务管理的维度抛砖引玉，通过对个人、项目及企业三个层级在任务管理方面的总结及使用的工具和方法，期望对大家工作有小小帮助。 一、扩容：个人任务管理 我们在工作中可能经常会碰到这样的问题，需要处理的任务越来越多，每天的任务计划排得很满，但总被临时的任务打乱计划。工作效率不高，压力大，总是感觉脑子不够用。如何有效得进行任务管理，为大脑减负，提升大脑的存储能力，让大脑专注于思考和执行是必须解决的问题。任务管理的方法有很多，GTD、四象限法、看板、都是很好的方法。通过对任务的收集、处理、整理、执行及回顾，实现任务的有序管理。 收集：把任何需要跟踪、记住或者要做的事情全部收集到“工作篮”中，包括领导交代的事情、项目需跟踪的事情、客户沟通的事项或自己思索出来的好点子等等。 -->原则：做到100%任务收集，按照时间顺序记录；
浅谈如何高效完成岗位工作任务 （前言：***单位目前面临的是人员缺少、工作量大、发展任务重、安全责任重的实际问题。我作为一个工作近30年的老员工，借此机会，就如何高效完成岗位工作任务方面谈谈我个人的粗浅看法，仅供参考。） 圆满完成岗位工作任务，是自己的职责。如何在完成工作任务的过程中提高效率、保证质量，是我们每一个干部员工都应注意的问题。个人认为，高效完成岗位工作任务，要必须做到“五个有”： 一、要有一个积极主动的工作态度 态度决定一切。俗话说：能够原谅的是能力，不能原谅的是态度。好的态度对工作有好的效果，不好的态度肯定有不好的驱动力。我们虽然不能选择工作，但对待工作的态度是可以选择的。按照自己的工作职责和制度，第一时间投入到工作中去，即使在领导没有布臵、提醒的情况下，这才是正确的工作态度。 积极主动的工作态度是对工作责任心的具体表现。在工作中要把握好尺度，就必须熟悉和明确自己的职责，办事程序和相关制度。宁愿在做事过程中去接受评议，也不要在被动的工作中去接受批评。也只有正确的工作态度才能在工作上争分夺秒地“抢”，有胆有识地“闯”，千辛万苦地“拼”，脚踏实地地“干”，始终保持“不用扬
鞭自奋蹄”的精神，树立和坚持正确的工作观，才是高效完成岗位工作任务的必然要求。 二、要有一个良好的工作习惯 一个良好的工作习惯是保证工作高质、高效完成的前提和保证。我们不妨试着培养以下习惯：一是建立工作列表。随时记下要做的工作，并区分轻重缓急排列出完成顺序和完成时限，按序、按期完成。二是量化分解目标。善于将工作目标量化、细化，将大项化为小项，将复杂的工作分解简单的工作，逐一完成。或者寻求同事的协助，协同完成工作。三是遇到难题寻求帮助。有时我们会面临一些难题，如果陷在一个思路中，可能会空耗时间，这时不妨同他人沟通一下，听听别人的见解，或许有更多的解决思路；或者自己对一个难题有了一个思路，也应该立即与他人沟通一下，验证思路。一般的，在前期发现问题比后期改正问题要节省数倍的时间精力。四是善于总结经验。每次工作结束，冷静下来总结很有必要。总结自己的工作前准备是否到位，工作中技巧的使用、理解和其他同事的合作等是否恰当；总结自己的工作有何收获、有无失误、哪方面还需要提高、哪方面有经验值得以后发扬等。只有这样，才能避免自己走以前走过的弯路，才能提高自己的工作经验和阅历，才能以自己的经验指导自己走自己的捷径从而提高工作效率。五是集中精力专注一事。保证工作效率的最佳方法就是专注，不要被小事情或其它的事情分心，做完一件事再做另外一件。
激励员工完成任务的句子 篇一：员工激励话语 员工激励话语 1、记得三个尊：尊重自已，尊重别人，保持尊严，对自已的行为负责。 2、黑夜的转弯是白天，愤怒的转弯是快乐，所以有的时候让心情转个弯就好了。 3、人生最精彩的不是实现梦想的瞬间，而是坚持梦想的过程，享受为别人服务的过程就是坚持梦想的过程。 4、有的顾客很牛是因为他见过最大的动物是牛，所以他必须装的“牛”一点。不要不理解，他并没有见过大象和恐龙。 5、你不喜欢技师的工作是因为你没做好，真正做好了，你会非常喜欢，因为你提升了顾客的健康，也提升了自己。 6、技师应当知道自己想要什么，而不是什么都想要。 7、当帮助不再仅仅是出于同情，而是出于本能，这个世界才会健康起来、温暖起来。 8、永远都不要停止微笑，即使是在你难过的时候，说不定哪一天有人会因为你的笑容面爱上你。 9、你能为别人做的最好的事情是，帮他发现他的健康隐患，然后巧妙地告诉他，即使他并不愿意接受。
10、寻找同事谈恋爱时请记住三句话：①外边的世界很精彩②不要相信哥，哥只是个传说③兔子不知窝边草。 11、幸福的人知道回忆过去的什么事情，享受现在的什么事情，以及计划将来的什么事情。 12、跟别人计较，其实是在跟自己计较。计较得最多的人，一定也失去最多。所以一定不要和你的身边人斤斤计较。 13、有的顾客很“色”有两个原因：①他没有洗澡②上帝把他的嘴和手安排错了地方。所以第一条要求我们必须洁身自好，第二条自己安排对自己的嘴和手。 14、常常赞美他人的人总是被人赞美：诋毁别人的人，正是在诋毁自己。赞美周边的人，让大家有勇气去面对困难与挫折。 15、施与是一种美德，而快乐的接受也是一件高尚的事情。如果有人真心地想要帮你，那么，你就快乐地接受吧，这会让他感到无比的喜悦。 16、我们总以为羞辱是来自他人的言行，却不知除了自己，无人可以羞辱你。我们是高尚的健康职业，不要自己羞辱自己。 17、店长和主管是你工作中最有利用价值的资源。 18、低调做员工，高调做工作，这样你会飞得更高。 19、不要等到老板赞赏你时才相信自己。 20、更多精彩内容就在《足疗店经营方略》。 篇二：激励员工的话 激励人心的句子
11种高效率工作方法 在谈到工作效率时，我们都面临同样的挑战——每天只有24个小时。然而有些人似乎拥有两倍的时间；为了完成任务，他们表现出了不可思议的能力。即便同时要处理多个项目，他们也能顺利完成目标。在超高效率地工作了一天并离开办公室之后，你感觉不可思议。只要方法正确，你天天如此。你不必要加班加点，只需更加巧妙地工作。不妨尝试以下超高效人士所依赖的11种工作方法：1.做事情一气呵成高效人士绝不会将任何工作暂且搁置起来，因为分两次完成任务会浪费大量时间。不要将邮件或者电话搁在一旁，待稍后处理。一旦有些工作引起你的注意，你应该采取行动，委派别人去完成或者将其删除。2.离开办公室之前，为明天的工作做好准备高效人士在结束每一天之前，要为第二天的工作做好准备。这种做法可以达到两个目的：有助于你巩固今天完成的工作，另外确保你在明天同样富有成效。这是结束每天工作的最有效方式，而且只需花上几分钟。我们每花一分钟去做安排，就相当于多赚一个小时。——本杰明·富兰克林3.他们吃青蛙“吃青蛙”是治疗拖延症的最佳良药，而超高效人士的每一天都从这道菜开始。换言之，他们先完成了任务清单上最倒胃口、最令人惧怕的事情，才去做别的事情。之后，他们腾出时间和精力去做可以激发他们兴趣的
事。4.他们反抗“紧急事项优先”“紧急事项优先”指的是倾向于做需立即完成无关紧要的小事，而耽误了真正的大事。正是因为紧急行动往往不会产生什么影响，所以这会引发一个大问题。如果屈服于紧急事项优先，你会发现自己数日甚或数周根本没有碰那些重要任务。高效人士善于识别，所以当紧急灭火妨碍到他们的表现时，他们情愿忽略不利于自己真正向前迈进的事务，或者委派于他人完成。时间是我们最需要的，但偏偏有许多人最不善于利用时间。——威廉·佩恩5.开会严格遵守时间表最浪费时间的事情就是开会。超高效人士深知，如果放任自流，会议就将永远不会结束，因此他们在一开始就通知所有人，他们将严格按照时间表进行。设置时限有助于所有人变得更集中和高效。6.说“不”“不”是超高效人士不惧使用的一个有力词语。在该说“不”的时候，他们避免使用“我认为我不能或者我不确定”等话语。对新的承诺说“不”不仅是对你已有承诺的尊重，也让你有机会去成功实现。加州大学旧分校的研究显示，“不”越难说出口，你感到压力、倦怠和甚至抑郁的可能性就越大。学会用“不”来拒绝，将有助于提升你的情绪，并提高工作效率。7.只在指定时间查收邮件超高效认识不许自己一直被邮件干扰。除了定时查看邮件外，他们还会利用各种收件箱功能根据发送者对邮件进行优先排序。他们会对其最重要的供应商和顾客的来信设置提醒，其他邮件则留待方
强化执行力，确保任务的高效完成 2012年8月集团公司基层管理人员素质提升培训的理论课程学习已全部结束，作为车辆公司的一名基层管理人员，通过本次理论培训学习，受益匪浅，结合自身的工作岗位，就强化执行力，确保工作任务的高效完成，谈谈自己的一些观点。 管理学中的格瑞斯特定律指出：“杰出的策略必须加上杰出的执行才能奏效”，意思是说，一个公司、一个部门、一个系统，再好的战略决策和工作思路必须得到有效的执行，才能取得良好的效果。因为执行是目标和结果之间的桥梁，是检验决策正确与否的有效手段，是关系到工作开展和事业成败的关键因素。 何谓执行力？专家的说法不一，但可以简单直白地解释为：执行力，就是保质保量地完成自己的工作和任务的能力，也可以说是按时按质履行好自己的工作职责的能力。有企业管理专家认为：一个企业的成功，30%靠的是战略，30%靠的是运气，另外40%靠的是执行力；也有专家认为：三分战略，七分执行。不管哪种说法，都是把执行力摆在了比较重要的位置。可见，执行力对一个企业的生存和发展具有重要的现实意义。否则，即使把目标定得再高，思路再清晰，措施计划订得再好，如果没有具体落实到行动上，不执行或执行不力，那么，所制订的措施计划就无法执行到位，所定的目标就根本无法实现。 如何强化、提高执行力，确保任务的高效完成。我认为，有效的执行是提升执行力的源头和关键环节，要想提升一个组织的执行力，
必须正确处理好执行与组织的“三个层级”的关系。 一是处理好执行与领导层的关系。传统的管理理论认为，领导层是负责决策的，而执行是下面的事。事实上，执行是领导层首要的工作，有效的执行是需要领导者亲力亲为的系统工程，因为执行贯穿于组织各个阶段、各个层面的活动，领导者既要制定计划、确定目标、建立愿景，又要制定战略规划，进行人员配制与管理。因此，领导者应该是一个组织中执行的倡导者、实践者。 二是处理好执行与中层的关系。中层人员的执行是指把上级领导的工作意图、决策亲自实施并带领下属实施的过程。中层人员在不折不扣地贯彻上级意图和指令的同时，还要指导下属。中层的执行是一个组织执行中最重要的一环，它是将高层的执行与基层的执行联结起来的枢纽和桥梁，一旦这个环节出故障，整个组织的执行力就会出现裂缝，执行的效果应会大打折扣。 三是处理好执行与基层的关系。基层人员是组织执行中的基本元素，一个组织的目标、计划、战略必须层层分解，最终落实成一个个的具体任务和行动方案，由基层人员去完成，基层人员的全部工作就是不折不扣地执行上级的命令，基层人员是具体任务的承担者和操作者。 以上是我对执行力的理解及如何提升、强化执行力，确保任务高效完成的一些看法和观点。 车辆公司王联熙 2012-09-07