发酵豆粕常见指标检测方法
粗蛋白含量检测
(GB/T6432)
一、原理：
凯氏法测定样中的含氮量、即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，
计算出粗蛋白含量。
二、仪器设备：
1.高速粉碎机，粉碎时间1分钟。
2.分样筛； 0.45mm、40目
3.分析天平；感量0.0001g
4.消化炉
5.滴定管；酸式50mL
6.锥形瓶；250mL
7.定氮仪；以凯氏原理制造的半自动蛋白测定仪
三、试剂
1.硫酸：含量98%
2.氢氧化钠：40%水溶液（m/V）
3.硼酸：2%水溶液（m/V）
4.混合催化剂：0.4g硫酸铜(5个结晶水)，6g硫酸钾或硫酸钠，磨碎混匀。
5.混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处
保存期为三个月。
6.0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3 mL盐酸注入1000 mL蒸馏水中。
标定：减量法称取0.8g左右在270-300℃灼烧2h的无水NaCO3，加水50mL溶解，加10滴混合指示剂，用配好的盐酸滴定成暗红色，煮沸2min，冷却(水中)后再滴至暗红色，同时作空白试验(不加Na2C03)。计算：
C= m×1000
(V 1-V 2)M
式中: C ——硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度（mol/L ）
m ——无水碳酸钠的质量，g
V 1 ——盐酸溶液的用量，mL
V 2——空白试验盐酸溶液的用量，mL
M ——无水碳酸钠的摩尔质量数值，单位为克每摩尔（g/mol ）〔M(1/2NaCO 3)=52.994〕
7. 蔗糖
8. 硫酸铵：分析纯，干燥
四、分析步骤：（国标推荐法）
1. 试样的消煮
2. 称取试0.5g （含氮量5～80mg ）准确至0.0002g ，放入消化管中，加入6.4g 混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL 硫酸，于420℃消化炉中消化3小时。冷却后，加入蒸馏水20ml ，待用。
3. 氨的蒸馏；
采用半自动定氮仪，将带消化液的消化管插在蒸馏装置上，以25mL 硼酸为吸收液，加入2-3滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶，然后向消化管中加入氢氧化钠溶液，以溶液变黑为宜，即当生成黑色的氢氧化铜时，加碱量已够。若加碱量不足或过量，分解液呈蓝色而不显黑色，若加碱不够，需再增加氢氧化钠用量，直到分解液呈黑色为止。蒸馏，蒸馏时间以吸收液体积达到150mL 以上时为宜，降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶。
4. 滴定：用0.1mol/L 的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变淡紫色为终点。
5. 空白测定：
称取蔗糖0.5g ，代替试样，按以上分析步骤进行测定，消耗0.1mol/L 的标准盐酸溶液的体积不得超过0.2mL ，消耗0.02mol/L 的标准盐酸溶液的体积不得超过0.3mL 。
五、计算：
100m
014.025.6C V -V %HCl 01????=）（）粗蛋白（ 式中：V 1——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL
V 0——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL
C HCL ——盐酸标准溶液浓度，mol/L
m ——试样质量，g
0.014——每毫克当量氮的克数
6.25——氮换算成蛋白质的平均系数
水分检测
(GB/T6435—2006)
一、适用围：
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和各种单一饲料中水分的测定，但用作饲料的奶制品、动物和植物油脂、矿物质除外。
二、原理：
试样在105℃烘箱，在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分。
三、试剂和仪器设备：
1．高速粉碎机，粉碎时间1分钟。
2．分析筛孔径0.25mm（60目）。
3．分析天平感量0.0001g
4．电热恒温箱（烘箱）可控制温度在105±2℃
5．称样皿玻璃或铝质,直径40mm以上,高25mm以下
6．干燥器以氯化钙或变色硅胶为干燥剂
四、试样的选取和制备：
选取具有代表性的试样，其原始样量应在1000g以上，用四分法缩减至500g，风干后粉碎至全部通过40目筛，再用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。
如试样为多汁的鲜样，或无法粉碎时，应预先干燥处理，称取试样200～300g，在105℃烘箱中烘15min，立即降至65℃，烘干5～6h。取出后，在室空气中冷却4h，称重，即得风干试样。
分析步骤：
1.洁净称样皿，在103℃烘箱烘1h，取出，在干燥器中冷却30min，称准至0.0002g，再烘干30min，同样冷却，称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。
2.用已恒重称样皿称取两份平行试样，每份2～2.5g（含水重0.1g以上，样品厚度4mm以下）。准确至0.0002g，不盖称样皿盖，在105℃烘箱烘
3.5h，取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min，称重。
五、计算
水分含量（%）按下式计算：
水分（%）＝W1－W2×100%
W1－W0
式中：W1——105℃烘干前试样及称样皿重，g
W2——105℃烘干后试样及称样皿重，g
W0——已恒重的称样皿重，g
粗灰分检测
(GB/T6438)
一、原理：
饲料样品在550℃灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣中主要是氧化物、盐类等矿物质，也包括混入饲料中的砂石、土等，故称粗灰分。
二、仪器设备：
1.高速粉碎机：粉碎时间1分钟。
2.分样筛：孔径0.25mm（60目）
3.分析天平：感量0.0001g
4.高温炉：有高温计且可控制炉温在550±20℃
5.坩埚：瓷质，容积50mL
6.干燥器：用氯化钙（干燥试剂）或变色硅胶作干燥剂
三、试样的选取和制备：
选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。
四、分析步骤：
将干净坩埚放入高温炉，在550±2℃下灼烧30min。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却30min，称其质量。再重复灼烧、冷却、称量，直至两次质量之差小于0.0005g为恒质。
在恒质的坩埚中称取2～2.5g试料（灰分质量在0.05g以上），准确至0.0002g，在电炉中碳化至无烟状态(夏季和冬季，可适当延长时间20min)，于550±20℃下灼烧3.5h至灰白色，冷却到200℃。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器中冷却至室温，称取质量。
五、计算：
粗灰分含量（%）按下式计算：
粗灰分（%）＝m2－m0
×100 m1－m0
式中：m2——为灰化后坩埚加灰分的的质量，g m1——为坩埚加试料的质量，g
m0——为恒质空坩埚，g
所得结果应表示至0.01%
酸溶蛋白（肽）含量的测定
（据QB/T 2653-2004制定）
一、原理
大分子蛋白质和肽链较长的多肽用三氯醋酸溶液进行沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，其中包括小肽和部分α-氨基酸。然后经离心、过滤、消化、蒸馏，测定其蛋白质含量即酸溶蛋白。
二、试剂及仪器
100ml 烧杯、10ml 和25ml 移液管、半微量粗蛋白质测定试剂和装置、40目标准筛、15％三氯醋酸溶液（TCA 溶液）、4500 转/ 分钟的离心机、定性滤纸等。
三、试验方法
（1）准确称取样品4.0000g 样品，加入15%TCA 溶液20ml ，混合均匀，静置5分钟。用定性滤纸过滤，取滤液约5ml ，4500转/分钟离心10分钟，取上清液4ml 注入干燥的消化管中，加入硫酸铜0.2g ，硫酸钠3g ，再加浓硫酸10ml ，消化方法及蒸馏方法与蛋白的测定方法相同。
（2）计算公式：
肽绝对含量（1X ）()%100525.60140.001??????-=m
N C V V HCL 1X ——样品中肽含量（%）
HCL C ——标准盐酸摩尔/当量浓度
V 1——样品消耗盐酸体积
V 0——试剂空白消耗盐酸体积
m ——样品重量（精确到0.0001）
N ——为微量法测定粗蛋白时的稀释倍数，若全量法测定则为1
肽相对含量（%）%100X X 0
1?= X 0——样品中的粗蛋白含量
不良寡糖定性检测（薄层层析法）
一、原理
薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。一般层析操作包括薄板活化、点样、展层、显色和结果分析等步骤。
二、试剂配制（注意：须在通风橱中进行）
1、展层剂
正丁醇：异丙醇：乙酸：蒸馏水=14：10：4（8）：8 (如有拖尾现象，可适当加大乙酸的量)
展层剂混匀后倒入展层缸。
2、显色剂
苯胺1ml，二苯胺1g，浓磷酸5ml，丙酮50ml
先将二苯胺溶于丙酮中，最后加浓磷酸。因为二苯胺不溶于水。
显色剂避光保存，有毒，小心操作。
三、操作步骤
1、样品处理：称取5g试样溶于40mL蒸馏水，于70℃水浴1h。
2、离心（8000rpm，20min）取上清，放入4℃冰箱保存。
3、硅胶板的活化：将硅胶板置于烘箱中，110℃活化1h备用。
4、点样，用水糖、棉籽糖和蔗糖做标准（5mg/mL）。
配制方法：称取5mg的水糖或棉籽糖、蔗糖，加入1mL蒸馏水。
在硅胶板底部留两厘米，用铅笔划一直线，隔开间距画上点样孔，用毛细管点样，干了再点第二次，干透后展层。（注意：点样时若发现上清已变浑浊，则必须重新离心。）
6、展层：将点好样的薄层板放入预先饱和的展层装置，让点样一端浸入展层剂中，其深度约0.5cm（切记：样品点不能浸入展层剂中）。当展层剂上升到离硅胶板的顶端0.5-1.0cm时，停止展层，迅速吹干。
7、显色：将显色剂喷雾，95℃烘箱显色6min。
8、拍照：关闭闪光灯，微距拍摄。