微生物检验操作步骤

样品制备：

取样品10 g/ml加入至90 ml灭菌生理盐水中，混匀，制成 1 ︰10 的稀释液；

菌落总数：（结果报告：XXX cfu /g(ml)）

取上述 1 ︰10 的稀释液 1 ml加入至9 ml灭菌生理盐水中，充分混匀，

制成 1 ︰100 的稀释液；

取上述两个稀释级的稀释液分别加入2块平皿中，每块平皿中加20 ml，然后往平皿中倒入约45℃的卵磷脂吐温80琼脂培养基，待培养基凝固，倒置放于36+/-1 ℃培养箱中培养 48 h，点计菌落数。

霉菌和酵母菌：

操作同菌落总数，加入的培养基为虎红培养基，待培养基凝固，倒置放于℃培养箱中培养 72 h，分别点计霉菌和酵母菌数。

粪大肠菌群：（结果报告（未）检出/ ）

取上述 1 ︰10 的稀释液10 ml加入至10 ml 双倍乳糖胆盐培养基中，摇匀，置 44 ℃培养箱中培养 48 h；

如果培养物产酸产气（现象为培养基呈黄色，小倒管内有气泡），则应取培养物分别接种至伊红美蓝琼脂平板于 37 ℃培养 18-24 h和蛋白胨水培养基中于 44 ℃培养 24 h。

在上述平板上，粪大肠菌群呈深紫黑色、圆形突起的菌落，并有金属光泽。

挑取分离的单个菌落，进行革兰氏染色和镜检，在显微镜下应观察到红色短杆状的菌。挑取菌落时，应使灭菌的接种环冷却后再行操作。

上述蛋白胨水培养基的培养物还需做靛基质试验，阳性现象为培养物表层出现玫瑰红色。

铜绿假单胞菌：（结果报告（未）检出/ ）

取上述1 ︰10 的稀释液10 ml加入至90 ml SCDLP 培养基中，摇匀，置 37 ℃培养箱中培养 18-24 h；

挑取上述培养物，接种至十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板于 37 ℃培养 18-24 h；在该平板上，铜绿假单胞菌应为灰白色色、圆形湿润的菌落，周围培养基溶有水溶性色的色素；

挑取分离的单个菌落，染色镜检，在显微镜下应观察到红色杆状的菌。

如果平板上只分离到1个可疑菌落，不够做生化试验，则应挑取该菌落于SCDLP增菌培养。取分离的菌落分别做氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验和42℃生长试验。

金黄色葡萄球菌：

增菌培养同铜绿假单胞菌项下，

挑取上述增菌液的培养物，接种至B-P 平板于 37 ℃培养 24-48 h；在该平板上，金黄色葡萄球菌应为灰黑色、圆形的菌落，菌落周围有混浊带和透明环

挑取分离的单个菌落，染色镜检，在显微镜下应观察到紫色球状的菌。

取分离的菌落分别接种至甘露醇发酵培养基和肉汤培养基中，于 37 ℃培养 24 h；取上述肉汤培养物，做血浆凝固酶试验。