微生物部分思考题

1、为什么说Koch等建立的微生物纯培养技术是微生物学建立与发展的基石？一般可用哪些方法获得微生物的纯培养？

不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌，以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板(culture plate)的简称，它是指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基是用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Koch建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。

常用固体培养基分离纯培养：

1、稀释倒平板法(pour plate method)

2、涂布平板法(spread platemethod)

3、平板划线分离法(streak plate method)

4、稀释摇管法(dilutlon shake culture method)

此外还有液体培养基分离纯培养。通常采用的液体培养基分离纯化法是稀释法。接种物在液体培养基中进行顺序稀释，以得到高度稀释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物。如果经稀释后的大多数试管中没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。如果经稀释后的试管中有微生物生长的比例提高了，得到纯培养物的概率就会急剧下降。因此，采用稀释法进行液体分离，必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数(一般应超过95%)表现为不生长。

单细胞（孢子）分离：采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。单细胞分离法的难度与细胞或个体的大小成反比。

2、微生物的最显著特征就是个体微小，通常只能通过显微镜进行观察。试列举在显微观察中（光镜和电镜）通过改变样品的反差以改善观察效果的技术及方法。

暗视野法：暗视野显微镜利用特殊的聚光器实现斜射照明，给样品照明的光不直接穿过物镜，而是由样品反射或折射后再进入物镜，因此，整个视野是暗的，而样品是明亮的。可以清晰地观察到在明视野显微镜中不易看清的活菌体等透明的微小颗粒。主要用于观察生活细菌的运动性。

相差显微镜：由于细胞各部分的折射率和厚度的不同，光线通过未经染色的标本时，直射光和衍射光的光程会有差别，随着光程的增加或减少，加快或落后的光波的相位会发生改变，产生相位差。相差显微镜配备有特殊的光学装置——环状光阑和相差板，利用光的干涉现象，能将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差，从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强。使人们能在不染色的情况下比较清楚地观察到在普通光学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构。

荧光显微技术：在紫外线的照射下，发荧光的物体会在黑暗的背景下表现为光亮的有色物体。

1、以EMB（伊红美蓝乳糖琼脂培养基）为例，分析鉴别培养基的作用原理。

答：鉴别性培养基是在培养基中加入能与某菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能将其与其他外形相似的菌落区分。EMB培养基中大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+,故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色。从菌落表面反光还可看到绿色金属闪光。而产酸弱的菌株的菌落呈棕色。不发酵乳

酸的菌落无色透明。

2、为什么生长因子通常是维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶，而葡萄糖通常不是生长因子？

维生素、氨基酸或嘌呤(嘧啶)通常作为酶的辅基或辅酶，以及用于合成蛋白质、核酸，是微生物生长所必需且需要量很小，而微生物(如营养缺陷型菌株)自身不能合成或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物。而葡萄糖通常作为碳源和能源物质被微生物利用，需要量较大，而且其他一些糖类等碳源物质也可以代替葡萄糖满足微生物生长所需。

3、芽孢为什么具有较强的抗逆性?

芽孢的含水量低,特别是自由水远低于营养细胞,使核酸和蛋白质不易变性。

芽孢的酶组成型与细胞的酶组成型有差别,芽孢只含有少量酶,并处于不活跃状态。

含有2,6-吡啶二羧酸。

芽孢壁厚。

芽孢中含硫氨基酸高。

1、用细菌细胞壁的结构和组成解释革兰氏染色的机制。

革兰氏染色是原生质染色，染色后细胞内形成了深紫色的结晶紫－碘的复合物，而脱色与否则决定于细菌细胞壁的结构和组成

由于G+细菌细胞壁较厚，尤其是肽聚糖含量较高，网格结构紧密，含脂量又低，当它被酒精脱色时，引起细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小以至关闭，从而阻止了不溶性结晶紫－碘复体物的逸出，故菌体呈紫色。

而革兰氏阴性细菌的细胞壁肽聚糖层较薄，含量较少，而脂类含量高，当酒精脱色时，脂类物质溶解，细胞壁透性增大，结晶紫－碘复合物也随之被抽提出来，故G-菌体呈复染液的红色。

8、试比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌细胞壁成分的异同，并讨论它们原生质体制备方法。细胞壁成分的异同

细菌分为G+和G-，G+肽聚糖含量高，G-含量低；G+磷壁酸含量较高，而G-不含磷壁酸；G+类脂质一般无，而G-含量较高；G+不含蛋白质，G-含量较高。放线菌为G-，其细胞壁具有G-所具有的特点。酵母菌和霉菌为真菌，酵母菌的细胞壁外层为甘露聚糖，内层为葡聚糖；而霉菌的细胞壁成分为几丁质、蛋白质、葡聚糖。

原生质体制备方法：

G+菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶

G-菌原生质体获得：EDTA鳌合剂处理，溶菌酶

放线菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶

霉菌原生质体获得：纤维素酶

酵母菌原生质体获得：蜗牛消化酶

13、什么叫锁状联合？其生理意义如何？

锁状联合: 担子菌亚门中多数担子菌的双核菌丝，在进行细胞分裂时，于菌丝的分隔处形成的一个侧生的喙状结构称锁状联合。

生理意义：保证了双核菌丝在进行细胞分裂时，每节（每个细胞）都能含有两个异质（遗传型不同）的核，为进行有性生殖，通过核配形成担子打下基础。锁状联合是双核菌丝的鉴定标准，凡是产生锁状联合的菌丝均可断定为双核。锁状联合也是担子菌亚门的明显特征之一。

第三章病毒和亚病毒

1、名词解释：病毒，真病毒，亚病毒，噬菌斑，烈性噬菌体，温和噬菌体，溶原菌，溶原性。

病毒：是超显微的，无细胞结构，专性活细胞内寄生，在活细胞外具一般化学大分子特征，一旦进入宿主细胞又具有生命特征。真病毒：至少含有核酸和蛋白质两种组分的病毒亚病毒：凡在核酸和蛋白质两种成分中，只含其中之一的分子病原体称为亚病毒

噬菌斑：当一个噬菌体感染一个敏感细胞后，隔不久即释放出一群子代噬菌体，在固体培养基中，它们通过琼脂层的扩散又侵染周围的宿主细胞，并引起它们的裂解，如此经过多次重复，就出现了一个由无数噬菌体粒子构成的群体—噬菌斑，它是透亮不长菌的小圆斑，每一个噬菌斑是由一个噬菌体粒子形成的。烈性噬菌体：凡在短时间内能连续完成吸附、侵入、增殖、成熟、裂解这五个阶段而实现其繁殖的噬菌体，称为烈性噬菌体。温和性噬菌体：噬菌体侵染宿主后，并不增殖，裂解，而与宿主DNA结合，随宿主DNA复制而复制，此时细胞中找不到形态上可见的噬菌体，这种噬菌体称为温和性噬菌体或溶源噬菌体。溶原菌：含有温和性噬菌体的细菌称为溶源性细菌。溶源性——噬菌体附着或整合在宿主染色体上，一道复制。

2、病毒粒有哪几种对称体制？每种对称又有几类特殊外形？

①螺旋对称型—TMV 呈直杆状，中空②二十面体对称—腺病毒外形呈典型的二十面体③复合对称—T偶数噬菌体呈蝌蚪状

3、什么叫烈性噬菌体？简述其裂解性生活史。

烈性噬菌体：凡在短时间内能连续完成吸附、侵入、增殖、成熟、裂解这五个阶段而实现其繁殖的噬菌体，称为烈性噬菌体。①吸附噬菌体尾丝散开，固着于特异性受点上。②侵入尾鞘收缩，尾管推出并插入到细胞壁和膜中，头部的核酸注入到宿主细胞中，而蛋白质衣壳留在细胞壁外。③增殖增殖过程包括核酸的复制和蛋白质的生物合成。注入细胞的核酸操纵宿主细胞代谢机构，以寄主个体及细胞降解物和培养基介质为原料，大量复制噬菌体核酸，并合成蛋白质外壳。④成熟（装配）寄主细胞合成噬菌体壳体(T4噬菌体包括头部、尾部),并组装成完整的噬菌体粒子。⑤裂解（释放）子代噬菌体成熟后，脂肪酶和溶菌酶促进宿主细胞裂解，从而释放出大量子代噬菌体。

4、什么是一步生长曲线？它可分几期？各期有何特点

一步生长曲线：定量描述烈性噬菌体增殖规律的实验曲线称作一步生长曲线或一级生长曲线。潜伏期从噬菌体吸附细菌细胞至细菌细胞释放出新的噬菌体的最短时间。又可分为隐晦期和胞内累积期。裂解期从被感染的第一个细胞裂解至最后一个细胞裂解完毕所经历的时间。平稳期指被感染的宿主已全部裂解，溶液中噬菌体数达到最高点后的时期。裂解量每个被感染的细菌释放新的噬菌体的平均数