植物生理学实验-细胞分裂素含量测定(萝卜子叶测定法)
细胞分裂素含量测定（萝卜子叶测定法）
[实验目的]:
学习并掌握萝卜子叶测定的方法来测定细胞分裂素的含量。
[实验原理]:
细胞分裂素能促进细胞的分裂，而不同浓度的细胞分裂素促进细胞分裂的程度不同。在一定的浓度范围内，植物组织的增重与细胞分裂素的浓度存在着线性关系。因而可以通过萝卜子叶增重来测定细胞分裂素的含量。
[器材与试剂]:
1..实验仪器黑暗培养箱，光照培养箱，电子天平
2.实验仪器1mol/LHCl，10mg/L6-BA母液（称10mg6-BA溶于少量1mg/LHcl溶液中，用蒸馏水稀释至1000ml,冰箱中保存）
3.实验材料萝卜种子
[实验步骤]:
1.挑选大小一致的萝卜种子，用蒸馏水浸泡15min，放在盛有湿滤纸的培养皿中，在26°C黑暗条件下萌发30h。
2.用镊子取下大小一致的萌发萝卜幼苗的子叶10对，去除下胚轴，子叶在蒸馏水中浸泡以去除内源激素，吸水纸吸干水后用1/10000灵敏度的电子天平称鲜重。
3.分别取不同浓度的6-BA标准液（100，200，300，400，500，600，700μg/L）各2ml于放有滤纸的培养皿中，另外吸取2ml蒸馏水作空白对照。三分重复。将称好的萝卜子叶放在各培养皿中，25℃光照箱中培养，注意补充6-BA标准溶液以保持湿润。
4.3d以后，吸水纸吸收水分，称量处理后的子叶的鲜重。
5.以6-BA溶液的浓度为横坐标，子叶鲜重的增加量为纵坐标，做标准曲线图。
6.如需检测植物提取液中6-BA的含量，可用上述同样的方法处理萝卜子叶，测定子叶的增加量，通过查标准曲线求得。[注意事项]:
1．取萝卜子叶时注意去除下胚轴。
2．用蒸馏水浸泡子叶除去内源激素。
3．最好用1/10000灵敏度的电子天平来称量。
[实验作业]:
萝卜子叶做细胞分裂素的生物测定时，为什么要清除它的下胚轴？
胡萝卜含量最高的食物
胡萝卜是α-胡萝卜素含量最高的食物 胡萝卜素可防治智力缺陷。食用富含胡萝卜素的食物可防止记忆衰退及其他神经功能损害。胡萝卜素是抗氧化剂，它还可以防治智力缺陷。富含胡萝卜素的食物有：油菜、荠菜、苋菜、胡萝卜、花椰菜、甘薯、南瓜、黄玉米等。 紫菜、甜瓜、胡萝卜、柑橘、红薯、南瓜、柿子、木瓜、橙子、肝、牛奶、蛋黄、鱼类等。 说到这里，人们肯R*定要问，这个可爱的α-胡萝卜素，它到底来自于哪里呢?我查询了美国农业部食物数据库，发现α-胡萝卜素含量最高的食物，仍然是胡萝卜。 如果比β-胡WP-WbllbZRIxwoxGavsw$IDxKMLZbwsd萝卜素的含量，胡萝卜当然是冠军，但其他深Imu zrj绿色叶菜也相当出色，比如菠菜、苋菜，差距 9%vIZEhZO68e v9u6obfUg并不是太大。但是，若论α-胡萝卜素的含量 4!YBEoXioacTx1t#NUO7bb*pZhu-1e&LY380$Ve@jdXad-h^aYhkr-L，胡萝卜素的数据绝对让其他食物望尘莫及。o&95#up%9clD((C5以下是α-胡萝卜素的主要食物来源： 生胡萝卜：3.48mg/100g;煮胡萝卜(不加盐)：3.77mg/100g;脱水胡萝卜：14.25mg/ 100g;胡萝卜汁(灭菌罐装)：4.34mg/100g牙不齐 南瓜：0.52;豆角：0.13mg;橘子：0.111;黄玉米：0.063;香菜： 0.044;柿子：0.013;橙子：0.3 芒果：0.009;木瓜：0.002 看了这些数据就能明白，胡萝卜还是一种非常优秀的蔬菜。需要提示的是，α-胡萝卜素并不怕蒸煮温度，把胡I9me-萝卜放在肉汤里煮，只要连汤喝掉，并不会引起α-胡萝卜素的明显损失。相反，熟吃才更有利于各种类胡萝卜素的吸收，只要少量的油脂就能达到充分吸收的效果。牙齿排列不整齐 虽然现在很多蔬菜都明显涨价，胡萝卜的价格仍然处于较为低廉的位置。经常把它请进家门，既经济，又健康，无论炖、煮、炒、蒸都相当美味，实在是当今生活中难得的幸事......唯一需要小心的，就是贪吃太多有可能让皮肤染黄，
胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定
新疆农业科学2004，41（专刊）：103～105 Xinjiang Agricultural Sciences 胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定 陈洁1，解晓霞2，庞咏梅2，丁海燕2，王先云3 （1.乌鲁木齐神内生物制品有限公司，新疆乌鲁木齐830001；2.新疆冠农天府果蔬食品有限责任公司，新疆库尔勒841000；3.乌鲁木齐市绿金啤酒花有限公司，新疆乌鲁木齐830001） 摘要：在GB12291-90的基础上，利用萃取剂（氯仿:甲醇（v/v）=2:1）对胡萝卜粉中的类胡萝卜素进行提取，并以萃取剂作为空白，确定其提取液的λmax为458nm。 关键词：胡萝卜粉；类胡萝卜素；快速测定 生产加工胡萝卜制品的企业多以胡萝卜浓缩汁、胡萝卜原浆及胡萝卜系列饮料为主，还有利用生产浓缩汁排出的废料—胡萝卜渣经烘干、磨粉而制得的胡萝卜粉制品。胡萝卜粉中富含了大量的类胡萝卜素、膳食纤维、果胶等物质，具有很高的经济价值。胡萝卜制品中的类胡萝卜素含量的高低成为评价该产品质量高低的重要指标之一。在检测该指标的众多方法中，多以层析法、色谱法居多，简易快速的方法很少，尤其是胡萝卜粉这类干制品，目前还没有完整的试验方法。实践工作中，依据GB/T12291-90的原理并借此基础，总结出一套快速、简易且较准确的方法以适宜生产检验的需要。 1材料与方法 !.!材料 胡萝卜粉（原料胡萝卜经破碎、榨汁后的湿渣再经烘干、磨粉制得，细度为80目过筛率大于60%）。!."仪器 723分光光度计、AE200电子分析天平、50ml具塞量筒（或具塞比色管）、直径为7.5cm的波纹漏斗、直径为12.5cm的快速滤纸、100ml棕色容量瓶、四孔漏斗架。 2检测方法 类胡萝卜素性状不稳定，见光易氧化分解，故操作时应避光。 ".!萃取 准确称取试样约0.2g（精确至0.1mg）于50ml具塞量筒中，以少量水浸润样品，待粉样被充分浸透、膨胀后，加入20ml萃取剂振摇数次，在振摇过程中注意旋盖放气，勿将样液溅出，于暗处放置2min 左右，取出再振摇1～2min，静置1min，待过滤。 将直径15cm的快速滤纸置于波纹漏斗中（滤纸应高出漏斗边沿1～2mm），先用少量萃取剂润湿滤纸，使之与漏斗紧密贴切，再用少量萃取剂清洗漏斗，弃去滤液。 将前述待过滤的萃取液转入漏斗（转移时，尽量将试样移入漏斗底部），随即用装有萃取剂的洗瓶快速洗涤具塞量筒3～4次至筒壁完全干净，并自上而下快速以螺旋状洗涤漏斗，致使试样全部集中于漏斗底部，盖上滤纸，待滤液完全滤干后，再用洗瓶洗涤样品，反复洗涤过滤数次（每次滤液完全滤净后再进行下一次的洗涤和过滤），直至被萃取的试样呈白色为止，全部滤液收集于棕色容量瓶中，以萃取剂定容至刻度，摇匀待比色。 "."波长 以萃取剂作空白，用1cm比色皿，在430～490nm波长内测定吸光值。以波长为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，以选择最大吸收峰。可见λ在456～458nm内吸光值达到最大，记录该波长下的吸光值A。图1 3组6个样品的试验结果及每一个样品所对应的标准曲线。表1
植物叶绿素类胡萝卜素测定方法
植物叶绿素类胡萝卜素测定方法 叶绿素、类胡萝卜素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A,αCL式中:α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料:新鲜(或烘干)的植物叶片。 (二)仪器设备:1)分光光度计;2)电子顶载天平(感量0.01g);3)研钵;4)棕色容量瓶; 5)小漏斗;6)定量滤纸;7)吸水纸; 8)擦境纸;9)滴管。 (三)试剂:1)95%乙醇(或80%丙酮)(v丙酮:v乙醇=2:1的95%水溶液);2)石英砂;3)碳酸钙粉。暗中2h，0.5g，25ml 三、实验步骤 1)取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，剪碎(去掉中脉)，混匀。
2)将取好的样品放入25ml容量瓶中，加混合浸提液(无水乙醇:丙酮 =5:5)20ml，放在黑暗条件下，浸泡至叶片发白，用浸提试剂定容至25ml，摇匀备用。 3)把叶绿体色素提取液倒入1cm光径的比色皿内，以浸提试剂为空白测定吸光度。选择波长663 646 和470nm。 四、实验结果计算 叶绿素a的浓度 = 12.21 ， OD– 2.81 ， OD 633 646 叶绿素b的浓度 = 20.13 ， OD– 5.03， OD646663 类胡萝卜素浓度=(1000A-3.27C-104C)?229 单位 mg/L 470ab C(mg/L)*提取液总量(ml) 叶绿体色素含量(mg/g)= ____________________________ 烟叶重量(g)*1000 注意事项:操作避光研磨时间短些
胡萝卜素的提取
胡萝卜素提取的设计方案 一，实验目的 1、学习柱色谱法、薄层色谱法的原理及其方法。 2、掌握从胡萝卜中分离提纯胡萝卜素的原理和方法。 3、学会用色谱法从胡萝卜中提取胡萝卜素并鉴定之。 4、初步了解胡萝卜素的来源以及生产方法。 二，实验原理： β－胡萝卜素可通过化学合成，植物提取和微生物发酵3种方法生产，根据生产方式不同分为化学合成β－胡萝卜素和天然β－胡萝卜素两大类。本实验是从胡萝卜中提取天然β－胡萝卜素。而提取的方法可选择色谱法。因为色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。具有极其广泛的用途。色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分开。流动的混合物溶液称为流动相，固定的物质称为固定相（可以是固体或液体）。根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱等；根据操作条件的不同，又可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。 1、柱色谱法 柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类。前者常用氧化铝、硅胶作固定相。在分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当待分离混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或者将柱吸干，挤出后按色带分割开，再用溶剂将各色带中的溶质萃取出来。对于柱上不显色的化合物分离时，可用紫外光照射后所呈现的荧光来检查，或在用溶剂洗脱是分别收集洗脱液，逐个加以鉴定。 2、薄层色谱法 薄层色谱法（ThinLayerChomatography，缩写TLC）是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。薄层色谱是在载玻片上才、均匀铺上一薄层吸附剂，制成薄板，用毛细管将样品点在起点处，把此薄层板置于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm，待展开剂前沿利顶端约1cm附近时取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色，测定斑点位置，计算比移值（Rf）。由于层析是在薄层上进行的，故称为薄层层析。薄层色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。一般能用硅胶或活性氧化铝薄层色谱分开的物质，也能用硅胶或氧化铝柱色谱分开，凡能用硅藻土和纤维素作支持剂的分配柱色谱能分开的物质；也可分别用硅藻土和纤维素薄层色谱展开，因此，薄层色谱常用作柱色谱的先导。同时也可以用吸收剂非极性大孔吸附树脂，具本实验的类胡萝卜素具有末端带环的长链结构，故平均孔径为290～300A的X-5大孔吸附树脂更利于他们的吸附和吸附过程中的传质。 3、胡萝卜素的分离 β-胡萝卜素分子中的碳骨架是由8个异戊二烯单位连接而成的，是四萜类化合物。它的分子中有一个较长的π-π共轭体系，能吸收不同波长的可见光，因而，呈现一定的颜色，β-胡萝卜素是黄色物质，所以，又叫做多烯色素。β-胡萝卜素的结构式如下：
水果蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定
水果、蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定 1 主题内容与适用范围 本标准规定了水果、蔬菜汁中类胡萝卜素的分离提取方法及提取物中类胡萝卜素总量的测定方法。 本标准适用于水果、蔬菜汁中类胡萝卜素总量的测定。 2 原理 果蔬滤液通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在特定波长下用分光光度法测其吸光度。该吸光度与类胡萝卜素含量成线性关系,通过换算即可得知类胡萝卜素之含量。 3 试剂和溶液 本标准所用试剂除特殊规定外,均使用符合国家标准的分析纯试剂,均采用蒸馏水。 3.1 石英砂(Q/HG 22--467)； 3.2 萃取剂,2/1(v/v)氯仿(GB 682)-甲醇(GB 683)混合。 4 仪器设备 4.1 抽滤器； 4.2 无灰分滤纸； 4.3 分液漏斗：250mL； 4.4 容量瓶,100mL； 4.5 移液管,20mL； 4.6 烧杯,50mL； 4.7 分光光度计,使用的测量波长为440±10nm。 5 分析步骤 注：由于类胡萝卜素本身性状的不稳定性,即见光易氧化分解,建议所有操作应避光进行。 5.1 试样的制备 5.1.1 液体样品：混合均匀后取样。 5.1.2 固体样品：捣碎机捣碎后,纱布挤汁。 5.2 用移液管吸取20mL样液置50mL烧杯中。 5.3 过滤：在烧杯(5.2)中加入3g石英砂,摇动后用布氏漏斗过滤(布氏漏斗预先铺有无灰滤纸,纸上铺有2g石英砂),然后再用5mL水冲洗滤渣3次。 5.4 萃取：在250mL的分液漏斗中倒入滤液(5.3),再加入20mL萃取剂(3.2),振摇后静置,收集下部分有机相,再用20mL萃取剂提取两次,将三次萃取所得有机相合并,用萃取剂定容为100mL。 注：对果胶含量大的果蔬,萃取时,将三次合并的有机相重新倒回原分液漏斗,继续用20mL萃取洗涤一次,然后用萃取剂定容至100mL。 5.5 测定：在440±10nm波长下测定提取液的最大吸光度A。 6 结果的计算和表示 类胡萝卜素总量用mg/L表示,按下式计算： 类胡萝卜素(mg/L)＝A×20 式中：A——测定的最大吸光度； 20——换算系数。 此计算公式是以公认的胡萝卜素分子平均吸收系数250为依据的。
植物生理学实验课程
《植物生理学实验》课程大纲 一、课程概述 课程名称（中文）：植物生理学实验 （英文）：Plant Physiology Experiments 课程编号：18241054 课程学分：0.8 课程总学时：24 课程性质：专业基础课 前修课程：植物学、生物化学、植物生理学 二、课程内容简介 植物生理学是农林院校各相关专业的重要学科基础课，是学习相关后续课程的必要前提，也是进行农业科学研究和指导农业生产的重要手段和依据。本实验课程紧密结合理论课学习内容，加深学生对理论知识的理解。掌握植物生理学的实验技术、基本原理以及研究过程对了解植物生理学的基本理论是非常重要的。本大纲体现了植物生理学最实用的技术方法。实验内容上和农业生产实践相结合，加强学生服务三农的能力。实验手段和方法上，注重传统、经典技术理论与现代新兴技术的结合，提高学生对新技术、新知识的理解和应用能力。 三、实验目标与要求 植物生理学实验的基本目标旨在培养各专业、各层次学生有关植物生理学方面的基本研究方法和技能，包括基本操作技能的训练、独立工作能力的培养、实事求是的科学工作态度和严谨的工作作风的建立。开设植物生理学实验课程，不仅可以使学生加深对植物生理学基本原理、基础知识的理解，而且对培养学生分析问题、解决问题的能力和严谨的科学态度以及提高科研能力等都具有十分重要的作用。 要求学生实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期结果，操作关键步骤及注意事项；实验时要严肃认真专心操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果；及时将实验结果如实记录下来；实验结束后，根据实验结果进行科学分析，完成实验报告。 四、学时分配 植物生理学实验课学时分配 实验项目名称学时实验类别备注 植物组织水势的测定3学时验证性 叶绿体色素的提取及定量测定3学时验证性 植物的溶液培养及缺素症状观察3学时验证性 植物呼吸强度的测定3学时设计性 红外CO2分析仪法测定植物呼吸速率3学时设计性选修 植物生长物质生理效应的测定3学时验证性 植物种子生活力的快速测定3学时验证性
类胡萝卜素的测定方法
类胡萝卜素的测定方法（高效液相色谱法） 本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。 本方法最低检出量为：α-胡萝卜素为5ng/mL，β-胡萝卜素为 4.3ng/mL，γ-胡萝卜素为3.5ng/mL，番茄红素为2.7ng/mL，斑蝥黄素为1.0ng/mL。 1. 方法提要 样品以丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离，在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测，通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。 2. 仪器 （1）高效液相色谱仪。 （2）冷凝回流皂化装置。 （3）旋转蒸发仪。 （4）离心机（5000r/min）。 3. 试剂 本方法所使用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为重蒸馏水。 （1）丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂：取相同体积的丙酮、石油醚混匀。 （2）50% KOH甲醇-水溶液：称取250g氢氧化钾，用50mL适量水溶解后，用甲醇定容至500mL容量瓶，备用。 （3）无水硫酸钠（Na-2SO4）。 （4）二丁基羟基甲苯（BHT）。 （5）无水乙醇（C2H5OH）。 （6）流动相使用液：按乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）比例准确量取各溶剂，并充分混匀，经.45μm微孔膜过滤后使用。 （7）类胡萝卜素标样：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。（8）标准溶液：准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量，先分别用少量的乙酸乙酯溶解，再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液（于-30℃冻箱保存），使用时再配成3.5~16.5mg/L的标准使用液。 4. 测定步骤 （1）样品处理： a. 皂化提取法（如牛奶等脂肪含量较高的样品）：取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min，取上层油脂于250mL皂化瓶中，加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、0.1g BHT，65~75℃回流皂化30min，用石油醚反复提取皂化液，多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。 b. 直接提取法（如番茄等脂肪含量较低的样品）：适量新鲜成熟番茄匀浆后称取5~10mg于小烧杯中，加入0.1g BHT，用丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂提取3次，合并、收集
对β-胡萝卜素测定方法的认识
对 Β - 胡 萝 ` 卜 素 测 定 方 ^ 法 的 认 识 , 姓名：邹俊楠 班级：应用化学122班 ( 学院：化学工程学院
学校：新疆农业大学。 # ! >
{ 对β-胡萝卜素测定方法的认识 摘要：食品中的β-胡萝卜素可以用纸上层析法、薄层色谱法、分光光度法及高效液相色谱法等方法测定。本文简述了这些方法的原理条件及优缺点，并谈了谈自己的认识。 Β-胡萝卜素作为维生素A的前体，是人体重要营养素，也能够影响蛋白质的合成和利用，促进体内软组织的生长发育。同时，β-胡萝卜素还有一定的防癌作用。因此，对β-胡萝卜素的研究倍受广注。 β-胡萝卜素分子中存在多个共轭双键结构，对许多物理、化学、生物等因素都不稳定，例如光辐射、高温、酸、碱、游离卤素、水分等，但氧是影响胡萝卜素稳定的主要因素。它不溶于水、丙二醇、甘油、酸和碱，溶于二硫化碳、苯、氯仿、己烷及植物油等，几乎不溶于甲醇和乙醇。 、 1 测定方法 1·1 天然β-胡萝卜素的提取 取切碎混匀的菜样30g，加入适量水(一般约l：—2)，于捣碎机中捣碎，使匀浆呈稠糊状。 因β-胡萝卜素对弱碱比较稳定，所以选用氨水：乙醇（5:35）作
为稳定剂。稳定剂可以加快沉淀且使沉淀完全，从而减少β-胡萝卜素损失，提高提取率。 加入2%的CaCl2·2H2O其沉淀量最大，且β-胡萝卜素的含量最高。 % 因β-胡萝卜素是脂溶性物质，可以溶解在有机试剂中，根据相似相溶规律和β-胡萝卜素的理化性质，我们选用亲脂性较强的有机溶剂。 为避免β-胡萝卜素的不必要损失，在除去溶剂时应避免高温，故应优先选择低沸点的溶剂。 同时，根据β-胡萝卜素在不同溶剂中的溶解度；可以得出石油醚可以作为很好的β-胡萝卜素的溶剂。 因为蔬菜糊中含有大量的水分，直接选用石油醚很难从其中萃取β-胡萝卜素，选用水溶性的丙酮和石油醚的混合液萃取，这样丙酮会有效地使渣干燥因而在随后的萃取中，色素可以高效地进入萃取液，提高了萃取率。 故在萃取过程中，为了提高萃取率，应加入氨水：乙醇（5:35）作为稳定剂，2%的CaCl2·2H2O作为沉淀剂；用石油醚和丙酮混合物作为提取剂。 < 1·2 测定 1·2·1 纸层析法 食品中的胡萝卜素可用生物学鉴定、溶剂分配和层析技术测定。
植物叶绿素类胡萝卜素测定方法
植物叶绿素类胡萝卜素 测定方法 The manuscript was revised on the evening of 2021
叶绿素、类胡萝卜素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。 （二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量）；3）研钵；4）棕色容量瓶； 5）小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸；8）擦境纸；9）滴管。 （三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）（v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。暗中2h，，25ml 三、实验步骤 1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。 2)将取好的样品放入25ml容量瓶中，加混合浸提液（无水乙醇:丙酮=5:5）20ml，放在黑暗条件下，浸泡至叶片发白，用浸提试剂定容至25ml，摇匀备用。 3）把叶绿体色素提取液倒入1cm光径的比色皿内，以浸提试剂为空白测定吸光度。选择波长663 646 和470nm。
植物生理实验希尔反应
植物生理学实验 希尔反应的观察和反应速率的测定
摘要： 本实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料；以菠菜的离体叶绿体为实验对象，由离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂，根据2,6 -二氯酚靛酚在光下从蓝色到粉红色再到无色的变化，观察希尔反应。在本实验中观察到，加入叶绿体悬浮液的试管，在光下由蓝色变为绿色（由于叶绿体存在的原因）；暗处的试管仍为蓝色。 一、实验原理与实验目的 实验原理： 希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP+、草酸等）2H2O+2A →2AH2+O2 希尔反应的测定的方法是（1）放氧速率；（2）氧化剂被还原的速率。本实验中2,6 -氯酚靛酚还原后，溶液由兰色变为无色。 实验目的： 观察和测定希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。 二、实验材料和方法 实验材料：菠菜 实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等 实验试剂：（1）提取液（0.067M 磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖+ 0.01M KCl）；（2）0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸缓冲液+0.01%KCl） 三、实验步骤 1.离体叶绿体悬浮液的制备 称取8克叶片,加10ml预冷提取液研磨,在研钵中捣碎30秒钟后,继续加入15ml冷提取液; 经过二层纱布过滤,去残渣,挤出滤液,置于离心管中。 以1000转/分离心3分钟;弃去沉淀。 以3000转/分离心上层液,8分钟,弃去上清液,沉淀为破碎的叶绿体。 用20ml提取液悬浮沉淀,置于冰浴备用。 2.离体叶绿体对2,6 -二氯酚靛酚的还原作用 取2支试管，分别加入5ml叶绿体悬浮液和1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚。一试管照光，另一试管置于黑暗。5-10min后观察溶液颜色的变化。 四、实验结果与讨论 实验结果： 黑暗处的试管颜色未发生变化，一直都是蓝绿色； 光照下的试管颜色明显变浅，由较深的蓝绿色变为浅绿色，证明希尔反应的存在，可见离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂。 实验讨论： 1、离体叶绿体对染料的还原作用实验中,比较两个处理的溶液颜色有何不同,并解释实验结
胡萝卜素的提取
β－胡萝卜素的提取分离研究
β－胡萝卜素的提取 摘要：β－胡萝卜素是安全的、无毒的天然色素，在生物食品等领域均有展应 用。β－胡萝卜素的提取工艺众多，工艺各有特点。简要介绍了溶剂提取法提取胡萝卜素，柱色谱分离β－胡萝卜素，薄层色谱法检验分离效果的方法。学习柱色谱法、薄层色谱法的原理及其方法。掌握从胡萝卜中分离提纯β－胡萝卜素的原理和方法。学会用色谱法从胡萝卜中提取胡萝卜素并鉴定之。 关键词：β－胡萝卜素提取分离 引言： 胡萝卜是传统蔬菜和食用天然胡萝卜素的重要来源。β－胡萝卜素是500多种类胡萝卜素的一种。是橘黄色脂溶性化合物，它是一种重要的食用天然色素和营养强化剂，易溶于许多有机溶剂，如：乙酸乙酯、氯仿。几乎不溶于丙二醇、甘油、酸和碱‘不溶于水。β－胡萝卜素是一种非常安全的、无任何毒副作用的营养元素，具有解毒作用。是维护人体健康不可缺少的营养素。在抗癌、预防心血管疾病、白内障及抗氧化方面有显著的功能，可预防因老化引起的多种退化性疾病。另外，β－胡萝卜素在食品工业中的应用也日益广泛。 胡萝卜中含有丰富的胡萝卜素，是β－胡萝卜素含量最高的蔬菜之一。本文以胡萝卜为原料，采用色谱分离的方法研究了胡萝卜素的提取。 正文 1.1胡萝卜中的成分每100克胡萝卜中，约含蛋白质0.6克，脂肪0.3克，糖7.6～8.3克，铁0.6毫克，维生素A（胡萝卜素）1.35～17.25毫克，维生素B1 0.02～0.04毫克，维生素B2 0.04～0.05毫克，维生素C12毫克，热量150.7千焦，另含果胶、淀粉、无机盐和多种氨基酸。各类品种中尤以深橘红色胡萝卜素含量最高，各种胡萝卜所含能量在79.5千焦～1339.8千焦之间。胡萝卜是一种质脆味美、营养丰富的家常蔬菜，素有“小人参”之称。胡萝卜富含糖类、脂肪、挥发油、胡萝卜素、维生素A、维生素B1、维生素B2、花青素、钙、铁等人体所需的营养成分。
胡萝卜素的提取教学设计教案
教学准备 1. 教学目标 1、了解有关胡萝卜素的基础知识 2、掌握提取胡萝卜素的基本原理 3、掌握萃取法提取胡萝卜素的技术 4、学会纸层析的操作方法 2. 教学重点/难点 教学重点： 胡萝卜素的提取，纸层析的操作 教学难点： 胡萝卜素的提取 3. 教学用具 教学课件 4. 标签 教学过程 （一）引入新课 植物有效成分提取的方法有哪些？这一节我们再来学习萃取法提取胡萝卜素的原理、方法和提取技术。 （二）背景知识 1．基础知识 （1）胡萝卜素的性质：橘黄色晶体，化学性质稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等。 （2）胡萝卜素的来源：植物、岩藻、微生物发酵。
（3）分类 根据双键的数目可以将胡萝卜素划分为α、β、γ三类，β－胡萝卜素是其中最主要的组成成分。 （4）用途 一分子的β－胡萝卜素在人或动物的小肠、肝脏等器官被氧化成两分子的维生素A，因此，胡萝卜素可以用来治疗因缺乏维生素A而引起的各种疾病，如夜盲症、幼儿生长发育不良，干皮症等。胡萝卜素还是常用的食品色素，广泛地用作食品、饮料、饲料的添加剂。最近发现天然胡萝卜素还具有使癌变细胞恢复成正常细胞的作用。 （5）方法：萃取法。 影响因素：萃取剂性质、用量；原料颗粒大小、紧密程度、含水量；温度、时间等。 选择控制：溶剂：石油醚 原料：颗粒小、干燥。 条件：温度较高，时间长。 （三）胡萝卜素的提取 1．实验设计 1．1实验流程：阅读教材图6－6。 溶剂：应选择使用水不溶性有机溶剂，如石油醚（为什么？）。 选择溶剂应注意哪些因素？：（提取效率、水溶性与水不溶性、沸点高低、有无毒性、是否易于产品分离等） （1）提取方法 胡萝卜素易溶于有机溶剂，可以用萃取的方法提取。 （2）提取胡萝卜素的实验流程 胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素 （3）萃取剂的选择
β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定
β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定 一、实验目的 1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。 2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf值的方法。 二．仪器和试剂 仪器三角瓶（50ml）、分液漏斗（150ml）、蒸馏瓶（50ml）、普通蒸馏装置（或减压蒸馏装置）、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。试剂胡萝卜、丙酮、石油醚（bp30~60℃）、硅胶（层析用，200~300 目）、无水硫酸钠、石油醚（bp60~90℃）、丙酮：石油醚（1：9）（V/V）。 三．实验方案 1、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备 将新鲜胡萝卜洗净、擦干,切去尾部，切碎。称取碎鲜胡萝卜【1】10g 于小研钵中,研碎。碎胡萝卜移至50mL 三角烧瓶中，每次用丙酮10mL 萃取2 次，再用石油醚（bp30~60℃）萃取固体两次，每次10mL。把石油醚溶液加到丙酮液中。在分液漏斗中将混合液与50mL饱和氯化钠溶液【2】振荡，分去下层，用蒸馏水洗涤上层液两次，每次50mL，分去水，用无水硫酸钠干燥石油醚液（约1h）,把混合液倒入50mL 圆底烧瓶中，热水浴加热蒸馏，除去溶剂，得固体。在制得的固体物加入3mL 石油醚（bp60~90℃）拌硅胶1g，在通风橱内抽干，得黄色硅胶颗粒，待上柱。 2、装柱和分离 取20cm*1cm 色谱柱一根，垂直装置，以50ml 三角烧瓶作洗脱液的接受器。用镊子取少许脱脂棉【3】放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂绵上盖一层厚0.5cm 的海石砂（或用一张比柱内径略小的滤纸代替），关闭活塞，向柱内倒入石油醚（bp60－90℃）至约为柱高的3／4 处，打开活塞，控制流出速度为1 滴/s。通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。用洗耳球轻轻敲打柱身，使填装紧密。当装填到3/4 时，再在上面加一层0.5cm 厚的海石砂，操作时一直保持上述流速，注意不能使液面低于砂子的上层。当液面流至离海石砂面1cm 时，立即从玻璃漏斗加入已制备好的含胡萝卜素的黄色硅胶，随后用0.5ml 石油醚洗下管壁的硅胶，如此连续2—3 次，直至洗净为止，然后在色谱柱上装上滴液漏斗，用石油醚（bp60－90℃）作洗脱剂进行洗脱，洗1 滴/s。当有一黄色的谱带分出，待黄色组分绝大部分洗出时，把洗脱剂换成1：9 丙酮一石油醚（bp60－90℃）混液作洗脱剂进行洗脱，控制流出速度如前（这混液洗脱剂有助于混合物中极性较大的组分移动），又可分出两个黄色组分。在45—90min 内，柱中物料将全部洗脱出来。观察这些物料通过柱子的移动情况。在三角烧瓶中收集3 份洗出液。用纸色谱、薄层色谱对各段洗出液进行色谱分析。 3.薄层色谱法
胡萝卜素含量测定
食物中胡萝卜素的测定方法 Method for determination of carotene in foods 1 主题内容与适用范围 本标准规定了食物中胡萝卜素的测定方法——纸层析法。 本标准适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定，其最小检出限为0.11μg。 2 原理 以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色纱分离；剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。 3 试剂 3.1 石油醚（沸程30～60℃）：同时是展开剂。 3.2 丙酮：分析纯。 3.3 丙酮-石油醚混合液：3：7（V/V）。 3.4 无水硫酸钠：分析纯。 3.5 5%硫酸钠溶液。 3.6 1：1氢氧化钾溶液：取50g氢氧化钾溶于50mL水。 3.7 无水乙醇：需经脱醛处理。 3.8 β-胡萝卜素标准溶液：取5mgβ-胡萝卜素标准品，溶于10mL三氯甲烷中，浓度约为500μg/mL，准确测其浓度。 取标准溶液10.0μL，加正己烷3.00mL，混匀，测吸光值，比色杯厚度1cm，以正己烷为空白，入射光波长450nm，平行测定三份，取均值。
计算公式： (1) 式中：X1——胡萝卜素标准溶液浓度，mg/mL； A——吸光值； E——β-胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度为1cm，溶液浓度为1ppm的吸光系数，为0.2638； ——将ppm,换算成mg/mL; ——测定过程中稀释倍数的换算。 3.9 β-胡萝卜素标准使用液：将已标定的标准液用石油醚准确稀释后，每毫升溶液相当50μg，避光保存于冰箱中。 4 仪器和设备 4.1 实验室常用设备。 4.2 玻璃层析缸。 4.3 分光光度计。 4.4旋转蒸发器：具150mL球形瓶。 4.5 恒温水浴锅。 4.6 皂化回馏装置。 4.7 点样器或微量注射器。 4.8 新华滤纸：定性，快速或中速，101号。 5 样品的采集和处理 5.1 粮食：样品用水洗三次，置60℃烤箱中烤干，磨粉，储于塑料瓶内，放一小包樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。
植物生理学实验指导
植物生理学实验指导 主编张立军 参编（按姓氏汉语拚音） 樊金娟郝建军 刘延吉阮燕晔 朱延姝
沈阳农业大学植物生理学教研室 2004年1 月 序 实验课是提高学生动手能力，提高分析问题和解决问题能力的重要途径。植物生理学教研室的全体教师和实验技术人员经过多年的教改探索，认为实验课教学要注意基本实验技能的训练、要有助于提高学生的动手能力，有助于使学生熟悉实验工作；实验内容要有挑战性，能够吸引学生的兴趣。为此，我们在借鉴国外高校和国内其他高校的先进教学经验的基础上，提出了一系列提高实验课教学质量的改革措施，这些措施涉及到实验内容的设置、实验的设计、实验报告的写作，以及实验指导书的编写等多个方面。本学期的实验教学是我们实验教学改革探索的一部分。所有的实验都设计成研究型的，有适当的处理，并尽可能的设置重复。同学们能够通过实验解释一个理论或实际问题。在本次编写的实验指导中我们给出了大量的思考题，有的涉及实验中应注意的问题，有的涉及实验技术的应用，有的涉及实验方法的应用扩展；此外，我们还要求实验报告的形式类似于正式发表的科研报告，并附有写作说明，这有利于培养学生写作科研论文的能力。为了培养良好的科研习惯，对每个实验还都给出相应的记录方式。 本学期是我们教研室首次按这项教学改革研究成果组织教学，希望广大同学配合，也希望相关专业老师、相关部门的领导及广大同学提出宝贵意见、以便使植物生理学实验教学改革更加完善。 张立军 2004 年1月30日 2014年12月29日 1
附：参加教学改革人员： 刘延吉郝建军樊金娟朱延姝阮燕晔康宗利付淑杰于洋 目录 Section 1（1h） 植物生理学实验课简介 1．教学目的 2．教学要求和考核 3．实验内容介绍 4．实验室安全要求 Section 2（6h） 一、植物的光合速率测定-----改良半叶法 二、植物叶绿素素含量测定----丙酮提取法 Section 3（6h） 三、植物组织水势测定----小液流法 四、植物根系活力测定----甲烯蓝法 Section 4（6h） 五、植物抗逆性鉴定----电导率仪法 六、植物组织丙二醛含量测定 Section 5（4h） 七、植物组织硝态氮含量的测定 Section 6（4h） 八、植物呼吸酶活性测定 2
胡萝卜素和番茄红素的提取分离和测定
β—胡萝卜素和番茄红素的提取分离与测定 一，实验目的 1、学习柱色谱法、薄层色谱法的原理及其方法。 2、掌握从胡萝卜或番茄中分离提纯胡萝卜素和番茄红素的原理和方法。 3、学会用色谱法从胡萝卜或番茄中提取胡萝卜素和番茄红素并鉴定之。 4、初步了解胡萝卜素和番茄红素的来源以及生产方法。 二，实验原理： 胡萝卜素是最早发现的一个多烯色素。后来，又发现了许多在结构上与胡萝卜素类似的色素，于是就把这类物质叫做胡萝卜色素类化合物，或者叫做类胡萝卜素。这类化合物大都难溶于水，易溶于弱极性或非极性的有机溶剂，因此又把这类物质叫做脂溶性色素。 番茄红素是胡萝卜素的开链异物体。番茄红素在成熟的红色植物果实如番茄、西瓜、胡萝卜、草莓、柑桔等中含量最高，其中含量最多的是番茄。 β-胡萝卜素和番茄红素的分子式均为C40H56，分子量为536.85，β-胡萝卜素的熔点184℃，番茄红素的熔点174℃。β-胡萝卜素和番茄红素是不饱和碳氢化合物，难溶于甲醇、乙醇，可溶于乙醚、石油醚、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有机溶剂。 根据β-胡萝卜素和番茄红素的上述性质，故可利用石油醚、乙酸乙酯等弱极性溶剂将它们从植物材料中浸提出来。然后，根据它们对吸附剂吸附能力的差异，用柱色谱进行分离，用薄层色谱检测分离效果。并根据它们在可见光区有强烈吸收的性质，用紫外-可见分光光度法进行测定，β-胡萝卜素的最大吸收峰为451nm，番茄红素的最大吸收峰 为472nm。 1、柱色谱法 柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类。前者常用氧化铝、硅胶作 固定相。在分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收大量的液体作固定相， 而支持剂本身不起分离作用。 吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当 待分离混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于 不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成不同层次，即溶质在柱中自上 而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱 上分别洗出收集；或者将柱吸干，挤出后按色带分割开，再用溶剂将各
植物生理学实验指导
植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民 浙江农林大学植物学科 2013年8月
实验一植物组织水势的测定 水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法 【实验目的】 了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。 【实验原理】 水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。 当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。 【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。 【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的
植物叶绿素类胡萝卜素测定方法
叶绿素、类胡萝卜素含量的测定 ??? 一、原理 ??? 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比，即A ＝αCL 式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 ???? 二、材料、仪器设备及试剂 ??? （一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。 ??? （二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量0.01g ）；3）研钵；4）棕色容量瓶；? 5）小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸； 8）擦境纸；9）滴管。 ??? （三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）（v 丙酮：v 乙醇=2：1的95%水溶液）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。 暗中2h ，0.5g ，25ml ??? 三、实验步骤 ??1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。 ??2)将取好的样品放入25ml 容量瓶中，加混合浸提液（无水乙醇:丙酮=5:5）20ml ，放在黑暗条件下，浸泡至叶片发白，用浸提试剂定容至25ml ，摇匀备用。 3）把叶绿体色素提取液倒入1cm 光径的比色皿内，以浸提试剂为空白测定吸光度。选择波长663 646 和470nm 。 ??? 四、实验结果计算 叶绿素a 的浓度 = 12.21 ? OD 633 – 2.81 ? OD 646
食品中β-胡萝卜素的测定 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准 食品中β-胡萝卜素的测定 1范围 本标准规定了食品中β-胡萝卜素的测定方法。 本标准适用于食品中β-胡萝卜素的测定。 2原理 试样经皂化后，使β-胡萝卜素完全变为游离态。用石油醚萃取后，反相色谱法分离，外标法定量。 3试剂和材料 注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 3.1试剂 3.1.1α-淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。 3.1.2氢氧化钾（KOH）。 3.1.3无水硫酸钠（Na2SO4）。 3.1.4抗坏血酸(C6H8O6)。 3.1.5石油醚：沸程30 ℃～60 ℃。 3.1.6甲醇(CH4O)：色谱纯。 3.1.7乙腈(C2H3N)：色谱纯。 3.1.8三氯甲烷(CHCl3)：色谱纯。 3.1.9正己烷(C6H14)：色谱纯。 3.1.10甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]：色谱纯。 3.1.11乙醇：体积分数为95 %。 3.2试剂配制 3.2.1氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾250 g，加入200 mL 水溶解。临用前配制。 3.3标准品 3.3.1β-胡萝卜素标准品，CAS：7235-40-7。 3.3.2α-胡萝卜素标准品，CAS：7488-99-5。 3.4标准溶液的配制 3.4.1β-胡萝卜素标准储备液（500 g/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品50 mg（精确到0.1mg），用正己烷定容至100 mL 棕色容量瓶中。 注：β-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。标准储备液用前需校正，具
体操作见附录A。 3.4.2β-胡萝卜素标准中间液（100 μg/mL）：从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0 mL 溶液于50 mL 棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度。 3.4.3β-胡萝卜素标准工作液：从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 溶液至5 个100 mL 棕色容量瓶。，用正己烷定容至刻度，得到浓度为0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL 、3.0 μg/mL 、4.0 μg/mL 的系列标准工作液。 3.4.4α-胡萝卜素标准储备液（500 μg/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品50 mg（精确到0.1mg），用正己烷定容至100 mL 棕色容量瓶中。 注：α-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。标准储备液用前需校正，具体操作见附录A。 3.4.5α-胡萝卜素标准中间液（100 μg/mL）：从α-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0 mL 溶液于50 mL 棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度。 3.4.6α-胡萝卜素和β-胡萝卜素混合标准工作液：分别从α-胡萝卜素标准中间液和β-胡萝卜素标准中间液中准确移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 溶液至5 个100 mL 棕色容量瓶，得到浓度为α-胡萝卜素和β-胡萝卜素浓度均为0.5μg/mL、1.0μg/mL、 2.0μg/mL 、 3.0μg/mL、 4.0 μg/mL的系列混合标准工作液。 4仪器与设备 4.1高效液相色谱仪，带紫外检测器。 4.2旋转蒸发器。 4.3恒温磁力搅拌器：20 ℃～80 ℃。 4.4离心机：转速≥5000rpm。 4.5分析天平：感量为0.1 mg 。 4.6氮吹仪。 4.7恒温水浴箱：控温精度±1℃。 5分析步骤 5.1试样制备 谷物、豆类、坚果等试样需粉碎、研磨、过筛（筛板孔径0.3 mm～0.5 mm)；蔬菜、水果、蛋、藻类等试样用匀质器混匀；谷粉、乳粉等试样用前振摇混合。4℃冰箱可保存1周。 5.2试样处理 5.2.1 无添加β-胡萝卜素的试样 称取粉碎或匀浆混匀的试样（约含β-胡萝卜素20 μg，精确至0.001 g）于250 mL 锥形瓶中，加入1g 抗坏血酸，加入75 mL 乙醇，60 ℃±1 ℃水浴回流加热30 min。 5.2.2 添加β-胡萝卜素的试样 5.2.2.1 高淀粉试样：称取混合均匀的试样（约含β-胡萝卜素20 μg，精确至0.001 g）于250 mL 三角瓶中，加入1.0 g 抗坏血酸，固体试样需用50 mL45 ℃～50 ℃的水溶解并混合均匀。加入l g α-淀粉酶，向三角瓶中充氮后盖上瓶塞，置60 ℃±2 ℃培养箱内酶解30 min。 5.2.2.2 非淀粉类试样：称取混合均匀的试样（约含β-胡萝卜素20 μg，精确至0.001 g ），置