临床免疫学检验
临床免疫学检验
一、免疫球蛋白检测
?概念：免疫球蛋白（Ig）是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称。由浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。
（一）分类
?按重链性质分:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、IgG
?于出生后三个月开始合成，3—5岁接近成人水平。IG是血液中含量最高的Ig，占血清总Ig的75%—80%，是抗感染的主要抗体。是唯一能通过胎盘的抗体。
IgA：分为分泌型和血清型，分泌型的合成和分泌部位在肠道、呼吸道、乳腺、唾液腺和泪腺，血清型占总Ig的10—20%。IgM：是分子量最大的Ig。占血清Ig的5-10%。是个体发育过程中最早出现的抗体，在胚胎发育晚期的胎儿即能产生IgM。在机体受抗原刺激后，是最先产生的抗体。IgM是血管内抗感染的主要抗体。
IgE:是正常人血清中含量最少的Ig。约0.1—0.9mg/L。占总血清Ig的0.02%，为亲细胞抗体。参与Ⅰ型超敏反应,与变态反应、寄生虫病及皮肤过敏有关。
（四）临床意义
⒈免疫球蛋白增高
?（1）单克隆免疫球蛋白增高（M蛋白血症）
IgG、IgA、IgD或IgE增高。见于：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症.淋巴样异常增生性疾病等。
?（2）多克隆免疫球蛋白增高
?①感染：特别是慢性感染如细菌、寄生虫、螺旋体感染，IgG、IgM增高
②自身免疫性疾病：SLE以IgG、IgA或IgG、IgM增高多见，类风关以IgM增高为主
③慢性肝病：IgG、IgA、IgM可增高，慢活肝IgG、IgM增高明显
⑶IgD增高：见于IgD型多发性骨髓瘤、妊娠末期、大量吸烟者
?⑷IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、变态反应性疾病、寄生虫病及皮肤过敏、急慢肝、肾综
⒉免疫球蛋白减少
IgG＜6.0g/L，IgM、IgA＜0.4g/L
（1）先天性：见于先天性无丙种球蛋白血症、先天无胸腺症?（2）获得性：见于大量蛋白丢失性疾病：肾综、剥脱性皮炎中毒性骨髓病、白血病、淋巴网状系统肿瘤：淋巴瘤、霍奇金病
长期使用免疫抑制剂
⑶Ig减少易引起反复感染
?IgG缺乏：易患化脓性感染
?IgM缺乏：易患革兰氏性阴败血症
?IgA缺乏：易患呼吸道感染
二、血清M蛋白检测
?M蛋白是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的，具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段。
M蛋白检测的临床意义
?多发性骨髓瘤
?巨球蛋白血症
?重链病：α型、γ型、μ型
?半分子病：一条重链+一条轻链
?恶性淋巴瘤
?良性M蛋白血症
二、补体检测
?补体是人或动物血清中的一组具有酶活性的糖蛋白，在机体免疫系统中发挥抗感染和免疫调节的作用，也参与免疫病理反应。㈠CH50测定
㈠CH50临床意义
?主要反应补体经典激活途径的溶血功能，其结果与C1-C9各组分的量和活性均有关
?增高见于：急性炎症、组织损伤
?降低见于：
①急、慢性肾小球肾炎
②各种自身免疫病
③感染性疾病
④作为判断肝病严重程度的指标
㈡C1q测定的临床意义
?是补体经典途径激活的始动因素
?增加：见于骨髓炎、类风关、痛风
?降低：见于SLE、肾小球肾炎、肾病综合症、重度营养不良㈢C3测定的临床意义
?补体中含量最高，是经典途径和旁路途径的关键物质，也是一种急性时相反应蛋白
?增高见于：急性炎症或传染病早期、
急性组织损伤、恶性肿瘤、
移植排异反应
㈢C3测定的临床意义
?降低见于：
⑴补体合成能力降低：慢性肝病、肝坏死
⑵补体合成原料不足：营养不良
⑶补体消耗或丢失太多：急性肾小球肾炎链球菌感染后肾炎、狼仓性肾炎、SLE活动期、化疗后
⑷先天补体缺乏
?㈣C4测定的临床意义
?增高：见于各种传染病、急性炎症（如急性风湿热、皮肌炎、关节炎等）和组织损伤等
?降低：见于自身免疫性肝炎、狼仓性肾炎
?SLE、类风关、IgA型肾病等
?在SLE，C4的降低常早于其他补体成分，且缓解时较其他成分回升迟
?㈤B因子测定的临床意义
?主要反应补体旁路途径的溶血功能
?增高：见于某些自身免疫性疾病、肾综、
?慢性肾炎、恶性肿瘤
?降低：见于肝病、急性肾小球肾炎、
?自身免疫性溶贫
?三、细胞免疫检测
?
?免疫细胞
?泛指执行机体免疫功能的各种细胞，主要包括T、B和NK细胞等与免疫应答有关的细胞。
?不同的细胞群或亚群各有其不同的表面标志和功能，可反映机体的细胞免疫状态或功能
?细胞免疫检测的应用
?自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测
?骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护
?感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测
?某些疾病的发病机制研究
?T细胞抗原标记：
CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8
?B细胞抗原标记：
CD10、CD19、CD20、CD21、CD22
?髓系（粒-单系）抗原标记：
CD11b、CD31-36、CD64、CD68、CD13、
CD14、CD15、MPO
?巨核系抗原标记：
CD41a、CD41b、CD42b、CD61
?干细胞抗原标记：CD34
?祖细胞抗原标记：CD38
?红细胞抗原标记；CD71、血型抗原A、H
?非谱系抗原标记：HLA-DR
急性白血病免疫分型
分型基础：正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现，表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特性。这些细胞表面和细胞浆内的抗原随着分化成熟过程不断发生改变，称为造血细胞分化抗原。分化抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
T淋巴细胞表面标志检测
一、T淋巴细胞表面标志检测
1.E玫瑰花结形成试验:CD2+
2.T细胞分化抗原测定：
CD3+、CD4+、CD8+
免疫荧光法和流式细胞术
临床意义：
?自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤患者治疗前后细胞免疫功能的检测
?骨髓移植和器官移植过程中免疫功能监护
?感染性疾病和变态反应性疾病的免疫功能监测
?某些疾病的发病机制研究
CD3+检测的临床意义：
?总T淋巴细胞的重要标志
?评价免疫缺陷症及白血病、淋巴瘤的分型诊断
?自身免疫性疾病如SLE、类风湿关节炎等的免疫调节治疗
?器官移植或骨髓移植时免疫监测及指导免疫抑制治疗
CD3+CD4+检测的临床意义：
?辅助、诱导T淋巴细胞的标志
?机体免疫功能检测
?白血病、淋巴瘤的分型诊断
?免疫抑制治疗效果评价
?病毒感染性疾病时常降低
CD3+CD4+检测的临床意义：
CD4+绝对计数
是HIV（+）者/AIDS诊断和分型指标之一。
HIV（+）者分型：
一期：>500×106/L;
二期：（200-499）×106/L；
三期：<200×106/L
CD3+CD8+检测的临床意义
?抑制、杀伤性T淋巴细胞的标志
?病毒感染性疾病时常增高
CD4+/CD8+减低:常见于爱滋病、恶性肿瘤进行期及复发时
CD4+/CD8+增高:在器官移植时预示可能发生
排斥反应、自身免疫病
?二、B淋巴细胞表面标志检测
?1.B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白测定：
?SmIgM、SmIgD
?免疫荧光法、流式细胞术
?2.B淋巴细胞分化抗原检测：
?CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD40
?二、B淋巴细胞表面标志检测
?临床意义：
?1.B淋巴细胞膜表面仅表达SmIgM则为未成熟B淋巴细胞，而同时表达SmIgM、SmIgD则为成熟B淋巴细胞
?2.SmIg+细胞增多：慢淋、毛细胞性白血病、巨球蛋白血症?3.SmIg+细胞减低：体液免疫缺陷如丙种免疫球蛋白缺乏症等?二、B淋巴细胞表面标志检测
?临床意义：
?CD19为全部B淋巴细胞共有的表面标志
?CD19增高见于B淋巴细胞系统的恶性肿瘤
?CD19减低见于体液免疫缺陷病
三、淋巴细胞亚群功能检测
㈠淋巴细胞转化试验：
1.形态学方法：
有丝分裂原：
T淋巴细胞---植物血凝素、
刀豆蛋白A、美洲商陆
B淋巴细胞---美洲商陆、
葡萄球菌A蛋白
三、淋巴细胞亚群功能检测
?临床意义：
?反映机体的细胞免疫功能水平，
?估计疾病的疗效和预后
㈢NK细胞的免疫检测
⒈数量检测——免疫荧光法、流式细胞术CD16+56
⒉功能的检测——
?NK细胞活性测定：酶释法、
放射性核素法、免疫荧光法
?抗体依赖性细胞介导的细胞毒（ADCC）测定：
㈢NK细胞的免疫检测
临床意义
1.NK细胞活性增高：病毒感染早期、器官移植患者
2.NK细胞活性减低：恶性肿瘤、AIDS、联合免疫缺陷病
3.抗肿瘤疗效观察和预后评价
4.免疫调节功能：释放IFN-γ、TNF-β等，增强抗感染和免疫监视能力
第三节感染免疫检测
一、血清抗链球菌溶血素“O”试验（P434）
?链球菌溶血素“O”是A群溶血性链球菌产生的溶血外毒素，可刺激机体产生特异的抗链球菌溶血素“O”（ASO）
一、血清抗链球菌溶血素“O”试验
?临床意义
1.链球菌感染1周后ASO开始升高，4-6周达高峰，以后逐渐下降，在体内可持续存在数月甚至数年
2.?增高见于：风湿性疾病、急性肾小球肾炎、扁桃体炎
3正常人血清中可存在ASO
二、伤寒和副伤寒沙门菌免疫检测
1.肥达反应（WR）：利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测患者血清中有无相应抗体的一种凝集试验。
参考值:直接凝集法
伤寒“H”＜1：160；“O”＜1：80。
副伤寒甲、乙、丙都＜1：80。
肥达反应的临床意义
?WR阳性一般出现在伤寒发病后一周，阳性率10%；第二周上升为60-70%；第四周可达90%以上。
?单份血清抗体效价“O”＞1：80及“H”＞于1：160者有诊断意义；
?若动态观察，WR持续超过参考值或较原效价升高4倍以上者更有价值。
?“O”不高，“H”升高见于预防接种后或非特异回忆反应
?“O”升高，“H”不高见于感染早期或其他沙门菌感染
2.伤寒和副伤寒沙门菌抗体IgM测定
参考值:ELISA法正常人为阴性或滴度＜1：20
临床意义：发病后一周即可出现升高，有早期诊
断价值，若其滴度＞1：20对诊断伤寒带
菌者也有意义。
3．伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定
参考值：胶乳凝集法为阴性
临床意义：阳性对确诊沙门菌感染更有重要意义
三、梅毒螺旋体抗体检测（P438）
?初筛试验（非特异性反应素）：
快速血浆反应素试验（RPR）
不加热血清反应素试验（USR）
美国性病研究实验室实验（VDRL）
?确诊试验（特异性抗体）：
梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）
荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）
?临床意义：
https://www.360docs.net/doc/f45557065.html,R、RPR法：感染梅毒螺旋体后1-2周检出率为76％，二期梅毒为95-100%，晚期梅毒为70-95%，隐性感染期为70-80%，SLE、疟疾、结核、瘤型麻风病等可出现阳性反应。可作定量，用于疗效观察。
2.筛选试验阳性的情况下必须做确认试验，阳性可肯定梅毒的诊断。确诊试验灵敏度高，特异性强，不受药物治疗的影响，特异性抗体可持续数年甚至终身。不能用于疗效观察。
四、TORCH试验
?TO：刚地弓型虫
?R：风疹病毒
?C：巨细胞病毒
?H：单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型
?这组病毒常引起围产期感染，导致流产、早产、死胎和各种异常，目前已作为妇产科产前常规检查项目
五、C反应蛋白（CRP）（P439）
?能与肺炎链球菌C多糖发生反应的急性时相反应蛋白
?细菌感染，尤其G-杆菌感染，CRP明显增高；病毒感染不增高或仅轻度增高
?风湿热的疗效观察：急性期或活动期CRP增高可达200mg/L
静止期恢复正常。
三、C反应蛋白（CRP）（P439）
?判断组织损伤的敏感指标：器质性损伤CRP增高，功能性损伤CRP正常。
?器官移植后疗效观察指标：排异反应时CRP增高
?超敏CRP对急性冠脉综合症的诊断和危险性评估有意义
第四节自身免疫检测
?自身免疫耐受：在正常情况下，机体的免疫系统对自身抗原表现为不应答
?自身免疫：当某些原因消弱或破坏正常的自身耐受时，免疫系统即会对自身组织或成分产生免疫应答
?自身免疫病：
指由自身免疫应答而产生的疾病
?自身抗体：
指针对自身组织或成分产生的抗体
㈠类风湿因子（RF）测定
?类风湿因子是由变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性疾病患者的血清或关节液内。它有IgM型，也有IgG、IgA、IgD和IgE型。
?检测方法：胶乳凝集法、免疫比浊法、
RIA、ELISA法
㈠类风湿因子（RF）测定
?临床意义
1.类风关（RA）时，阳性率可达79.6%，高滴度RF支持对早期RA的诊断，RF滴度与临床表现正相关
2.SLE、多发性硬化、干燥综合征时可见阳性
3.部分老年人可见RF阳性
㈡抗核抗体检测
?概念：抗核抗体（ANA）指抗各种核成分[脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、和可提取的核抗原（ENA）等]自身抗体的总称。ANA的性质主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD，无器官和种族的特异性，ANA主要存在于血清中，也可以存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。
?抗核抗体（ANA）检测可作为自身免疫病的筛选试验
㈡抗核抗体检测
㈡抗DNA抗体检测
?方法:间接免疫荧光法、ELISA法和RIA法
?临床意义：
?抗dsDNA抗体:为SLE特征性标志抗体,
特异性95-100%,敏感度30-50%,
抗体滴度与疾病活动度相关（阳性率70-90%）
?抗ssDNA抗体:阳性见于SLE、药物性狼仓
㈢抗可提取性核抗原（ENA）
多肽抗体谱测定
??方法：免疫印迹法
㈢抗可提取性核抗原（ENA）多肽抗体谱测定
?临床意义
?抗Sm抗体：主要见于SLE
?抗nRNP抗体：主要见于混合性结缔组织病
?抗SSA、抗SSB抗体：主要见于干燥综合症
?抗Scl-70抗体：主要见于进行性系统性硬化症
?抗组蛋白抗体：主要见于药物性狼仓、SLE
三、抗组织细胞抗体检测
㈠、抗肾小球基底膜抗体（抗GBM抗体）
是抗基底膜抗体型肾小球肾炎特异性抗体，包括免疫复合物型肾小球肾炎、急进型肾小球肾炎等
㈡抗乙酰胆碱受体抗体测定（AchRA）：
是一种针对运动肌细胞上乙酰胆碱受体的自身抗体，阳性主要见于重症肌无力
㈢抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）
?ANCA是血管炎患者的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异指标
?ANCA分胞质型（cANCA）和核周型（pANCA）两型
?cANCA阳性主要见于韦格纳肉芽肿
?pANCA主要与多发性微动脉炎相关
㈣抗心磷脂抗体（ACA）
?ACA是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体
?SLE患者中枢神经系统血栓形成与阳性ACA显着相关，血清及CSF中ACA检测有助神经精神性狼仓患者的临床诊断
?高水平ACA是急性脑血管病的预后不良信号
?70%未经治疗的ACA阳性患者可发生自发性流产和宫内死胎，尤其IgM型ACA可作为自发性流产的前瞻性指标
本章要求：
1.能够概述免疫球蛋白、补体（C3、C4、C1q、B因子）、分化抗原（CD3、CD4、CD8）的概念，检测方法及临床意义。
2.了解T细胞、B细胞数量和功能的检测方法及NK细胞活性检测的临床意义。
3.掌握自身免疫的概念（包括自身免疫耐受、自身免疫病的概念），掌握类风湿因子、抗核抗体的概念及检测的临床意义。
4.掌握ASO、肥达氏反应检测的临床意义。
5.掌握TORCH实验包含的检测项目及临床意义。
6.掌握梅毒检测的方法及临床意义。
7.掌握C-反应蛋白检测的临床意义。
9.了解抗ENA、抗dsDNA、抗GBM、ANCA、ACA检测的临床意义。