3-甲基-4-硝基酚对雄性小鼠生殖毒性的研究
玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用_董双_何剑斌_张燚_龙淼
董双，何剑斌，张燚，等．玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用．［J］．畜牧与兽医，2016，48（6）：25－29 Dong S，He J B，Long M，et al．Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice［J］．Animal Husbandry＆Veterinary Medicine，2016，48（6）：25－29 玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用 董双，何剑斌*，张燚，龙淼* （沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866） 摘要：为探讨玉米赤霉烯酮（ZEA）对雄性生殖系统的毒性作用，本试验选取清洁级昆明系雄性小鼠93只，随机分成5组：25mg/kg、50mg/ kg、75mg/kg ZEA处理组、溶剂对照组（DMSO）、空白对照组（生理盐水），进行腹腔注射染毒，每天1次，连续5d，于末次染毒后第2天摘眼球采血并脱颈处死动物，分离睾丸和附睾，测定脏器系数、精子密度和活力，睾丸酶的活力水平以及血清睾酮和雌激素的浓度。结果显示，与对照组相比，玉米赤霉烯酮显著地降低小鼠的体重和精液品质，睾丸乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）的活力随着染毒剂量的增加显著升高（P＜0.01，P＜0.05），血清睾酮和雌激素浓度随染毒剂量的增加显著下降（P＜0.01，P＜0.05）。该结果提示，玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统具有严重的损伤作用，影响生精功能。 关键词：玉米赤霉烯酮；睾丸；附睾；精液品质 中图分类号：S856.9文献标志码：A文章编号：0529－5130（2016）06－0025－05 Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice DONG Shuang，HE Jian－bin，LONG Miao，ZHANG Yi （College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shenyang Agricultural University，Shenyang110866，China） Abstract：To examine toxic effects of zearalenone（ZEA）on male reproductive system，93clean grade adult male Kunming mice were ran-domly divided into5groups and exposed to intraperitoneal injection of ZEA at25，50and75mg/kg body weight，DMSO and normal saline solution，respectively for5days．The mice were sacrified at the6th day after eyeball blood sampling．The testis and epididymis viscera inde-xes，semen quality，testis enzyme activity and serum concentrations of testosterone and estrogen were assessed．The results showed that com-pared with the control group，ZEA significantly decreased the body weight，semen quality，increased the testis enzyme activity and decreased serum concentrations of testosterone and estrogen（P＜0.01，P＜0.05）．In conclusion，ZEA can hurt male reproductive system and affect the spermatogenic function． Key words：zearalenone；testis；epididymis；semen quality；testosterone 玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）是由镰刀菌属的霉菌，如黄色镰孢霉、禾谷镰孢霉、轮枝镰孢霉产生的类雌激素作用的次级代谢产物，是一种大环β－二羟基苯甲酸内酯类［1－2］。这种霉菌毒素存在于各类农作物中，如收割前后的小麦、大麦、玉米、高粱等，以及农产品加工阶段，进而污染世界范围内的人类食物和动物饲料，给全球带来巨大的经济损失。ZEA不仅具有肝肾毒性、遗传毒性、免疫毒性，还 收稿日期：2015－06－30 基金项目：中国博士后科研基金项目（2014M551125）；国家自然科学基金项目（31201961、31302152） 作者简介：董双（1989－），女，硕士生，研究方向：临床兽医学*通信作者：何剑斌（1969－），男，硕士生导师，教授，研究方向：临床兽医学，E－mail：hejianbin69@https://www.360docs.net/doc/f64997233.html,；龙淼（1978－），男，讲师，博士，研究方向：动物营养代谢病及中毒病，E－mail：longjlau@https://www.360docs.net/doc/f64997233.html, 由于其能够与17β－雌二醇竞争性结合雌激素受体（EＲ），具有雌激素效应，干扰机体的内分泌系统，产生生殖毒性，进而影响动物的正常生理活动，引起靶器官、靶组织甚至机体的多个系统发生病变［3－5］，对人类和动物的健康危害极大。 ZEA作为一种外源性内分泌干扰物，其生殖毒性是当今科研领域的一大研究热点。有研究显示，ZEA对机体的生殖系统损害极大［6］。研究表明玉米赤霉烯酮呈剂量依赖性方式诱导猪卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡和细胞坏死，从而减少细胞的增殖［7］，还能够引起断奶仔猪发生氧化损伤和炎症反应［8］，并且玉米赤霉烯酮还使断奶雌鼠的初情期提前，并干扰雌鼠的早期妊娠［9］。ZEA不仅影响雌性动物的繁殖机能，还损害雄性动物的生殖系统，能够引起大鼠的睾丸萎缩，并诱导生精细胞发生凋亡［10］，睾丸间质
海尔福对铅致雄性小鼠生殖腺毒性的拮抗作用
海尔福对铅致雄性小鼠生殖腺毒性的拮 抗作用 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：覃淑云，秦小云，张树球，方晓燕 【摘要】目的探讨海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性的拮抗作用。方法取健康昆明雄性小白鼠，随机分为对照组、染铅组、治疗组3个实验组，进行醋酸铅染毒亚慢性毒性实验，治疗组用海尔福进行治疗。结果醋酸铅染毒组雄性小鼠的生殖腺有不同程度的病理学改变，精子计数、直线运动精子数、活精子率下降，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率升高；海尔福治疗组小鼠的生殖腺病理学改变有不同程度的改善，精子计数、直线运动精子数、活精子率有所升高，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率有所降低。结论海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性有拮抗作用。 【关键词】海尔福；铅中毒；生殖毒性；诱变力试验；小鼠Abstract: Objective To explore Haierfu syrup in protection against lead poisoning on genital gland in male mice. Methods
Kunming male mice were randomly divided into control group, lead poisoning group and therapeutic group. Sub-chronic toxicity test was performed with lead acetate poisoning. The therapeutic group was given Haierfu syrup. Results In lead poisoning group, the pathological changes in genital glands of mice were obtained; sperm count, linear movement sperm and live sperm rate decreased; the elevated motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate were found. In Haierfu group, the pathological changes in genital glands of mice ameliated to different degree, sperm count, linear movement sperm and live sperm rate elevated, and motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate decreased. Conclusion Haierfu syrup can prevent genital glands of male mice from lead poisoning. Key words: Haierfu syrup; lead poisoning; genital toxicity; mutagenicity tests; mice 铅是一种对人体有害的重金属元素，普遍存在于自然界中。环境中的生活性铅污染也很严重，铅对健康的影响已成为相当突出的社会问题。铅对健康的影响是多方面的，铅对雄性睾丸和附睾的毒性也得到了公认，人们对铅损害生殖腺的研究较多，但对用于干预铅损害生殖腺的研究报道较少，笔者通过观察海尔福对铅致小鼠性腺毒性的
PUF蛋白在小鼠雄性生殖细胞及人肿瘤细胞增殖中的功能研究
PUF蛋白在小鼠雄性生殖细胞及人肿瘤细胞增殖中的功能研究最近研究发现,RNA结合蛋白可能在动物发育过程和细胞增殖分化过程中发挥了重要的作用,但是多数RNA结合蛋白的作用尚有待发现。 PUF(Pumilio-Fem3-binding factor)蛋白家族是真核生物RNA结合蛋白家族中高度保守的一类,它们在低等动物中主要对基因表达起负性调控的作用。PUF蛋白可以通过Pumilio的同源结构域去结合目标mRNA的3’UTR(3’Untranslated Region)上高度特异性序列,最终导致mRNA降解和翻译水平的降低。 PUF家族蛋白广泛分布于真核生物,从酵母、线虫、果蝇到小鼠和人均存在同源基因。在果蝇和线虫中它们被发现在生殖细胞发育过程起重要作用,比如原始生殖细胞的增殖和迁移,生殖干细胞的自我更新等等。人和其他哺乳动物主要存在两种PUM蛋白,即PUMILIO1(PUMI)和PUMILI02(PUM2),它们在人和其他哺乳动物中的功能还不清楚。 尤其是它们是否像在果蝇、线虫中一样参与生殖细胞的发育和干细胞的维持还尚无报道。有研究表明,Puml或者Pum2基因敲除小鼠仍然存在生育能力;但是我们课题组前期发现两个基因同时缺失会导致胚胎致死,这对研究它们在哺乳动物精子发生过程中的作用造成了极大的困难。我们实验室前期通过生殖细胞特异性Cre(Vasa-cre和Stra8-cre)工具鼠构建了 Pum基因条件性敲除小鼠,可以使其分别在特定时间点将睾丸生殖细胞中的Pum蛋白敲除。 通过对这两种条件性敲除小鼠的表型进行分析发现,它们的睾丸显著小于对照组睾丸,并且不育。与此同时,在出生后6天时,这种睾丸的重量差异就已经变得非常显著了,这说明PUM很有可能在早期生殖细胞的发育过程中起着重要的作用。为了解释Pum基因条件性双敲小鼠的不育原因,我们首先对其进行了组织学
PIWI-piRNA“机器”与雄性生殖细胞发育
收稿日期：2014-07-14 *通信作者：E-mail: mfliu@https://www.360docs.net/doc/f64997233.html, PIWI/piRNA “机器”与雄性生殖细胞发育 戴 鹏，苟兰涛，刘默芳* (中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，分子生物学国家重点实验室， 上海市分子男科学重点实验室，上海 200031) 摘要：PIWI (P-element-induced wimpy testis )蛋白在动物生殖系细胞中特异性表达，为动物生殖细胞发育分化所必需。piRNA (PIWI-interacting RNAs )是最近在动物生殖系细胞中发现的一类非编码小分子RNA ，这类小RNA 特异性地与PIWI 家族蛋白相互作用。 PIWI/piRNA “机器”通过沉默转座元件和调控编码mRNA 等方式在动物生殖细胞发育分化过程中发挥重要作用。本文围绕PIWI/piRNA “机器”的生物学功能及分子机制，对近期取得的相关研究进展进行了系统性总结。关键词：PIWI ；piRNA ；转座元件；精子发生 PIWI/piRNA machinery in spermatogenesis DAI Peng, GOU Lantao, LIU Mofang * (State Key Laboratory of Molecular Biology, Shanghai Key Laboratory of Molecular Andrology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China) Abstract: PIWI proteins are specifically expressed in animal germ cells, and have been well demonstrated to be essential for germline development and gametogenesis. Recently, PIWI-interacting RNAs (piRNAs), a novel class of germ-cell-specific small noncoding RNAs, have been found associated with PIWI proteins. PIWI/piRNA machinery silence transposable elements and regulate the expression levels of mRNAs during 刘默芳，女，博士，中国科学院生物化学与细胞生物学研究所研究员，博士生导师。2000年在中科院上海生化所获博士学位。2000年至2006年分别在美国国家健康研究院国立癌症研究所(NIH/NCI )、约翰霍浦金斯医学院从事博士后研究、研究助理工作。2006年起在中科院生化与细胞所工作。获得2013年度国家杰出青年科学基金和2006年度上海市“浦江人才计划”等支持。 刘默芳研究组从事非编码RNA 功能机制研究，主要围绕piRNA 与哺乳动物精子发生、microRNA 与人类癌症等开展较系统的探索。近期工作先后发现 小鼠piRNA 及其结合蛋白MIWI 在后期精子细胞中协同降解的调控机制(Dev Cell 2013)、小鼠粗线期piRNA 指导父本mRNA 在精子形成后期大规模降解 (Cell Res 2014)；同时还发现microRNA 在炎症相关肿瘤发生中具有极其重要的调控作用，是联系炎症-癌症的新介质因子(Cancer Res 2014；Cell Res 2014；EMBO J 2012；Cell Res 2012；Cancer Res 2010)。这些原创性研究成果揭示了小分子非编码RNA 的生理和病理功能机制, 可为男性不育症及肿瘤等疾病的诊治研究提供理论依据和相关基础。
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述 02(医)七任怡2002207221 摘要：通过对1989年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅，从环磷酰胺对生精细胞，干细胞因子，精原干细胞，精子的发生、形态，数量，以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述，和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。 关键词：环磷酰胺生殖系统毒副作用 环磷酰胺（CTX）是一种烷化剂，1958年首次人工合成，主要用于肿瘤免疫，对多种肿瘤有明显的抑制作用，对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解，释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用，不可忽视，故查阅1989年至今文献现做综述如下： 1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤 岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡(P<0．()1)，bcl2蛋白表达显著下降(P
干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的应用实验结果分析
干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的应用实验结果分析 发表时间：2017-08-18T16:33:09.853Z 来源：《心理医生》2017年18期作者：裴斯彪王丹李林彭贤东[导读] 综上所述，干姜人参半夏汤在治疗脾胃虚寒型妊娠恶阻时，可采用小剂量进行治疗，不会产生妊娠毒性。 （南充市中心医院<川北医学院第二临床学院> 四川南充 637000）【摘要】目的：分析干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的实验结果。方法：选取100只妊娠小鼠，将其随机分为4组，分别为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，所有小鼠均是在孕后第6～17天进行灌胃，第18天处死，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况及胎仔外观。结果：低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照 组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05）；四组活胎率、死胎率及吸收胎率进行两两组间对比，差异无统计学意义（P＞0.05）；观察胎仔发现高剂量组出现头盖骨变大腹部裂开等情况。结论：小剂量的干姜人参半夏汤不会对妊娠小鼠产生妊娠毒性，随着剂量增加，逐渐增加胚胎畸形的发生率。【关键词】干姜人参半夏汤；妊娠小鼠；生殖毒性【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）18-0187-02 干姜人参半夏汤是由干姜、人参、半夏组成，其中半夏有“堕胎”的说法，现代药理证实，半夏有胚胎毒性，因此在治疗妊娠患者需慎用半夏[1]。但干姜人参半夏汤在发挥降逆功效时半夏发挥了重要作用。现笔者就干姜人参半夏汤对妊娠小鼠的生殖毒性进行实验研究，以便为孕期的安全用药提供理论依据。 1.资料与方法 1.1 实验材料 小鼠：选取性成熟清洁级小鼠150只，雌性小鼠100只，雄性小鼠50只，体质量平均（24.9±2.6）g，饲料为标准饲料。干姜人参半夏汤：依据金匮要略进行配置，干姜、生哂参各14g，生姜汁10滴，半夏28g，煎煮浓缩后保存于4℃的冰箱中备用。 1.2 实验方法 饲养条件：室温25℃，湿度40～70%，饲养标准鼠料，环境干燥清洁。确定妊娠：将2只雌性小鼠和1只雄性小鼠放置于一笼中，于每日9时检查雌性小鼠阴道口，如阴道口有阴栓，则将其取出，记录为受孕“0”天，分组饲养。 给药：随机将100只妊娠小鼠分为4组，空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，均于孕后第6天（胚胎器官形成期）开始灌胃给药，至第17天（器官形成），空白对照组采用等体积蒸馏水进行灌胃，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给药量为原方剂量、3倍原方剂量、6倍原方剂量。 1.3 观察指标 所有小鼠均于妊娠第18天处死，剪开腹壁，取出子宫，称重子宫及胎，切开子宫，取出胎仔，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况（死胎、活胎及吸收胎率）及胎仔外观。妊娠小鼠体质量增加=解剖体质量-受孕第“0”天体质量-子宫及胎质量。胎仔外观检查：检查头部是否器官完整、眼睛大小、是否有突眼等异常，是否露骨或脑膜膨出等；检查四肢是否多、并、少、无趾，有无足内外翻等畸形；检查躯干有无腹裂、脊髓膨出或裂开等；检查尾部是否短、卷、无尾或尾分叉等。 1.4 统计学分析 数据录入统计学软件SPSS 18.0，将计量资料（妊娠小鼠体质量及胎鼠体质量）、计数资料（死胎、活胎及吸收胎率）分别采用（x-±s）、（%）表示，并予以t检验、χ2检验，P≤0.05，差异有统计学意义。 2.结果 2.1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量 低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05），如表1所示。表1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量（x-±s）
第1章生殖细胞发生
第一章生殖细胞发生 一、本章重点 1．精子发生 2．卵子发生 二、本章难点 1．卵子发生 三、教学内容： 第一节生殖细胞发生 生殖细胞分化配子雄配子成体 受精合子 雌配子生殖细胞 在行有性生殖的动物中，配子发生是个体发育的前奏。配子发生包括雄性生殖细胞（精子）和雌性生殖细胞（卵子）的发生，是由原始生殖细胞分化而来的。原始生殖细胞在雄性动物中分化为精原细胞，在雌性动物中分化为卵原细胞，然后分别经过精子发生和卵子发生形成成熟的精子和卵子。 一生殖质与生殖细胞分化 1.生殖质(germ plasm) ①定义:在卵子中有一类特化的细胞质决定因子,他们定位于卵质的特殊区域,并决定原始生殖细胞(PGC)的形成和发育.这类特化的卵质决定因子称生殖质,其是新一代生殖细胞的发源处，维系着种系的延续。 ②组成:生殖质是具有一定形态结构的特殊物质,由蛋白质和RNA构成 2.生殖质影响生殖细胞分化 线虫 ●线虫的生殖质叫做p颗粒 ●未受精前p颗粒随机分布于卵子中 ●受精后p颗粒向卵子后端集聚 ●经一次卵裂后， p颗粒全部分布在P1细胞中，然后再经3次卵裂，由P1、P2、P3传 递到P4细胞 ●所有的生殖细胞均源于P4细胞
爪蟾 爪蟾的生殖质位于植物极附近. 卵裂期间，生殖质通过卵黄胞质向上运动，由于分裂过程中卵质的非对称性分布，生殖质仅保留在最靠近植物极的子细胞中 在原肠形成期，这些含有生殖质的细胞定位在囊胚腔底层的内胚层 到原肠后期，他们被决定为原始生殖细胞，并从内胚层迁出，进入生殖嵴，在那里与生殖嵴一起形成性腺。 二.原生殖细胞的迁移 1.为什么要迁移? ?原始生殖细胞是生殖细胞的前身,多数动物原始生殖细胞的起源与其性腺的起源不同,并在位置上有一定的距离,一般是获得生殖质形成原生殖细胞后.才被迁移到生殖腺.然后才在性腺分化为卵子或精子
原始生殖细胞的发生、发育与EG细胞
农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13(3):382~387 *基金项目：国家自然科学基金项目(No.30200137)，国家基础研究发展(973)项目(No.G199954304-3)，国家高技术研究与发展计划(863)项目 (No.2002AA216161)和教育部重大科技项目(No.03160)资助。 华进联:男,1971年生,助理研究员。E-mail:
雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定
雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定王志茹1,2，李军2，刘晓梅1，吴红联2，朱德生2 （1.吉林大学公共卫生学院，长春130021；2. 北京大学实验动物中心，北京100871） 【摘要】目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠，为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配，产生子代动物，利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术，分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组；活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达；睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。 【关键词】睾丸；特异性；基因重组；GFP Production and phenotype identification of specific expressed green fluorescent protein in male mice germ cells WANG Zhi-ru1,2，LI Jun2，LIU Xiao-mei1，WU Hong-lian2，ZHU De-sheng2 (1.School of public health，Jilin University，Changchun 130021，China；2. Peking University Laboratory animal centre，Beijing 100871，China) 【Abstract】Objective The aim of this study is production of organ specific animal model for studying reproductive toxicity in mice. Methods F1 generation was gotten by mating the Ddx4-cre transgenic male mice with the Rosa26mT/mG transgenic female mice. F1 offspring and its parents phenotype was screened by molecular biological, histopathological and in vivo imaging technology. Results At molecular level, specific DNA fragment was only found in testis of F1 offspring ; At the organ level, the expression of green fluorescent protein could only be observed in testis of F1 offspring; Testicular frozen sections and sperm fluorescence observation showed that green fluorescent protein were mainly expressed in the germ cell lineage such as secondary spermatocyte and spermatocyte and spermatozoon. Conclusions The production of the mice with specific germ cell expressed green fluorescent protein by Cre/loxP recombination system were built successfully. 【Key words】Testis;Specificity; Gene recombination;Green fluorescent protein 生殖系统的改变是造成不孕不育的重要原因，如何简易快速的检 [作者简介]王志茹（1988-）女，在读硕士研究生，研究方向：纳米毒理学，Email：843872569@https://www.360docs.net/doc/f64997233.html, [通讯作者]朱德生( 1960-) 男，高级工程师，研究方向：转基因动物，Email：deshengz@https://www.360docs.net/doc/f64997233.html,
生殖毒性试验流程及意义
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义 1.概述 生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III段）。 生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示： 图1. 动物生命周期划分 A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。 B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。 C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。 D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。 E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。 F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。 各段试验研究阶段如下： 生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B 胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D 围产期毒性试验（III段）：C-F 1一般试验设计简介 1.1受试物 生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。 1.2实验动物 首选啮齿类动物为大鼠。在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。 1.3给药 1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
生殖毒性及其评定
第二节生殖毒性及其评定 一、生殖毒性表现 外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。 二、生殖毒性作用的评定 外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。 （一）试验方法原则 生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。 一般设三个剂量组，另设对照组。最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。 最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。 剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。最低剂量可相当于最高剂量的1/30。如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。
苯、甲苯、二甲苯和甲醛对雄性小鼠生殖系统的联合毒性
苯、甲苯、二甲苯和甲醛对雄性小鼠生殖系统的联合毒性 前言 近年来由于广泛的室内装修，含有苯系物和甲醛等有害物质的装修材料、建筑材料、家具的广泛使用，使得众多非职业人群处于低浓度苯系物、甲醛长期联合暴露状态。[1]流行病学调查表明居室装潢与近年来的白血病高发相关。[2] 故苯系物和甲醛联合暴露的健康相应应引起广泛的关注，初步的研究提示其对造血系统、生殖细胞具有一定的协同损伤作用[3-4]，但其联合毒性作用尚需系统的论证。 这里的苯系物主要是指苯、甲苯和二甲苯。苯、甲苯和二甲苯都是有机溶剂，在工业上应用广泛。在塑料、橡胶、油漆等行业中人们经常性接触。三者往往同时存在与环境中，因此接触混苯的人比较多。对苯、甲苯和二甲苯的单个研究已有报道，有关苯的致癌、致突变、致畸以被列入50多种化学致癌物之间。对于甲苯、二甲苯的毒性作用也被越来越多的研究报道[5]。 我国的《工作场所有害因素职业接触限值》（GBZ2-2002）规定了工作场所空气中苯的短时间接触容许浓度为10mg/m3；《室内空气质量标准》（GB、T18883-2002）中规定苯的室内最高容许浓度为0.11mg/m3。而目前的很多调查结果显示空气中苯的浓度超标问题仍然普遍存在于一些脂类加工、制鞋以及石油化工企业以及装修的居室。苯暴露可引起动物动情周期，怀孕动物的流产发生率增加以及产生明显的母体毒性[6]。Mickiney调查发现小儿白血病与其父亲在母亲妊娠前接触苯显著相关，[7]推测苯可能引起人类生殖系统受损，导致下一代先天性缺陷，如先天性心脏病、先天性白血病、智力低下等, 严重的还可致畸胎、不孕等。 Luoping Zhang[8]等研究发现，苯接触者的髓
双酚A致雄性小鼠生殖毒性的研究
双酚A致雄性小鼠生殖毒性的研究 发表时间：2016-04-12T11:49:43.363Z 来源：《系统医学》2016年第2期作者：汤婷苏望宁王婷郭迅依范朝彪曾灿[导读] 长沙医学院双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。 长沙医学院湖南长沙 410219 【摘要】目的：探讨不同剂量双酚A(bisphend A，BPA)对雄性小鼠的生殖毒性的影响。方法：选取健康雄性小鼠，采用灌胃染毒，染毒4周后颈椎脱臼处死，观察精子形态，精子畸形率，精子活度，睾丸切片。结果：双酚A实验组，其中附睾脏器系数，精子畸形率，精子活度指标随着剂量的升高而呈正相关，具有一定的对比性。HE染色得出结果显示双酚A实验组小鼠附睾有损伤，生精小管出现坏死。结论：一定剂量的双酚A对雄性小鼠精子有生殖毒性。 【关键词】BPA；生殖毒性；雄性小鼠 【中图分类号】R114【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-2-067-02 双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。日常生活中人们可以通过饮食摄入、灰尘吸入和皮肤接触BPA[1-2]。在人的血液、尿液、胎盘、乳汁、羊水及其他体液等组织中能检测到BPA[3]。BPA是一种环境内分泌干扰物[4]，能够模拟雌激素的作用，与雌激素受体结合，干扰体内天然激素的正常活动，即使是极低剂量也能对生物体的生殖、神经、免疫等功能产生影响[5-6]。本实验旨在通过研究BPA对雄性小鼠的生殖毒性，试分析BPA致雄性小鼠生殖毒性的量-效关系，探讨BPA致雄性小鼠生殖毒性可能的作用机制。 1 材料与方法 1.1 仪器与设备 BPA，分析纯，中国上海化工试剂公司，生产编号B108652； 玉米油，药用级，中国上海化工试剂公司，生产编号C116025； 显微镜(Unican)HV2818，生产编号30108453； 电子分析天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司）。 1.2 实验动物 选用湖南省疾控实验动物中心提供的普通级封闭群，KM群雄性小鼠，体重18g到22g，随机分成对照组，BPA低剂量组、BPA高剂量组。分别记为C组，B低剂量组、B高剂量组，每组3只动物，对照组采用玉米油做空白对照，BAF低组染毒剂量为50mg/kg BW, BAF高组剂量为200mg/kg BW。 1.3 实验方法 1.3.1形态学观察计算精子活动率、精子畸形率。 精子活动率：采用伊红染色法，将0.5g伊红Y染料溶于100mL等渗盐水中配成染色液。计数100条精子，计数的精子所占比例即为精子活动率。 精子活动率=活精子数/100 精子畸形率：取一侧附睾置于5 mL生理盐水中，剪碎，37 ℃孵育 15-20 min 后，制得精子悬液。每只动物检查1000 只精子，计算精子畸形率。 畸形率=畸形精子数/1000 1.3.2脏器系数迅速取出实验小鼠睾丸和附睾, 去除周围的脂肪组织和结缔组织，准确称量小鼠双侧睾丸和附睾的重量。脏器系数(%)=脏器体重(g)/小鼠体重(g)×100% 1.3.3形态学观察常规 HE 染色，石蜡切片，光学显微镜观察。 以上睾丸病理学染色、切片、拍照和读片将在长沙医学院病理学教研室老师指导下完成。 1.4 统计方法 所有实验数据均应用SPSS18.0统计软件录入分析，实验组和对照组数据采用方差分析和LSD法进行比较。 2 结果 2.1 一般情况 染毒后，低剂量小组实验小鼠体重有上升，高剂量组小鼠出现活动量减少，精神萎靡，进食量也有不同程度减少，停止染毒后逐渐好转；整个实验过程中高剂量组小鼠死亡 1 只。 2.2 BPA染毒对成年雄性小鼠精子畸形率，精子活度的影响 BPA染毒各组小鼠的精子活动率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，精子畸形率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，附睾的脏器系数与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，结果见下表。 表BAF染毒对精子活动率, 精子畸形率,睾丸附睾脏器系数的影响(±s)