分子生物学作业-3

1.请说明基因治疗中的关键技术问题是什么？

基因治疗的主要步骤包括目的基因的克隆、基因转移、靶细胞的选择和临床试验观察等，其中基因转移是基因治疗的关键步骤。

基因的转运：外源基因只有整合到染色体中，变为其中一部分才有可能得到持续的高表达。采用什么样的手段将目的基因送到体内，穿过细胞膜，进入细胞核与染色体整合，这是基因治疗成败的关键。无论是体内还是体外，基因转移都需要一种安全、无毒的工具来携带外源基因进入细胞。

另外，还要选择有治疗作用的基因和合适的载体，导入到恰当的位点，不但要确保外源基因能够表达，而且要十分安全，不激活体内的原癌基因。

2.目前基因治疗中常用的载体有哪几种？各有什么特点？

常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。

病毒载体有逆转录病毒、腺病毒、疱疹病毒、腺相关病毒、痘苗病毒载体、HIV病毒载体、杆状病毒载体等。

⑴逆转录病毒载体的特点：①结构和感染过程与普通逆转录病毒相似；

②可使靶细胞变成稳定表达目的基因的转化细胞；③感染靶细胞后不扩散；④假病毒感染靶细胞的效率非常高；⑤不感染非增殖细胞。

⑵腺病毒载体的特点：①宿主范围广；②腺病毒蛋白表达不以宿主增殖为必要条件；③可获得高病毒效价；④重组体非常稳定；⑤不会引起肿瘤；⑥有较高的安全性；⑦无包膜，不易被补体灭活，可直接在体内应用；⑧不整合入染色体。

⑶单纯疱疹病毒载体的特点：①滴度高；②容量大；③增殖细胞和非增殖细胞均可感染；

④不整合，但可长期存在并可稳定表达。

⑷艾滋病病毒(HIV)载体：优点是高效感染宿主细胞，并且其感染范围广；能逃避人体免疫系统的监视，从而防止免疫排斥。缺点是引起抑癌基因的受抑和原癌基因的激活，以及对细胞的毒性和产生变种病毒。

非病毒载体有脂质体、分子耦联载体、裸露DNA、染色体载体、多聚物。

⑴脂质体：脂质体载体是用人造双层磷脂质，包装DNA 后形成的脂质体-DNA复合物。脂质体载体无毒无抗原性，目的基因与脂质体的包裹使其可以免受核酸酶降解，容量大，可单独或联合其他载体使用，并可通过静脉注射使目的基因进入特定部位。

缺点：表达时间短，不能通过细胞膜屏障。

⑵分子耦联载体：分子耦联载体由DNA、DNA结合因子和配体三部分组

成。配体与特异的受体结合，经受体介导的细胞内吞途径，将目的基因转移至细胞内。

缺点：DNA易被降解，降低了基因转移效率；靶向性不高。