生物学基本技术实验
质粒构建＆重组蛋白表达、纯化和鉴定
1、质粒和菌株
pET22b-TATm-Survivin(T34A)；大肠杆菌克隆菌株DH5a；表达菌株BL21(DE3)
2、主要试剂和培养基
氨苄青霉素（Amp)母液（50mg/ml）配制：用电子天平准确称量氨苄青霉素粉剂0.5g，加入10ml超纯水定容，充分溶解，将溶液用0.22μm 的滤膜过滤除菌后，每1ml分装1支，-20℃保存，备用。培养大肠杆菌时，每1ml LB培养基中加入1μl 氨苄青霉素溶液(1：1000)。终浓度为50μg/ml。
异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)母液（1M）配制：用电子天平准确称量2.38 g IPTG 溶解于10ml超纯水中，配制成238mg/ml的水溶液，用0.22μm滤膜过滤除菌后，分装1ml/支，-20℃保存，备用。诱导时每1ml LB培养基中加入1μl IPTG母液。终浓度为1mmol。
LB培养基的配制：根据《分子克隆实验指导》配制每升培养基中加入950ml去离子水，10g蛋白胨，10g NaCl，5g酵母膏，摇动容器直至溶质溶解。用5mol/L NaOH调节pH至7.0，用去离子水定容至1L。随后121℃高压灭菌20min。
LB平板的制备：在LB溶液培养基中加入1.5%的琼脂粉，高温灭菌后，降温至50-60℃后，倒平板，每个平板约倒入25ml 培养基，封口后- 4℃保存，备用。
LB抗性平板的配制：与LB平板的制备类似，不过在倒平板前加入氨苄青霉素，1ml 培养基加入1μl氨苄母液。- 4℃保存，备用。
DNA电泳缓冲液(TAE)配制（50×储存液）：准确称量Tris碱粉剂242g，EDTA粉剂37.2g，放入1L的烧杯中，向烧杯中加入约800ml的双蒸水，充分搅拌，必要时可加热以加速溶解，再加入57.1ml的冰乙酸充分溶解粉剂，充分溶解后，加入双蒸水定容至1L，室温保存，备用。使用时，稀释50倍。
1%琼脂糖电泳胶配制：称取0.4mg琼脂糖，蒸馏水定容至40ml，微波炉加热至琼脂糖完全溶解，温度降至50℃左右，加入400μl的100×gelred 染色剂，混匀后，倒入电泳槽，冷却凝固。
PBS缓冲液：8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4，1.44g Na2HPO4，定容至1L，用NaOH 溶液或浓HCl溶液调pH至8.2-8.3，倒入HT瓶中，盖上盖子（但不拧紧），在121℃下灭菌20min，拧紧封口，备用。
自剪切缓冲液( Cleaving buffer )：1L 未调pH的PBS缓冲液中加入40mM Tris （0.484g），2mM EDTA（0.584g）调节pH至6.2，倒入HT瓶中，盖上盖子（但不拧紧），在121℃下灭菌20min，拧紧封口，备用。
50%（v/v）甘油：用量筒准确倒取50ml 纯甘油，加入超纯水定容至100ml。倒入HT 瓶中，盖上盖子（但不拧紧），在121℃下灭菌20min，拧紧封口，备用。
3、实验方法
3.1 大肠杆菌感受态BL21/DH5a的制备
（1）取-80℃冷冻柜保存的大肠杆菌空菌BL21/DH5a，用接种环蘸下保菌，再无抗的LB平板上划线，37℃，倒置，过夜培养；
（2）第二日，挑取平板上的单菌落接种于5ml 不加抗生素的LB培养基试管中，37℃，转速200rmp，过夜培养；
（3）按1:100比例吸取1ml菌液接种于100ml无抗LB培养基摇瓶中，37℃，转速200rmp，培养2.5h左右，测OD600达到0.4-0.6（细菌生长对数期）；
（4）将离心的菌体转入50ml预先预冷的离心管中，冰浴30min，5000rmp，4℃离心10min；
（5）弃去上清，加入20ml预先预冷的0.1M CaCl2溶液，先加5ml，吸打混匀，再加15ml，混匀，5000rmp，4℃离心10min；
（6）弃去上清，将预冷的50%甘油和0.1M CaCl2溶液以400μl和600μl加入1m离心管中，混合均匀，使甘油浓度最终为20%，加入离心管中，吹打混匀，分装于1.5 ml EP管中，一支分装100μl（置于冰上），标注后-80℃保存，备用。
3.2 质粒的抽提
（1）从筛选的平板上挑取单菌至含抗生素的培养基中，37℃，200rmp，过夜培养；
（2）第二日，取3ml 过夜培养菌液，转速3000rmp，室温，离心15min，倒掉培养基并将离心管倒置在吸水纸上以吸取剩余的培养基；
（3）取100μl Solution I充分重悬菌体，吹打，直至菌体打匀；
（4）加入150μl Solution II，立即上下轻轻颠倒离心管5-6次，使菌体充分裂解后，置于冰浴上2min；
（5）加入150μl Solution III，立即上下轻轻颠倒离心管7-8次，直至沉淀不再增加后，室温放5min后，1200rmp离心10min；
（6）在新的吸附柱中加入420μl 结合缓冲液，然后小心点的将离心后的上清吸入到吸附管中，切忌不可吸到沉淀，室温，1200rmp离心30s；
（7）离心后，向吸附柱中加入700μl洗涤液，1200rmp离心30s，倒掉废液；
（8）重复7步骤；
（9）倒掉废液后，空管离心2min，以完全除去漂洗液；
（10）将吸附管放入新的离心管中，加入预热的40-60μl洗脱缓冲液，室温放置2min，1200rmp，室温，离心2min洗脱DNA，收集到的液体即为抽提的DNA。
3.3 质粒的转化
（1）取80μl-100μl感受态细胞置于冰盒中，吸取1μl预冷的质粒（10ul酶连产物），混匀；
（2）离心管0℃冰浴30min；
（3）将离心管放入42℃恒温水浴锅中热冲击45s后，迅速将离心管放回冰盒中冰浴5min；
（4）向离心管中加入800μl无抗LB培养基（预冷的效果更好），37℃，200rmp，振荡培养1h；
（5）(若为酶连产物转化）离心管6000rmp离心30s，吸取200μl上清，弃去剩余上清液，用200μl上清吹打混匀菌体沉淀；（转化质粒此步可省略，直接吸取200ul涂布就可。）（6）将菌液涂布于含抗生素的LB平板上，用灭菌的玻璃珠涂布，待菌液被琼脂吸收后，37℃，倒置，过夜培养后即出现转化菌落。
3.4菌株的复苏
（1）将1.5 ml EP管中菌液8000rmp离心1min，使菌体完全沉降；
（2）用200μl LB培养基将沉淀重悬，将全部菌液加5ml 无抗的LB培养基，培养10h；
（3）吸取10μl 菌液加入5ml 含有相应抗生素的LB培养基中，培养10h；
（4）甘油保菌，划线，完成复苏。
3.5 DNA胶回收
（1）将DNA琼脂糖放在紫外灯下观察，小心的用刀切下目的条带，放入到小离心管中，称量；
（2）每100mg琼脂糖胶中加入400μl的Solution B，放入预热的55℃左右的水浴锅中，热冲击，充分溶解凝胶；
（3）凝胶完全溶解后，将溶解液放入到2ml的genclean离心管中，室温放置2min，12000rmp离心1min；
（4）离心后，弃去溶液，加入500μl washing solution，12000rmp，离心1min；
（5）重复（3）步骤；
（6）将离心柱放入离心管中，空管离心1min；
（7）将离心柱放入离心管中，加入50μl elution buffer，37℃放置3min后，12000rmp，离心2min，收获的液体即为回收的DNA。
3.6 重组蛋白在大肠杆菌中的表达
（1）从-80℃中取出保藏的菌，取50μl菌液置于5ml的含氨苄青霉素（1μl amp/1ml LB 培养基）的LB培养基中，37℃，200rmp，过夜培养；
（2）取过夜培养的菌液1ml于100ml含氨苄青霉素（100μl）的LB培养基中，37℃，200rmp；
（3）培养至OD600=0.3左右，取1ml菌液到100ml LB培养基中，37℃，200rmp，培养3.5h左右，（取1ml菌液用于SDS-PAGE）至OD600=0.6左右，加IPTG（100μl）（终浓度为1mmol）后转入20℃低温培养24h；
（4）24h后，收集菌液（1ml），用SDS-PAGE电泳鉴定产物表达情况，证明目的蛋白成功表达。（经SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白是以可溶性的形式表达，蛋白EI-TATm-Survivin(T34A)大小为85KDa）
3.7 细胞破碎
（1）收集菌液，分装入两个离心管中，12000rmp，4℃离心10min，弃去上清液，收集沉淀；
（2）将两个离心管中的沉淀分别加入15ml PBS缓冲液重悬，12000rmp，4℃离心10min，弃去上清，收集沉淀；
（3）将收集沉淀置于离心管中，加入15ml PBS缓冲液重悬；
（4）用高压匀浆机进行细胞破碎（破碎2-3次）；
（5）将破碎液置于离心管中，12000rmp，4℃离心10min，取上清液。（在上清液和沉淀（PBS重悬）中分别取样1ml，用于SDS-PAGE）
3.8 ITC循环分离纯化重组蛋白
（1）在上清液中加入(NH4)2SO4至终浓度为0.4M后（15ml (NH4)2SO4/100ml上清液），置于37℃水浴锅中热冲击10min；
（2）10min后从水浴中取出，37℃，12000rmp，离心15min，弃去上清（取样1ml，用
于SDS-PAGE），收集沉淀（EI-TATm-Survivin(T34A)）；
（3）沉淀用预冷的自剪切缓冲液( Cleaving buffer )重悬溶解后，4℃，12000rmp，离心15min，弃去不溶沉淀（用PBS重悬取样1ml，用于SDS-PAGE）；
（4）离心后，将Cleaving buffer置于22℃水浴中进行标签自切割反应16h；
（5）自切割反应完成后，加入(NH4)2SO4中至终浓度为0.4M，再将Cleaving buffer体系置于37℃水浴锅中热冲击10min；
（6）热相变完成后，37℃，12000rmp，离心15min，收集上清即为目的蛋白TA Tm-Survivin(T34A)，沉淀为切割下的EI标签（在上清液和沉淀（PBS重悬）中分别取样1ml，用于SDS-PAGE）；
（7）SDS-PAGE电泳鉴定纯度，从（5）开始继续下一轮的ITC循环。
3.9 SDS-PAGE蛋白电泳
移液器取蛋白样品10μl，5μl 5×上样缓冲液（loading buffer），10μl双蒸水煮沸5min，3000rmp离心1min后，配制好的蛋白胶中每孔加样量为20μl，电压80V跑胶，待样品跑完浓缩胶后，将电压调至120V，直至样品跑出分离胶为止。小心地将胶从胶片玻璃板上剥离下来，加入蛋白染色液，微波炉中加热30s，置于漩涡振荡器上震荡染色2h。染色完毕后，倒掉染色液，用清水冲洗两遍后，加入蛋白脱色液，于漩涡振荡器上过夜脱色。脱色完成后，电泳成像仪上观察。
固定两块玻璃板，加入超纯水，静置10min，检查是否会渗漏；先制12% 分离胶（下层），依据下表依次加入（其中TEMED最后加入），用无水乙醇进行液封（30min）；再制备5% 浓缩胶（上层），依据下表依次加入（其中TEMED最后加入），插入梳子，静置30min。
分离胶（15%）分离胶（12%）浓缩胶（5%）浓缩胶（10%）超纯水（ml） 2.3 1.15 3.3 1.65 3.15 1.575 4.0 2 30%丙烯酰胺（ml） 5.0 2.5 4.0 2 0.75 0.375 3.3 1.65 Tris-HCl缓冲液（ml） 2.5(pH8.8) 1.25 2.5(pH8.8) 1.25 0.57(pH6.8) 0.285 2.5(pH6.8) 1.25 10% SDS（μl）100 50 100 50 45 22.5 100 50 10% APS（μl）100 50 100 50 45 22.5 100 50 TEMED（μl） 5 2.5 4 2 4.5 2.25 4 2 APS：过硫酸铵
TEMED：N,N,N',N'-四甲基乙二胺，可以催化过硫酸铵从而产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。有腐蚀性，具强神经毒性，易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
SDS-PAGE电泳流程：
(1) 将玻璃板用蒸馏水洗净晾干，准备2个干净的50ml烧杯。
(2) 把玻璃板在灌胶支架上固定好。
(3) 按比例配好15%分离胶，用移液枪快速加入，大约5cm左右，之后加少许20%乙醇，静置30min。凝胶配制过程要迅速，催化剂TEMED要在注胶前再加入，否则凝结无法注胶。注胶过程最好一次性完成，避免产生气泡。
(4) 倒出20%乙醇并用滤纸把剩余的20%乙醇吸干，按比例配好5%浓缩胶，连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm处，迅速插入样梳，静置30min。
(5) 拔出样梳后，在上槽内加入1×蛋白缓冲液（用5×蛋白缓冲液稀释），没过锯齿。
(6) 样品准备：取蛋白样品30μl与4×上样缓冲液10μl（最终稀释成1×上样缓冲液loading buffer）（当需要进行非还原电泳时用非还原的上样缓冲液）混合，煮沸10min，离
心。
(7) 上样根据蛋白浓度可选择5-30μl，蛋白样品上样20μl，蛋白marker上样10μl。
(8) 接通电源，恒压80V跑30min。
(9) 接着换电压到120V，待溴酚蓝跑出胶后（40-50min左右）关闭电源。
(10) 凝胶板剥离与染色：电泳结束后，撬开玻璃板，将凝胶板做好标记后放在大培养皿内，加入染色液，染色30h左右。
(11) 脱色：染色后的凝胶板用水漂洗数次，再加入脱色液或水置于微波炉中高火加热15min进行快速脱色。
(12) 脱色后，将凝胶板用水漂洗数次，置于生物电泳图像分析系统中进行蛋白电泳图像拍摄。
1生物学实验常用技术
生物学实验常用技术一、分子方面 1、基因工程 1)PCR (Polymerase Chain Reaction) (二楼PCR仪器全部会用) 2)RT-PCR;Q-PCR 3)琼脂糖凝胶电泳;胶回收 4)酶切/链接 5)转化 6)固体/液体LB培养基配制 (高压蒸汽灭菌锅使用方法) 7)质粒大/小抽原理及步骤 (手提、溶液I、II、III作用) 8)基因组DNA抽提 9)RNA提取; 2、蛋白质工程 1)蛋白收集 (蛋白裂解液+PMSF; 1×Loading 裂解(推荐)) 2)SDS-PAGE(电泳胶的配制) 2)考马斯亮蓝染色,银染 3)Western blot 4)蛋白定量常用的方法及原理, 以及熟练操作Bradford法蛋 白定量 (TRIZOL法原理、注意事项及步骤) 二、细胞方面 1)细胞培养、传代 2)细胞冻存与复苏 冻存液配制: (1)DMSO:血清=1:9(推荐)
(2)DMSO:培养基:血清=1:3:6 均可 DMSO为细胞专用型;现用现配,效果最好;冻存时细胞在-80℃中不要超过一周,最好在24-48h内放入液氮罐中保存。 3)细胞培养基配制(过滤除菌)、胰酶配制(过滤除菌),PBS配制(灭菌);(不同培养基的区别;谷氨酰胺(提供氮源),2周补充一次) 4)转染 5)MTT原理及操作(检测细胞存活率或死亡率) 6)碱性磷酸酶实验(ALP,检测细胞分化) (5、6 需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用) 7)Hoechst染色 8)结晶紫染色(不推荐) 9)苏木精/伊红染色 (9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮) 10)荧光显微镜的使用 11)激光共聚焦显微镜样品制备(细胞固定,染色,洗脱) (7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据) 12)流式细胞仪样品制备(包括:转染效率与细胞凋亡染色标记)以及仪器操作(需学会FlowJo软件分析流式结果) 三、动物实验 1)小鼠的定制: 常见的小鼠: ICR小鼠(正常),9元/只
细胞生物学未来情况
浅谈细胞生物学未来情况 11生科111003015 康明辉 摘要：著名生物学家威尔逊早在20世纪20年代就提出“一切生物学关键问题必须在细胞中找寻”。细胞是一切生命活动结构与功能的基本单位，细胞生物学是研究细胞生命活动基本规律的科学。细胞生物学的研究范围广泛，其核心可归结为遗传和发育问题。遗传是在发育中实现的，而发育又要以遗传为基础。当前细胞生物学的主要发展趋势是用分子生物学及物理、化学方法，深入研究真核细胞基因组的结构及其表达的调节和控制，以期从根本上揭示遗传和发育的关系，以及细胞衰老、死亡和癌变的原因等基本生物问题，并为把遗传工程技术应用到高等生物，改变其遗传性提供理论依据。20世纪90年代以来，分子生物学取得很大进展，这些进展促进了细胞结构和功能调控在分子水平上的研究 关键词：细胞遗传生物学发育 细胞生物学的研究范围广泛，其核心可归结为遗传和发育问题。遗传是在发育中实现的，而发育又要以遗传为基础。当前细胞生物学的主要发展趋势是用分子生物学及物理、化学方法，深入研究真核细胞基因组的结构及其表达的调节和控制，以期从根本上揭示遗传和发育的关系，以及细胞衰老、死亡和癌变的原
因等基本生物问题，并为把遗传工程技术应用到高等生物，改变其遗传性提供理论依据。20世纪90年代以来，分子生物学取得很大进展，这些进展促进了细胞结构和功能调控在分子水平上的研究。 目前对细胞研究在方法学上的特点是高度综合性，使用分子遗传学手段，对新的结构成分、信号或调节因子的基因分离、克隆和测序，经改造和重组后，将基因（或蛋白质产物）导入细胞内，再用细胞生物学方法，如激光共聚焦显微镜、电镜、免疫细胞化学和原位杂交等，研究这些基因表达情况或蛋白质在活细胞或离体系统内的作用。分子遗传学方法和细胞生物学的形态定位方法紧密结合，已成为当代细胞生物学研究方法学上的特点。另一方面，用分子遗传学和基因工程方法，如重组技术、、同源重组和转基因动植物等，对高等生物发育的研究也取得出乎意料的惊人进展。对高等动物发育过程，从卵子发生、成熟、模式形成和形态发生等方面，在基因水平的研究正全面展开并取得巨大进展。自从“人类基因组计划”实施以来，取得了出乎意料的迅速进展。2000年6月，国际人类基因组计划发布了“人类基因组工作框架图”，可称之为“人类基因草图”，这个草图实际上涵盖了人类基因组97％以上的信息。从“人类基因组工作框架图”中我们可以知道这部“天书”是怎样写的和用什么符号写的。2001年2月，包括中国在内的六国科学家发布人类基因组图谱的“基本信息”，这说明人类现在不仅知道这部“天书”是用什么
分子生物学实验技术考试题库
一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合
细胞生物学实验
实验室规则和要求 一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚 趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食 物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外 套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每 组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数 清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦 拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的 注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实 验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下 自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。 实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验 室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验 室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变 措施。
药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料， 查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免 污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉 尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好 习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂 糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。 仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸， 勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开 盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电 源。
基础生物学实验教学大纲.doc
《基础生物学》实验教学大纲 课程代码：课程名称：基础生物学 课程性质：必修课程类别：专业基础 实验项目个数：9 面向专业：生物技术 吟趟材黄诗笺主编《动物生物学实验指导》, 头报教竹：王英典、刘宁主编《植物生物学实验指导》，高等教育出版社，2001 ―、课程学时学 课程学时: 80 学分：4 实验学时：28 二、实验H的、任务、教学基本要求及考核方式 1、目的和任务： 通过木课程的学习，获得基础生物学必要的基木理论、基木知识和基木技能。了解生物的基本特性及其生命活动规律，为学习后续课程及从事于本专业有关的生物技术打下一定基础。 2、教学基本要求： 掌握基础生物学实验技术的基本操作和技能，熟练使用显微镜，并对原生生物及动植物的基木形态和结构有所了解。 3、考核方式： 操作考核：50% 理论考核：50% 三、实验项目一览表 序 实验项目名称实验 时数 实验内容及目的实验 要求 实验 类型 备注 1显微镜的使用 和细胞形态结 构观察及原生 动物和藻类植 物的形态观察 3 1 .显微镜使用的一般方法； 2.观察眼虫、草履虫、变形虫、鱼腥 藻、衣藻、团藻及寄生性原生动物的 形态结构。 必修 验证 性 显微镜 2植物的营养器 官 3 1.观察各种新鲜植物根的标本，区别 初生根与次生根，双子叶植物根与单 了叶植物的根； 2.观察裸了植物茎，被了植物茎（木 本、草本），分析其结构的区别； 3.观察各种叶子的形态结构，了解不 同生态类型的叶的区别。 必修 验证 性 显微 镜，解 剖镜
3植物的繁殖器 官 3 1 .解剖几种植物的花，认识花的结 构； 2.解剖儿种植物的果实，认识不同类 型的果实； 3.解剖几种种子，了解种子的基木结 必修 验证 性 显微 镜，解 剖镜
生物技术工程实验室建设
2007-2010年中央与地方共建高等学校共建专项资金项目 生物技术工程实验室建设 可行性论证报告 重庆科技学院 生物系 二○○七年六月二十日
一、总论 1、学科基本情况 原化学与生物工程学院是一个多学科及交叉学科并存的综合性学院，有化学与化学工程、生物技术、环境科学三个一级学科，以及交叉学科覆盖了全院八个专业：化学工程与工艺、应用化学、精细化工、工业分析、商品质量检测、生物制药、制药工程、环境工程，其中已有化学工程与工艺、应用化学两个本科专业。07年3月学校完成了学科专业结构布局调整，进行资源重组，由原来的化学与生物工程学院，新组建成立了化学化工学院和生物系。生物系现有15人，副教授1人，讲师7人，助教4人，全部具有硕士学位，其中博士5人。现有生物制药、制药工程两个专业，2001年以来形成了以能力培养为主线，以基础知识的传授和学习能力的培养、工程观念和创新能力的培养为两个教学重心。全面体现“厚基础、宽口径、重实践、高素质、创造性”整体思路，突出本专业在新药研究与开发方面所形成的特色。 2、实验室现状 化学化工实验室始建于1950年，经过五十六年的发展与建设，特别是经过2004、2005年中央与地方共建基础化学实验室及化工原理实验室的建设，生物系和化学化工学院现共有：制药工程实验室、微生物实验室、生化技术实验室、化工原理实验室、化工仿真实验室、基础化学实验室、化学工程与工艺实验室等实验室，拥有包括高效液相色谱仪、气相色谱仪、原子吸收仪、紫外分光光度仪、红外光谱仪、元素分析仪、发射光谱仪等贵重精密仪器，设备总价值505多万元设备。 3、建设概况 （1）概况 项目名称：生物技术工程实验室建设 项目类型：仪器设备购置 项目需要的投入总额：1200万元。其中对中央财政专项资金的最低需求960万元。 （2）预期目标： 为了全面贯彻落实教育部、财政部《关于实施高等学校本科教学教学质量与教学改革工程的意见》文件精神，集中力量有效提升专业实验室的水平，保证本科教学质量，对2千多平方米的教学实验设备进行整体建设，推进实验教学内容、方法、手段、队伍、管理及实验教学模式的改革与创新。 ①该项目建设完成后，“生物技术工程实验室”的设备档次、规模、台套数满足“质量工程”的要求，增加了设计性、综合性、创新性实验内容，使实验开出率达到100%、设备利用率90%以上，全面提高本科实验教学质量，使学生的综合素质和实践能力得到培养和锻炼；该项目建设完成后，可进一步加强产学研密切合作，与社会、行业以及企事业单位共同建设实习、实践教学基地，培养出一大批社会需要的适用人才。
2012基础生物学实验考试--微生物学复习资料
一．名词解释 1．微生物的纯培养物：由一种微生物组成的细胞群体，通常是由一个单细胞生长、繁殖所形成。 2．菌落：单个微生物细胞在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见的、有一定形态的子细胞生长群体。 3. 灭菌：是指物体中包括芽孢在内的所有微生物都被杀死或消除。 4. 消毒：杀死或灭活物质或物体中所有病原微生物的措施，消毒可起到防止感 染或传播的作用。 5.无菌技术：在分离、转接及培养纯种微生物时，防止其被环境中微生物污染或 其自身污染环境的技术。 6. 鉴别培养基：在培养基中加入能与特定微生物的代谢产物发生特征性化学反 应的化学物质，用于鉴别不同类型微生物。 7. 选择培养基：根据不同微生物的营养需求或对某种化学物质敏感性不同，在 培养基中加入相应营养物质或化学物质，抑制不需要微生物的生长， 将所需微生物从复杂的微生物群体中选择分离出来。 8. 基础培养基：含有一般微生物生长所需基本营养物质的培养基。 9. 合成培养基：由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，也称为化学限 定培养基。 10. 平板划线法：用接种环在培养平板表面划线接种微生物，使微生物细胞数量 随着划线次数的增加而减少，并逐步分开。保温培养后，在固体培养 基表面得到生长分离的微生物菌落。 11. 稀释倒平板法：将待分离的材料稀释后与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培 养基混合，摇匀后制成可能含菌的培养平板，保温培养后分离得到的 微生物菌落生长在固体培养基表面和里面。 12．平板菌落计数法：将适当稀释的样品涂布于琼脂培养基表面，培养后活细胞能形成菌落，通过计算菌落数能知道样品中的活菌数，该方法称为平 板计数或菌落计数。 二．填空题（每空1分，共20分） 1. 用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括：、、。
生物技术中心实验室规章制度汇编
生物技术中心规章制度汇编 （试行本） 二零一六年一月
目录 生物技术中心工作规程............................................. 错误!未指定书签。 第一章总则..................................................... 错误!未指定书签。 第二章任务..................................................... 错误!未指定书签。 第三章建设..................................................... 错误!未指定书签。 第四章体制..................................................... 错误!未指定书签。 第五章管理..................................................... 错误!未指定书签。 第六章人员..................................................... 错误!未指定书签。生物技术中心各项规章制度........................................ 错误!未指定书签。 生物技术中心共享平台（A级平台）实验室管理制度 ........... 错误!未指定书签。 生物技术中心植物类、动物类共享平台实验室（B级平台）管理制度错误!未指定书签。 生物技术中心团队、专家平台（项目、课题组）实验室（C级平台）错误!未指定书签。 管理制度....................................................... 错误!未指定书签。 生物技术中心岗位职责......................................... 错误!未指定书签。 生物技术中心管理人员守则..................................... 错误!未指定书签。
本科生六个基本生物学实验
实验一：感受态细胞的制备 1.原理： 当实验室获得了一个新的质粒时，而这个质粒并未转化到宿主菌体内，则需要该技术进行细菌的转化，以大量获得这一质粒。转化细菌的方式有很多种，如电转化法、脂质体转染法、显微注射法、CaCl2处理法制备感受态细胞等。一般的实验室都应用CaCl2处理细菌，改变细胞膜的结构，使质粒DNA能穿过细菌细胞膜进入细胞。然后在选择培养基中培养转化处理过的细菌，转化成功的细菌可在抗菌素培养基上生长形成菌落。这一方法是分子生物学常用实验方法。 2.实验材料 2.1LB液体培养基 2.20.1mol/L CaCl2溶液：称取1.1g无水CaCl2，溶于90ml双蒸去离子水中， 定容至100ml，用0.22μm滤器过滤并装入灭菌试剂瓶中，4℃保存。 2.3 DH5α菌株，冰，牙签，无菌滤纸，50ml离心管，枪头（以上需灭菌）； 移液器，摇床，冷冻离心机，涡旋震荡器，恒温摇床，恒温培养箱，超净工作台，普通冰箱，-70℃冰箱 3.操作方法 3.1从37℃培养12—16h的平板上，用无菌牙签挑取一个单菌落，转移到含有3ml LB培养基的试管内，37℃振摇过夜。次日取菌液1ml，接种到含有100ml LB培养基的500 ml烧瓶中，37℃剧烈振摇培养约2—3h（振摇速度为200—300r/min），待OD600值达到0.3—0.4时，将烧瓶取出立即置冰浴10—15min。 3.2自该步骤起皆需无菌操作。在无菌条件下将细菌转移到一个灭菌处理过的、冰预冷的50 ml离心管中。 3.34℃离心，4000g×5min回收细胞。 3.4弃去培养液，将离心管倒置于滤纸上1min，以使最后残留的培养液流尽。 3.5加入冰预冷的0.1mol/L CaCl2溶液10ml重悬菌体，置冰浴30min。 3.64℃离心，4000g×5min,弃去上清液，倒置于滤纸1min。 3.7再加4ml用冰预冷的0.1mol CaCl2重悬菌体（重悬时操作要轻）。 3.8置4℃冰箱置12—24h，即可应用于转化。 思考题： 制备感受态细胞时加入CaCl2的作用是什么？ 钙离子结合于细胞膜上，使细胞膜呈现一种液晶态。在冷热变化刺激下液晶态的细胞膜表面会产生裂隙，细胞膜的通透性发生变化，使外源DNA进入。
普通生物学实验整理全套
普通生物学实验 内容提要 本书共编入20个实验，包括显微镜的使用、细胞、动植物组织、个体解剖以及制片、标本的制作等方面的内容，能帮助学生印证理论，学习和训练基本实验技能。实验后附有思考题，能启发和开阔学生的思路，培养综合与分析问题的能力。 本书适合我院本科、基地班及大专生物工程专业学生作为普通生物学实验教材，也可供有关专业人员和中学教师参考。 目录 实验一显微镜的构造和使用 实验二生物绘图技术 实验三细胞的形态与结构 实验四细胞的有丝分裂 实验五植物组织 实验六植物组织制片技术 实验七叶绿体的制备及其对染料的还原作用 实验八植物根的形态与结构 实验九植物茎的形态与结构 实验十植物叶的形态与结构 实验十一植物的繁殖器官 实验十二植物腊叶标本的制作 实验十三动物组织（一） 实验十四动物组织（二） 实验十五 ABO血型鉴定 实验十六人体动脉血压的测量 实验十七血细胞的计数 实验十八原索动物及脊椎动物类群（一）鱼类 实验十九脊椎动物——鸟类 实验二十脊椎动物类群（二）哺乳类
实验一显微镜的构造和使用 一、目的要求 了解普通光学显微镜的构造和各部分的性能，学习本掌握正确的使用技术 二、材料和用品 生物切片标本；显微镜；二甲苯、香柏油 三、方法和步骤 （一）、了解显微镜的构造和性能 光学显微镜是研究生物学的常用工具，由一组光学放大系统和支持及调节它的机械系统组成，有的还带有光源部分。其结构见图1。 图1 显微镜的结构 1、机械系统 （1）、镜座和镜柱 镜座是显微镜底部的沉重部分，它使显微镜重心较低，以使之不致倾倒。其上直立的短柱部分为镜柱，支持镜臂和镜台。 （2）、镜台 又名载物台，是放置玻片标本的平板。其中央有一圆孔，称镜台孔，以便从下方来的光线由此通过。镜台上有压片夹用以固定标本。较好的显微镜装有标本移动器（或称推进尺），既可固定载玻片又可转动螺旋前后左右移动标本。有的标本移动器上还带有标尺，可利用标尺上的刻度寻找所要观察的标本位置。 （3）、镜臂 为镜柱之上弯曲的部分，以便于持握，有些老式显微镜的镜臂与镜柱之间有一个能活动
生物技术应用中心实验室建设方案
生物制药技术中心实验室 建 设 方 案 为进一步提高实验实训教学质量的水平，推进实验实训教学的改革和建设，贯彻落实教育部关于实验室工作“巩固、深化、提高、发展”的要求，引入有效的竞争激
励机制，充分调动实验技术人员的积极性和创造性，构建高水平的实验技术平台，特制定本建设方案。 一、建设背景与目标 2006年12月学院为了适应21世生物应用技术人才的培养和资源共享理念的需要，在学校高校中率先对管理体制进行改革，成立了详详细细学院实验实训中心，将原生物科学系中心实验室更名为生物技术应用中心实验室并隶属该实验实训中心管理。 生物技术应用中心实验室下设化学、生物化学、畜牧业生产技术应用、生物化学制药与检测技术、园艺技术应用、食品营养与检测技术、生物技术应用等6大类18 个实验室，承担我院生物制药、食品营养与检测、畜牧兽医、园林和园艺5个专业、多层次的生物技术实验教学任务。并利用该中心实验室，开展了食品检验工、花卉工、园艺工、动物疫病防治员、动物检验检疫员、药物分析工和药物制剂工的职业技能培训与鉴定工作。每年接纳学生约2000人，年均总实验人时数在109500万左右。 中心实验室累计投入170万元购置了一大批先进教学仪器设备，增强了实验教学手段，改善了教学环境，提高了实验技术水平，为培养适应21世纪国家建设与社会 发展需要的、具有高技能、高素质创新、实践性生物技术人才创造条件，提供良好的实验教学技术平台。 中心实验室形成了独立设课与管理的运转模式。各实验室由生物技术应用中心实验室实行统一管理和调配，仪器设备共享，全面负责生物科学系各专业专业基础、专业课的实验教学和各专业的职业技能鉴定培训与鉴定工作。同时，不断增加从事实验教学的高职称、高学历的教师，优化实验教学体系、调整实验内容，学生通过实验课程的学习获得了良好的技能训练，他们的动手能力，创新思维，综合技能能得到显著提高。 通过院系的共同建设和发展，先后取得了具有积极示范推广意义的科技成果，即xxx省科技进步三等奖和xxx市科技进步二等奖。在理论与实践教学改革中勇于探索 和创新，获xxx省教学成果一等奖。突出的实验教学改革成果促进了畜牧兽医专业精品课程的建设(《xxxx》和《xxxx》于2004年和2006年分获省级精品课程)。本中心设施齐全先进、实验教学团队优秀、管理体制规范高效、环境人文安全，实验教学成绩显著，2004年和2006年度被评为xx省优秀实验室。经过多年的改革与建设，生 物技术应用中心实验将向海南省实验教学示范中心的目标迈进。
成立生物技术研究所协议样本
成立生物技术研究所协议样本 Effectively restrain the parties’ actions and ensure that the legitimate rights and interests of the state, collectives and individuals are not harmed ( 协议范本 ) 甲方：______________________ 乙方：______________________ 日期：_______年_____月_____日 编号：MZ-HT-090888
成立生物技术研究所协议样本 甲方：_________ 住址：_________ 电话：_________ 乙方：_________ 地址：_________ 法定代表人：___ 一、合作宗旨和目的 为了促进高科技生物技术的推广应用，推动高技术产业化经营和乙方公司上市工作，现甲方和乙方充分利用各自科技优势、投资优势、融资优势和品牌优势，共同进行_________的开发和应用推广工作，共同成立生物技术研究所。 二、拟成立研究所的基本情况：
1．研究所名称：_______ 2．组织形式：_________ 3．注册资金：_________ 4．注册地：___________ 5．法定代表人：_______ 6．职能和经营范围：___ 三、甲方出资条件及享有的权益条件约定如下： 1．甲方无需进行实物、土地使用权、货币、有价证券的投入。 2．甲方以其专有的技术投入研究所，如是专利或专利技术则需办理转移手续。 3．乙方同意甲方技术折成研究所股份40％，即乙方拥有研究所的40％股份。 4．甲方投入的技术必须达到以下条件：_________。 5．如甲方的技术无法办理转移手续，则甲方需为研究所工作满三年以上才可以拥有本条件第三款规定的完全股权，否则，依年份的长短计算，即甲方在研究所工作第一年实现股权拥有率比例为研
生物学基础实验技能讲义
生物学基础实验技能 实验讲义 王玉倩冯晓英郭娟张潮汤晓辛唐婧编 贵州师范大学生命科学学院 2012年6月
目录 一、显微操作 (2) 实验一显微镜的使用方法与绘图 (2) 实验二简单临时装片的制作与观察，油镜的使用 (6) 实验三压片的制作，涂片的制作 (8) 实验四生物材料的解剖结构观察 (10) 二、溶液配制 (11) 实验五玻璃器皿的洗涤 (11) 实验六、溶液的配制Ⅰ (13) 实验七、溶液的配制Ⅱ (15) 实验八溶液pH值的调节 (18) 三、分光光度计的使用 (20) 实验九分光光度法的介绍及分光光度计的使用方法 (20) 实验十混合物中CuSO4的测定 (24) 实验十一分光光度法测定叶绿素的含量 (26) 四、无菌操作 (28) 实验十二无菌操作技术 (28)
一、显微操作 实验一显微镜的使用方法与绘图 一、实验目的 1、掌握显微镜的构造及原理，熟练使用光学显微镜。 2、了解显微镜使用的基本要求、注意事项及一般维护方法。 3、学习生物绘图的基本要求及方法。 二、实验原理 显微镜的原理是经过两次成像，成为倒立的虚像。第一次先经过物镜成像，在物镜的一倍焦距和两倍焦距之间成放大的倒立的实像。第一次成的物像，经过目镜的第二次成像，是一个虚像。倒置的像常常使初学者使用发生困难。 1、显微镜的构造 机械部分 (1) 镜座 显微镜最下面呈马蹄形或园形的部分，起稳定和支持镜身作用。 (2) 镜柱 从镜座向上直立的短柱。上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。 (3) 镜臂 弯曲成马蹄形的部分，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。 (4) 载物台 自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。台上有一移动器（老式的左右各有一个压片夹），用以固定和移动标本。 (5) 镜筒 和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是160－170毫米。镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器（或叫物镜旋转盘，固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。转换器上有2～4个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜）。作用是保护成像的光路与亮度。 (6) 调节器（也叫调节螺旋） 为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动，调节焦距。大的叫粗准焦螺旋，位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细准焦螺旋，位于镜臂的下方，它的移动范围较粗准焦螺旋小，升降镜筒较慢，可以细调焦距。 (7) 倾斜关节 镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。它可以使显微镜在一定的范围内后倾（一般倾斜不得超过45°）便于观察。但是在使用临时封片观察时，禁止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体。 (8) 载物台 从镜臂向前方伸出的金属平台。呈方形或圆形，是放置玻片标本的地方。其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一个弹性的金属压片夹，用来压住载玻片。较高级的显微镜，在载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外，还可使切片在载物台上移
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2011-04-23 11:01:29)转载▼ 标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术基本实验室技术生物学实验教育 常用的分子生物学基本技术 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization） Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA 变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显
生物化学基本实验技术
Ⅰ生物化学基本实验技术 一、分光光度法 （一）原理 光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400—760nm。短于400nm的光线称为紫外线（200—400nm为紫外光区），短于200nm 的叫远紫外线，再短的就是X射线和γ射线了。长于760nm的光线称为红外线（760—500000nm为红外区），再长的就是无线电波了。 可见光区的电磁波，因波长不同而呈现不同的颜色，这些不同颜色的电磁波称为单色光，单色光并非单一波长的光，而是一定波长范围内的光，太阳及钨丝灯发出的白光，是各种单色光的混合光，利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。 当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液之后，部分光波减少。例如，可见光通过有色溶液后，或红外线通过多种气体后，部分光波被吸收。不同的物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，故可利用各种物质的不同的吸收光谱特征及其强度对不同物质进行定性和定量的分析。 在可见光范围内，利用溶液的颜色深浅来测定溶液中物质含量的方法，称为比色法。采用适当的光源、棱镜和适当的光源接受器，可使溶质浓度的测定范围不仅仅局限于可见光，尚可扩大到紫外光区和红外光区。这就是分光光度法。 分光光度法是生物化学中最有价值的测定方法之一。通过测定紫外、可见或红外的特征吸收光谱可以鉴定未知化合物；通过测量在某一波长的光吸收可以测定溶液中未知化合物的浓度。 分光光度法所依据的原理是Lambert和Beer定律。 1．Lambert定律一束单色光通过透明溶液时，一部分波长的光波被吸收，被吸收光波的量与溶液厚度有一定的比例关系。 即：
VOLAB细胞生物学实验室规划设计
VOLAB细胞生物学实验室规划设计 一、细胞生物学实验的定位与实验内容 细胞生物学是当今生命科学中的重要基础学科和前沿学科，对于学生们一个入 学考试的基本要求，通过综合考虑， VOLAB对于生物细胞实验室规划设计更胜 一筹，实现了实验室规划设计时的创新和科研能力。实现了现代化实验室设计 的一些基本原理。 细胞生物学教学内容量大面广，对学生的知识、能力和素质具有直接和长远的 影响。教学内容要反映当前国际生命科学的发展，细胞生物学发展日新月异， 新内容层出不穷。因此，要求学生牢固掌握细胞的基本结构和功能及各细胞器 间的关系的基本知识，并且能够了解细胞生物学的热点领域中的研究进展和未 来的发展趋势，包括细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递、基因表达 与调控等内容。 细胞生物学实验室设计应根据理论教学大纲，让通过显微镜了解各种细胞器的 的结构和功能，通过基础训练使学生掌握细胞化学显示技术、染色体技术、细 胞培养技术以及细胞器分离技术。通过综合设计实验培养学生对细胞生物学的 研究兴趣和勇于探索科学真理精神，使学生能够从生命现象中发现细胞生命活 动的内在本质和规律，能够运用已学到的细胞生物学知识去研究和探索生命科 学中与细胞生物学有关的课题，最终达到提高学生分析问题与解决问题的能力 和创新能力的目的，为本科生今后从事生命科学的研究与深造打下坚实的基础。 本科细胞生物学实验根据不同专业方向的要求，实验学时一般在24～48学时之间，细胞生物学实验内容的选择既要考虑对细胞生物学理论知识进行验证，巩 固和加强基础理论知识的理解，又要熟悉细胞生物学研究的一些基本方法，培 养细胞生物学实验设计和科研能力；更重要的是使学生能够通过综合设计实验 加强学生的创新思维能力。因此，必须强调实验室设计内容的先进性，综合性 实验内容的典型性，设计性实验内容的创新性。 细胞生物学实验主要包括三个部分，第一部分主要是显微镜技术和细胞形态学 观察以及部分细胞化学技术，第二部分为细胞生物学基本实验技术，第三部分 为综合设计实验，特别是设计内容可以让学生自由选题，开展与细胞生物学相 关的课题研究，鼓励学生进入教师的科研课题，为学生提供更好的实验环境。
分子生物学实验技术实验内容
2006 年《分子生物学实验技术》实验内容 RT-PCR （一）总 RNA的提取 实验安排：每两人抽提一管。为了使操作同步以节省时间，各组样品请一起离心。 操作步骤： TM（苯冰预冷的900μlLS -Biotragents液体样品加入 1.5ml Ep管中，再加入1、将100μ l 酚和异硫氰酸胍的混合物）。 2、将样品剧烈混合后，在室温放置5min。 3、加入200μl 氯仿，颠倒Ep 管混和两次，并剧烈振荡混和10s。 4、在4℃条件下，以10000×g 离心15min。 5、将上层水相转移到一个新的Ep 管中，加入等体积的异丙醇（Isopropanol）并混匀，然后在4℃放置至少10min。 6、在4℃条件下，以10000×g离心15min 后，小心并尽可能地去除全部上清夜。 7、用1ml 75%乙醇洗涤RNA 沉淀和管壁。 8、将RNA 沉淀进行干燥（不能完全干燥）处理后，用10μl 无RNase污染的水（RNase- Free Water）将RNA 溶解并于-20℃保存。 注意事项： 1、所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr 或更长时间。 2、所用的塑料材料，如吸头、离心管等需用0.1% DEPC 水浸泡过夜。 3、配制的溶液应尽可能用0.1% DEPC，在37℃处理12hr 以上。然后用高压灭 菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC 处理过的无菌双蒸水 配制，然后经0.22μm 滤膜过滤除菌。 4、操作人员需在超净工作台上操作，并戴一次性口罩、手套，实验过程中手套要勤换。 二）反转录 实验安排： 每人做一管反应体系（20μ l）：按下列顺序加样 μl4 5× Buffer
生物学中的常用实验
以前做过的实验： 病毒学实验：抗体检测：血凝抑制 ELISA 抗原检测：血凝 PCR 胶体金检测试纸卡测抗原细菌学实验：药敏试验 水质监测测大肠杆菌 其他：PH计测畜禽饮用水PH值 显微镜法测虫卵（饱和盐水法） 建议：可以采用的其他的检测试纸卡扩大抗原检测的种类和缩短检测时间。
各实验具体步骤： 病毒学实验 1.抗体检测： 有血凝素（HA）的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，原理是相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合，常用于正粘病毒、副粘病毒及黄病毒等的辅助诊断、流行病调查，也可用于鉴定病毒型与亚型。 疫血凝（HA）及血凝抑制(H1)试验 目的意义： 1.掌握血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HAI）的基本方法； 2.了解HA与HI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用。 基本原理： 许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。 血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。 器材及试剂: 待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液； 待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清； 生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。 实验步骤 (一)血凝试验（HA）取96孔板，按以下步骤操作： 1、第一排1-12孔各加生理盐水25ul，第二排1-12孔加生理盐水25ul为红细胞对照； 2、吸25ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取25ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去25ul， 3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞25ul。 4、室温静置10-30分，观察结果 5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集 的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价 （二）血凝抑制试验（HI） 取一96孔板，按以下步骤操作： 1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。（根据学农实验配置4单位抗原，以完全血凝的病毒最高稀释倍数除以4即为含4单位抗
基础生物学实验方案模板
基础生物学实验方案 指导教师: 9月
实验一培养基的配制 实验目的 1. 明确培养基的配制原理。 2. 掌握配制培养基的一般方法和步骤。 实验内容 学习细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物培养基的配制。 实验原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质, 用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。 各类微生物对营养的要求不尽相同, 因而培养基的种类繁多。培养细菌常见牛肉膏蛋白胨培养基, 培养放线菌常见高氏I号培养基, 培养霉菌常见蔡氏培养基或马铃薯培养基, 培养酵母菌常见麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基。另外还有固体、液体、加富、选择、鉴别等培养基之分。在这些培养基中, 就营养物质而言, 一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。琼脂只是固体培养基的支持物, 一般不为微生物所利用。它在96℃以上熔化成液体, 而在45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时, 根据各类微生物的特点, 就能够配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。培养基除了满足微生物所必须营养物质外, 还
要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵母菌的pH偏酸; 细菌、放线菌的pH为微碱性。因此每次配制培养基时, 都要将培养基的pH 值调到一定的范围。 以下配方选第三种实验中进行实验 ( 1) 牛肉膏蛋白胨培养基配方 牛肉膏 3.0 g 蛋白胨10.0g NaCl 5.0g 水1000mL pH 7.4~7.6 ( 2) 高氏I号培养基配方 可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO31g K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂15—25g 水1000mL pH 7.4~7.6 ( 3) 马铃薯培养基配方 马铃薯( 去皮) 200g
分子生物学常用技术 习题
第五章常用分子生物学技术的原理及其应用习题（引自网络精品课程） 一、选择题 （一）A型题 1 ．分子杂交实验不能用于 A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C ．单链 RNA 分子之间的杂交 D ．单链 DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是 A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组 DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针 A ． DNA 片段 B ． cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ． RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为 A ． DNA 印迹 B ． RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ． PCR 实验延伸温度一般是 A ．90 ℃ B ．72 ℃ C ．80 ℃ D ．95 ℃ E ．60 ℃ 6 ． Western blot 中的探针是 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．抗体 E ．双链 DNA 7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是 A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是 RNA D ．探针必须是 DNA E ．靠毛细作用进行转移 8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ． RNA 印迹 D ． DNA 芯片技术 E ． DNA 印迹 9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．蛋白质 E ．双链 DNA 10 ． RT-PCR 中不涉及的是 A ．探针 B ． cDNA C ．逆转录酶 D ． RNA E ． dNTP 11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是 A ．特异性引物 B ．耐热性 DNA 聚合酶 C ． dNTP D ．含有 Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ． DNA 链末端合成终止法不需要 A ． ddNTP B ． dNTP C ．引物标记 D ． DNA 聚合酶 E ．模板 13 ． cDNA 文库构建不需要 A ．提取 mRNA B ．限制性内切酶裂解 mRNA C ．逆转录合成 cDNA D ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是 A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理 C ．常用标签是 GST D ．也可以是 6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是 A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为