培养基(含测试试剂)质量控制规程

培养基（含测试试剂）质量控制规程

一、培养基制备要求

培养基的一般性状：液体培养基应透明、清亮，颜色符合要求。固体培养基应表面湿润但无水汽、平整光滑，厚薄均匀，一般厚度在3mm （M-H平板厚度不得<4mm）。斜面的长度不得超过试管长度的2/3)。PH 值应在规定值±0.2的范围内。

培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下：

1. 根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。

2. PH测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其PH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基PH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。

3. 培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净凉干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。

4. 盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。

5. 培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降

低其营养价值，一般121℃15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。

6. 每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。

7. 目前各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。

8. 每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。

二、培养基的质量控制

培养基的质量控制主要包括三方面的内容：pH测试、无菌试验以及已知菌生长试验。如果使用商品化脱水培养基，严格按照说明操作，一般不必再进行pH测试。如果使用基础物质进行培养基制备，在培养基冷却后须进行pH测试。如果pH测得值与预期值相差0.2单位，则需要酸碱调节；无菌试验一般为随机抽样3-5％，在35℃条件下培养48h。如果抽样中每个培养基上出现2个以上菌落，证明本批培养基已被污染；已知菌生长试验的前提条件是实验室有足够的已知菌储备，其中包括标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)及经过准确鉴定的临床分离菌。如果条件允许，提倡使用标准菌株。有关常用培养基的已知菌生长试验见表1。

金黄色葡萄球菌25923 抑制(部分或完全)

鼠伤寒沙门菌14028 生长

福氏志贺菌12022 生长

SS琼脂需氧，24h 粪肠球菌29212 抑制(部分或完全)

大肠埃希菌25922 抑制(部分或完全)

大肠埃希菌25922 生长

营养肉汤需氧，24-48h 金黄色葡萄球菌25923 生长

(无添加物)

1、无菌试验新制备的培养基要按批号随机抽取一定数量的标本作无菌试验。无细菌生长结果合格，有细菌生长，说明培养基已受杂菌污染，除了寻找原因外，应不再使用。

对于分装后进行灭菌的培养基，一般随机抽取5%~10%，置35℃卵育24h。对无菌手续分装的培养基，则应对全部培养基35℃卵育24h。对选择性培养基，应取部分培养基加入10~20倍无抑制性肉汤培养基如TSB，稀释抑制物质，置35℃卵育24h。

2、细菌生长试验要用已知标准菌株按照NCCLS推荐的方法测定培养基性能是否符合要求。

保存

避光。

避热。

存放阴凉处，其保存期限与所用储存的容器类型有关。

①用脱脂棉堵塞的试管，1周；

②用软木塞堵的试管，2周；

③有旋盖的容器，3周；

④平皿培养基（放在密封的塑料袋中），4℃1周；

⑤平皿培养基，当天。

用冻存的质控菌种最多向下传三代，就应更换质控菌种。过多的传代会增加表型改变的机会。

制备工作质控菌种，用冻存的质控菌种接种一个琼脂斜面或平板，卵育过夜或得到足够的量为止。这些工作琼脂斜面或平板上的培养物应贮存于2~8℃，或者室温，可放4个星期。菌种再传代后应检查纯度和典型的菌落形态。

厌氧菌的工作质控菌株应在庖肉培养基或其它适宜的厌氧肉汤培养基中保存，或冷冻保存菌种，不应使用琼脂斜面或平板。

2．妻一尼染色

1)严格按照标本收集程序取样并涂片

2)对涂片进行严格编号或标识

3)每次使用新玻片，不可重复使用

4)在固定涂片时，避免玻片加热过度

5)利用过滤的方法去除石炭酸复红染液中的沉淀

6)利用已知的抗酸杆菌(AFB)阳性涂片每周或在更新炭酸复红染液时至

少进行一次质量验证

7)阳性涂片应置于专门器具专门地点保存以备复验

8)阴性涂片至少保存两周以备复验

四、细菌鉴定或鉴别常用试验的质量控制

细菌鉴定或鉴别主要依据细菌的形念特点、染色特点、培养特征、生化反应及血清学特征等。细菌这些生物表型特征或按固定组合的方式被用于细菌鉴定，或以灵活组合的方式用于细菌鉴定、鉴别及补充试验。无论怎样，这些生物表型检测的准确与否直接影响细菌鉴定的准确性。下面将列举一些常用且较为关键的试验，并对其质量控制方法加以说明，见表2。

表2 常用细菌鉴定或鉴别试验的质量控制

试验名称质控周期阳性质控阴性质控

质控菌结果质控菌结果

触酶试验每次使用时金黄色葡萄球菌有气泡产生化脓性链球菌无变化

吲哚试验每批号(在允许的储大肠埃希菌产生红色阴沟肠杆菌无颜色改变

存条件和使用期限内)

五、培养基加贴标签

实验室要培养基都贴上标签，标明其适用性、特性、储存条件、配制日期、有效期和（或）推荐的储存时期。负责微生物检验准备的试验人员可以从记录中确认。