实验动物学

2、研究实验动物具体内容：是以实验动物为材料，采用各种方法在实验动物身上进行实验，研究动物实验过程中实验动物的反应、表现及其发生发展规律等问题。

（1）育种、保种（培育新品种、保持原有品系的遗传特性）

（2）生物学特性（包括解剖、生理、生化、生殖及生态等）

（3）繁殖生产、饲养管理以及疾病的诊断、治疗和预防。

4、实验动物的价值：

（1）基础医学、生物学研究：对人的各种生理现象和病理机制及疾病的防治研究中，实验动物是人的替难者；

（2）制药和化学工业方面：毒性实验（急性、亚急性、慢性）、三致试验（致畸、致癌、致突变）、药效药代试验；

（3）生物制品方面：生物制品生成的原料、安全性评价的工具、有效性评价的工具；

（4）轻工业与食品工业方面；（5）农业与畜牧业方面；

（6）国防和军事科学方面：各种武器的杀伤效果评价；化学、辐射、细菌、激光武器的效果和防护；航天科学研究。

7、实验用动物（Experimental Animal, Animal for Research）是指一切用于科学实验的动物。包括：野生动物、经济动物、观赏动物、实验动物。

8、实验动物化：野生动物或经济动物经过初期的表型分析和筛选。经过严格的驯养、微生物净化、遗传及饲养环境等因素的控制，按实验要求进行培育，使之达到实验动物的标准。这种将野生动物或家畜驯化、培育成实验动物的过程，叫做实验动物化。

9、动物疾病模型：

（1）基因改变疾病模型：也称遗传工程动物模型。指利用分子生物学技术手段，将已知的一个或多个基因导入动物胚胎细胞或从动物胚胎细胞中剔除，培育成携带或缺失某种或几种基因的动物；

（2）诱发疾病模型：也称实验性疾病模型。指利用物理、化学、辐射、生物感染等技术制作的动物模型，根据实验目的的不同，认为地造成动物组织、器官或全身损伤，出现某些类似人类疾病的症状；

（3）突变疾病模型：也称突变疾病模型。是指在自然条件下，动物由于基因突变发生异常表现，这种突变症状类似人类的疾病，通过定向选育使之遗传下去而形成的模型。高血压模型（SHR大鼠）、肥胖模型（Zucker 大鼠）、糖尿病模型GK大鼠、肥胖并糖尿病模型（db/db小鼠）。

11、实验动物遗传学分类：

（1）近交系（2）杂交群：两个不同近交系杂交所生的动物（3）封闭群

13、遗传育种学的研究内容

是利用遗传调控原理，控制实验动物的遗传特性，不断开发和改良，培育新的实验动物品种、品系，以及各种动物模型，使之达到实验动物化的目的。包括：实验动物遗传的改良和遗传控制；家畜和野生动物的实验动物化研究；实验动物品种、品系的保存方法研究

遗传改良：

（1）近亲培育：通过近亲交配方式，将某些特殊性状（如产子数、哺育能力、性成熟等）固定下来。（2）突变培育：通过回交－互交，或者近交，或者将突变基因导入近交系的方式将某些有用的突变基因保持下来。

（3）杂交：为了提高某些性状，如产子数、体重等，将两个近交系或近交系与运交群进行杂交。

保种技术研究：常规活体保种、胚胎、精子、卵子、卵巢冷冻保存。

胚胎冷冻的主要方法：缓慢冷冻法、玻璃化冷冻法、超速冷冻法。

辅助体外受精技术：PZD技术：透明带切开（运动能力较差的精子）；ZUSI技术：精子透明度下注射（运动能力较差的精子）；ICSI技术：精子头胞质内注射（无运动能力的精子）

2、实验动物设施对环境控制的意义

（1）保证实验动物健康和质量标准化

（2）保障实验研究获得可重复的结果

（3）为动物实验工作者提供适宜的工作环境，避免伤害，确保研究的顺利进行

3、影响实验动物的自然环境因素：环境温度、相对湿度、光照、噪声、空气洁净度、通风、人为因素

环境温度：需要控制的最关键的环境参数；高温比低温的问题更严重；与推荐范围的重大偏离是首要问题；日温差要小于等于3度

温度对实验动物的影响：温度变化可影响动物的表型、性周期、代谢水平、抗感染能力。

（1）新陈代谢：低温时新陈代谢增加，摄食增加

（2）散热：除灵长类，其他动物汗腺不发达或无汗腺，高温时散热困难，难以维持体温恒定

（3）脏器重量：负相关

（4）生殖：高温时雄性睾丸萎缩，精子活力下降；雌性动物性周期紊乱，泌乳下降。

实验动物产热（化学调节为主）：基础代谢产热、肌肉活动产热、生长过程产热

实验动物散热（物理调节为主）：辐射、传导、对流、蒸发

湿度对实验动物的影响

偏高：微生物易于繁殖；饲料、垫料易于霉变；动物易发生传染病

偏低：使动物皮肤和黏膜发生干裂；使室内灰尘飞扬，易引起动物的呼吸道疾病；相对湿度低于20%时，大鼠容易发生环尾症（尾根部坏死，室温太高（35℃））

绝对湿度a：某温度下，样品空气中的水蒸气的实际含量；饱和湿度b：某温度下，样品空气中所能容纳的水蒸气的最大值；相对湿度c：某温度下，样品的绝对湿度与该温度下的饱和湿度的比值（和样品多少无关，能够客观衡量湿度的大小）c=（a/b）×100％。空气中的含水量和温度有关，温度越高，能容纳的水蒸气也越多

光照对哺乳动物生物钟具有重要作用，光线刺激可影响垂体促性腺激素和肾上腺皮质激素的分泌，对动物

的生殖生理和行为活动有较大影响。光照的昼夜交替使动物体的一些活动，如血压、激素水平、体温、神经活动等都变成了一种节律。光照：热效应，光化学效应，与波长、光周期和光强度有关。

光周期的控制对啮齿类动物至关重要：12小时（明）/12小时（暗）14小时（明）/10小时（暗）

对实验动物的影响：持续光照可使生殖系统过度兴奋，造成连续发情。还可性成熟年龄提早。光源随距离的增大而递减，高强度会引起白化鼠的视网膜病变。强光长时间照射可引起角膜退变。

波长：对红光的感觉与黑暗相同，小鼠的活动量在蓝、绿、白色最小，而在红色和黑暗中最大。

噪声对实验动物的影响

（1）引起动物听力性痉挛。≥60db （2）对生殖影响较大，如豚鼠流产。（3）引起动物呼吸、心跳、血压、肾上腺皮质激素等生理指标变化。心跳、呼吸次数及血压增加，大鼠出现高血压、心脏肥大

4、我们想通过通风系统达到什么目的？

（1）可作用于动物体表皮肤的蒸发和对流散热，气流速度和散热正相关。

（2）可调节室内温度和湿度，又可降低室内粉尘和有害气体污染，控制传染病的流行。

气流布局模式：水平层流式，垂直层流式，乱流式

通风系统中的两个重要参数：换气次数，洁净程度越高，要求换气次数越多。屏障环境：10～20次/h 隔离环境：20～50次/h.；压强梯度：洁净区高于污染区。饲养间60pa＞走廊40pa＞缓冲间20pa＞清洗区8、常规实验动物设施分类

实验动物设施根据对饲养动物的空气净化程度分为三类：开放系统、屏障系统、隔离系统

（1）开放系统：定义：符合动物基本居住要求，但在硬件设施上不能完全控制传染因子。温湿度、尘埃等受外界环境影响。空气净化：无空气净化适用：饲育普通级动物

（2）屏障系统：定义：通过严格控制人员、物品和环境空气的进出，形成控制微生物进入的屏障

空气净化:空气进出经高效过滤，空气净化等级达到万级适用：饲育SPF级动物和清洁级动物

（3）隔离系统：定义：采用无菌隔离装置以保证与外界环境的绝对隔离

空气净化：空气进出经超高效过滤，空气净化等级达到百级适用：饲育无特定病原体动物，无菌动物和已知菌动物（悉生动物）

9、实验动物设施布局原则

（1）有利于防止疾病的传播、各种动物保持各自的独立性，避免相互干扰相互感染

（2）方便工作人员操作

（3）能够使人员、动物、其他物品和净化空气尽可能的按“单向”路线移动

屏障系统中人的移动路线：人员入口（脱衣）→一更（清洁）→二更（穿衣）→风淋室（风淋）→清洁走廊→ 饲养室或动物实验室（实验）→清洁走廊→ 人员出口→ 更衣→ 外部区域

屏障系统中物品移动路线：清洁准备室→清洁物品储存室→清洁走廊→饲养室或动物实验室→清洁走廊→物品出口→外部区域

屏障系统中动物移动路线：外来动物→传递窗→检疫室或健康动物观察室→清洁走廊→饲养室或动物

实验室→清洁走廊→污物出口→外部区域

10、物品进出动物房的三个原则

原则1：物品进入动物房尽可能采取高压灭菌的方式，不能高压的物品方可使用紫外照射灭菌。

原则2：经传递窗紫外照射进入的物品，当天必须取出。

原则3：经高压灭菌进入的物品，至多在动物房内存放7天。

11、实验动物的饲料：任何单一的饲料都不能满足不同动物的不同生长时期对营养的需要，因此需要进行配制，使其含有全面而均衡的各种营养素，以满足动物生长繁殖或特殊实验的需要。这种饲料叫“全价营养饲料”。

天然饲料原料：如谷物、脱水蔬菜、草粉、鱼粉、骨粉、矿物质、酵母等

加工饲料原料：如玉米淀粉作为饲料糖类来源，牛奶中提取酪蛋白作为蛋白质来源等

纯化学物质：如氨基酸、必需脂肪酸等

1、实验动物受微生物污染的途径：饲料、垫料、饮水、可灭菌的衣物、用具、设备；工作人员无法灭菌的物品；引进新种源、废料、待洗物品；动物尸体。

2、实验动物环境检测

环境检测：环境温度、湿度、梯度压差、通风、噪声、空气洁净度及光照控制等。

微生物检测：饲料、饮水、垫料、笼具、器具表面落下菌数及空气落下菌数是否达到SPF标准。

灭菌效果检测：高压蒸汽灭菌器、紫外灯、消毒剂。

实验动物检测：哨兵鼠的检测。

3、动物感染疾病的早期症状

外观：死亡、衰弱、被毛竖立、颜面水肿、鼻端眼睑脏污

动作：蹲坐姿、喘气、回旋

体检数据：体重及食物摄取量下降、白血球增加

发生状况：集中在短时间内发生，以饲养笼及笼架为单位扩增，实验组与对照组一起发生

剖检：肺：实质化、凹凸、萎缩、气管粘液增加肝：散在性白点、凹凸肾：化脓、结石

4、机会性病原：无特定病原（SPF）检测项目以外的病原。病毒11项，细菌17项，寄生虫7项以外的。如克雷伯杆菌的感染，则报告结案。

低致病性病原：病原传染性不高，如梨形虫（Giardia muris），考虑做局部动物房扑杀或净化，并加强环境消毒。病原致病性不高且可治疗，如蛲虫（Pinworm）等感染，则考虑投药治疗。

首要病原：对实验动物致病性高、对科学研究有显著影响，或人畜共患传染病原（HV、LCMV、鼠咬热等）。这类病原传染率高且容易被检测到。必须彻底清洁环境，甲醛熏蒸。采用生物净化的方式，建立新的种群。

5、实验动物传染病的卫生防疫

防疫原则：隔离饲养，防止交叉感染；引进动物要严格检疫：从可信赖的单位引进动物；按国家标准严格

检测；坚持卫生消毒制度；饲养管理人员要定期做健康检查；自繁自养多级保种，提高自我更新能力；免

疫接种，提高实验动物防病治病能力；严格防止野生动物进入实验动物场所，对死亡动物进行无害化处理。第三章常用动物

大鼠、小鼠均属于啮齿类。实验用非哺乳类动物种类：线虫，果蝇，斑马鱼，爪蟾等。

一、小鼠

1、生物学特性：哺乳纲、啮齿目

（1）一般特性：①体型小，性情温顺，易于饲养管理。②小鼠是哺乳动物中体型较小的动物，出生时体重

1.5g，体长20mm左右。成年体重30～40g，体长110mm。③喜黑暗，昼伏夜动。④喜欢群居，雄性好斗。

⑤胆小怕惊，对环境反应敏感，适应性差，汗腺不发达，怕热，高温容易中暑。

（2）解剖学特性：尾巴较长，约等于体长，尾具有平衡、散热和自卫等功能。尾部有四条明显的血管，其背腹面各有一条静脉血管，两侧各有一条动脉血管。

（3）正常生理生化指标：正常体温37～39℃，成年小鼠呼吸频率140～210次/分，心跳平均163次/分。染色体20对。门齿终生不断生长。

（4）有乳腺5对。其中胸部3对，腹部1对，腹股沟1对。

2、小鼠生理学特点：①性成熟：♀35-50日龄，♂45-60日龄②适配日龄：65-90日龄。③发情周期：4-5天④排卵：发情后2-3小时可排卵，排卵可延长至3-4天。一次排卵10-23个。有产后发情，可以血配。⑤妊娠期19-21天。哺乳期20-22天。每胎产仔数8-15只，年可产6-10胎。繁殖年限为1年。⑥成年雌鼠在发情周期不同阶段，阴道粘膜可发生典型变化。根据阴道涂片的细胞学改变，可以推断卵巢功能的周期性变化。⑦雌鼠交配后10-12小时，阴道口有白色阴道栓，是交配成功的标志。

3、交配方法：一雄一雌法，一雄多雌法（一雄双雌，小群交配法），要注意在孕鼠分娩前讲孕鼠从交配笼中分出。

6、大小鼠年龄的大致判断

（1）根据形态：

①1天，仔鼠裸体鲜红②3天，耳壳露出表皮③四天，脐带瘢痕脱落④五天，能翻身⑤能爬行⑥10天，能听到声音⑦9~11天，全身被白毛，门齿长出⑧13~15天，眼皮张开，能跳跃，能抓取东西⑨18天以后，能自行采食，独立生活

7、小鼠编号

（1）短期编号：常用染色剂①3% ~ 5%苦味酸溶液，可染成黄色。②0.5% 中性红或品红溶液,可染成红色。

③2%硝酸银溶液，可染成咖啡色（涂染后在可见光下暴露十分钟）。④煤焦油酒精溶液，可染成黑色。（2）长期标记：打耳洞、剪脚趾、耳牌、文身、电子牌

8、小鼠常用的品种、品系

（1）不同的遗传种群：近交系----遗传的均质性保证了实验反应的稳定性和重复性；封闭群----能较好的代表自然群体的遗传特性；F1杂交群----在一定程度上，兼有近交系和封闭群的特点；突变动物----往往具有鲜

明的人类疾病模型特征

（2）近交系

经连续20代以上亲代与子代的交配，与全同胞兄妹的交配有同等效果。近交系数应大于99％。

特征：1、基因纯合性2、遗传稳定性3、遗传组成的同源性4、表型均一性5、遗传组成的独特性6、遗传特征的可分辨7、分布的广泛性8、资料的可查性

优缺点：近交系的优点是可以获得精确度高的实验结果，而且各项实验结果极易重复，具有可比性，对各种应激反应均一，周期短，使用动物少，可作病理模型，遗传背景明确。但是由于近交系动物是高度近交培育而成，必然造成近交衰退（inbreeding depression），如对生长的环境条件要求较高，产仔少，饲料中的营养要求也高等。

（3）封闭群动物

概念：以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上，称为一个封闭群，或叫远交群。

特征：①其目的是尽量防止近亲交配而保持其遗传变异性，既保持群体遗传的一般性，又保持群体遗传的杂合性。②如常用的KM小鼠、Wistar大鼠、青紫蓝兔、新西兰兔和英国种豚鼠等，均属这类动物。③它是以群体遗传学为基础包括群体封闭年限、群体大小、群体结构等。由于封闭群繁殖率高，具有杂合的特性，适于大量繁殖，以满足生物制品、制药厂对各种药品的安全性和效价进行检验的需要。

分类：封闭群按其来源和遗传背景不同，可分为两大类：①来源于近交系的繁殖群及其子代，不用兄妹交配方式保种以进行生产的实验动物。②来源于非近交系，不是以培育近交系为目的而生产的实验动物群。封闭群内，个体间的差异程度主要取决于其祖代来源，若祖代来自一般杂种动物，则个体差异较大，若祖代来自同一品系的近交系动物，差异则较小。

优缺点：封闭群动物的遗传组成具有很高的杂合性，在遗传中可作为选择实验的基础群体，用于对某些性状遗传力的研究。而且由于其具有类似于人类群体遗传异质性的遗传组成，因此在人类遗传研究、药物筛选和毒性试验等方面起着不可替代的作用。

繁殖力和生活力强，表现为每胎产仔多、胎间隔短、仔鼠死亡率低、生长快、成熟早、对疾病抵抗力强、寿命长，加之饲养繁殖时无需详细记录谱系，容易生产，成本低，可大量供应，因而广泛应用于预试验、学生教学和一般实验中。

（4）突变种

概念：由自然突变，或经人工诱导，使动物正常染色体上的基因发生突变，动物表现出某种遗传缺陷，且这种特异的遗传性状能够维持稳定的遗传品质。

突变系小鼠：

侏儒症：比正常小鼠体型小，缺少生长素和促甲状腺素，用于内分泌研究。

（5）杂交F1代动物

概念：两个不同品系的近交系动物之间杂交所产生的第一代杂交动物，又叫F1代（first filial generation的简

称）动物，也可叫“杂交一代”或“子一代”、“杂种一代”动物。

优点：遗传一致性②杂交优势③作为某些疾病研究模型

10、不宜用小鼠进行的实验

小鼠无呕吐反应，不宜作呕吐实验。

小鼠没有汗腺，体温调节不稳定，在选择应用时应注意回避。

小鼠不易形成动脉粥样硬化，故不宜作此类实验。

二、常用实验动物方法

1、动物被毛的去除方法①. 剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪适用于各种实验动物②. 拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射③. 剃毛法：剃须刀、手术刀④. 脱毛法：脱毛剂

2、实验动物麻醉方法

麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。

全麻是指麻醉药通过呼吸道吸入、静脉和肌肉注射等途径，进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不留后遗症。

全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用非挥发性麻醉药。

3、麻醉注意事项

①麻醉之前应禁食。

②麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻醉剂用量的依据。

③应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的，如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。

④大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。

⑤静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。

⑥麻醉之前应禁食。

⑦麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻醉剂用量的依据。

⑧应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的，如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。

⑨大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。

⑩静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。

4、麻醉意外的抢救

原因：麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深

后果：中枢神经系统抑制导致呼吸系统、循环系统功能障碍，引起呼吸、心跳停止。

抢救方法：要针对具体情况，采取对症治疗的措施。

①.立即停止供给麻醉剂②.人工呼吸，吸氧③.苏醒剂

④.呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂，如0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注50%葡萄糖溶液等。

5、实验动物的给药方法

（1）经口给药法（2）注射法（3）其它途径给药方法（呼吸道给药、皮肤给药、脊髓腔内、给药、脑内给药、直肠内给药、关节腔内给药）

注射法有皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。药物吸收速度（静脉注射＞腹腔注射＞肌肉注射＞皮下注射。皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，如过敏试验脑内注射常用于病毒学接种

6、实验动物常用处死方法

（1）“安死术”是指以人道的方法处死动物的过程。在处死动物过程中减少动物的惊恐或焦虑，安静地、无痛苦地死亡。

（2）采用安死术必须符合的标准①死亡时没有惊恐、疼痛的表现②使其在最短时间内失去意识，迅速死亡③方法可靠且可重复④对操作人员安全⑤采用的方法要与研究要求和目的一致⑥对观察者和操作者的情绪影响最小⑦对环境污染的影响最小⑧设备简单、价廉、易操作⑨处死动物地点应远离，并与动物室隔开（3）大鼠小鼠①.颈椎脱臼法②急性失血法③麻醉致死法④气体窒息致死法

第四章常用实验动物生物学特性及其应用

使用实验动物的最终目的是为了间接地研究人类疾病，所以在选择动物时，尽量使用那些与人在机能、代谢、结构、疾病特点等方面相似的动物

因为一致性是重现性的可靠保证。

在动物实验设计时，所采用的方法应尽量做到容易执行和合乎经济原则。

第五章遗传工程动物模型

2、技术手段：显微注射转基因技术、基因随机突变技术、化学或放射诱变技术

3、遗传工程动物遗传修饰的策略

导致功能丢失的基因组修饰；导致产生新基因组功能的遗传修饰

4、导致功能丢失的基因组修饰

插入突变：外源DNA片段在基因组中发生整合后，势必会造成插入位点的基因结构发生变化，如果该位点是某基因的所在位点，就会造成相应基因的结构破坏而导致LOF。

大片段的缺失突变：利用置换型的基因打靶载体，将内源基因的功能片段用某些选择基因置换而造成LOF 的基因打靶。

引入点突变：可以对基因组中的特定位点单个碱基置换几个碱基的定向改变。

5、基因打靶

基因敲除：传统基因敲除（conventional knockout）条件性基因敲除（conditional knockout）

基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的,是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物学技术。

同源重组（Homologous Recombination)是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。

条件性基因敲除优点：（1）诱导基因突变的时间可人为控制；（2）可避免因基因突变而致死胎的问题；（3）如用病毒或配体/DNA复合物等基因转移系统来介导Cre的表达。

6、相关术语：

宿主挑选原则：注射后发育得到的小鼠毛色要易于观察嵌合体小鼠；两个小鼠品系间要具有良好的相容性,即宿主囊胚要利于保证ES细胞的良好生殖传递性。

受体鼠(Receptions）: 接受操作胚胎的假孕母鼠

假孕(Pseudopregnancy）:发情期的母鼠在与无精子的公鼠交配后的一定时间内，黄体素会持续存在，而使它自己的行为和身体处于适合胚胎种植，及养育子鼠的状态。

结扎公鼠：输精管结扎过的公鼠。具有正常的交配能力，由于输精管中没有精子，与母鼠交配后，可使母鼠处于假孕状态。

生殖系传递：即所得到的嵌合体小鼠中具有参与生殖系传递能力的es细胞

8、基因捕获

是通过在基因组中创造随机插入突变。基因捕获载体包含一个无启动子的报告基因或选择标记，它能在插入位置（内含子）报告基因表达。因这系列方法酷似以报道基因为诱饵来捕获基因，故得名基因陷阱或基因捕获。一般常用的报道基因有GUS、绿色荧光蛋白（GFP）、LacZ基因。

优点：短期内可建立大量含不同基因突变的ES 细胞克隆库。突变基因的序列可通过PCR 等一些方法鉴定, 同时还可能发现一些新基因。

9、雄原核显微注射法

以单细胞受精卵为靶细胞，利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核，再将接受注射的受精卵移入假孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。目前应用较广泛，最早最经典的方法。

基本程序：质粒的构建；准备假孕母鼠；受精卵的准备；基因导入（显微注射）；胚胎移植；对幼鼠的鉴定相关术语：

原核：在卵子受精后，二性染色体融合前，从精子或卵子发育而来的单倍体核样结构

供体鼠：为DNA注射提供受精卵的母鼠

种公鼠：用于和供体母鼠交配的雄鼠

超排卵：为了增加实验时可操作的受精卵，可以通过人为注射激素，来诱导供体鼠多排卵。

转基因小鼠：所有携带有外源基因的小鼠的总称

Founder : 从注射后的受精卵直接发育而来的携带有外源基因的小鼠

Transgenic lines: 从各个founder繁衍下来的系

基本准则:一个founder, 一个系，不同系之间不交叉，除非实验需要

10、转基因动物的意义

（1）转基因动物是在单细胞基因转染技术的基础上发展起来的。而许多基因的表达是无法通过转染的方法来研究；

（2）基因表达有时空与组织的特异性；

（3）外源基因的表达受特异性有关顺式作用序列的调控；因此，只有通过转基因的动物才有可能研究基因的表达、调控及基因之间的相互作用。

（4）进行功能基因组学的研究，研究外源基因在动物整体水平的表现调控规律。

（5）转基因动物疾病模型可用来进行疾病发病学和治疗性研究。

（6）也可改变动物基因使其表现型更适合人类需要。

（7）还可以用转基因动物生产一些人类所需的生物活性物质。