过碘酸雪夫AB-PAS染色试剂盒

产品简介：

糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。

阿尔辛蓝和PAS技术联合使用可鉴别同一组织切片中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。这种技术也常用作广泛检测黏蛋白的手段。该技术染色阴性，可明确断定该物质不是黏蛋白。在大多数方法中，切片先经标准的阿尔辛蓝(pH值为2.5)染色，再使用PAS技术。阿尔辛蓝可将唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成蓝色。PAS技术可将中性黏蛋白染成深红／红紫色，同时将既含中性黏蛋白又含酸性黏蛋白的组织和细胞染成深浅不同的紫色，这是由于阿尔辛蓝与Schiff试剂结合并反应。上述染色常可出现在含有中性黏蛋白和唾液黏蛋白的小肠杯状细胞中。

阿尔辛蓝是类铜钛花青染料，这种阳离子染料与酸性基团结合，也即阿尔辛蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。分子中带正电荷的盐键与酸性黏多糖物质中带负电荷的酸性基团结合形成不溶性的复合物而呈蓝色，再与PAS进行复合染色，就能显示三种不同黏液物质成分。

主要成分：

试剂(A): 主要有阿利新蓝、弱酸等组成。

试剂(B): 主要由过碘酸组成。

试剂(C): 主要由碱性品红、偏重亚硫酸钠等组成。

试剂(D): 主要由苏木素、乙醇等组成。

试剂(E): 主要由酸、乙醇等组成。

试剂(F): 主要由氨水、蒸馏水组成。

自备材料：

1、蒸馏水或去离子水

2、95%乙醇

3、无水乙醇

4、染色缸

操作步骤（仅供参考）：

1、脱蜡至水洗。

2、蒸馏水洗2 min。

3、用阿利新蓝溶液染色10～20 min。

4、蒸馏水洗3次，每次1～2min。

5、放人过碘酸溶液中进行氧化5min。

6、用Leagene Schiff Reagent浸染10～20min。

7、倾去Schiff Reagent，流水冲洗10min。

8、用Lillie Mayer苏木素染色液染核1～2min。

9、用酸性乙醇分化液分化。

10、水洗。

11、用氨水溶液进行返蓝。

12、水洗3min。

13、逐级常规乙醇脱水。

14、二甲苯透明。

15、中性树胶封固。

染色结果：

糖原、中性黏蛋白、各种糖蛋白红紫色

酸性黏蛋白（硫黏蛋白和唾液黏蛋白）蓝色

蛋白多糖和透明质酸蓝色

备注：含有中性黏蛋白和酸性黏蛋白的细胞或组织可染成不同程度的蓝紫色至紫色。

注意事项：

1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。

2、过碘酸氧化时间不宜过久，氧化时的温度以18-22℃最佳。

3、试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)应置于4℃密闭保存，使用时避免接触过多的阳光和空气。使

用前，最好提前30min取出恢复到在室温后，避光暗处使用。

4、酸性乙醇分化液应经常更换新液，其分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性乙

醇分化液的新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够。

5、切片在过碘酸和Schif f Reagent中作用时间非常重要，该依据切片厚薄、组织的类别

等决定。

6、如复染核，细胞核一定要淡染，以免影响阳性物质观察，如AB-PAS合染最好不复染细

胞核，因为会影响AB的观察。

7、研究表明，阿尔辛蓝-PAS联合技术的染色顺序可影响最终结果。PAS技术在阿尔辛蓝

染色之前时，中性黏蛋白和糖原可染成紫色。与此相反，阿尔辛蓝染色在PAS技术之前时，则可将这些物质染成预期的红紫色。 PAS染色后，中性碳水化合物获得亲阿尔辛蓝能力的原因不明。然而，有人认为过碘酸氧化后形成的醛基可能与Schiff试剂中的亚硫酸盐反应形成一个阴离子，再与随后的阿尔辛蓝结合。

8、苏木素淡染非常重要，目的是防止胞浆或黏蛋白着色而掩盖阿尔辛蓝的颜色。

9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

实验二+细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察

实验二细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察 1. 目的要求（1）学习细菌涂片、染色的基本技术及无菌操作技术。（2）掌握细菌的简单染色法，初步认识细菌的形态特征。（3）了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。 2. 基本原理（1）简单染色法用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱碱性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。（2）革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类

物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。 3. 材料及器材 (1) 大肠杆菌，枯草芽孢杆菌 (2) 革兰氏染色液，载玻片，显微镜等 4. 方法与步骤 Ⅰ涂片取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种环以无菌操作分别从培养14～16h的枯草芽孢杆菌和培养24h的大肠杆菌的斜面上挑取少量菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。载玻片要洁净无油迹；滴蒸馏水和取菌不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚。 Ⅱ干燥室温自然干燥。 Ⅲ固定固定时通过火焰2～3次即可。此过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。

普鲁士蓝染色试剂盒(核固红法)使用说明

普鲁士蓝染色试剂盒（核固红法）使用说明货号:G1422 有效期：12个月产品内容：产品名称2×50ml2×100ml Storage Perls stain A25ml50ml RT避光 Perls stain B25ml50ml RT 临用前，取A1、A2等量混合，即为试剂(A)Perls stain，不宜提前配制。试剂(B):核固红染色液50ml100ml RT避光产品说明：含铁血黄素（Hemosiderin）是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。 Perls普鲁士蓝反应（Prussian blue reaction）又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞内会间质内，主要显示三价铁盐。Perls普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，其染色原理为：亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁氰化钾反应，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝，所以该反应被称为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物，在反应后可用红色染色剂进行复染，如核固红、伊红、中性红等。 Perls stain常用于显示局部组织内各种出血性病变，常见于吞噬细胞内。在判断含铁血黄素沉积时，用Perls反应可以得到证实，该染色方法可以很好的区分含铁血黄素和其他色素。

该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进行复染。该染色液的复染液采用核固红，是最经典、最常用的复染液。自备材料： 1.10%的中性福尔马林 2.系列乙醇 3.蒸馏水 4.4%的多聚甲醛操作步骤（仅供参考）：（一）石蜡切片染色 1、组织固定于10%中性福尔马林，常规脱水包埋。 2、切片厚度4um，常规脱蜡至水。 3、蒸馏水水洗1min。 4、切片入Perls stain（见注意事项4），浸染15-30min。 5、蒸馏水充分冲洗2-5min。 6、入核固红染色液，淡染细胞核5-10min。 7、自来水冲洗1-5s。 8、常规脱水透明，中性树胶封固。（二）冰冻切片染色 1、无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min。 2、染色、水洗、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。（三）细胞染色 1、4%多聚甲醛固定10～20min。

革兰氏染色红色

革兰染色液说明书【产品名称】革兰染色液【包装规格】货号：DM0016 单瓶包装规格分别为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：4×20ml/盒、4×100ml/盒、4×250ml/盒、4×500ml/盒。【预期用途】用于细菌或真菌的涂片染色。【检验原理】革兰氏染色法是丹麦医生Christain Gram于1884年所发明，是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是由肽聚糖层厚度和结构决定的，经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它脱色。在革兰阴性细胞染色中乙醇或丙酮破坏了胞壁外膜、损伤肽聚糖层和细胞质膜，结晶紫和碘复合物从细胞中渗漏出来，当再用其他染色液复染时显现红色，红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，所以红色显示不出来；在革兰阳性细胞染色中乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘复合物分子太大，不能通过细胞壁不易脱色，所以保持着紫色。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法(属复染法)，可用于标本涂片或菌落涂片，染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以临床分类鉴定，染色结果将细菌分为革兰氏阳性菌(紫色)和革兰氏阴性菌(红色)两大类。【主要组成成分】试剂组成主要成分 1、结晶紫染色液结晶紫、乙醇 2、碘溶液碘、碘化钾 3、脱色液乙醇、水 4、沙黄染色液或复红染色液沙黄染色液：沙黄、乙醇复红染色液：品红、乙醇【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。【样本要求】涂片时必须注意细心操作，涂片薄而均匀；制备的涂片应自然干燥，采用加热固定时，固定温度不宜过高，以背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变影响观察结果。【检验方法】 1、涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与水混合均匀，涂成一薄层； 2、干燥、固定：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，也可以用甲醇或乙醇固定； 3、染色。 4、滤纸吸干或在空气晾干，镜检。【检验方法的局限性】采用陈旧标本涂片时有产生假阴性的可能。【注意事项】 1、涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。 2、取细菌时，应注意自我防护，拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在

革兰氏染色法的步骤

革兰氏染色法的步骤详细阐叙革兰氏染色法的步骤浏览次数:174次悬赏分:0 |解决时间:2011-5-25 17:44 |提问者:肖箫 2011shaw 最佳答案革兰氏染色一、目的:在细胞发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测,判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。二、原理: 通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。三、实验用品准备: 灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器四、操作: 1 涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2 干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。 3 固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约 1min。 5 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 6 媒染:用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min。

HE(苏木素-伊红)染色试剂盒使用说明书

HE（苏木素-伊红）染色试剂盒使用说明书货号：L9406 规格：10ml/100ml 保存：本试剂盒常温保存，复检期至少1年。注意：环境温度低时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。产品说明：苏木精-伊红染色法( Hematoxylin-Eosin staining )，简称HE染色法，切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。操作说明：石蜡组织切片的HE染色（以下步骤仅供参考）。 1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。 2．切片用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。 3．苏木素染液染色5-20min(可以根据染色结果和要求调整时间)，自来水冲洗。 4．分化液分化30s。 5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。 6．置伊红染液2min。 7．自来水冲洗。 8．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）1min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min →中性树脂封固，镜下观察。冰冻切片不用脱蜡，可固定后直接染色，其方法与石蜡切片相同。

线索细胞图集

线索细胞: 要查线索细胞就一定要做涂片染色，但不包含在常规检查之中。线索细胞是加特纳菌或小杆菌（这两种菌常见）感染正常的鳞状形状上皮细胞，使正常的上皮细胞形态发生改变，如边缘不整齐、粗糟、透明度不高等。主要是结合其它的检查项目来确定是否有阴道炎及指导用药。微生物本科教材：BV诊断的金标准是革兰氏染色发现线索细胞。镜检发现大量短小杆菌及上皮细胞，酸碱度，胺试验为常用检测方法。一般的描述是：线索细胞来自于大型扁平上皮细胞，其表面附着有大量的短杆菌，表面看起来显得粗糙、有斑点和颗粒，细胞边缘不整齐。这种细胞的出现多与细菌性阴道炎有关，故发现大量的线索细胞，可初步怀疑患者有此病。这个图片（未染色的）: 线索细胞的图片:

细菌性阴道病称加特钠菌性阴道炎，阴道嗜血杆菌性阴道炎和厌氧性阴道炎。在1983年斯德哥尔摩国际阴道炎，阴道病会议上正式统一命名为细菌性阴道病。诊断依据：一，阴道分泌物量多、恶臭，胺试验阳性，即加一滴10%氢氧化钾液于涂有阴道分泌物的玻片上，可闻到挥发出来的腥臭味。

二，阴道分泌物PH>4.5。三，用阴道分泌物涂片革兰氏染色镜检；可检见线索细胞。即阴道鳞状上皮细胞表面附有许多革兰氏阴性细菌，变异小球菌和杆菌，看上去表现粗糙不平，细胞膜缺加，血基不整齐，呈锯齿状模糊不清，胞浆粒状红染，占脱落上皮细胞20%以上。四，混合菌群阳性。阴道分泌物PH>4。7常提示BV，滴虫性阴道炎和宫劲炎，相当多的无以上感染的妇女PH>4.7，但若PH<4.7,事实上已经可是排除BV。鱼腥味不会发生在正常妇女或霉菌性阴道炎时，但滴虫性阴道炎时可能发生。所谓“线索细胞”是诊断标准中特异性最高的一项，是指阴道上皮细胞有大量的细菌附着其上，使其边缘成锯齿状而模糊不清。但是正常上皮细胞偶然也会在表面附着不少的细菌，使之看起来“模糊”。阴道上皮的这种表现作为诊断可能由于过分主观而用处不大。湿片中的一些其他特点对临床大有帮助，BV妇女阴道中有大量小细菌聚集成团浮动，很难见到大型的乳酸杆菌，大量形态典型的乳酸杆菌存在是否定BV的有力证据。BV患者并无白细胞计数的增加（指WBC数目超过阴道上皮细胞数目）而这种现象发生于滴虫性阴道炎，宫颈炎，偶见于霉菌性阴道炎和混合感染. 值得强调的是，必须依靠特异的临床和革兰氏染色标准来诊断BV。阴道加德勒氏菌的存在与否亦不能用以诊断BV。 BV妇女阴道内的菌群能产生的有机酸，其质与量与正常妇女区别显著，故可使用气液色谱仪鉴别诊断。但并不比临床或革兰氏诊断标准更为准确。由于加德勒氏杆菌大量在正常妇女中存在，所以培养对于BV的诊断无决定性的作用。细菌性阴道病的诊断与治疗细菌性阴道病（Bacterial Vaginosis BV）是由阴道加特纳尔氏菌（Garanerella）与某些厌氧菌混合感染引起的，曾称非特异性阴道炎（nonspecific Vaginitis）、阴道嗜血杆菌性阴道炎（Haemophilus Vaginits)、加特纳尔氏菌性阴道炎（Gardnerella Vaginitis）、棒状杆菌性阴道炎（Corynebacterium Vaginitis ）、厌氧性阴道病（annerobic Vaginosis）等。一、诊断：⒈临床表现：BV 患者约半数可无症状。有症状时主要表现为阴道分泌物增多，伴鱼腥味，尤其是性交后更为明显。因碱性精液使阴道pH值上升，促进加特纳尔氏菌和其它厌氧菌生长，引起胺类释放所致。少数患者可有轻度外阴瘙痒及灼热感，检查时可见阴道口有灰白色匀质、稀薄乳状的阴道分泌物。分泌物容易从阴道壁擦掉，阴道粘膜无充血、斑点等炎症改变。部分患者检查时即可闻到恶臭或鱼腥味。⒉实验室检查：由于BV病是乳酸杆菌减少或缺失，加特纳尔氏菌和厌氧菌增加，以乳酸杆菌和加特纳尔氏菌的数量比例变化作为诊断参考，而培养法无大的意义。方法：取阴道分泌物作涂片，革兰氏（或白带十项染液）染色，油镜下观察5～8个视野，记录各种细菌的数量。乳酸杆菌为G＋大杆菌，加特纳尔氏菌为G－小杆菌；动变杆菌为G－弧菌。涂片中乳酸杆菌数量的判断标准：（＋）表示平均每个视野＜1个；（＋＋）表示平均每个视野1～5个；（＋＋＋）表示平均每个视野6～30个，如非BV，只见乳酸杆菌或其数量为（＋＋）或（＋＋＋），仅见少许加特纳尔氏菌，BV则为混合菌群；不仅有加特纳尔氏菌，还有其它G＋和G－杆菌，而乳酸杆菌缺乏或仅有（＋）至（＋＋），据报道指出患者阴道杆菌消失，即使乳酸杆菌阴性的患者，数量仅为（＋）。该项检查可作为BV的诊断标准之一。⒊线索细胞检查：BV阴道分泌物涂片中，常见有G－杆菌粘附于上皮细胞表面，称之为线索细胞（cluecell）。最常见粘附于线索细胞上的细胞是加特纳尔氏菌，其次是动弯杆菌，国外学者认为寻找线索细胞在阴道分泌物中是诊断BV的重要指标。方法：取阴道分泌物与0.1％美兰混合或NS湿片在高倍镜下检查，BV患者阴道分泌物多数可找到线索细胞（即边缘不整齐，呈锯齿状且模糊的上皮细胞）。涂片背景中白细胞少于上皮细胞，如阴道分泌物革兰氏染色，线索细胞更明显。据报道用丫啶橙染色法，荧光显微镜检

Masson三色染色试剂盒说明书

Masson三色染色试剂盒说明书 Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）【产品介绍】 Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。淡绿分子量最大。因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。【用途】主要用于胶原纤维染色。【产品特点】 ①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。切片：所有类型。【产品组成】编号名 SBJ0126 （7×50ml）SBJ0126 （7×100ml） SBJ0126 （7×500ml） Storage 试剂（A） A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RT A2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】 1、切片脱蜡至水。 2、试剂（A）染色5min～10min。 3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。 4、蒸馏水或者去离子水洗1min。 5、试剂（D）染色5～10min。 6、试剂（E）洗1min。 7、试剂（F）洗1～2min。 8、试剂（E）洗1min。

妇科白带涂片多项检查快速染色技术的临床应用研究

妇科白带涂片多项检查快速染色技术的临床应用研究目的：探讨分析妇科白带涂片多项检查快速染色技术的临床应用价值。方法：选取2986例妇科疾病患者，均采取白带涂片进行妇科白带涂片多项检查快速染色技术诊断。结果：2986例妇科疾病患者经妇科白带涂片多项检查快速染色技术诊断，检出1940例患者存在病原菌或是有上皮细胞的异常，阳性检出率为65.0%。其中461例（23.8%）患者检出阴道加特纳菌，407例（21.0%）患者检出霉菌，243例（12.5%）患者检出滴虫，115例（5.9%）患者检出纤毛菌，8例（0.4%）患者检出核异质细菌，2例（0.1%）患者检出癌细胞。结论：妇科白带涂片多项检查快速染色技术可在几分钟内快速检出妇科的霉菌性或滴虫性或细菌性阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂的程度、宫颈癌的癌前病变、宫颈癌、卵巢的功能异常等情况，使妇科疾病的病原体检出率与临床的诊疗水平得到提高。标签：妇科白带涂片；多项检查快速染色技术；临床应用妇科白带涂片多项检查快速染色技术能够在一张涂片上同时进行霉菌、滴虫、阴道加特纳菌、纤毛菌、淋球菌、阴道炎、核异质细胞和癌细胞等多项检查，还能够对阴道的鳞状细胞进行分类计数，对卵巢的功能进行观察，操作简便，背景清晰，检查结果准确快速，特别适合基层医院对妇科疾病的普查和筛查，检出率较高[1]。探讨分析妇科白带涂片多项检查快速染色技术的临床应用价值，具体报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料选取笔者所在医院妇科门诊2012年4月-2013年3月收治的2986例妇科疾病患者，年龄21～70岁，平均（40±6.5）岁。患者主要以白带异常、外阴瘙痒等症状表现来院就诊。 1.2 方法取材和涂片：对霉菌、滴虫、纤毛菌、细菌性的阴道炎等疾病进行检查，需要取阴道的后穹隆处白带或者白带较多处的标本进行直接涂片；如果存在宫颈糜烂就需要对核异质细胞和癌细胞进行检查，取材以宫颈刮片最佳。将白带涂抹在载玻片一端的1/3处，涂片区域大小以指头大小为宜，且厚薄适中。染色方法：在白带涂片干后，使用酒精灯进行固定，先滴红色R1液3～4滴，盖住涂膜展开，进行15 s染色，把染液倒掉，进行水洗后将涂片上水分随风甩干，甩掉涂片上多余的水分，再滴蓝色R2液3～4滴，15～30 s染色，倒去染液流水冲洗后趁湿镜检[2]。 2 结果

微生物的革兰氏染色实验报告

微生物的革兰氏染色一、实验目的： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法； 2、了解革兰氏染色的原理； 3、巩固显微镜的使用。二、实验原理：革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分： 1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片； 2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物； 3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色； 4、复染：复红配成碳酸复红作为复染剂。成分占细胞壁干重的% 革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌肽聚糖含量很高（50~90）含量很低（~10）磷壁酸含量较高（<50）无类脂质一般无（<2）含量较高（~20）蛋白质无含量较高G-和G+细胞壁的比较： 1、阳性（G+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。 2、阴性（G-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。三、实验步骤： 1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。 2、将涂片用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。 3、滴加1滴结晶紫染液，染色1min，水洗。 4、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗 5、滴加脱色乙醇，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。 6、水洗，滴加番红复染液，复染1min，水洗，晾干 7、镜检并拍照。四、注意事项： 1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。实验结果与讨论： 1、结果：高倍镜下观察的菌体图像：

革兰氏染色的机理和步骤

1.革兰氏染色的机理和步骤机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。 G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。 G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。 ②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。 ③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。 ④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用） ⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。 ⑥水洗，吸干。 ⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。 ⑧干燥镜检。 2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种

失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。 3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。（第2张中的图）还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。 PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2） ②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。 ③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。 ④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。 ⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂类;减小通风量。 3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态

白带常规涂片检查与生殖道感染情况的调查

白带常规涂片检查与生殖道感染情况的调查发表时间：2013-08-20T17:46:32.420Z 来源：《医药前沿》2013年第21期供稿作者：张明间[导读] 预防为主，注重生殖健康教育，提高育龄妇女的防范意识，注重个人卫生习惯，提高防病意识。张明间（广东省云浮市罗定市妇幼保健院 527200）【摘要】目的通过白带常规涂片检查，了解育龄妇女生殖道被各种病原体感染的情况。中国性病疾病预防控制中心已明确规定，白带涂片常规检查的项目包括：革兰氏阴性双球菌(淋球菌)、滴虫、霉菌（念珠菌）、细菌性阴道病（BV）、白细胞≥（++）。滴虫、霉菌是女性生殖道常见的感染病菌。生殖道感染是严重威胁人类生殖健康、特别是妇女身心健康的重要疾病。它不仅能引起妇女自身多种并发症和后遗症，而且还影响着下一代的健康。所以防治妇女生殖道感染显得尤为重要。近年来对来我院门诊就诊的1864例年龄在20－60周岁自感不适的女性进行了白带涂片常规检查，结果如下。【关键词】白带常规生殖道感染【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）21-0355-02 1 材料与方法 1.1 标本来源是选择来我院就诊的年龄在20－60周岁自感不适的妇女共1864例进行白带常规检查。 1.2 检查方法：由医生用阴道拭子对患者进行取阴道分泌物送检，接到标本后，将阴道拭子先涂一张干片，然后涂一张生理盐水湿片供检查滴虫用，干片用革兰氏染色，油镜检查。 2 结果 2.1 1864例妇女阴道分泌物检查结果显示，滴虫性阴道炎检出97例，占8.2%，霉菌性阴道炎检出242例，占12.9%，非特异性阴道炎检出173例，占9.2%，细菌性阴道炎检出968例，占51.9%。其中滴虫性阴道炎合并细菌性阴道病98例，霉菌性阴道炎合并细菌性阴道病117例，非特异性阴道炎合并细菌性阴道病14例，伴有滴虫又有霉菌合并细菌性阴道病21例。表1 1864例疑生殖道感染分泌物检查情况 2.2 来我院就诊的在20－40周岁自感不适的患者1175例阴道分泌物常规检查得出，滴虫性阴道炎99例，占8.4%，霉菌性阴道炎149例，占12.6%，非特异性阴道炎110例，占9.36%，细菌性阴道病611例，占52.0%。其中滴虫性阴道炎合并细菌性阴道病62例，霉菌性阴道炎合并细菌性阴道病73例，非特异性阴道炎合并细菌性阴道病9例，伴有滴虫又有霉菌合并细菌性阴道病14例。表2 20－40周岁1175例疑生殖道感染分泌物检查情况 2.3 涂片标本中检出WBC≥（++）者，1864例中有319例和1175例中有202例。 3 讨论预防为主，注重生殖健康教育，提高育龄妇女的防范意识，注重个人卫生习惯，提高防病意识。要采取有效的干预措施和预防控制生殖道感染的发生率和流行，必须大力开展卫生知识宣传教育，加强人们的健康道德意识，着重加强经期、婚期、孕期、产褥期、节育期的个人卫生，避免或减少病原体入侵的机会。也要注意非婚性接触和不洁性行为以及防止不检点的配偶所带来感染的机率。20－40周岁育龄妇女生殖道极易感染，发病率是高于其它年龄段，这个年龄段正处于生育高峰期，当生殖道一旦感染主要侵犯生殖系统，就会引起妇女自身的生殖疾患。如：盆腔炎、不孕、难产、死产、还可能导致新生儿先天性感染，出生缺陷甚至死亡。从资料显示细菌性阴道病患者高达52%，最多患病率要比滴虫阴道炎高近7倍，比霉菌性阴道炎高4倍。资料还显示细菌性阴道病和滴虫性阴道炎，霉菌性阴道炎有明显的差别。从表2可以看出，检出的结果基本持平，细菌性阴道病感染率高达52.0%，高于滴虫性阴道炎近7倍，是霉菌性阴道炎的近4倍，很明显，细菌性阴道病与滴虫性阴道炎、霉菌性阴道炎有明显的差别。引起细菌性阴道病感染和滴虫性阴道炎以及霉菌性阴道炎混合感染可协同增加早产的危险性，作者建议来就诊的育龄妇女自感不适或早期无症状的都应作分泌物常规检查为佳。参考文献 [1]刘达森、生殖道感染的流行情况，影响因素及防治对策，中国性病艾滋病防治202.8（2）：120. [2]王晓云、衣原体检测诊断技术研究现状：中国性病艾滋病防治202.8（2）125.

微生实验报告 2012.10.10 实验一细菌的简单染色和革兰氏染色

微生实验报告姓名： xx 专业年级：2011级生物技术学号：1032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色一、实验目的学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。二、实验原理用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔

径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。三、实验器材 1、菌种：金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂：草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚：乙醇=7:3），xx柏油。 3、器材：废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。四、实验方法（一）简单染色 1．涂片：取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干：让涂片自然晾干。 3．固定：

革兰氏染色法

革兰氏染色法原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。鉴定原理革兰氏染色该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。特性染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染后用酒精脱色，再用蕃红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G+）。被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（G-）。革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。

AB-PAS染色试剂盒操作步骤及注意事项

AB-PAS 染色试剂盒操作步骤及注意事项 AB-PAS 染色试剂盒货号:G1285 有效期：6个月有效。产品简介: 糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。阿利新蓝和PAS 技术联合使用可鉴别同一组织切片中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。这种技术也常用作广泛检测黏蛋白的手段。该技术染色阴性，可明确断定该物质不是黏蛋白。在大多数方法中，切片先经标准的阿利新蓝（pH 值为2.5）染色，在使用PAS 技术。阿利新蓝可将唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成蓝色。PAS 技术可将中性黏蛋白染成深红/红紫色，同时将既含中性黏蛋白有含酸性黏蛋白的组织和细胞染成深浅不同的紫色，这是有于阿利新蓝与Schiff 试剂结合并反应。上述染色常可出现在含有中性黏蛋白和唾液黏蛋白的小肠杯状细胞中。阿利新蓝是类铜钛花青染料，这种阳离子染料与酸性基团结合，也即阿利新蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。分子中带正电荷的盐键与酸性黏蛋白多糖物质中带负电荷的酸性基团结合形成不溶性的复合物而呈蓝色，再于PAS 进行复合染色，就编号名称 6×50ml 6×100ml Storage 试剂（A ）阿利新蓝染色液50ml 100ml 4℃避光试剂（B ）过碘酸溶液50ml 100ml 4℃避光试剂（C ）Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃避光试剂（D ）苏木素染色液50ml 100ml 4℃避光试剂（E ）酸性分化液50ml 100ml RT 试剂（F ）Scott 蓝化液50ml 100ml RT

革兰氏染色法的过程及原理

革兰氏染色法的过程及原理一，过程 1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 2 ．染色 ( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 ( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 ( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。 ( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。 ( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。二，原理革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。青霉素作用机制干扰细菌细胞壁的合成。青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁的作用溶菌酶作用机制：是一种能水解致病菌种黏多糖的碱性酶，只要通过破坏细胞壁中的 N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的 B-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物流出而使细菌溶解，溶菌酶还可以和带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA，RNA，脱辅

凯基7-AAD染色试剂盒说明书

7-AAD染色试剂盒凯基7-AAD染色试剂盒 (Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit) Cat number：KGA For Research Use Only Store at4℃for one year Expire date： A．试剂盒说明 7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD同PI 有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。本试剂盒适用于培养的细胞染色，可应用于荧光显微镜、激光共聚焦计或流式细胞仪检测。二、试剂盒组份 1×10倍。三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪、激光共聚焦或荧光显微镜：激发波长546nm，发射波长647 nm 微量移液器、1.5m L Microtube、载玻片四、使用注意事项 1．微量试剂取用前请离心集液。 2．7-AAD避光保存及使用。 3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。 4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。五、操作方法 1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞； 2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min； 3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞； 4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。 A．荧光显微镜观察 1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞； 2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；（2）用PBS洗涤细胞两次；（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；（5）避光、室温反应5 min。 3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647nm，7-AAD 荧光信号呈红色。 B．流式细胞仪分析用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。 7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。

实验二革兰氏染色法

实验二革兰氏染色法【实验目的】 1.学习并初步掌握革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 3.巩固显微镜油镜的使用方法。【实验仪器、材料】 1.菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌菌液。 2.染色剂：革兰氏染色试剂盒（结晶紫染色液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复红染液）。 3.仪器及其他物品：显微镜、香柏油、无水乙醇、载玻片、擦镜纸、滤纸、酒精灯、试管架、废液缸、记号笔、接种环、镊子、打火机等。【实验内容】革兰氏染色法一、染色标本制备 1.涂片取一张洁净的载玻片，滴加少许生理盐水，用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，与生理盐水研磨均匀，做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（事先在载玻片的反面滴加菌液的相应位置做好标记） 2.干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥。(温度不宜过高) 3.固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常

用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。二、染色 l.初染滴加结晶紫覆盖菌膜，染lmin，自来水缓缓冲洗，甩去积水。 2.媒染滴加卢氏碘液，染lmin，水洗，甩去积水。 3.脱色滴加95%乙醇数滴，20s~30s，见紫色脱下立即用水冲洗，甩去积水。 4.复染滴加石炭酸复红液，染lmin，水洗，甩去积水，标本片用滤纸吸干。三、镜检待染色片充分干燥后，用油镜观察。【实验结果】葡萄球菌呈葡萄状排列，呈紫色，为革兰氏阳性菌；大肠杆菌为散在的短小杆菌，呈红色，为革兰氏阴性菌。注：绘图展示染色结果【结果分析、讨论（结论与评价）】注：分析你的染色结果是否正确？如果不正确，请分析原因。