γ射线照射对IER5基因mRNA表达的影响

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脑瘤ＢＴｌ２５。制作方法参见文献［３］。接种后定期测量肿瘤生长情况，待肿瘤大约为１．００ｃｍ×１．００ｃｍ，体重为２９ｇ左右，７射线照射裸鼠。

３．照射：军事医学科学院辐射中心６０ｃｏ源７射线，吸收剂量率为１８３．６７ｃＧｙ／ｍｉｎ，采用套照方式。具体操作如下：①ＡＨＨｌ与ＨｅＬａ细胞照射后重新置３７℃、５％ＣＯ，孵箱中继续培养。按照培养时间与辐射剂量大致将实验方案分为两大部分。一为量效研究，即照射后继续培养均为ｇｈ，但分别照射０．５、２、４、６、１０和１５Ｇｙ。二为时效研究，即选用的吸收剂量分别为２和１０Ｇｙ，照射后继续培养的时间分别为０、２、４、８、１２和２４ｈ。②接种肿瘤的裸鼠，分２Ｇｙ照射组和４Ｇｖ照射组。照射后继续存活４ｈ，再取肿瘤组织。

４。细胞与肿瘤总ｍＲＮＡ的提取：按照活体脏器总ｍＲＮＡ提取方法严格操作，对实验器皿采取防止ＲＮＡ酶降解的一些措施，其总ｍＲＮＡ提取方法与离体培养的ＡＨＨｌ、ＨｅＬａ细胞一样，均按照Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司提供ｌｍｌＴｆｉｚｏｌ试剂说明书操作。总ｍＲＮＡ提取完毕后取２ｇｌ稀释４０倍进行分光光度计浓度与纯度的测定。取总５出ｍＲＮＡ在１％甲醛．琼脂糖凝胶中通过电泳检验ＲＮＡ的完整性。

５．由总ｍＲＮＡ反转录ＤＮＡ：采用Ｐｒｏｔｏｓｃｆｉｐｔ删第１链ｃＤＮＡ合成试剂盒（ＢｉｏＬａｂｓ公司），并按照其说明书进行操作。合成后保存在一８０℃冰箱或立即进行实时ＰＣＲ测试。

６．设计引物序列及实时ＰＣＲ测试：测试ＩＥＲ５基因ｍＲＮＡ水平采用７３００实时ＰＣＲ仪，反应循环次数为４０次，反应体系为２０肚ｌ，反应条件为５０．０。Ｃ２ｍｉｎ（主要是通过ＵＮＧ酶消化测试样品中残留的ＲＮＡ）、９５．０℃１０ｍｉｎ（主要用于ＵＮＧ酶灭活与使摸板变性）、９５．０℃１５ｓ、６０．０。Ｃ１ｍｉｎ（退火与延伸温度都是６０℃，总时间为１ＩＩｌｉｎ）。测试数据的处理为该仪器自有的７３００系统ＳＤＳ软件。设计的测试引物序列见表１，其中Ｂ．ａｃｔｉｎ为内参基因。

结果

正常人ＡＨＨｌ与ＨｅＬａ细胞均受０．５、２、４、６、１０和１５Ｇｙ照射后，继续培养４ｈ并连同对照组细胞提取总ｍＲＮＡ。甲醛琼脂糖凝胶电泳，检测ｍＲＮＡ的质量，各组样品中．２８ｓ和１８ｓｍＲＮＡ，比值为１。９６：１，表明无降解现象。ＡＨＨｌ细胞０、２和１０Ｇｙ照射后４ｈ的总ｍＲＮＡ结果见图１。

表１实时ＰＣＲ测试的引物序列

图１ＡＨＨＩ细胞不同剂量照射后总ｍＲＮＡ结果

在此基础上将提取的总ｍＲＮＡ反转录为ＤＮＡ，再进行实时ＰＣＲ测试，ＡＨＨｌ与ＨｅＬａ细胞的测试结果见图２。

图２ＡＨＨｌ与ＨｅＬａ细胞照射后４ｈ时ＩＥＲ５

相对基因表达量与剂量之间的关系

将两种细胞正常情况下ＩＥＲ５基因表达量都设定为１．００，结果发现ＡＨＨｌ细胞的ＩＥＲ５相对表达量都比对应组的ＨｅＬａ细胞高，说明在同样的实验条件下ＡＨＨｌ细胞比ＨｅＬａ细胞对照射高敏感，更容易表达。对于ＡＨＨｌ细胞与ＨｅＬａ细胞，ＩＥＲ５相对表达量随着剂量的增大，都表现出先增加后下降再上升的变化趋势，但两者不同在于ＨｅＬａ细胞在１０和１５Ｇｙ时的ＩＥＲ５相对表达量小于６Ｇｙ时，出现了再次下降、恢复的趋势。

此外，我们依然采用了这两种细胞，选择了２和１０Ｇｙ，了解在特定照射剂量下ＩＥＲ５相对表达量与时间之间的关系，见图３。

将正常ＡＨＨｌ细胞的ＩＥＲ５表达量设为１．００，并按此确定其他实验组样品的ＩＥＲ５相对基因表达量。

从图３可看出，尽管辐射剂量不同，但是对于ＡＨＨｌ

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γ射线照射对IER5基因mRNA表达的影响

作者：丁库克，沈晶晶，许莉莉，李延玲，周萍，马斌荣，赵增强，隋建丽，周平坤

作者单位：丁库克,沈晶晶,许莉莉,李延玲,周萍,马斌荣(首都医科大学生物医学工程学院,北京

,100069)，赵增强,隋建丽,周平坤(军事医学科学院辐射与放射医学研究所)

刊名：

中华放射医学与防护杂志

英文刊名：CHINESE JOURNAL OF RADIOLOGICAL MEDICINE AND PROTECTION

年，卷(期)：2008,28(1)

被引用次数：2次

参考文献(9条)

1.Williams M;Lyu M;Yang YL IER5,a novel member of the slow-kinetics immediate-early genes[外文期刊] 1999(03)

2.龙贤辉;徐勤枝;贺性鹏5 cGy γ射线照射正常人淋巴母细胞基因表达转录谱的变化[期刊论文]-辐射防护

2006(02)

3.邓勇军;戎铁华;周军高表达MUC1的人食管癌裸鼠移植瘤模型的建立[期刊论文]-癌症 2007(07)

4.王会平;龙贤辉;徐勤枝基因芯片技术分析20 cGy γ射线照射人淋巴母细胞中差异表达的基因谱[期刊论文]-辐射防护 2006(03)

5.Tachiiri S;Katagiri T;Tsunoda T Analysis of gene-expression profiles after gamma irradiation of normal human fibroblast[外文期刊] 2006(01)

6.Cirelli C;Tononi G Gene expression in the brain across the sleepwaking cycle[外文期刊] 2000(2)

7.Kis E;Szatmari T;Keszei M Microarray analysis of radiation response genes in primary human fibroblasts[外文期刊] 2006(05)

8.Okada A;Kushima K;Aoki Y Identification of early-responsive genes correlated to valproic acid-induced neural tube defects in mice 2005(04)

9.Pawlik TM;Keyomarsi K Role of cell cycle in mediating sensitity to radiotherapy 2004(04)

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1.张增利.ZHANG Zengli辐射对小鼠骨髓基质细胞分泌血管内皮生长因子的影响[期刊论文]-辐射研究与辐射工艺学报2006,24(1)

2.张贺英X射线对肺癌细胞系p57<'kip2>蛋白表达的影响[学位论文]2007

3.蒋幼凡.刘晓.岳秀.雷淑慧.JIANG You-fan.LIU Xiao.YUE Xiu.LEI Shu-hui X射线对肺腺癌细胞E-

cadherin/β-catenin及其相关生物学特性的影响[期刊论文]-肿瘤2008,28(6)

4.李士坤.徐俊.陈克河.任庆梅.LI Shi-kun.XU Jun.CHEN Ke-he.REN Qing-mei分化诱导剂对Eca-109细胞DNA聚合酶β及X-射线修复交联-补充蛋白1表达的影响[期刊论文]-中国基层医药2008,15(8)

5.聂新民.黄竹英.姚辉.袁才佳.Nie Xin-min.Huang Zhu-ying.Yao Hui.Yuan Cai-jia X射线照射后鼻咽癌细胞系HNE1多药耐药基因MDR1的表达研究[期刊论文]-中国抗生素杂志2008,33(4)

6.徐志静.康丽丽.赵玉利.李方国CLIA在肿瘤标志物检测中的应用[期刊论文]-医学检验与临床2008,19(3)

7.隋晓梅X线照射对人鼻咽鳞癌CNE-1细胞株耐药基因及其蛋白表达的影响[学位论文]2007

8.邹华伟.谭永刚.朱喜科.李凯.韩(王争)波.张贺英.徐茹.ZOU Hua-wei.TAN Yong-gang.ZHU Xi-ke.LI Kai.HAN Cheng-bo.ZHANG He-ying.XU Ru X射线对肺癌细胞系p57kip2转录表达的影响[期刊论文]-中华肿瘤防治杂志2006,13(20)

9.杨滨.阎华.马萍.邹华伟.尚涛.李东博.YANG Bin.YAN Hua.MA Ping.ZOU Hua-wei.SHANG Tao.LI Dong-bo X射线照射对HeLa细胞TP和D PD酶表达影响的研究[期刊论文]-中华肿瘤防治杂志2008,15(21)

10.龙贤辉.周平坤.LONG Xian-hui.ZHOU Ping-kun缝隙连接蛋白43基因及其辐射诱导表达反应[期刊论文]-国外医学（放射医学核医学分册）2005,29(6)

引证文献(2条)

1.鲁玮瑗.刘志翔.李莉.马惠苹.郑坤洋.丁库克用MATLAB探索肿瘤细胞辐射效应的定量分析[期刊论文]-中国医学物理学杂志 2010(5)

2.李秀楠.李莉.杨川杰.郝淳.乔茶.杨芬.周平坤.王佩.袁增强.李延玲.鲁玮媛.张为远.丁库克IER5基因对HeLa细胞辐射敏感性的影响[期刊论文]-生物化学与生物物理进展 2009(7)

本文链接：https://www.360docs.net/doc/117193959.html,/Periodical_zhfsyxyfhzz98200801002.aspx