-1 河南省医学科技攻关计划项目申请书2007

编号项目分类重大攻关项目□

普通攻关项目□

软科学项目□

河南省医学科技攻关

计划项目申请书

项目名称VEGF（血管内皮生长因子）在糖尿病牙周炎患者牙龈组织中的表达

研究领域基础□临床□预防□药学□其它□

所属学科名称口腔医学研究起止时间2008.7月---2011.7月承担单位（公章）

课题负责人

河南省卫生厅

河南省医学科学院

二O O 年月

说明

1、本申请书各项内容必须实事求是，逐项认真填写。表达要明确、严谨、详细、具体，内容请务必打印，必要时另附详

细技术材料。凡填写内容不符合要求、手续不完备、字迹潦草者，不予受理和评审。

2、申请者和协作者所在单位及其所属学术委员会必须认真评审，对项目的价值和可行性等提出具体意见，共同签章后方

可上报。

3、“创新项目”填写“研究领域”，“引进项目”填写“技术类别”。

4、所有栏目如页面不够，均可自行加页。

中华人民共和国国家标准

学科分类与代码

Classification a nd cod e of d iscip lines

(G B/T13745--92)

代码学科名称代码学科名称代码学科名称

310〃11 医学生物化学320〃2440 内分泌学330〃14 毒理学

310〃14 人体解剖学320〃2445 风湿病学与自体免疫病学330〃21 流行病学

310〃17 医学细胞生物学320〃2450 变态反应学330〃24 传染病学

310〃21 人体生理学320〃2499 内科学其他学科330〃31 环境医学

310〃24 人体组织胚胎学320〃27 外科学330〃34 职业病学

310〃27 医学遗传学320〃2710 普通外科学330〃37 地方病学

310〃31 放射医学320〃2715 显微外科学330 . 41 社会医学

310〃34 人体免疫学320〃2720 神经外科学330〃47 食品卫生学

310〃37 医学寄生虫学320〃2725 颅脑外科学330〃51 儿少卫生学

310〃41 医学微生物学320〃2730 胸外科学330〃54 妇幼卫生学

310〃44 病理学320〃2735 心血管外科学330〃57 环境卫生学

310〃47 药理学320〃2740 泌尿外科学330〃61 劳动卫生学

310〃51 医学实验动物学320〃2745 骨外科学330〃64 放射卫生学

310〃54 医学心理学320〃2750 烧伤外科学330〃67 卫生工程学

310〃57 医学统计学320〃2755 整形外科学330〃71 卫生经济学

310〃61 生物医学工程学320〃2760 器官移植外科学330 · 81 卫生管理学

310〃99 基础医学其他学科320〃2765 实验外科学340 · 20 特种医学

320 临床医学320〃2799 外科学其他学科350 药学

320〃11 临床诊断学320〃31 妇产科学350 · 10 药物化学

320〃1140 医学影像学320〃34 儿科学350 · 20 生物药物学

320〃14 保健医学320〃37 眼科学350 · 35 药剂学

320〃1420 运动医学320〃41 耳鼻咽喉科学350 · 40 药效学

320〃1430 老年医学320〃44 口腔医学520 · 60 计算机应用

320〃17 理疗学320〃47 皮肤病学840〃7170 计划生育学

320〃21 麻醉学320〃51 性医学870 图书馆、情报与文献学320〃24 内科学320〃54 神经病学880 教育学

320〃2410 心血管病学320〃57 精神病学910 · 4030 卫生统计学

320〃2415 呼吸病学320〃64 核医学

320〃2420 结核病学320〃67 肿瘤学

320〃2425 胃肠病学320〃71 护理学

320〃2430 血液病学330 预防医学与卫生学

简表

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研究内容和意义（包括学术思想、立论依据、攻关目标和具体内容；理论意义和应用价值分析）

学术思想：

牙周炎是一种常见的造成牙周组织破坏的慢性感染性疾病，越来越多的实验证实, 细胞因子在牙周组织的破坏机制中起到重要的免疫调节作用和直接介导作用，正确判断和预测牙周病的发展变化，无疑给牙周病的治疗和预防提供了有力支持，而细胞因子作为牙周的生化标记物之一，是最有前景的辅助诊断物质。

细胞因子是由体内多种细胞产生的一大类糖蛋白。正常情况下，细胞因子之间相互制约、相互影响，以网络形式发挥着生物学效应。当机体受到异常刺激时，某些细胞因子便会异常增多，打破细胞因子正常的网络系统，从而引起全身或局部组织的病理反应。

血管内皮生长因子是Ferrara 等于1989 年体外培养牛垂体星状细胞时分离出的一种糖蛋白,是内皮细胞特异性最强的丝裂原,具有特异性促进血管增殖的作用。又因为它能改变血管通透性,促使血浆蛋白的渗出,形成富含纤维素并有利于新血管形成的细胞外基质, 故也称为血管渗透因子。VEGF 可在很多正常成人和动物组织中表达,但一般表达水平较低[1,2]

牙周病是口腔最常见的疾病,是人类缺牙的主要原因之一。糖尿病是一种复杂的代谢紊乱综合症,是牙周病的主要危险因素之一。牙周病这一口腔多发病对于糖尿病等全身性疾病的影响和危害正逐渐被人们所了解和重视,一旦人们能够研究出牙周病与糖尿病之间的相关性及其相关程度,将会对糖尿病的预防和治疗产生积极作用。

牙周病形成的始动因素———牙菌斑中含有大量细菌,有诱导血小板凝集、促进血栓形成的作用;而糖尿病患者有特异性的微血管病变,这种病变也存在于牙周组织的微循环中,血糖升高,影响了正常的血流,使血小板黏附聚集加强,抗凝因子减少,红细胞脆性增加,造成组织缺氧,血管内皮损害,有利于细菌及毒素的侵袭和感染的发生[3.4.5] 。

说明牙周病与糖尿病发病机制方面有相互促进的关系。而VEGF可增加微血管的通透性和特异性的与血管内皮细胞受体结合,促进血管内皮细胞的分裂和增殖,进而导致新生血管的形成，被公认在血管生成中作为一个中心调节者,是最有力的血管生成因子。

立论依据：

VEGF 的生物学特性主要表现在:增加微血管的通透性和特异性的与血管内皮细胞受体结合,促进血管内皮细胞的分裂和增殖,进而导致新生血管的形成。被公认在血管生成中作为一个中心调节者 ,是最有力的血管生成因子。

VVEGF 具有维持原有血管密度及维持血管运送营养物质所必需的通透性的作用, 在很多正常成人和

动物的组织中表达, 但一般水平较低。牙龈上皮棘层及角化层细胞有V EGF 的低量表达, 而炎症牙龈除了上皮细胞外, 还在血管内皮细胞中发现V EGF 的表达。O yama 等[6 ]在龈沟液及唾液检测到V EGF, 也从侧面证实上皮细胞分泌V EGF。提示正常生理代谢情况下上皮角质细胞低水平分泌的V EGF 既可维持生理

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条件所需的血管密度和血管通透性, 而炎症状态下不仅上皮细胞分泌V EGF 增加, 而且血管内皮细胞可能通过自分泌途径分泌V EGF 使炎症组织的血管密度和血管通透性增加。

随着人民生活水平的不断提高和人类平均寿命的延长,糖尿病已成为多发病和常见病，牙周病是口腔最常见的疾病,是人类缺牙的主要原因之一。糖尿病的发生与发展可加重牙周炎症并影响其治疗效果,反之,严重的牙周炎症对糖尿病也有相似的影响[7]。牙周病已被认为是糖尿病的重要并发症之一。[8 ]糖尿病合并牙周病时

1.牙周血管改变

牙周组织血管的改变包括微血管形态、微血管流态和血管周围形态三个方面。糖尿病的血糖升高影响正常的血流, 使血小板粘附、聚集加强, 抗凝因子减少, 红细胞脆性增加, 造成组织缺氧, 血管内皮损伤, 有利于细菌及其毒素的侵袭和感染的发生。临床电子显微镜对牙周微血管超微结构观察和动物试验证明, 糖尿病所致的高血糖使细胞外液容易扩张, 形成一种高滤过状态, 引起牙周组织及外周细胞毛细血管的持续性扩张,造成毛细血管壁通透性改变, 并由此造成血浆蛋白在毛细血管壁沉积、进行性血管壁增殖、玻璃样变以及血栓形成和血管腔闭合, 最终导致牙周组织的病理性变化。。静脉压增高可使基底膜增厚, 微血管的改变导致组织局部供血减少, 降低组织营养, 可能降低牙周组织对损伤的恢复能力, 是糖尿病患者易患牙周病的重要原因[9, 10]。

2.病理变化

光电镜研究结果表明, 糖尿病患者特异性的微血管病变同样存在于牙周组织的微血管系统中, 这些改变包括毛细血管基底膜增厚, 增厚的基底膜PA S 阳性, PA S 阳性物质围绕

基底膜增厚是糖尿病代谢异常在小血管壁的表现。

3.发病机理

糖尿病患者由于血糖升高, 可以引起微循环障碍, 影响正常的血流, 使血小板粘附、聚集加强, 抗凝血因子减少, 红细胞脆性增加, 造成组织缺氧, 血管内皮损害, 有利于细菌及其毒素的侵袭和感染的发生。

VEGF的生物学效应及影响因素

㈠生物学效应

⒈增加血管通透性：VEGF可强烈增加血管通透性,主要作用于毛细血管微静脉和小静脉,引起血浆蛋白的外渗。

⒉促进内皮细胞增殖和新生血管形成：VEG F是一种内皮细胞的特异性促有丝分裂原, 在体内,它可诱导血管生成,新生血管的数量与VEGF的表达密切相关;在体外,它可促进内皮细胞增殖。VEGF可导致新生血管形成,

⒊改变细胞外基质：VEG F可诱导内皮细胞基因表达方式,促进纤维蛋白酶和间质胶原酶的表达，也可导致一些细胞外基质，使其更有利于新生血管的生长。

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⒋上调细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的基因表达：VEG F可增加血管ICAM-1的mRNA和蛋白质水平，这可能促成白细胞淤滞，从而形成小栓子，使白细胞激活，释放多种活性物质，破坏血管壁，激活血小板，引起血流缓慢和血栓形成，导致局部缺血加重和最终的新生血管形成。

㈡VEGF及其受体基因表达的调节因素

1.在高糖条件下VEG F及其受体,促进血管内皮细胞增生,增加血管通透性,促进新生血管的形成[11]。在有关糖尿病的实验模型中证实由于高糖所引起的过量氧化物的产生使得VEGF基因表达上调

2.一些细胞因子如:碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源性生长因子 (PDGF)、转化生长因子(TGF)和肿瘤坏死因子(TNF)等对VEGF的表达都有正调节作用。

攻关目标：

本实验的目的在于观察VEGF 在糖尿病合并牙周炎患者牙周组织中表达和分布, 及其与临床指标的关系, 探讨VEGF 在糖尿病牙周炎发生发展，相互促进及影响方面的作用.

理论意义和价值：

VEGF在造成牙周炎的细胞因子网络中是一个重要的成员,因此,我们如果能通过各种途径对VEGF的产生及其生物学效应的发挥进行有效的调控,就可以减轻它对牙周组织的损害,对牙周炎的治疗有着积极的意义。随着研究的不断深入, VEGF及其调控机制的阐述也会越来越完善,相信不久的将来人们一定能认清VEGF在糖尿病牙周炎发生发展、相互促进及影响方面的作用，掌握有效调控VEGF的方法,为彻底战胜牙周炎奠定基础；同时，这也将会对糖尿病的预防和治疗产生积极作用。

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国内外研究现状、水平及发展趋势（包括有何国家、单位曾经或正在从事类似的研究，已经达到的水平，存在的主要问题以及发展趋势。本课题的技术关键，有无创新和特色）

国内外研究现状及存在的问题：

VEGF 的生物学特性主要表现在:增加微血管的通透性和特异性的与血管内皮细胞受体结合,促进血管内皮细胞的分裂和增殖,进而导致新生血管的形成。被公认在血管生成中作为一个中心调节者 ,是最有力的血管生成因子。

VVEGF 具有维持原有血管密度及维持血管运送营养物质所必需的通透性的作用, 在很多正常成人和动物的组织中表达, 但一般水平较低。牙龈上皮棘层及角化层细胞有V EGF 的低量表达, 而炎症牙龈除了上皮细胞外, 还在血管内皮细胞中发现V EGF 的表达。O yama 等[6 ]在龈沟液及唾液检测到V EGF, 也从侧面证实上皮细胞分泌V EGF。提示正常生理代谢情况下上皮角质细胞低水平分泌的V EGF 既可维持生理条件所需的血管密度和血管通透性, 而炎症状态下不仅上皮细胞分泌V EGF 增加, 而且血管内皮细胞可能通过自分泌途径分泌V EGF 使炎症组织的血管密度和血管通透性增加。

糖尿病合并牙周病时

1.牙周血管改变

糖尿病的血糖升高影响正常的血流, 使血小板粘附、聚集加强, 抗凝因子减少, 红细胞脆性增加, 造成组织缺氧, 血管内皮损伤, 有利于细菌及其毒素的侵袭和感染的发生。F rantzis 等观察糖尿病患者的牙龈组织, 发现牙龈的血管内皮下基底膜由于沉积了免疫球蛋白和补体C3 而增厚,影响了正常的营养糖和水的代谢, 使组织易受细菌及其产物如内毒素的侵袭, 并认为微血管形态和功能的改变对糖尿病患者的牙周病发生有特别重要的作用[12]。临床电子显微镜对牙周微血管超微结构观察和动物试验证明, 糖尿病所致的高血糖使细胞外液容易扩张, 形成一种高滤过状态, 引起牙周组织及外周细胞毛细血管的持续性扩张,造成毛细血管壁通透性改变, 并由此造成血浆蛋白在毛细血管壁沉积、进行性血管壁增殖、玻璃样变以及血栓形成和血管腔闭合, 最终导致牙周组织的病理性变化。。静脉压增高可使基底膜增厚, 微血管的改变导致组织局部供血减少, 降低组织营养, 可能降低牙周组织对损伤的恢复能力, 是糖尿病患者易患牙周病的重要原因[9, 10]。

2.病理变化

光电镜研究结果表明, 糖尿病患者特异性的微血管病变同样存在于牙周组织的微血管系统中, 这些改变包括毛细血管基底膜增厚, 增厚的基底膜PA S 阳性, PA S 阳性物质围绕

血管分布, 耐淀粉酶, 毛细血管内皮细胞肿胀、增生、管腔消失, 基底膜局灶性断裂。牙龈毛细血管的超微结构研究基本支持光镜所见, 认为增厚的基底膜以无定形、颗粒状、丝状物和较少见的胶原纤维的增加为其特征。基底膜增厚是糖尿病代谢异常在小血管壁的表现。研究血管基底膜增厚与糖尿病状态关系的学者至今未能将这种关系与临床所见的牙周病增加或组织学所见炎症加重联系起来。因此, 牙龈微血管

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病与牙周病的因果关系还值得进一步探讨。

3.发病机理

糖尿病患者由于血糖升高, 可以引起微循环障碍, 影响正常的血流, 使血小板粘附、聚集加强, 抗凝血因子减少, 红细胞脆性增加, 造成组织缺氧, 血管内皮损害, 有利于细菌及其毒素的侵袭和感染的发生。JohnsonRB 发现高血糖糖尿病大鼠在无牙周感染的情况下有明显的牙槽骨吸收破坏。微循环障碍还直接阻碍氧和营养物的弥散、代谢废物的移出和免疫防御因子的弥散, 最终导致组织修复和再生效率的降低, 使牙周病更加严重[13 ]。

VEGF的生物学效应及影响因素

㈠生物学效应

⒈增加血管通透性：VEGF可强烈增加血管通透性,主要作用于毛细血管微静脉和小静脉,引起血浆蛋白的外渗。外渗的纤维蛋白原可凝集于血管外基质,形成纤维蛋白。VEGF是目前所发现的最强的血管通透剂。

⒉促进内皮细胞增殖和新生血管形成：VEG F是一种内皮细胞的特异性促有丝分裂原, 在体内,它可诱导血管生成,新生血管的数量与VEGF的表达密切相关;在体外,它可促进内皮细胞增殖。VEGF可导致新生血管形成,其原因据推测一方面VEGF促进微血管内皮细胞增生,另一方面则为VEGF使微血管内皮细胞通透性增强,大分子物质如纤维蛋白进入细胞外基质中形成纤维蛋白凝胶,允许和支持新生血管和基质细胞的内向生长。VEGF对组织细胞增生及新生血管形成具有三个不同作用的起动过程:(1)通过内皮细胞促使活性胶原酶产生和释放;(2)刺激内皮细胞游走;(3)刺激内皮细胞增殖。新生血管形成的早期关键步骤是:蛋白酶被激活,蛋白酶溶解血管基底膜和周细胞外基质的蛋白,使之水解,微血管内皮细胞通过血管基底膜侵润、迁移进入临近细胞外间质形成新生血管芽,而非是血管内皮细胞的生长。

⒊改变细胞外基质：VEG F可诱导内皮细胞基因表达方式,促进纤维蛋白酶和间质胶原酶的表达，也可导致一些细胞外基质，使其更有利于新生血管的生长。

⒋上调细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的基因表达：VEG F可增加血管ICAM-1的mRNA和蛋白质水平，这可能促成白细胞淤滞，从而形成小栓子，使白细胞激活，释放多种活性物质，破坏血管壁，激活血小板，引起血流缓慢和血栓形成，导致局部缺血加重和最终的新生血管形成。

㈡VEGF及其受体基因表达的调节因素

⒈VEGF和受体特异性结合后,从而引起细胞内许多酶和其它反应,发挥其生物学作用,其中缺氧是刺激VEGF mRNA表达的最强因素[14]，缺氧是如何引起VEGF活动的机制尚不够清楚。Takagi [15]推测,组织的缺氧可能先引起腺苷激酶再循环下降,腺苷水平升高,腺苷与特定细胞表面的腺苷受体结合,引起腺嘌呤介导cAM P升高,cAMP再激活蛋白激酶A,通过细胞内信号传递通路致VEGF表达。

⒉在高糖条件下VEG F及其受体,促进血管内皮细胞增生,增加血管通透性,促进新生血管的形成

[11]。在有关糖尿病的实验模型中证实由于高糖所引起的过量氧化物的产生使得VEGF基因表达上调

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3.一些细胞因子如:碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源性生长因子 (PDGF)、转化生长因子(TGF)和肿瘤坏死因子(TNF)等对VEGF的表达都有正调节作用。

国内有学者关于牙周病的控制对糖尿病患者血中糖化血红蛋白水平的影响，血清中TNF_α浓度变化等作出报道

也有血管内皮生长因子在牙周炎患者牙龈中的表达的研究以及在牙龈癌中的研究报道

但目前关于血管内皮生长因子在糖尿病合并牙周炎患者牙周组织中的表达还未有相关报道，属于本课题的创新之处。

目前存在的主要问题是：体内血管生成是在十分复杂的生理、病理条件下完成的,V EGF 还有很多同源的生长因子, 如V EGF2B, V EGF2C, V EGF2D, V EGF2E 等, 均有不同程度的血管生成作用, 是否是这些因素在牙周炎症中起着比V EGF 更重要的作用。

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预期研究的阶段性成果、最终成果、经济社会效益及其推广应用（包括总目标和分阶段目标。成果应写明推广应用或转让的可能性及社会、经济效益预测）

总目标：本实验的目的在于观察VEGF 在糖尿病合并牙周炎患者牙周组织中表达和分布, 及其与临床指标的关系, 探讨VEGF 在糖尿病牙周炎发生发展，相互促进及影响方面的作用.

分阶段目标：

2008年7月—2008年12月：预实验，摸索实验条件

2009年1月—2009年12月：完成120例标本的收集

2010年1月—2010年6月：检测实验室指标，数据统计

2010年7月—2010年9月：补充实验

2010年10月—2011年7月：论文总结、成果鉴定

VEGF在造成牙周炎的细胞因子网络中是一个重要的成员,因此,我们如果能通过各种途径对VEGF的产生及其生物学效应的发挥进行有效的调控,就可以减轻它对牙周组织的损害,对牙周炎的治疗有着积极的意义。随着研究的不断深入, VEGF及其调控机制的阐述也会越来越完善,相信不久的将来人们一定能认清VEGF在糖尿病牙周炎发生发展、相互促进及影响方面的作用，掌握有效调控VEGF的方法,为彻底战胜牙周炎奠定基础；同时，这也将会对糖尿病的预防和治疗产生积极作用。

拟采用的研究方法、技术路线（包括研究工作的总体安排、理论计算、实验设计、实验方法和步骤、工艺流程及其可行性论证，预计可能遇到的问题与解决方案）

纳入标准：

慢性牙周炎组

1) 纳入本实验的均为广泛性慢性牙周炎患者，全口牙中有附着丧失(AL>1mm)和骨吸收的位点>30%。

2)根据慢性牙周炎组再分为糖尿病组和非糖尿病组

空腹血糖≥7. 8 mmol/ L ,病史> 1 年的患者纳入糖尿病组,其余空腹血糖< 7. 2 mmol/ L 的患者纳入对照组。

牙周健康组

根据社区牙周需要治疗指数(community periodon tal in dex,CPI)不需要治疗或仅需口腔健康教育。

本实验中纳入的牙周健康者分为非糖尿病和糖尿病组。

患者及实验牙的剔除标准：

1) 近3 个月内服用过抗生素，消炎止痛药或激素类药，近半年内接受过牙周治疗。

2) 全口余留牙少于20 颗自然牙，实验牙有根尖周病(根据临床症状、检查及X 线所示)、咬合创伤(根据功能性咬合动度和牙周膜增宽诊断[46])等局部刺激因素。

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牙周检查指标

1）菌斑指数(Pl aqu e index,PLI) 采用Quigley-Hein法

2）龈沟出血指数(sul cus bl eeding in dex,SBI) ET. Mazz a(1981 年)法

3) 牙周探诊深度(probing depth,PD)使用标准的牙周探针，用约25g力记袋底到龈轴缘的距离，读取探针上最接近的刻度即为探诊深度，以mm 表示。每颗实验牙取近中颊角、颊侧中点、远中颊轴角、近中舌轴角、舌侧中点、远中舌轴角共6 个点作为每次探诊位置，记录探诊最深处。

4）附着丧失(Attachm ent l oss, AL)牙周袋底(龈沟底)到釉牙骨质界的距离，以mm表示。用牙周探针直接测量或根据牙周袋深度及龈缘到釉牙骨质界的距离计算。记录探诊最深牙周袋处AL。

所有临床检查均由同一位医生操作。

实验室检测指标：

切片制作及免疫组化染色: 在取得牙龈乳头标本后, 用10% 福尔马林固定, 切片(厚3 Lm)。用V EGF 单克隆抗体或CD34 做一抗, 进行SABC 染色。DAB 显色, 苏木素复染。脱水、透明、封片。阴性对照用PBS 液代替一抗。

免疫组化结果判断: 在400 倍显微镜下观察V EGF 的着色情况, 以5 个或5 个以上有阳性染色细胞为阳性。

血管计数: 在病理图像分析仪400 倍下选取上皮下5个视野(1240 Lm×910 Lm) , 观察CD34 标记的血管, 记录数量, 每一样本取均数。

病例来源：

所有病例均来自郑州大学附属口腔医院门诊自愿参加本研究的初诊患者

实验分组：

按照是否患牙周病和是否吸烟进行分组

A 组糖尿病慢性牙周炎组牙周基础治疗+治疗后1 周、4 周和12 周复诊

B 组非糖尿病慢性牙周炎组牙周基础治疗+治疗后1 周、4 周和12 周复诊

C 组非糖尿病牙周健康组不行牙周治疗，仅收集牙龈组织

D 组糖尿病牙周健康组不行牙周治疗，仅收集牙龈组织

统计学分析:各组间的GI 及血管计数用小样本量方差分析的N ewman keuls 法,V EGF 染色阳性率的比较用V2 检验, SPSS 软件处理。

可行性分析：

1.郑州大学口腔医院病人来源广，具备病例收集等实验条件

2.郑州大学实验室的良好条件

3.实验操作技术的熟练掌握

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研究进度及完成期限（课题总进度、年度计划进度）

2008年7月—2008年12月：预实验，摸索实验条件

2009年1月—2009年12月：完成120例标本的收集

2010年1月—2010年6月：检测实验室指标，数据统计

2010年7月—2010年9月：补充实验

2010年10月—2011年7月：论文总结、成果鉴定

实现本课题目标已具备的条件和基础（1.过去的研究工作基础；2.已有或可否借用的主要实验设备；3.已经或可能进行的预试验或实验；4.现有研究技术力量）

1. 仪器设备及试剂供应：郑州大学实验室已具备了完成本项目所采用的主要仪器。本实验室拥有进行生物信息分析所需的各种软件。实验所需试剂均可在中国购买。这在仪器设备和试剂供应上保证了本项目的顺利完成。

2．人力保证：本项目申请者曾先后参与牙周病相关的研究课题，熟练掌握常用的分子生物学技术，具有较强的科研开发、科研设计和科研管理能力。本课题小组成员曾在第四军医大学就读博士，已熟练掌握相关细胞分子生物学的基本实验技术。这在人力上和技术上充分保证了本项目的顺利完成。

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完成本课题尚缺乏的主要条件和基础

申请者和主要合作者情况（1.申请者和主要合作者已承担其它研究任务、经费来源以及能用于本课题的时间；2.申请者和主要合作者近3年内发表的与本课题有关的主要论文、著作和科研成果名称。按人填写，注明发表于何时、何刊物）

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项目考核目标（预期达到的技术、经济指标）

VEGF在造成牙周炎的细胞因子网络中是一个重要的成员,因此,我们如果能通过各种途径对VEGF 的产生及其生物学效应的发挥进行有效的调控,就可以减轻它对牙周组织的损害,对牙周炎的治疗有着积极的意义。随着研究的不断深入, VEGF及其调控机制的阐述也会越来越完善,了解VEGF在糖尿病牙周炎发生发展、相互促进及影响方面的作用，掌握有效调控VEG F的方法,为彻底战胜牙周炎奠定基础；同时，这也将会对糖尿病的预防和治疗产生积极作用。以上研究成果将以论文形式在专业刊物上发表。

项目实施的组织管理措施

已按填报说明对申请人进行了资格审查，对申请书内容进行了审核，并保证在项目获得资助后做到：

1、保证对研究计划实施所需的人力、物力和工作时间等条件给予支持。

2、严格遵守有关资助项目管理、财务等各项规定。

3、督促项目负责人和本单位项目管理部门按规定及时报送有关报表和材料。

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申请经费预算金额单位：万元

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申请者所在单位学术委员会意见（包括学术意义、应用价值、学术思想有何创新、研究技术路线是否可行、研究实力是否具备、预期目标能否达到等）

学术委员会主任委员（签章）

年月日

申请者所在单位意见（包括经费预算是否合理、有无其它经费来源、能否保证人力、物力、工作时间等基本条件并监督研究计划的实施）

单位（盖章）

负责人（签章）

年月日

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省辖市卫生局意见（医学高等院校、厅直医疗卫生单位不填此栏）

单位（盖章）

负责人（签章）

年月日

协作单位意见（应说明是否同意参加协作，能否保证协作人员工作时间和提供必要的条件）

协作单位（盖章）

负责人（签章）

年月日

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学术评审委员会或同行评审意见

（盖章）

年月日河南省卫生厅审核意见

（盖章）

年月日

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