浅色黄姑鱼蛋白及脂肪需求的研究
浅色黄姑鱼蛋白及脂肪需求的研究
一、本实验的研究目的：
研究饲料中不同蛋白水平对浅色黄姑鱼幼鱼生长表现和饲料指标，常规营养物质消化率，全鱼、肌肉和肝脏中常规营养成分含量，肌肉氨基酸组成和主要消化酶活力的影响。
二、本实验的研究内容:
1.饲养实验
研究饲料中不同蛋白水平对浅色黄姑鱼幼鱼饲养指标和饲料指标的影响，计算增值率、特定生长率、肥满度、肝体指数、饲料系数和蛋白质效率。
2.消化实验
研究浅色黄姑鱼幼鱼对不同蛋白质水平饲料的干物质总表观消化率以及饲料中粗蛋白、粗脂肪、钙和磷等主要营养物质的表观消化率。
3.生理生化指标分析
测定浅色黄姑鱼幼鱼全鱼、肌肉和肝脏中水分、粗蛋白、粗脂肪以及粗灰分等常规营养成分；测定幼鱼机肉中的氨基酸组成；测定幼鱼肝脏、胃、幽门盲肠及各段肠道中蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活力。
三、材料和方法
1.实验动物：浅色黄姑鱼幼鱼300条
2.实验饲料：
根据蛋白含量为44.5%是军曹鱼稚鱼生长最好（R.L Chou 、optimal dietary protein and lipid levels for juvenile cobi a），大黄鱼饲料中适宜的蛋白和脂肪比为47.5/10.5（Duan Q, Mai K, Zhong H, et al. Studies on the nutrition of the large yellow croaker, Pseudosciaena
Crocea R. I: growth response to graded levels of dietary protein and lipid）以及肉食性Pro45%—55%，杂食性Pro35%—45%，草食性Pro30%—45%.
各实验组饲料鱼油含量一直，以满足鱼类必需脂肪酸需求，设置粗蛋白为不同的梯度水平。
饲料以优质鱼粉为蛋白原，鱼油为脂肪源，用纤维素做填充剂，据此将实验饲料分为6个水平，每个水平3个重复。实验所用主要原料经粉碎后过80目标准筛，各原料按配比精确称量、混合、搅拌均匀，用饲料机做成直径2.00mm左右的膨化饲料颗粒，晾干后置于-20。C冰柜中冷藏备用。各组实验饲料的组成如下：
七三
四、实验方法
实验设5个不同的蛋白水平，以优质鱼粉做蛋白源，鱼油为脂肪源。设计蛋白梯度水平为36%、40%、44%、48%、52%，每个水平三个重复。
1.饲养实验
饲养实验为期8周。选取同一批次、体质健康的浅色黄姑鱼幼鱼，预饲养2周，挑选150尾规格相近的浅色黄姑鱼幼鱼进行分组，分别放养于15个网箱中，并随机
将15箱鱼分为5组，分别投喂五种不同蛋白水平的日粮。每个网箱中10尾鱼的总体重量基本相同，以保证各组间初始体重不存在显著差异。
每天投饵两次，分别在上午9:00和下午17:00进行，手动投喂，日投喂量为鱼体重的5-7%，以观察为主，到大部分鱼不再积极采食为止，饲养过程中每天记录鱼的采食量、鱼健康状况、采食情况以及成活状况等，每四周检查一次生长情况，称总体重。
2.消化实验
进行为期两周的消化实验，饲料中添加1%Cr2O3作为外源指示剂（矿物质的添加以沸石粉为载体）。粪便的收取采用虹吸法收粪，每次投饵后全池换水，以减少水中
溶失饲料对收粪的影响，选择比较成型的粪便收集；第一次收粪集中在换水后1小时进行，以后采用即时收粪法。
3.样品采集
（1）全鱼样品：每个网箱中随机选取3尾鱼，用MS-222（100ppm）麻醉，装入自封袋，迅速转入-20.C冰箱中保存，待实验室分析用；
（2）肝脏、胃、肠样品：解剖全过程在冰盘上操作，将每个网箱中剩余鱼的肝脏、胃、肠随机分为3组，并将肠道按幽门盲肠、前肠、中肠和后肠分段，
去除肠道中内容物，装于密封袋中，立即转至-20.C的冰箱中保存，待实验
分析用；
（3）肌肉样品：将浅色黄姑鱼体表用抹布抹干置于冰盘上，去除鱼皮，取其两侧侧线上的背肌，将得到的肌肉样品装于密封袋中，立刻放于-20.C的冰箱
中保存，待实验室分析用；
（4）粪便样品：将收得的粪便样品沉淀、过滤，然后装于密封袋中，保存在-20.C 冰箱中，待实验室分析用。
五、饲料指标和饲养指标的测定
饲料系数=饲料消耗量/体增长*100%
蛋白质效率=体增重/（摄食量*饲料蛋白质含量%）*100%
饲料干物质表观消化率=（1-饲料中指示剂含量/粪便中指示剂含量）*100%
某营养物质表观消化率=【1-（饲料中指示剂含量/粪便中指示剂含量）*（粪便中该物
质含量/饲料中该物质含量）】*100%
增重率=（结束总重-开始总重）/开始总重*100%
特定生长率=（Ln结束平均体重-Ln开始平均体重）/试验天数×100%
鱼体肥满度=100*鱼体重(g)/体长(cm)3
肝体指数=肝脏重量/体重*100%
六、样品的测定
1.样品粗蛋白含量的测定
凯氏定氮法测定试样中含氮量，即在催化剂的作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱使其逸出，用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
2.样品中粗脂肪含量的测定
在索氏提取器中用石油醚提取试样，计算绝干试样的损失减重。
3.样品中Cr2O3含量的测定
用酶标仪测定
4.样品氨基酸组成测定
前期处理：去饲料和鲜肉样品100-150mg,加足量6mol/L盐酸，抽真空风管，在110℃烘箱中水解24h，过滤定容至50ml.取0.5蒸干，用Na-S缓冲液1.0溶解。溶解过的样品经离心后用日立氨基酸测定仪测定。
5.其它成分的测定
（1）常规成分测定:
水分含量：105℃烘箱中烘干
粗灰分含量：600℃马弗炉中灼烧
钙含量的测定：EDTA络合滴定法
磷含量的测定：磷-钒钼酸铵法
（2）消化酶活力的测定
粗酶液的制备：
将每组待测组织放入液氮中迅速冷冻，敲碎，在研钵中研碎混匀(在碎冰上进行)，均匀取样称重，每克加10mL（胃每克加20mL）蒸馏水（4℃），用玻璃匀浆器匀浆。
匀浆后的匀浆液在冰箱(4℃)中静置1h后，用冷冻离心机于10000r·min-1’、4℃离心30min，将上清液即粗酶提取液置冰箱(4℃)中保存备用。
蛋白酶活性测定，参照Folin-酚法进行。
淀粉酶活性测定，采用试剂盒测定（南京建成生物工程研究所提供）。
脂肪酶活性测定，采用试剂盒测定（南京建成生物工程研究所提供.