化学发光法 EMSA 试剂盒
化学发光法EMSA试剂盒
产品简介：
化学发光法EMSA试剂盒(Chemiluminescent EMSA Kit)是一种通过Streptavidin-HRP及后续的BeyoECL Star试剂来实现化学发光检测Biotin标记的EMSA探针的检测试剂盒。同时本试剂盒也提供了EMSA检测所需的结合缓冲液和上样缓冲液，及一些关键的相关试剂，可以实现非同位素的EMSA检测。
本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。
本试剂盒采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。
本试剂盒和碧云天的各种生物素标记EMSA探针可以配套使用。
本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，其它特定的生物素标记EMSA探针的制备可以使用碧云天的EMSA探针生物素标记试剂盒(GS008)。
EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)等有效成分。其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。
本试剂盒可以用于100个蛋白和探针的结合反应，并足够检测至少10块有生物素标记EMSA探针的膜。
保存条件：
GS009-1至GS009-3和GS009-6在-20℃保存，其余可4℃保存。如果长期不用，整个试剂盒可-20℃保存，-20℃可以保存更长时间。
注意事项：
需自备带正电荷尼龙膜，以及凝胶电泳时所需的相关试剂。带正电荷尼龙膜(FFN12/FFN16)可以向碧云天订购。
如果需要使用更多的封闭液或洗涤液，可另外单独订购GS009B封闭液或GS009W洗涤液(5X)。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 探针的标记：
可以直接选购碧云天的生物素标记EMSA探针，或使用碧云天的EMSA探针生物素标记试剂盒(GS008)或其它合适的试剂盒进行EMSA探针的生物素标记。
2.探针的纯化和检测：
碧云天的各种生物素标记EMSA探针都已经过纯化，可以直接使用；对于使用碧云天的EMSA探针生物素标记试剂盒(GS008)等试剂盒标记的EMSA探针，通常为实验简便起见，可以不必纯化标记好的探针。有些时候，纯化后的探针会改善EMSA的电泳结果。详细的探针纯化和探针的标记效率的检测请参考EMSA探针生物素标记试剂盒的相关说明。
3.EMSA胶的配制：
a.准备好倒胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳胶的模具(例如BioRad的常规用于蛋白电泳的制胶装置)，或其它适当
的模具。最好选择可以灌制较薄胶的模具，以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果，可以选择可灌制较大EMSA胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净，需特别注意不能有SDS残留。
b.按照如下配方配制20ml 4％的聚丙烯酰胺凝胶(注意：使用29:1等不同比例的Acr/Bis对结果影响不大)。
TBE buffer (10X) 1.0ml
重蒸水 16.2ml
39:1 acrylamide/bisacrylamide (40%,w/v) 2ml
80% 甘油 625μl
10% 过硫酸铵(ammonium persulfate) 150μl
TEMED 10μl
c.按照上述顺序依次加入各种试剂，加入TEMED前先混匀，加入TEMED后立即混匀，并马上加入到制胶的模具中。避免
产生气泡，并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡，可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。
4.EMSA结合反应：
a.如下设置EMSA结合反应：
阴性对照反应：
Nuclease-Free Water 7μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 0μl 标记好的探针 1μl 总体积 10μl
探针冷竞争反应：
Nuclease-Free Water 4μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 未标记的探针 1μl 标记好的探针 1μl 总体积 10μl
Super-shift反应：
Nuclease-Free Water 4μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 目的蛋白特异抗体 1μl 标记好的探针 1μl 总体积 10μl 样品反应：
Nuclease-Free Water 5μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 标记好的探针 1μl 总体积 10μl
突变探针的冷竞争反应：
Nuclease-Free Water 4μl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2μl 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2μl 未标记的突变探针 1μl 标记好的探针 1μl 总体积 10μl
b.按照上述顺序依次加入各种试剂，在加入标记好的探针前先混匀，并且室温(20-25℃)放置10分钟，从而消除可能发生的
探针和蛋白的非特异性结合，或者让冷探针优先反应。然后加入标记好的探针，混匀，室温(20-25℃)放置20分钟。
c.加入1μl EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X)，混匀后立即上样。注意：有些时候溴酚蓝会影响蛋白和DNA的结合，
建议尽量使用无色的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液。如果对于使用无色上样缓冲液在上样时感觉到无法上样，可以在无色上样缓冲液里面添加极少量的蓝色的上样缓冲液，至可以观察到蓝颜色即可。
5.电泳：
a.用0.5XTBE作为电泳液。按照10V/厘米的电压预电泳10分钟。预电泳的时候如果有空余的上样孔，可以加入少量稀释好
的1X的EMSA上样缓冲液(蓝色)，以观察电压是否正常进行。
b.把混合了上样缓冲液的样品加入到上样孔内。在多余的某个上样孔内加入10μl稀释好的1X的EMSA/Gel-Shift上样缓冲液
(蓝色)，用于观察电泳进行的情况。
c.按照10V/厘米的电压电泳。确保胶的温度不超过30℃，如果温度升高，需要适当降低电压。电泳至EMSA/Gel-Shift上样
缓冲液中的蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘1/4处，停止电泳。
6.转膜：
a.取一和EMSA胶大小相近或略大的尼龙膜，剪角做好标记，用0.5XTBE浸泡至少10分钟。尼龙膜自始至终仅能使用镊子
夹取，并且仅可夹取不可能接触样品的边角处。
b.取两片和尼龙膜大小相近或略大的滤纸，用0.5XTBE浸湿。
c.把浸泡过的尼龙膜放置在一片浸湿的滤纸上，注意避免尼龙膜和滤纸间产生气泡。
d.非常小心地取出EMSA胶放置到尼龙膜上，注意确保胶和膜之间没有气泡。
e.再把另外一片浸湿的滤纸放置到EMSA胶上，注意确保滤纸和胶之间没有气泡。
f.采用Western时所使用的湿法电转膜装置或其它类似的电转膜装置，以0.5XTBE为转膜液，把EMSA胶上的探针、蛋白以
及探针和蛋白的复合物等转移到尼龙膜上。对于大小约为10x8x0.1cm的EMSA胶，用BioRad的常用的Western转膜装置，电转时可以设置为380mA(约100V)转膜30-60分钟。如果胶较厚，则需适当延长转膜时间。转膜时需保持转膜液的
温度较低，通常可以把电转槽置于4℃冷库或置于冰浴或冰水浴中进行电转，这样可以确保低温。具体的电转膜方法请参考电转膜装置的使用说明。
g.转膜完毕后，小心取出尼龙膜，样品面向上，放置在一干燥的滤纸上，轻轻吸掉下表面明显的液体。立即进入下一步的
交联步骤，不可使膜干掉。
7.交联：
a.用紫外交联仪(UV-light cross-linker)选择254nm紫外波长，120mJ/cm2，交联45-60秒。如果没有紫外交联仪可以使用普通
的手提式紫外灯(例如碧云天的手提紫外检测仪(EUV002))，距离膜5-10厘米左右照射3-10分钟。也可以使用超净工作台内的紫外灯，距离膜5-10厘米左右照射3-15分钟。最佳的交联时间可以使用标准品自行摸索。
b.交联完毕后，可以直接进入下一步检测；也可以用保鲜膜包裹后在室温干燥处存放3-5天，然后再进入下一步检测。
如果检测结果发现交联效果不佳，甚至连free probe的条带都非常微弱，可以考虑在膜干燥后参考步骤A的条件再交联一次，以进一步改善交联效果。
8.化学发光法检测生物素标记的探针：
a.37-50℃水浴溶解封闭液和洗涤液。
注意：封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用，封闭液和洗涤液可以在室温至50℃之间使用，但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生，在冬天需特别注意。
b.取一合适的容器加入15ml封闭液，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
c.取7.5μl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。
d.去除用于尼龙膜封闭的封闭液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平
摇床上缓慢摇动15分钟。
e.取25ml洗涤液(5X)，加入100ml重蒸水或MilliQ级纯水，混匀配制成125ml洗涤液。
f.将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内，漂洗1分钟。
g.去除洗涤液，加入15-20ml洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。
h.重复步骤G 三次(共洗涤四次)，每次洗涤时间都约为5分钟。
i.将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。
j.取5ml BeyoECL Star A液和5ml BeyoECL Star B液混匀，配制成BeyoECL Star 工作液。注意：BeyoECL Star 工作液必须现配现用。说明：从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。
k.取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。
l.在尼龙膜的表面小心加上步骤J配制好的共10ml BeyoECL Star 工作液，使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。
m.取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间，并固定于压片暗盒(也称片夹)内。
n.用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟，立即显影定影，然后根据结果再调整压片时间；也可以直接分别压片30秒、
1、3、5分钟或更长时间，然后一起显影定影观察结果。
使用本产品的文献：
1. Wang X, Li C, Chen Y, Hao Y, Zhou W, Chen C, Yu Z.
Hypoxia enhances CXCR4 expression favoring microglia migration via HIF-1alpha activation.
Biochem Biophys Res Commun. 2008 Jun 27;371(2):283-8.
2. Zhang L, Chen W, Li X.
A novel anticancer effect of butein: inhibition of invasion through the ERK1/2 and NF-kappa
B signaling pathways in bladder cancer cells.
FEBS Lett. 2008 Jun 11;582(13):1821-8.
3. Wei Y, Weng D, Li F, Zou X, Young DO, Ji J, Shen P.
Involvement of JNK regulation in oxidative stress-mediated murine liver injury by microcystin-LR.
Apoptosis. 2008 Aug;13(8):1031-42.
4. Mao XM, Zhou Z, Cheng L Y, Hou XP, Guan WJ, Li YQ.
Involvement of SigT and RstA in the differentiation of Streptomyces coelicolor.
FEBS Lett. 2009 Oct 6;583(19):3145-50.
5. Lu J, Zhao J, Liu K, Zhao J, Yang H, Huang Y, Qin Z, Bai R, Li P, Ma J, Yan W, Zhao M, Dong Z.
MAPK/ERK1/2 signaling mediates endothelial-like differentiation of immature DCs in themicroenvironment of esophageal squamous cell carcinoma.
Cell Mol Life Sci. 2010 Jun;67(12):2091-106.
6. Ding RY, Zhao DM, Zhang ZD, Guo RX, Ma XC
Pretreatment of Rho kinase inhibitor inhibits systemic inflammation and prevents endotoxin-induced acute lung injury in mice.
J Surg Res. 2011 Dec;171(2):e209-14.
7. Xu J, Wang B, Xu Y, Sun L, Tian W, Shukla D, Barod R, Grillari J, Grillari-V oglauer R, Maxwell PH, Esteban MA.
Epigenetic regulation ofHIF-1α in renal cancer cells involves HIF-1α/2α binding to a reversehypoxia-response element.
Oncogene. 2012 Feb 23;31(8):1065-72.
8. Gu L, Liang X, Wang L, Yan Y, Ni Z, Dai H, Gao J, Mou S, Wang Q, Chen X, Wang L, Qian J.
Functional metabotropic glutamate receptors 1 and 5 are expressed in murine podocytes.
Kidney Int. 2012 Mar;81(5):458-68.
9. Peng X, Wang Y, Kolli S, Deng J, Li L, Wang Z, Raj JU, Gou D.
Physical and functional interaction between the ID1 and p65 for activation o f NFκB.
Am J Physiol Cell Physiol. 2012 May 16.
10.Liu SS, Zheng HX, Jiang HD, He J, Yu Y, Qu YP, Yue L, Zhang Y, Li Y.
Identification and characterization of a novel gene, c1orf109, encoding a CK2 substrate that isinvolved in cancer cell proliferation.
J Biomed Sci. 2012 May 1;19(1):49.
11.Li F, Li C, Zhang H, Lu Z, Li Z, You Q, Lu N, Guo Q
VI-14, a novel flavonoid derivative, inhibits migration and invasion of human breast cancer cells.
Toxicol Appl Pharmacol. 2012 Jun 1;261(2):217-26.
12.Chen FH, Lu N, Zhang HW, Zhao L, He LC, Sun HP, You QD, Li ZY, Guo QL.
L YG-202 augments tumor necrosis factor-α-induced apoptosis via attenuating casein kinase 2-dependent nuclearfactor-κB pathway in HepG2 cells.
Mol Pharmacol. 2012 Nov;82(5):958-71. doi: 10.1124/mol.112.079848. Epub 2012 Aug 21.
13.Yao J, Hu R, Sun J, Lin B, Zhao L, Sha Y, Zhu B, You QD, Yan T, Guo QL.
Oroxylin A prevents inflammation-related tumor through down-regulation of inflammatory gene expression byinhibiting NF-κB signaling.
Mol Carcinog. 2012 Sep 4. doi: 10.1002/mc.21958.
14.Zhao J, Liu K, Lu J, Ma J, Zhang X, Jiang Y, Yang H, Jin G, Zhao G, Zhao M, Dong Z.
Alternariol induces DNA polymerase β expression through the PKA-CREB signaling pathway.
Int J Oncol. 2012 Jun;40(6):1923-8. doi: 10.3892/ijo.2012.1398. Epub 2012 Mar 8.
15.Song X, Yao J, Wang F, Zhou M, Zhou Y, Wang H, Wei L, Zhao L, Li Z, Lu N, Guo Q.
Wogonin inhibits tumor angiogenesis via degradation of HIF-1α protein.
Toxicol Appl Pharmacol. 2013 May 23. pii: S0041-008X(13)00215-9. doi: 10.1016/j.taap.2013.04.031.
16.Zhu L, Zhao L, Wang H, Wang Y, Pan D, Yao J, Li Z, Wu G, Guo Q.
Oroxylin A reverses P-glycoprotein-mediated multidrug resistance of MCF7/ADR cells by G2/M arrest.
Toxicol Lett. 2013 May 23;219(2):107-15. doi: 10.1016/j.toxlet.2013.01.019. Epub 2013 Mar 5.
17.Wu WY, Wang WY, Ma YL, Yan H, Wang XB, Qin YL, Su M, Chen T, Wang YP.
Sodium tanshinone IIA silate inhibits oxygen-glucose deprivation/recovery-induced cardiomyocyte apoptosis viasuppression of the NF-κB/TNF-α pathway.
Br J Pharmacol. 2013 Jul;169(5):1058-71. doi: 10.1111/bph.12185.
18.Sun J，Fan L, Li M, Zhang Y, Cheng N.
Decreasing Pin1 suppresses telomerase activity by NF-κB in HCT116 cells colorectal carcinoma.
The Chinese-German Journal of Clinical Oncology.April 2013, V olume 12, Issue 4, pp 181-187 .
19.Li K, Dan Z, Hu X, Ouzhu M, Ciren Y, Wang Z, Wang J, Yang X, Ze Y.
CD14 overexpression upregulates TNF-α-mediated inflammatory responses and suppresses the malignancy ofgastric carcinoma cells.
Mol Cell Biochem. 2013 Apr;376(1-2):137-43. doi: 10.1007/s11010-013-1559-0. Epub 2013 Jan 22.
20.Yu Q, Shen XH, Li Y, Li RJ, Li J, Luo YY, Liu SF, Deng MY, Pei MF, Zhang GS.
An intron mutation in the ACVRL1 may be associated with a transcriptional regulation defect in a Chinese family with hereditary hemorrhagic telangiectasia. PLoS One. 2013;8(2):e58031. doi: 10.1371/journal.pone.0058031. Epub 2013 Feb 27.
21.Yan S, Fu Q, Zhou Y, Zhang N, Zhou Q, Wang X, Yuan Z, Wang X, Du J, Zhang J, Zhan L.
Establishment of stable reporter expression for in vivo imaging of nuclear factor-κB activation in mouse liver.
Theranostics. 2013 Oct 15;3(11):841-50. doi: 10.7150/thno.6997. eCollection 2013.
22.Fang L, Xu Z, Wang GS, Ji FY, Mei CX, Liu J, Wu GM.
Directed evolution of an LBP/CD14 inhibitory peptide and its anti-endotoxin activity.
PLoS One. 2014 Jul 15;9(7):e101406. doi: 10.1371/journal.pone.0101406. eCollection 2014.
23.Wang G, Xiu P, Li F, Xin C, Li K.
Vitamin A supplementation alleviates extrahepatic cholestasis liver injury through Nrf2 activation.
Oxid Med Cell Longev. 2014;2014:273692. doi: 10.1155/2014/273692. Epub 2014 Jul 9.
24.Zhao K, Song X, Huang Y, Yao J, Zhou M, Li Z, You Q, Guo Q, Lu N.
Wogonin inhibits LPS-induced tumor angiogenesis via suppressing PI3K/Akt/NF-κB signaling.
Eur J Pharmacol. 2014 Aug 15;737:57-69. doi: 10.1016/j.ejphar.2014.05.011. Epub 2014 May 22.
25.Yao LL, Liao CH, Huang G, Zhou Y, Rigali S, Zhang B, Ye BC.
GlnR-mediated regulation of nitrogen metabolism in the actinomycete Saccharopolyspora erythraea.
Appl Microbiol Biotechnol. 2014 Sep;98(18):7935-48. doi: 10.1007/s00253-014-5878-1. Epub 2014 Jun 17.
26.Liao C, Rigali S, Cassani CL, Marcellin E, Nielsen LK, Ye BC.
Control of chitin and N-acetylglucosamine utilization in Saccharopolyspora erythraea.
Microbiology. 2014 Sep;160(Pt 9):1914-28. doi: 10.1099/mic.0.078261-0. Epub 2014 Jul 9.
27.Xu X, Zhang Y, Li W, Miao H, Zhang H, Zhou Y, Li Z, You Q, Guo Q, Zhao L.
Wogonin Reverses Multi-Drug Resistance of Human myelogenous leukemia K562/A02 cells via Downregulation of MRP1 Expression by Inhibiting Nrf2/ARE
Signaling Pathway.
Biochem Pharmacol. 2014 Sep 25. pii: S0006-2952(14)00552-8. doi: 10.1016/j.bcp.2014.09.008.
28.Li X, Jiang J, Shi S, Bligh SW, Li Y, Jiang Y, Huang D, Ke Y, Wang S.
A RG-II type polysaccharide purified from Aconitum coreanum alleviates lipopolysaccharide-induced inflammation by inhibiting the NF-κ
B signal pathway. PLoS One. 2014 Jun 13;9(6):e99697. doi: 10.1371/journal.pone.0099697. eCollection 2014.
29.Li X, Miao H, Zhang Y, Li W, Li Z, Zhou Y, Zhao L, Guo Q.
Bone marrow microenvironment confers imatinib resistance to chronic myelogenous leukemia and oroxylin A reverses the resistance by suppressing Stat3 pathway.
Arch Toxicol. 2014 Mar 27.
Cobase电化学发光免疫分析仪用户操作手册
cobas e411（Disk）操作手册 罗氏诊断产品（上海）有限公司广州分公司 第一章 一． 二． 三． 四． 五． 第二章 一． 二． 1． 2． 3． 三． 1． 2． 3． 四． 第三章 一． 二． 三． 四． 五． 第四章 一． A：操作开关 置）
C ：测试区 D ：消耗品区 E ：显示及控制单元 位于仪器右侧面 位于仪器左侧面 A ：主电源开关 B ：电源线 A ：USB 接口 C ：HOST 接口 二． 控制单元 三． 样品／试剂区 A ：取样区 B ：样品盘保护盖 A ：磁珠搅拌针 B ：冲洗站 C ：样本/试剂针 四． 测试区 A ：孵育池（共32个孵育位） B ：吸样位 B A ：触摸屏 B ：虚拟键盘（触摸屏幕 上需输入内容区域 时，自动在屏幕下方 跳出） C ：数字键盘 A ：定标/质控条形码阅读口 B ：带开关盖装置的试剂仓 （18个位置） C B
A ：系统试剂保护门 B ：Sipple 针 C ：CleanCell （黑盖） D ：ProCell （白盖） 五． 消耗品区 废吸头/反应杯盒 A ：蒸馏水桶 B ：废液桶 第二章 基本操作 一． 开机 a ． 检查蒸馏水桶，将SysWash 浓缩液配置 为1:100的系统用水 b ． 清空废液桶 c ． 打开ProCell 和CleanCell 盖子，关好系统试剂保护门。 注意：运行过程中不能打开系统试剂保护门，否则仪器将停止运行。 d ． 打开仪器右面主电源开关，再打开仪器前面操作开关，等界面出现后，录入用户名和 密码，仪器自动初始化后进入待机状态 注意：仪器分不同级别及权限使用，可根据实际情况设定；添加用户名后，第 一次输入的密码即为以后的密码。 e. 待仪器进入待机后清空废吸头/反应杯盒。 二． 准备工作 仪器进入待机后，进行每日工作前准备。 1． 清除前日标本记录 B B D C A ：吸头位1-2 B ：反应杯位3-5 C ：吸头丢弃位 D ：反应杯丢弃位 A B A ：抓手 B ：抓手移动时的横纵轴 C ：吸头/反应杯区1（120个吸头，60个反应杯） D ：吸头/反应杯区2（120个吸头，60个反应杯） E ：吸头/反应杯区3（120个吸头，60个反应杯）
化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品技术审评要求规范(2017版)1204
化学发光免疫类体外诊断试剂（盒）产品技术审评规范（2017版） 本规范旨在指导注册申请人对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本规范是对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品的一般要求，申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，并依据产品特性确定其中的具体内容是否适用。 本规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本规范。 本规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本规范相关内容也将进行适时调整。 一、适用范围 本规范适用于利用化学发光免疫分析技术对被测物质进行定量检测的第二类体外诊断试剂（包括以微孔板、管、磁颗粒、微珠和塑料珠等为载体的酶促及非酶促化学发光免疫分析测定试剂）的注册技术审查。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号，以下简称《办法》）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管
〔2013〕242号）化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。 （二）主要原材料研究资料（如需提供） 主要原材料（例如各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等标记用酶、磁微粒及其他主要原料）的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；校准品、质控品的原料选择、制备、赋值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。 （三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供） 1.主要生产工艺介绍，包括工作液的配制、分装和冻干,固相载体的包被和组装，发光系统等的描述及确定依据等，可以图表方式表示； 2.反应原理介绍； 3.确定反应所需物质及其用量（校准品、样本、试剂等）的研究资料； 4.确定反应最适条件研究（反应条件、校准方法、质控
17α—羟孕酮测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求mairui
1 性能指标 2.1外观和性状 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固；Ra 组分应为棕色含固体微粒的液体，无板结、无絮状物。Rb 和Rc 组分应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物； 校准品应为清澈透明液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。分装瓶应为透明塑料管，盖有塑料外盖。 2.2装量 应不少于试剂的标示装量值。 2.3准确度 对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±10%范围内。 2.4最低检测限 应不大于0.05 ng/mL。 2.5线性 试剂盒在0.05 ng/mL ~30 ng/mL 区间内，其相关系数（r）应不低于0.9900。 2.6重复性 变异系数CV 应≤ 5%。 2.7批间差 变异系数CV 应≤ 10%。 2.8校准品均一性 2.8.1校准品瓶内均一性 C0 的标准差（SD）应不大于0.05 ng/mL，C1 和C2 的变异系数（CV）应不大于8.0%。 2.8.2校准品瓶间均一性 C0 的标准差（SD）应不大于0.05 ng/mL，C1 和C2 的变异系数（CV）应不大于5.0%。
2.9生物安全性 使用国家权威管理机构认可的、且不低于我国法定用于血源筛查体外诊断试剂灵敏度的检测试剂，对校准品中乙型肝炎病毒表面抗原、人类免疫缺陷病毒抗体（HIV-I 型和HIV-II 型）、丙型肝炎病毒抗体、梅毒螺旋体抗体的检测应为阴性。 2.10稳定性
2~8℃避光保存，试剂盒有效期为365 天。到有效期后90 天内的试剂盒应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8 的要求。
Cobase电化学发光免疫分析仪用户操作手册
cobas e411（Disk）操作手册罗氏诊断产品（上海）有限公司广州分公司 第一章 一． 二． 三． 四． 五． 第二章 一． 二． 1． 2． 3． 三． 1． 2． 3． 四． 第三章 一． 二． 三． 四． 五． 第四章 一． A：操作开关 B） C：测试区 D 位于仪器右侧面 A：主电源开关 B：电源线 A：USB接口 C：HOST接口 二．控制单元
三． 样品／试剂区 A ：取样区 B ：样品盘保护盖 A ：磁珠搅拌针 B ：冲洗站 C ：样本/试剂针 四． 测试区 A ：孵育池（共32个孵育位） B ：吸样位 A ：系统试剂保护门 B ：Sipple 针 C ：CleanCell （黑盖） D ：ProCell （白盖） B A ：触摸屏 B ：虚拟键盘（触摸屏幕 上需输入内容区域 时，自动在屏幕下方 跳出） C ：数字键盘 A ：定标/质控条形码阅读口 B ：带开关盖装置的试剂仓 （18个位置） C B
五． 消耗品区 废吸头/反应杯盒 A ：蒸馏水桶 B ：废液桶 第二章 基本操作 一． 开机 a ． 检查蒸馏水桶，将SysWash 浓缩液配置为1:100的系统 用水 b ． 清空废液桶 c ． 打开ProCell 和CleanCell 盖子，关好系统试剂保护门。 注意：运行过程中不能打开系统试剂保护门，否则仪器将停止运行。 d ． 打开仪器右面主电源开关，再打开仪器前面操作开关，等界面出现后，录入用户名和密码，仪器自动初始 化后进入待机状态 注意：仪器分不同级别及权限使用，可根据实际情况设定；添加用户名后，第 一次输入的密码即为以后的密码。 e. 待仪器进入待机后清空废吸头/反应杯盒。 二． 准备工作 仪器进入待机后，进行每日工作前准备。 1． 清除前日标本记录 定标： 1．录入定标物参数（扫描定标物BC 卡）： 将BC 卡插入扫描位2．分配定标品位置 a ：使用定标瓶上条形码 直接将定标瓶放上标本盘，并将定标瓶上的条码对准读码器即可。 b ．手工安排定标品位置 B A ：吸头位1-2 B ：反应杯位3-5 C ：吸头丢弃位 D ：反应杯丢弃位 A B A ：抓手 B ：抓手移动时的横纵轴 C ：吸头/反应杯区1（120个吸头，60个反应杯） D ：吸头/反应杯区2（120个吸头，60个反应杯） E ：吸头/反应杯区3（120个吸头，60个反应杯）
化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范(2017版)1204
化学发光免疫类体外诊断试剂（盒）产品技 术审评规范（2017版） 本规范旨在指导注册申请人对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本规范是对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品的一般要求，申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，并依据产品特性确定其中的具体内容是否适用。 本规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本规范。 本规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本规范相关内容也将进行适时调整。 一、适用范围 本规范适用于利用化学发光免疫分析技术对被测物质进行定量检测的第二类体外诊断试剂（包括以微孔板、管、磁颗粒、微珠和塑料珠等为载体的酶促及非酶促化学发光免疫分析测定试剂）的注册技术审查。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号，以下简称《办法》）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕
242号）化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。 （二）主要原材料研究资料（如需提供） 主要原材料（例如各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等标记用酶、磁微粒及其他主要原料）的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；校准品、质控品的原料选择、制备、赋值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。 （三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供） 1.主要生产工艺介绍，包括工作液的配制、分装和冻干,固相载体的包被和组装，发光系统等的描述及确定依据等，可以图表方式表示； 2.反应原理介绍； 3.确定反应所需物质及其用量（校准品、样本、试剂等）的研究资料； 4.确定反应最适条件研究（反应条件、校准方法、质控方法）；
磁微粒子化学发光法测定AFP
磁微粒子化学发光法测定AFP、CEA的应用 关键词】癌胚抗原 【摘要】目的研究磁微粒子化学发光酶免疫法检测的可靠性及方法学评价。方法利用磁微粒子化学发光法检测血清AFP、CEA，并进行精密度、灵敏度、特异性、回收率方面的探讨。结果化学发光法测定AFP的线性范围0.30～1380μg/L，CEA的线性范围0.51～1067μg/L。测定AFP的批内精密度CV值为1.16%～3.53%，批间为1.49%～4.67%;CEA的批内精密度CV值为0.87%～4.47%，批间为1.92%～4.71%。AFP的最低检测限度0.30μg/L;CEA 的最低检测限度0.51μg/L。AFP的回收率97.7%～99.0%;CEA的回收率98.4%～101.65%。黄疸、脂血、溶血对AFP、CEA的测定无明显影响。结论磁微粒子化学发光酶免疫法在病人结果可报告范围宽、精密度好、灵敏度高、特异性高、抗干扰能力强。 【关键词】磁微粒子化学发光甲胎蛋白癌胚抗原 近十年来通过不断改进和发展，使化学发光免疫分析成为非放射性标记免疫分析中最有前途的方法之一。测定时间短，无放射污染等特点，广泛应用在临床和科研［1］。甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）是最常用的肿瘤标志物之一。它们的测定有助于肿瘤病人的诊断、治疗及术后疗效观察。BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型免疫分析仪，即全自动微粒子化学发光免疫分析系统。我们用此法对血清中的AFP和CEA的测定，作了精密度、分析灵敏度、回收试验及干扰试验等实验，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 仪器美国BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型全自动化学发光免疫分析仪。 1.2 试剂 AFP和CEA试剂盒由BECKMAN COULTER公司提供配套试剂。 1.3 方法按仪器操作手册，用配套试剂盒测定定值、样品。数值在标定值允许的范围内，继续做精密度、灵敏度、回收试验和干扰试验等相关实验。 2 结果 2.1 精密度采取批内和批间差异来确定。分别取AFP和CEA高、中、低浓度各三份混合血清标本，其中一半重复测定20次，计算均值、方差，及批内CV值。另外一半分成20份，装入塑料离心管置于-20℃冰箱，每天1次连续测定20天，计算均值、方差及批间CV 值。结果见表1。 表1 AFP和CEA批内、批间变异值（略）
促肾上腺皮质激素(ACTH)测定试剂盒(电化学发光免疫分析法)产品技术要求北京联众泰克
促肾上腺皮质激素(ACTH)测定试剂盒（电化学发光免疫分析法） 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人体血清样本中促肾上腺皮质激素（ACTH）的含量。 1.1包装规格：50人份/盒、100人份/盒。 1.2主要组成成分 试剂盒由磁分离试剂（M）、试剂a（Ra）、试剂b（Rb）和定标品（ACTH-Cal）（选配）组成。组成及含量见下表： 注：1、定标品靶值批特异，详见靶值单。 2、试剂盒条码卡内含主校准曲线。 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏； 2.1.2 磁分离试剂摇匀后应为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集、无絮状物； 2.1.3 其它液体组分应澄清，无异物，沉淀物或絮状物； 2.1.4 包装标签应清晰、无磨损、易识别。 2.2 空白限
应不大于1.0pg/mL。 2.3 准确度 将已知浓度的ACTH标准溶液加入到血清中，其回收率应在(85%～115%)范围内。 2.4 线性 在[3.00，2000.0]pg/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.9900。 2.5 精密度 2.5.1 重复性 在试剂盒的线性范围内，测定高、低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于8%。 2.5.2 批间差 在试剂盒的线性范围内，用3个批号试剂盒分别测定高、低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于15%。 2.6 效期末稳定性 本产品效期为15个月，试剂盒在2～8℃下保存至有效期末进行检测，检测结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1的要求。 2.7 溯源性 依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求提供促肾上腺皮质激素（ACTH）定标品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，定标品溯源至企业工作校准品。
化学发光试剂盒和单抗生产相关ELISA试剂盒
化学发光试剂盒和单抗生产相关ELISA试剂盒 Assay Designs 位于美国的密歇根州，成立于 1992 年，为全世界生化、医药专业的科研工作者提供优质、快速、方便的产品， " 使您的科研更为简单 " 。公司目前可提供检测和定量细胞调节、信号转导、炎症、氧化过程和凋亡相关的分子。公司最近开发了 CORRELATE 和 TITERZYME 免疫试剂盒，活性检测试剂盒、 FLASHLIGHT and BIOLIGHT 发光混合物、抗体等。 Assay Designs 提供各种 eicosanoid 试剂盒、人和小鼠的细胞因子试剂盒以及世界唯一的非放射性 COX 活性检测试剂盒，其精确和重复性无与伦比。另外，公司大量提供抗原和抗体相关产品。 产品分类： 1 ．ELISA 试剂盒 2 ．活性检测试剂盒 3 ．化学发光试剂盒 4 ．抗体和蛋白纯品 化学发光试剂盒 Assay Designs 提供高质量的化学发光产品，包括抗体和蛋白。公司新推出的一系列化学发光和生物发光试剂可快速、容易、准确检测生物分子。 化学发光技术是近二、三十年来发展起来的一种测定方式，其利用化学反应释放的自由能激发中间体( 常用碱性磷酸酶－金刚烷胺)，使其从激发态回到基态，当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而进行定量分析。化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，就避免了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度，并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害，是一种非常优秀的定量分析方法。 虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰，但化学分析本身的不特异性，制约了整个方法的使用。因此，如同RIA 、FIA 等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定( CLIA )技术。 CLIA 是一种高度敏感的微量测定技术，凡具有抗原性的物质(包括半抗原)都可以用CLIA 测定。其起步于80 年代初，快速发展于90 年代，在国外CLIA 的应用处于蓬勃发展的阶段, 其具备以下特点：①高度敏感，极限达10-17 －10-19M/L ，远高于RIA 、EIA ，与TRFIA 相当但比TRFIA 便宜。②特异性强，重复性好 C.V. ＜ 5 ％。③测定范围宽，可达7 个数量级。④试剂稳定性好，无污染有效期 6 －12 月。⑤操作简单，易于自动化。在对环保很重视的国家，CLIA 成了取代RIA 的首选方法。 单抗生产相关 1 ．快速、敏感、方便 2 ．Correlate-EIA 产品包括ELISA 和化学发光两种，可定量检测小分子量抗原
电化学发光原理介绍
、概念 电化学发光免疫测定Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI。 ECLI 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术。电化学发光法源于电化学法和化学发光法，而ECLI 是电化学发光ECL和免疫测定相结合的产物，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括了电化学和化学发光二个过程。 ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA／RNA探针检测。 二、反应底物 ECL 反应底物有两种： ·三氯联吡啶钌[Rubpy3]2+络合物： 钌Ruthenium, Ru，原子序数44，原子量101.07。元素名来自拉丁文，原意是"俄罗斯"。1827年俄国化学家奥赞在铂矿中发现钌；1844年俄国化学家克劳斯肯定它是一种新元素。钌在地壳中的含量约为十亿分之一，是铂系元素中含量最少的一个。钌常与其它铂系元素一起分散于冲积矿床和砂积矿床中。钌有7种天然稳定同位素：钌96、98、99、100、101、102、104。 钌为银白色金属，熔点2310℃，沸点3900℃，密度12.37×103/m3。 钌的化学性质不活泼，在空气和潮湿环境中稳定；不溶于酸和王水，溶于熔融的强碱、碳酸盐、氰化物等；加热到900℃，时能与氧反应；加热时能与氟、氯、溴反应；钌有形成配位化合物的强烈倾向，还有良好的催化性能。 钌是铂和钯的有效硬化剂；金属钛中加入0.1%的钌就可大大提高耐腐蚀性；钌钼合金是一种超导体；含钌的催化剂多用于石油化工。 ·三丙胺Tripropylamine，TPA： 结构式： 点击浏览/下载该文件 三、电化学发光反应原理 电化学反应过程：在工作电极上阳极加一定的电压能量作用下，二价的三氯联吡啶钌 [Rubpy3]2+ 释放电子发生氧化反应而成为三价的三氯联吡啶 钌 [Rubpy3]3+，同时，电极表面的TPA也释放电子发生氧化反应而成为阳离子自由基 TPA+ ，并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基 TPA·，这样，在反应体系中就存在具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 [Rubpy3]3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA·。 化学发光过程：具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 [Rubpy3]3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA·发生氧化还原反应，结果使三价的三氯联吡啶
全自动化学发光免疫分析仪产品技术要求
全自动化学发光免疫分析仪 主要由主机（包含样本架输送模块、反应杯配备模块、加样模块、试剂处理模块、温育反应模块、清洗分离模块、光学检测模块、电路控制模块）、软件（发布版本：V1.0）、电源线、串口线及附件（包含样本架、液路管）组成。 该产品基于间接化学发光法，与配套的检测试剂共同使用，在临床上用于对来源于人体血清、血浆或者其他体液样本中的被分析物进行体外定性或定量检测。 1.1产品型号划分说明 1.2结构组成 主要由主机（包含样本架输送模块、反应杯配备模块、加样模块、试剂处理模块、温育反应模块、清洗分离模块、光学检测模块、电路控制模块）、软件（发布版本：V1.0）、电源线、串口线及附件（包含样本架、液路管）组成。 1.3软件信息 1.3.1 软件名称：利德曼化学发光免疫分析仪器软件平台 1.3.2 发布版本：V1.0 1.3.3 版本命名规则 发布版本号：VX.Y 其中：VX.Y由version缩写V，主版本号及次版本号构成：表示正式发布的第一版程序。 X为主版本号，表示全功能集成第一个版本； Y为次版本号，表示此版本程序发布后暂时未发生变更。 1.3.4 运行环境 硬件配置：
CPU：主频1.7GHz以上。 内存：1G以上内存。 硬盘空间：40G以上均可。 软件配置：操作系统：WINDOWS 7 或WINDOWS 10。 2.1加样正确度与重复性 对仪器标称的样品最小加样量和最大加样量、试剂最小加样量和最大加样量进行检测，应符合表1的规定。 表1 加样正确度与重复性要求 2.2 反应区温度控制的正确度和波动度 反应区温度的偏倚应在：37.0℃±0.5℃，波动度不超过0.5℃。 2.3 光检测装置部分 2.3.1仪器噪声 检测空反应管的发光值应不大于200RLU。 2.3.2发光值的线性 在不小于3个发光值数量级范围内，线性相关系数（r）应≥0.99。 2.3.3发光值的重复性 采用发光剂法，变异系数（CV）不超过5％。 2.3.4发光值的稳定性 采用发光剂法，发光值的变化不超过±10％。 2.4 携带污染率 携带污染率应≤10-5。 2.5临床项目的批内精密度
化学发光免疫分析法自己整理
化学发光免疫分析法(CLIA) A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法: (竞争法:用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体,待检抗原与检测信号成反比) 一、原理:本实验采用竞争法,酶标抗原与标准品抗原竞争抗体,标准品抗原浓度越大,结合到抗体上的酶标抗原越少,RLU越小,B/B 值越小。例:A为一种抗原 小分子,有免疫反应性。实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析,使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗A 抗体(FITC-A抗体)发生竞争性免疫反应,再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒,反应生成物结合在磁微粒上,在磁场经分离、洗涤后加发光底物,用冷光分析仪检测发光强度(RLU),测定尿液中A的含量。 二、仪器: 1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司); 2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min 3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯) 4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司)
5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂) 6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis 公司) 三、试剂 1、A标准品 2、A单克隆抗体 3、A-BSA结合物 4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子(5mg/mL) 5、FITC标记的A单克隆抗体 6、HRP标记的A 7、PBST 洗涤液(0、05mol/L PBS, 含0、05% Tween-20) 8、分析缓冲液(0、05 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH 7、4, 含2、0%BSA、0、5 %的水解明胶、0、1%的Proclin-300) 9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢与对碘苯酚溶液) 实验用水为二次蒸馏水 四、试剂处理 1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品; 2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存、 FITC-A单克隆抗体溶液的配制: 取FITC-A单克隆抗体溶液, 以分析缓冲液为稀释液,梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:12000 的FITC-A单克隆抗体溶液, 4 ℃保存。(具体分析) 五、数据处理 通过测量标准品与样品溶液的发光强度(RLU),使用Fl ash’n glow LB955 发光分析仪自带软件中的数据处理程序对测得的数据进行处理、线性方程采用的就是logit(Y)-log(X)的线性回归数学模型, 以logitY 为纵坐标, logX 为横坐标, 其线性方程表达式为logit(Y) = a + blog(X), 线性方程中 X 为标准品(或待测样品)溶液的浓度, logit(Y) =ln(y/1-y),y=B/B0,式中, B 为标准品(或待测样品)溶液的发光强度, B0 为不加标准品(或待测样品)而加分析缓冲液的发光强度、根据标准品的浓度与发光强度值, 经线性回归得标准曲线, 代入样品
促甲状腺激素(TSH)测定试剂盒(电化学发光免疫分析法)产品技术要求lianzhongtaike
促甲状腺激素（TSH）测定试剂盒（电化学发光免疫分析法） 组成： 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人体血清样本中促甲状腺激素（TSH）的含量。 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏； 2.1.2 磁分离试剂摇匀后应为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集、无絮状物； 2.1.3 其它液体组分应澄清，无异物，沉淀物或絮状物； 2.1.4 包装标签应清晰、无磨损、易识别。 2.2 空白限 应不大于0.01μIU/mL。 2.3 准确度 用TSH国家标准品（150530）进行检测，其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。 2.4 线性 在[0.01,100.0]μIU/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.9900。 2.5 精密度
2.5.1 分析内精密度 在试剂盒的线性范围内，浓度为（5.0±1.0μIU/mL）和（30.0±6.0μIU/mL）的样品检测结果的变异系数（CV）应不大于8%。 2.5.2 批间精密度 在试剂盒的线性范围内，用3个批号试剂盒分别检测浓度为（5.0±1.0μIU/mL）和（30.0±6.0μIU/mL）的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于15%。2.6 特异性 2.6.1 与促卵泡生成激素（FSH） 浓度不低于200mIU/mL促卵泡生成激素（FSH）样品，在本试剂盒测定结果应不大于0.01μIU/mL； 2.6.2 与促黄体生成素（LH） 浓度不低于200mIU/mL促黄体生成素（LH）样品，在本试剂盒测定结果应不大于0.01μIU/mL； 2.6.3 与人绒毛促性腺激素（HCG） 浓度不低于1000mIU/mL人绒毛膜促性腺激素（HCG）样品，在本试剂盒测定结果应不大于0.01μIU/mL。 2.7 效期末稳定性 本产品效期为15个月，试剂盒在2～8℃下保存至有效期末进行检测，检测结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1的要求。 2.8 溯源性 依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至TSH国家标准品（编号150530）。
心肌肌钙蛋白I测定试剂盒(直接化学发光法)产品技术要求jianan
心肌肌钙蛋白I测定试剂盒（直接化学发光法） 适用范围：本试剂用于体外定量检测人血清、血浆中心肌肌钙蛋白I（cTnI）的含量。 批特异性：每批校准品的值、质控品的质控范围具有特异性，详见瓶签。 以上校准品（选配1）、校准品（选配2）须选择一项获取校准信息。
2.1 物理性状 2.1.1外观 本试剂盒中的组分齐全、完整，液体试剂澄清，无异物、沉淀物、絮状物和无渗漏。各组分标签字迹清晰、无破损。质控品、校准品为淡黄色冻干品，用蒸馏水复溶后应为淡黄色液体。 2.1.2 装量 液体装量不少于标示值。 2.2线性 在[0.05，50]ng/mL范围内，用线性拟合公式拟合，相关系数应不低于0.9900。 2.3准确度 将已知浓度的心肌肌钙蛋白I加入到血液基质或其他体液成分中，其回收率应在（85%-115%）区间内。 2.4空白限 本试剂盒的空白限不大于0.05ng/mL。 2.5重复性 用急性心肌梗死临界值±50%水平的样本，重复检测10次，其变异系数（CV）不大于8%。 2.6 批间差 用3个批号试剂盒检测同一份样本，则3个批号试剂盒之间的批间变异系数（CV）不大于15%。 2.7 质控品、校准品批内瓶间差 质控品、校准品批内瓶间差CV（%）应不高于10%。 2.8特异性 检测表2中相应浓度的交叉反应物，检测结果应小于0.05ng/mL。 表2 被测物常见的交叉反应物
2.9 质控品赋值有效性 质控品测定结果应在本试剂盒规定的范围内。 2.10 校准品溯源性 应根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》提供所用校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，校准信息可溯源至本公司工作校准品，工作校准品与已上市心肌肌钙蛋白I检测系统比对赋值。 2.11 稳定性 2.11.1效期稳定性 将试剂盒在2℃～8℃的环境中放置12个月后，分别检测2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.7、2.9项，结果应符合各项目的要求。 2.11.2复溶稳定性 质控品复溶后在2℃～8℃条件下储存28天后，产品性能应符合2.7、2.9规定的要求。校准品复溶后在2℃～8℃条件下储存28天后，产品性能应符合2.7规定的要求。
UltraECL底物化学发光检测试剂盒说明书
◆UltraECL底物化学发光检测试剂盒◆目录号1924 ◆使用手册 ◆实验室使用，仅用于体外
UltraECL底物化学发光检测试剂盒目录号：1924 目录编号包装单位 192401 50ml （A液B液各25ml） 192402 100ml （A液B液各50ml） 192403 500ml （A液B液各250ml） 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50ml 100ml 500ml 溶液A 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml 溶液B 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml 本产品收到后按照上面指示温度存放，至少6个月内有效。
产品介绍： Western blot底物发光检测试剂可由标记于二抗上的辣根过氧化酶催化，产生化学发光反应，可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。UltraECL底物化学发光检测试剂盒基于新一代增强型化学发光底物研制而成，并对成份做了优化。产品背景低，稳定性好，比普通ECL试剂敏感度高数十倍。它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应，发出荧光，可对X光胶片曝光，也可直接进行luminometer检测或者荧光CCD扫描。 操作步骤： 1.按常规Western blot操作，二抗孵育后，进行最后一次洗涤时，根据膜的大小，按 每10cm2膜混合0.5ml溶液A和0.5ml溶液B，混匀，配制成发光检测工作液。 2.用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。膜的 蛋白面朝上，置于洁净保鲜膜（某些市售保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜）上。用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上，使其均匀覆盖，室温孵育1-2分钟。 3.用平头镊夹持蛋白膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。膜的 蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡，固定在X片暗盒内。 4.在暗室中取一张X片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分钟。立即显影定 影，根据其曝光强度，缩短或延长下一张X片的曝光时间（对微弱信号，曝光时间可延长至数小时）,或者曝光0.5，1，2，4，6分钟一系列后再显影定影挑选一张满意的。也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。 注意：如果储存使用时间过长，溶液B中过氧化氢可能随时间分解降低曝光敏感度，可取普通纯水按照每10ml纯水加入40μl 30％H202（商品化的H202一般为30％）比例配成新鲜H202溶液替代溶液B使用，可以完全恢复发光工作液最大发光敏感度，效果和新鲜的溶液B完全一样。
化学发光免疫分析法-自己整理
化学发光免疫分析法（CLIA） A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法： （竞争法：用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体，待检抗原与检测信号成反比） 一、原理：本实验采用竞争法，酶标抗原与标准品抗原竞争抗体，标准品抗原浓度越大，结合到抗体上的酶标抗原越少，RLU越小，B/B0值越小。例：A为一种抗原小分子，有免疫反应性。实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析，使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗A抗体（FITC-A抗体）发生竞争性免疫反应，再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒，反应生成物结合在磁微粒上，在磁场经分离、洗涤后加发光底物，用冷光分析仪检测发光强度（RLU），测定尿液中A的含量。 二、仪器：
1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司); 2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min 3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯) 4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司) 5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂) 6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis 公司) 三、试剂 1、A标准品 2、A单克隆抗体 3、A-BSA结合物 4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子（5mg/mL） 5、FITC标记的A单克隆抗体 6、HRP标记的A 7、PBST 洗涤液(0.05mol/L PBS, 含0.05% Tween-20) 8、分析缓冲液(0.05 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH 7.4, 含2.0%BSA、0.5 %的水解明胶、0.1%的Proclin-300) 9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢和对碘苯酚溶液) 实验用水为二次蒸馏水 四、试剂处理 1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品； 2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存. FITC-A单克隆抗体溶液的配制:
电化学发光的基本原理
电化学发光的基本原理 电化学发光免疫测定（ECLI）是一种在电极表面由电化学引发 的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用 的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。ECLL的测定模式与ELISA相似。 基本原理：发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在 电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌，随即释放光子而 恢复为基态的发光底物。医学教育网搜|集整理这一过程在电极表面 周而复始地进行，不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。 电化学发光是化学发光方法与电化学方法相互结合的产物，是 指通过电化学方法来产生一些特殊的物质，然后这些电生的物质之 间或电生物质与其它物质之间进一步反应而产生的一种发光现象。 电化学发光保留了化学发光方法所具有的灵敏度高、线性范围宽、观察方便和仪器简单等优点；同物时具有许多化学发光方法无 法比拟的优点，如重现性好、试剂稳定、控制容易和一些试剂可以 重复使用等优点，广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、 食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。在21世纪中必将继 续为解决人类面临的各种重大问题发挥更加显著的作用。因此有必 要对电化学发光在分析中的应用有更加全面的了解。
电化学发光的应用 1、电极表面活性分布的表征 利用电化学发光成像法可以很好地观察电极表面电化学发光强度的分布情况，而电化学发光强度对电极表面的活性具有很大的依赖性，因此利用电化学发光成像法可以直观地反映电极表面活性分布。 该方法是由Engstrom等于1987年提出的，他们观察到在新抛光的玻碳电极上电化学发光强度分布十分均匀，而在环氧树脂浸渍过的网状玻碳电极上，电化学发光强度的分布不均匀，通过与其它方法相对照，发现电化学发光强度分布能够很好地反映出电极表面活性分布，并且具有微米级的空间分辨能力。在此基础上，他们把电化学发光成像法用于研究碳糊电极表面活性点的分布，观察到碳糊电极表面存在。着活性区域和非活性区域，对于了解碳糊电极的电化学行为具有一定的意义。 由于电化学发光成像法具有直观和简单等优点，许多科学工作者先后将该方法用于表征化学修饰电极表面的活性分布。如Hopper 等用该方法研究了电极表面的电荷对电子转移性质的影响；Pantano 等用该方法研究了电极表面羧基的分布对电子转移性质的影响；ShuItz等用该方法研究了聚合物在电极上的附着情况。从上面的文献可以看出，电化学发光成像法对于了解电极表面的活性分布及其与电极性能之间的关系，进而制备出具有特定功能的电极具有较好的参考价值。
化学发光免疫分析仪相关介绍(精)
化学发光免疫分析仪相关介绍 产品一：MP180化学发光免疫分析仪（京药监械（准）字2007第2400006号） 产品二：MP280化学发光免疫分析仪（京药监械（准）字2007第2400005号） 1产品特点 1. 本仪器采用进口机芯，性能稳定。配套软件与进口全自动化学发光仪软件基本一致，界面人性化、 操作简单、方便。 2. 可用于化学发光体外诊断试剂的检测，本化学发光免疫分析仪外形美观，噪音较小，性能稳定， 检测速度快，可适应目前市场上的多家化学发光诊断试剂盒。 2产品参数： 1. 测量系统：单光子计数器（PMT） 2. 样品形式：96孔微孔板 3. 光谱范围：300～750nm 4. 检测速度：小于3分钟每96孔 5. 孔间干扰：< 1×10－6 6. 本底噪声：0RLU—100RLU/秒 7. 检测范围：0RLU—2.5×107RLU/秒 8. 灵敏度：1×10-22mol/孔 9. 重复性:CV<3% 3产品介绍： 1. 北京泰格科信生物科技有限公司是目前国内最大、研发实力最强、获得国 家食品医药监督管理局注册证最多的专业化学发光免疫诊断产品生产企业。公司同时拥有试剂、仪器两个研发生产平台。试剂、仪器相匹配。试剂稳定，仪器可靠，能及时提供售后服务，产品深受用户欢迎。 2. 目前生产的化学发光免疫分析仪有MP系列半自动化学发光免疫分析仪 及即将推出的全自动板式化学发光免疫分析仪。 3. 目前生产的化学发光诊断试剂盒利用辣根过氧化物酶催化底物发光，稳定 性、灵敏度均优于酶免，又没有放免的缺陷，操作简便，对人体健康无害。 现有化学发光免疫分析诊断试剂包括性激素、甲功、乙肝、肝纤、糖尿病、肿瘤、不孕不育、优生优育、肾功、贫血等10大类80多种产品。 4.仪器试剂一体化，配套效果更好，有利于为客户解决实际操作中遇到的问题，避免 了目前市场上出现的“仪器，试剂厂家互相推卸责任的现象”。 5.仪器软件不定期升级，方便您的使用。
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(化学发光法)
【药品名称】 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（化学发光法） 【英文或拉丁名】 CLIA Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen 【汉语拼音】 YI XING GAN YAN BING DU BIAO MIAN KANG YUAN HUA XUE FA GUANG ZHEN DUAN SHI JI HE 【试剂盒组成】 1.检测HBsAg用发光固相板 8孔×12条 2.检测HBsAg用发光标记物12ml×1瓶 3.HBsAg阴性对照1ml×1瓶 4.HBsAg阳性对照1ml×1瓶 5.发光底物A液6ml×1瓶 6.发光底物B液6ml×1瓶 7.浓缩洗涤液（使用前用纯化水稀释至700ml）35ml×1瓶 【用途】 适用于体外血清、血浆中乙肝表面抗原定性检测。 【检测原理】 采用单克隆抗-HBs包被发光固相板加入待检样品反应后，再加发光标记多克隆抗-HBs应用双抗体夹心法原理检测人血清或血浆中的HBsAg。用鲁米诺化学发光系统做发光底物进行发光反应。 【仪器】 1. 化学发光测定仪 2. 微孔洗板机 【样本要求】 血清或血浆应新鲜，无溶血，无微生物污染，如不能及时检测样本可在零下18-25℃储存6个月。 【操作步骤】 1.取出试剂盒，平衡至室温。按1:1比例混合发光底物A、B液，避光待用。混合后底物放置时间不超过8小时。
2.加阴性对照3孔，阳性对照2孔及待检标本至预包被发光固相板各相应孔内，100μl/孔，置37℃水浴箱中温育30分钟。 3.用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。 4.每孔加检测HBsAg用发光标记物100μl，置37℃水浴箱中温育30分钟。 5.用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。 6.每孔加混合发光底物液100μl，在室温中避光放置10分钟读取各孔RLU。 【结果判定】 Cutoff＝RLU阴性对照×2.1。 阳性结果：样本RLU≥Cutoff 阴性结果：样本RLU当阴性对照RLU不足500时按500计算，超过500时按实际RLU 计算 【注意事项】 1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡30分钟以上。试剂使用前请振荡摇匀。每次测试后，剩余试剂请及时于2-8℃保存，一周内用完。 2.请按需配制底物，混合底物放置时间不超过8小时。 3.确保待测标本无溶血无污染，忌反复冻融，勿用NaN3防腐。 4.自动洗板时应保证每次洗涤后其孔中洗涤液残留液不大于5μl。 5.浓缩洗涤液若有结晶时，请置37℃溶解后再行稀释。 6.所有样品应按传染源处理。 7.不同批号的试剂不能混用。 【局限性】 本产品只用于血清、血浆等样品检测，不适用于全血的检测。 【规格】 96人份/盒 【贮藏】 于2-8℃避光保存。 【包装】 塑料瓶、玻璃瓶及铝箔袋。 【有效期】 有效期为6个月。