微生物复习题重点

一、微生物的鉴定—三部曲：获得该微生物的纯培养、测定一系列必要的鉴定指标、查找权威性鉴定手册。经典分类鉴定依据：1、形态特征：培养即菌落特征（菌落的形状、大小、颜色、表面状况等）；细胞形态：形状（球形、杆状、弧形、螺旋形、丝状等）；大小（细胞的宽度和直径）；排列方式（单个、成对、成链等）；特殊的细胞结构（鞭毛、芽孢、孢子）2、生理生化特征：营养类型（利用氮源、碳源、生长因子的能力）；需氧性（好氧、厌氧、兼性厌氧）；代谢产物的种类和特性；生化试验(糖发酵试验、甲基红试验、乙酰甲基甲醇试验、吲哚试验、硫化氢试验等)3、生态特征（在自然界的分布情况，与其他生物有否寄生或共性关系，宿主种类及与宿主关系等）4、血清学反应（抗原和抗体相互作用反应）5、噬菌体（phage）的敏感性。6、遗传特性：DNA的碱基组成（G+C mol%）。

现代分类鉴定依据：1、形态学特征（在不同类群中进化速度差异大、不准确）；2、分析和比较生物大分子的结构特征（以蛋白质、DNA、RNA作为主要指征）；3、微生物的遗传型的鉴定（DNA碱基比列的鉴定、核酸分子杂交、16SrRNA寡核苷酸编目分析、氨基酸序列和蛋白质分析、遗传重组）；4、细胞化学成分鉴定（细胞壁的化学成分、全细胞水解液的糖型、磷酸类脂的成分分析、醌类的分析）；5、现代分子生物学和免疫学技术的应用（DNA 探针、PCR、DNA芯片、酶联免疫吸附测定、免疫荧光技术、放射免疫技术等）。

二、核酸鉴定微生物的方法依据：1、核酸的分子杂交—间接比较不同微生物DNA碱基排列顺序的相似性。○1DNA-DNA杂交—将未标记的各种微生物菌株的单链DNA预先固定在硝酸纤维素微孔滤膜上，再用经同位素标记的参考菌株的单链DNA小分子片段在最适复性温度条件下与膜上的DNA单链杂交，杂交完毕后洗去滤膜上未配对结合的带标记的DNA 片段，然后测定各菌株DNA滤膜的放射性强度。以参考菌株自身复性结合的放射性计数值为100%，即可计算出其他菌株与参考菌株的相对百分数，这些百分数值即分别代表这些菌株与参考菌株的同源性或相似性水平，同源性在70%以上的菌株可认为是同一个种。○2 DNA-rRNA杂交---当两个菌株DNA的非配对碱基超过10%到20%时，DNA-DNA杂交往往不能形成双链，为更进一步比较亲缘关系较远的菌株，可用rRNA与DNA杂交。○3核酸探针技术---两条不同来源的核酸链如果具有互补的碱基序列，就能够特异性的结合而成为分子杂交链。据此，将已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记，加入已变性的被检DNA样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中DNA的目的，这种能认识到特异性核苷酸序列有标记的单链叫DNA分子核酸探针或基因探针。

三、菌株的定义及命名

菌株：表示任何由一个独立分离的单细胞繁殖而生成的纯种群体及其一切后代（起源于共同祖先并保持祖先特性的一组纯种后代群）。因此，一种微生物的每一不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。菌株强调的是遗传性纯的谱系。

微生物的命名：学名，微生物的科学名称，由拉丁词或拉丁化的外来词组成（第一个词是属名，第二个词是种名）。主要用双名法，少数情况用三名法。

双名法：

学名=属名+种加词+（首次定名人）+现定名人+现名年份

必要，需用斜体表示可省略，用正体表示

“菌株”数量是无限的，“种”的数量是有限的。

菌株名称：

①在种名后面自行加上数字、地名或符号等。

如Bacillus subtilis AS1.389 A TCC=American Type Culture Collection美国模式菌种保藏中心AS=Academia Sinica(中国科学院的缩写) Bacillus subtilis BF7658 BF=北坊

②当文章中前面已出现过某学名后面再出现时，可将后出现的属名简写成1-3个字母。

如：Bacillus subills AS1.398 B.subtilis BF7658 Bac.brevis---短芽孢杆菌

AS=Academia Sinica(中国科学院的缩写) Escherichia coli B 大肠杆菌B株

对细菌类的编号AS1.*** 对酵母类的编号AS2.***

对霉菌类的编号AS3.*** 对放线菌的编号AS4.***

常用的菌株有：

AS2.173一株葡萄糖酵母AS2.375一株面包酵母AS2.393一株酒精酵母

AS2.14一株啤酒酵母AS2.4 另一株啤酒酵母AS2.346一株果酒酵母

应用：具有典型特征的菌株为标准株，是国际和国内所公认的可供细菌鉴定或研究，生产上对比使用。

四、国家标准对于微生物检测指标有三个：菌落总数、大肠杆菌、致病菌（病原菌）。

五、微生物抗原性：病原菌包括细菌、病毒、真菌、原生动物等，进入宿主后可作为抗原而引起免疫反应。不同的病原菌因其结构的差异，故抗原性的差别也很大，以细菌病原菌为例：细菌是一类重要的病原体，化学成分复杂，故每种细菌的细胞都是一个包含多种抗原成分的复合体。1、表面抗原：指包围在细菌细胞壁外层的抗原，主要是荚膜或微荚膜抗原；2、菌体抗原：指存在于细胞壁、细胞膜与细胞质上的抗原；3、鞭毛抗原：指存在于鞭毛上的抗原、即鞭毛蛋白抗原，又称H抗原；4、菌毛抗原：由细菌细胞表面的菌毛蛋白所形成的的抗原；5、外毒素和类毒素：细菌的外毒素一般都是抗原性很强的蛋白质，类毒素则是外毒素经甲醛脱毒后对动物无害、但仍保持强免疫原性的蛋白质，可免疫宿主动物以制取相应的抗体。

对食源性疾病进行鉴定--利用抗原性抗体反应（即免疫学试验或称血清学试验）：a、凝集反应；b、沉淀反应；c、免疫标记技术；d、补体结合试验

（食源性疾病的定义：通过摄食方式进入人体内的各种致病因子引起的通常具有感染或中毒性质的一类疾病。一般可分为感染性和中毒性，常见有食物中毒、肠道感染病、寄生虫病。）六、快速微量检测方法：1、微量生化系统检测：如：商品化的API（法国）-----各类菌都有相应的产品可供选择，可以鉴定的细菌700多种，如API-20E，可鉴定E肠道细菌，Enterotube（美国、瑞士）-----鉴定肠道细菌，Biolog（美国）-----能鉴定上千种细菌，几乎所有的病原菌，以及其他鉴定系统。2、快速、自动化微生物检测仪器和设备：阻抗测定仪、放射测定仪、微量量热计、生物发光测定仪、药敏测定仪、自动微生物检测仪。

七、传统发酵食品的原理---以酿酒和酿造酱油为例：1、酿酒过程是在诸多微生物参与下，将淀粉质原料酿造成酒，生化反应复杂，代谢种类繁多。主要有：○1淀粉糖化。淀粉质原料糊受热后，在微生物产生的各种淀粉酶的作用下水解成糖的过程。主要淀粉酶有：a-淀粉酶，β-淀粉酶，葡萄糖淀粉酶，异淀粉酶。参与菌种：黑曲霉、甘薯曲霉、米根霉、米曲霉、芽孢杆菌等。○2酒精发酵。第一型发酵经EMP途径，第二型和第三型发酵产物为乙醇、甘油等。常用菌种:酿酒酵母、葡萄糖汁酵母。○3产酸菌与有机酸的形成○4杂醇油的形成○5酯类与醛类的形成：酯有特殊香味产生的酯。乙酸乙酯、己酸乙酯，醛类以乙醛和乙缩醛为主。○6双乙酰的生成：酵母合成AA与高级醇的平行副产物有一定味道。2、酿制酱油，是以大豆和脱脂大豆、小麦和麸皮为原料，经微生物发酵制成色香味的调制品。人工培养的纯菌是水解蛋白质能力强的米曲霉，生产上应用较多的是沪酿3.042、AS3.867等。参与的微生物：毛霉、根霉、青霉等霉菌，微球菌、乳酸菌、芽孢杆菌、四联球菌等、细菌、球拟酵母等。糖类、醇类、酯类赋予酱油特有的滋味，并有80余种微量香味成分，有酯类、醇类等。八、菌种改良的方法：1、自然筛选：从自然界中进行筛选。2、诱变育种：理化因素刺激变异。3、杂交育种：细胞×细胞、细胞×孢子、孢子×孢子。4、原生质体融合育种：原生质体+原生质体、原生质体+灭火原生质体、原生质体+细胞器、原生质体+异源细胞5、分子育种---细胞工程技术育种：○1获取目的基因（从适当的供体细胞分离）○2载体的选择○3体外

重组：限制性内切酶、DNA连接酶、低温、退火-杂交质粒○4重组质粒导入受体受体细胞○5重组受体细胞的筛选和鉴定。