ELISA法检测老年人梅毒抗体易产生假阳性分析

表2　食管癌患者经手术治疗6个月复发组与未复发组血清S I L-2R、S C P活力比较

组别n S I L-2R(u/m l)S C P(n k a t)

复发组未复发组12

28

780.4±285.2

152.6±84.8

2476.5±201.2

1602.8±181.4

P<0.01(与未复发组比较)

3　讨论

据文献报告[3,4],S I L-2R在一些自身免疫性疾病、肿瘤患者中可显著地升高,且与病程、疗效和预后密切相关。国外有人报告[5],S I L-2R主要是由免疫活性细胞膜I L-2R (m I L-2R)脱落后进入体液中,通过与m I L-2R竞争结合I L -2参与T淋巴细胞依赖性免疫反应的免疫调节,其结果是抑制和减弱淋巴细胞的增殖、分化及功能的发挥,高水平的S I L-2R还可以影响B淋巴细胞功能及血清免疫球蛋白的浓度。故被认为S I L-2R为体内的一种重要的免疫抑制物质,其血清中含量的高低可影响机体的细胞免疫状态。T淋巴细胞、外周血单核细胞活化后均可释放S I L-2R。本文结果表明,食管癌患者在术前血清S I L-2R水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),术后6个月复发组又明显地高于未复发组(P<0.01)。分析其原因可能是由于患者体内存在有细胞免疫功能的紊乱,T淋巴细胞和B淋巴细胞功能失去平衡,故T细胞调节功能的障碍可能是造成患者血清中S I L-2R水平升高的主要原因之一。

近来的研究表明[6,7],在白血病、妇科肿瘤等疾病中可有不同程度的升高。在正常情况下,C P在唾液酶的作用下脱去酶蛋白分子上的唾液酸后再进一步地降解。当患癌症时,由于癌细胞增殖活跃,癌细胞表面糖脂脱落增加,使血清唾液酸含量异常的增加,由于癌症患者唾液酶的活性降低,唾液酸转移酶活性增加,使脱去唾液酸处于分解状态的C P又重新使唾液酸化,影响了C P的重新降解过程,从而使C P的活力增加,癌细胞增殖越快,对C P的分解代谢酶活力影响也会明显,患者的S C P酶活力也会增加明显。本文结果表明,食管癌患者在术前血清C P活力显著地高于正常人组(P< 0.01),复发组又明显高于未复发组(P<0.01),这与国内文献报告的基本一致[8]。

参考文献

[1]R u i mL A,N e l s o nD L.T h es o l u b l ei n t e r l e a k i n-2r e c e p t o r:b i o l o g y

f u n c t i o na n dc l i n i c a l a p p l i c a t i o n.A n nI n t e r nM e d.1990,113:614.

[2]丁昌玉,赵学海,钱冠华,等.呼吸系统肿瘤血清铜蓝蛋白氧化酶活力的变化.蚌埠医学院学报.1993,18(2):82.

[3]何浩明,田小平,苏彩女,等.肺癌患者外周血S I L-2R水平检测的临床意义.淮海医药.2000,20(1):13.

[4]富宁,朱迅.可溶性白细胞介素-2受体及其生物学意义.国外医学免疫学分册.1989,12(5):225.

[5]R o b bR I.C o n c e r s i o n o f l o w-a f f i n i t y i n t e r l e u k i n-2r e c e p t o r s t o h i g h -a f f i n i t y s t a t e f o l l o w i n g f u s i o no f c e l l m e m b e r a n e s.P r o c N a t1A c a n dS c i U S A.1986,83:3992.

[6]丁昌玉.从生物学角度论述铜蓝蛋白与临床医学的关系.蚌埠医学院学报.1992,17(2):138.

[7]曾贤,杨琳,陈汉美.九种肿瘤标志物测定原发性肝癌的初步评价.中华肿瘤杂志.1993,15(6):427.

[8]许佩舜,杨家裕.原发性肺癌与肺结核患者血清铜、钙测定的临床意义.肿瘤.1993,12(2):81.

(2003-04-15收稿)

E L I S A法检测老年人梅毒抗体易产生假阳性分析

江苏省常州市肿瘤医院(213001) 季德成　李晓平　董春雷　倪　艳

梅毒是性传播性疾病之一。临床上梅毒的诊断主要是根据临床症状和血清学检查,而在血清学检查中,对特异性抗体检测最常用的方法是梅毒螺旋体被动颗粒凝集试验T P-P A(或梅毒螺旋体血球凝集试验T P H A)和梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验T P-E L I S A。T P P A(或T P H A)已被美国疾病预防控制中心(C D C)定为确诊方法,而T P-E L I S A因其对I g G和I g M都具有很好的检测能力[1,2],且灵敏度高,价格低廉,操作方便,结果客观,国内因此广泛使用。然很多文章对T P-E L I S A的特异性却报道不一致[2～5],另外有人报道了住院老年病人阳性率高的现象[6],笔者在工作中也注意到有很多临床无症状,主诉无发病史和疾病接触史的老年人T P-E L I S A阳性,为此笔者做一番深入调查,现报道如下。

1　对象和方法

1.1　对象　2003年1月～2005年2月期间我院住院病人、体检及部份门诊病人共3796人。其中老年组年龄在75岁及75岁以上的老人共507人,对照组选择年龄(18～55)岁之间的人共3289人。

1.2　试剂　E L I S A试剂盒,由英科新创(厦门)科技有限公司提供。T P P A试剂盒由珠海丽珠试剂有限公司提供的日本富士公司赛乐迪亚(S E R O D I A -T P P A)。试剂均在有效期内,操作均按说明书。

1.3　假阳性判断　T P-E L I S A试剂阳性而T P P A试验阴性,并在10d后复检无变化。

1.4　真阳性判断　T P-E L I S A试验与T P P A试验同为阳性。

1.5　仪器　酶标仪为B I O-R A Dm o d e l550。

1.6　统计学方法　采用χ2检验。

2　结果

结果老年组共检出T P-E L I S A阳性17例,其中T P-E L I S A假阳性14例(女9,男5),假阳性率2.8%(14/507),平均S/C.O.(S代表样品孔O D值,C.O.代表临界值,如样品S/C.O.计算值>1则判定为阳性,否则定为阴性。如阴性对照孔O D均值<0.05时以0.05计算)值为3.91。真阳性

3例(男2,女1),平均S/C.O.值为1.81。所有老年组都无临床症状,真阳性中男性均承认曾患过梅毒,女性77例,自诉其爱人曾患有梅毒,本人未有发病史。14例假阳性中仅二人诉有过婚外史和梅毒病史。对照组共检出T P-E L I S A阳性99例,其中T P-E L I S A假阳性10例,平均S/C.O.值为3.49,阳性率0.3%(10/3289)。两个年龄组中T P-E L I S A 假阳性差异较大,经卡方检验,χ2值为45.14,P<0.01,两年龄组间T P-E L I S A假阳性差异有统计学意义。

3　讨论

梅毒从感染到产生抗体需要一段时间,而T P-E L I S A的灵敏度高于T P P A,采用10d后复检可以避免早期患者因抗体浓度低而被T P P A漏检[2]。况且本次试验的假阳性的S/ C.O.值大多都很高,基本可排除两种方法因灵敏度引起的结果的差异。

我们在工作中发现很多老年人T P-E L I S A阳性,然临床上没有症状,病人也主诉无发病史和疾病接触史。老年人75岁以上基本丧失了性能力,通过性感染上梅毒可能性已经很小。有人认为梅毒潜伏期可以是(5～25)年[7],且抗体在体内能存在很长时间,因此老年人抗体阳性的比率高是可以解释的,本次调查中3例老年真阳性平均S/C.O.值为1.81,也印证了老年人确可能存在这种抗体,而且表明经过一段时间后抗体水平已经降低。但在14例假阳性中,T P P A却不能检测出来,笔者以为不能简单地用T P P A假阴性来解释,也许检测到的本来就不是梅毒特异性抗体,因为病人无任何症状和病史能相佐证。出现这种差异一般不外乎两个方面原因,一种是存在有某种物质干扰E L I S A测定,另一种原因是二种方法的抗原存有差异。

在梅毒感染过程中,WI B法可检测到T P的特异性蛋白抗原抗体,其中有92K D、47K D、45K D、17K D、15K D、42K D、37K D等;47K D、45K D、17K D、15K D蛋白为梅毒螺旋体外膜的脂蛋白,具有较好免疫活性[8,9],国内外梅毒E L I S A试剂盒主要是选用以上的分子抗原,用基因重组表达和B O C-氨基固相法得到多肽抗原,为使小分子多肽有较好的吸附性,再用人血清白蛋白与之联接,且合成后的多肽一般不作提纯,直接作为试剂抗原使用[7,10,11]。而T P P A采用的是纯化的致病性梅毒螺旋体(N i c h o l s株)抗原。理论上E L I S A法因为采用的位点少似乎应该更特异,但是实际抗原却存在着不纯的问题,而且使用了人血清白蛋白更增加意外的假阳性抗原位点的可能。老年较易使T P-E L I S A检测产生假阳性的原因尚不清楚,可能是老年人容易出现免疫功能上的异常,容易产生一些针对联接用的白蛋白抗体或者是一些异常蛋白质干扰了T P-E L I S A反应?确切的原因尚待进一步探讨。

关于T P-E L I S A法,国内有很多研究报告,反映与T P P A 法符合率存在着一定的差异,仔细分析这些报道,发现在研究对象中,老年人所占的比例存在着不同。美国疾病预防控制中心(C D C)《疾病率和死亡率周报》(M M W R)2002年5月10日第51卷第6期研究报告中明确了梅毒血清特异性抗体检测法应用F T A-A B S和T P P A,只字未提E L I S A法。个中的原因没有说明,也许是因为E L I S A方法除用人血清白蛋白联接多肽抗原,还不能很好地直接用上T P P A试剂中的抗原。

(本文得到英科新创公司技术支持谨表感谢!)

参考文献

[1]傅均星,周潇,曾铁兵.基因重组抗原E L I S A法在梅毒螺旋体抗体检测中的评价.南华大学学报(医学版).2004,32(3):305,306, 314.

[2]毛爱玲,郭晓黎,聂晓勇.梅毒T P P A、E L I S A两种试剂的比较.中国卫生检验杂志.2003,13(2):378.

[3]刘贵育,王明丽.T P-E L I S A诊断梅毒螺旋体感染的可行性评价.安徽医科大学学报.2004,39(2):150.

[4]王露楠,邓巍,李金明.梅毒螺旋体感染不同血清学诊断方法的临床评价.中华检验医学杂志.2002,(25):6252.

[5]杨红,杨海亮,胡翔宜.T P P A与E L I S A检测梅毒血清的比较.山西职工医学院学报.2002,12(2):47.

[6]周毅.老年梅毒螺旋体感染51例调查与分析.中国现代医药杂志.2004,6(5):7.

[7]王福俊,贺坚慧,王琳琳.梅毒螺旋体抗体E L I S A测定方法的建立和应用.上海医学检验杂志.2000,15(4):218.

[8]党倩丽,陆学东,张小艳,等.梅毒螺旋体感染兔模型中特异性抗体分析.中国皮肤病性病学杂志.2004,18(1):28.

[9]F u j i m u r a k,I s e n n,U e n o e,e t a l.R e a c t i v i t y o f r e c o m b i n a n t t r e p o n e m a-p a l l i d u m(r-T p)a n t i g e n s w i t h a n t i-t p a n t i b o d i e s i n h u m a n s y p h i l i t i c s e-r a e v a l u a t e db y E L I S A.J C l i nL a bA n a l.1997,11(6):315.

[10]Y o u n gH,M o y e s A,S e a g a r L,e t a l.N o v e l r e c o m b i n a n t-a n t i g e n

e n z m e i m m u n o a s s a y

f o r s e r o l o

g i c a l d i a g n o s i s o f s y p

h

i l i s.J C l i n M i c r o b i o l. 1998,36(4):913.

[11]G e r b e r a,C r e l l s,M o r e n z J.R e c o m b i n a n t.T r e p o n e m a p a l l i d u m a n-t i g e n s i ns y p h i l i s s e r o l o g y.I m m u n o b i o l o g y.1996,196:535.

(2005-04-04收稿)

一例睾丸精原细胞瘤患者血清H C G-β、H C G的动态观察云南省肿瘤医院核医学科(650118) 桂艳丽　马世兴　王永斌

除妊娠外,人绒毛膜促性腺激素(H C G)是由滋养层肿瘤产生的。约10%的卵巢或睾丸胚细胞瘤病人也出现H C G升高[1]。

应用放射免疫分析动态观察我院一例睾丸精原细胞瘤患者自发病以来,其血清H C G-β、H C G变化情况,以探讨H C G-β、H C G和睾丸精原细胞瘤病情发展变化的关系。

1　病史摘要

患者:男,28岁,于半年前无意中发现右侧睾丸肿大约“鸡蛋”大小,质韧、无压痛未予重视。后右侧睾丸渐增大至