NordiQC官网石蜡切片信息汇总
NordiQC 官网石蜡切片信息汇总
主要汇总内容如下：
1、Run45 2015年最新评价信息（肺间变性淋巴瘤激酶Lu-ALK ）
材料:为研究Lu-ALK 而染色的切片主要由以下组成：
1）没有EML4-ALK 迁移的细胞株 ；2）具有EML4-ALK 迁移的细
胞株；3）迈克尔癌细胞；4）扁桃体；5）阑尾；6）具有ALK 迁
移的大细胞淋巴瘤；7）具有EML4-ALK 迁移的肺腺癌细胞；8）
没有EML4-ALK 迁移的肺腺癌细胞
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
Lu-ALK 染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 几乎所有的间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)癌细胞均具有显著的中到强的细胞核和细胞质染色；
? 具有EML-ALK 迁移的肺腺癌组织中几乎所有癌细胞细胞质上至少有弱到中度的颗粒状染色；
? 麦克尔癌中分散的癌细胞至少有弱到中度的颗粒状细胞质染色反应； ? 阑尾中的神经节细胞至少有弱到中度的颗粒状细胞质染色反应；
? 没有ALK 迁移的肺癌中癌细胞没有染色；
? 阑尾和扁桃体上皮细胞没有染色反应。
2、Run26 2009年最新评价信息（α-甲基酰基-CoA 消旋酶AMACR ，P504S/前列腺上皮内瘤(PIN)混合物）
材料:为研究AMACR/PIN
1）前列腺上皮内瘤（PIN ）；2）扁桃体；3）肾；4）前列腺增
生组织；5-6）前列腺癌
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
AMACR 染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 肾近端小管上皮细胞具有中到强的颗粒状细胞质染色；
? 大部分的PIN 和两个前列腺腺癌细胞具有中到强的细胞质染色；
? 前列腺增生组织上皮细胞呈现阴性或者只有较弱的焦点状的细胞质染色； ? 基质细胞呈现阴性或者只有较弱的细胞质染色；
Run16 2009年最新评价信息（α-甲基酰基-CoA 消旋酶AMACR ，P504S ） 材料:为研究AMACR 1）前列腺增生组织；2-3）前列腺腺癌；
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
AMACR 染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 两个前列腺腺癌细胞具有中到强的细胞质染色；
? 前列腺增生组织呈现阴性或者只有较弱的焦点状的细胞质染色；
? 基质细胞呈现阴性或者只有较弱的细胞质染色；
3、Run44 2015年最新评价信息（α-平滑肌肌动蛋白ASMA ）
材料:为研究ASMA 而染色的切片主要由以下组成：
1）肝脏 ；2）阑尾；3）平滑肌肉瘤；4）GIST ；5）平滑肌瘤；
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
ASMA 染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 肌成纤维细胞，叶片表面粘膜基层和肌成纤维细胞隐窝以及
阑尾上皮表层所有平滑肌细胞具有显著的中到强的细胞质染色，
? 具有EML-ALK 迁移的肺腺癌组织中几乎所有癌细胞细胞质上至少有弱到中
度的颗粒状染色；
? 肝脏中大部分的窦周细胞（肝星状细胞）至少有弱到中度的清楚的细胞质
染色；
? 平滑肌肉瘤和平滑肌瘤中几乎所有的癌细胞具有中到强的显著的细胞质染
色反应；
? GIST 中大部分的癌细胞具有弱的细胞质染色；
? 待测组织血管中几乎所有的平滑肌细胞具有较强的细胞质染色。
Run21 2007年最新评价信息（α-平滑肌肌动蛋白ASMA ）
材料:为研究ASMA 而染色的切片主要由以下组成：
1）阑尾；2）平滑肌肉瘤；3）胚胎性横格纹肌肉瘤；4）正常
乳房；5）胃肠道间质瘤（GIST ）；6）肝脏
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
ASMA 染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 粘膜基层薄层，基层固有层和肌成纤维细胞隐窝以及上皮表层所有平滑肌
细胞具有显著的中到强的细胞质染色，
? 乳房的腺体和导管的基层肌上皮细胞具有较强的细胞质染色；
? 肝脏中大部分的窦周细胞（肝星状细胞"myofibroblasts"）至少有弱到中度
的清晰的细胞质染色；
? 平滑肌肉瘤和胃肠道间质瘤（GIST ）中几乎所有的癌细胞具有较强的显著
的细胞质染色反应；
? 待测组织血管中几乎所有的平滑肌细胞具有较强的细胞质染色。
Run10 2004年最新评价信息（α-平滑肌肌动蛋白ASMA ）
材料:为研究ASMA 而染色的切片主要由以下组成：
1）子宫平滑肌肉瘤；2）乳房纤维囊性疾病；3）胃肠间质瘤；
4）小肠GIST ；5）阑尾
ASMA 染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 阑尾平滑肌细胞（血管和肌层），肌成纤维细胞和腺体肌上
皮乳房纤维囊性疾病的平滑肌具有较强的细胞质染色，同时子宫平滑肌肉瘤具有焦点状的细胞质染色反应。
Run27 2009年最新评价信息（α-平滑肌肌动蛋白ASMA ）
材料:为研究ASMA 而染色的切片主要由以下组成：
1）阑尾；2）肝脏；3-4）平滑肌肉瘤；5）胃肠道间质瘤
（GIST ）；
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
ASMA 染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 粘膜基层薄层，基层固有层和肌成纤维细胞隐窝以及阑尾上皮表层所有平
滑肌细胞具有显著的较强的细胞质染色，
? 肝脏中大部分的窦周细胞（肝星状细胞）具有中到强的细胞质染色； ? 平滑肌肉瘤和胃肠道间质瘤（GIST ）中几乎所有的癌细胞具有中到强的显
著的细胞质染色反应；
? 待测组织血管中几乎所有的平滑肌细胞具有较强的细胞质染色。
材料:为研究Bcl-2而染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）肝脏阑尾；3）处理48小时的扁
桃体；4）滤泡性淋巴瘤，II 级5）滤泡淋巴瘤,Ⅲ级；
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
Bcl-2染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 扁桃体和阑尾几乎所有外围B 和T 细胞具有中到强的显著的细胞质染色； ? 扁桃体的基底鳞状上皮细胞和阑尾基底上皮细胞至少有弱的细胞质染色； ? 两个滤泡淋巴瘤中几乎所有的肿瘤细胞至少有弱的细胞质染色反应； ? 原始的中心B 细胞没有染色反应。
Run13 2005年最新评价信息（β-2蛋白）
材料:为研究Bcl-2而染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）处理168小时的扁桃体；3-5）
滤泡性淋巴瘤；
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
Bcl-2染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 两个扁桃体组织外套层中的B 淋巴细胞和滤泡间的T 淋巴细胞和原始中心
（在这里B 淋巴细胞需要呈现阴性）需要具有中到强的细胞质显著染色，同时所有的滤泡淋巴细胞需要有强的细胞质染色；
材料:为研究Bcl-6而染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）处理48小时的扁桃体；3）滤泡
性淋巴瘤Ⅰ级；4）滤泡性淋巴瘤，II 级；5）弥散型大B 细胞
淋巴瘤,无原始生发中心B 细胞类型(DLBCL non-GCB)； 6）
DLBCL,GCB 。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
Bcl-6染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 处理24小时后的扁桃体原始中心几乎所有B 淋巴细胞具有中到强的细胞核
染色；
? 处理24小时后的扁桃体的大部分鳞状上皮细胞至少有弱到中度的细胞核染
色；
? 两个滤泡淋巴瘤的肿瘤细胞具有中到强的细胞核显著染色反应；
? DLBCL,GCB 亚型，no.6组织中心大部分肿瘤细胞至少具有弱到中度的细胞
核染色；
? DLBCL,non-GCB 亚型，no.5组织中心分散的肿瘤细胞没有或者只有一个细
胞核染色反应。
Run28 2010年最新评价信息（β-6蛋白Bcl-6）
材料:为研究Bcl-6而染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）处理48小时的扁桃体；3）滤泡
性淋巴瘤Ⅰ级；4）滤泡性淋巴瘤，II 级；5）弥散型大B 细胞
淋巴瘤。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
Bcl-6染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 两个扁桃体原始中心大部分B 淋巴细胞具有中到强的细胞核染色；
? 扁桃体的大部分鳞状上皮细胞至少有弱到中度的细胞核染色；
? 两个滤泡淋巴瘤的肿瘤细胞具有中到强的细胞核显著染色反应；
? 弥散型大B 细胞淋巴瘤大部分肿瘤细胞至少有弱到中度的细胞核染色反应。
Run17 2006年最新评价信息（Bcl-6）
材料:为研究Bcl-6而染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）处理72小时的扁桃体；3）滤泡
性淋巴瘤4-5）弥散型大B 细胞淋巴瘤；6）滤泡性淋巴瘤。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
Bcl-6染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 两个扁桃体原始中心和鳞状上皮大部分细胞具有中到强的细胞核染色； ? 两个滤泡淋巴瘤的肿瘤细胞具有中到强的细胞核显著染色反应；
? No.5弥散型大B 细胞淋巴瘤原始中心B 细胞系-GCL ）具有较强的细胞核染
色反应。
? No.4弥散型大B 细胞淋巴瘤(激活B 细胞系-ABC)染色为阴性。
6、Run41 2014年最新评价信息（B细胞特异激活蛋白BSAP，PAX5）
材料:为研究BSAP而染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）处理48小时的扁桃体；3）阑
尾；4）弥散型大B细胞淋巴瘤（DLBCL）;5) 霍奇金淋巴瘤
（经典型）。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
BSAP染色最佳的评价标准包括以下条件：
?几乎所用的地幔区B细胞，生发中心B细胞和扁桃体和阑尾的滤泡外周B
细胞具有中到强的细胞核染色；
?几乎所用的DLBCL肿瘤细胞具有中到强的细胞核染色；
?在霍奇金淋巴瘤中霍奇金细胞和里德·斯顿伯格细胞至少有弱的但是明显的
细胞核染色反应；
?其他细胞没有染色反应，包括T细胞，扁桃体鳞状上皮细胞和阑尾柱状上
皮细胞。
Run28 2010年最新评价信息（B细胞特异激活蛋白BSAP，PAX5）
材料:为研究BSAP而染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）阑尾；3）处理48小时的扁桃
体； 4）弥散型大B细胞淋巴瘤（DLBCL）;5) 霍奇金淋巴瘤
（NS）。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
BSAP染色最佳的评价标准包括以下条件：
?几乎所用的地幔区B细胞，生发中心B细胞和扁桃体和阑尾的滤泡外周B
细胞具有中到强的细胞核染色；
?几乎所用的DLBCL肿瘤细胞具有中到强的细胞核染色；
?在霍奇金淋巴瘤中霍奇金细胞和里德·斯顿伯格细胞至少有弱的但是明显的
细胞核染色反应；
7、Run29 2010年最新评价信息（癌症抗原CA125）
材料:为研究BSAP 而染色的切片主要由以下组成：
1）阑尾；2）Salpinx 输卵管，3）浆液性卵巢癌II 级，
4）浆液性卵巢癌III 级。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CA125染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 几乎所用输卵管上皮细胞具有中到强的主要是细胞膜染色；
? 两个卵巢癌中大部分的癌细胞具有中到强的显著的细胞膜染色；
? 在阑尾生发中心滤泡树突状网络具有弱到中度的染色反应；
? 阑尾的上皮细胞没有染色反应。
Run15 2005年最新评价信息（癌症抗原CA125）
材料:为研究BSAP 而染色的切片主要由以下组成：
1） 输卵管；2）阑尾；3）结肠腺癌；4）间皮瘤；5）
浆液性卵巢癌II 级；6）浆液性卵巢癌III 级。
所有样品在10％NBF 中固定24-48小时。
CA125染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 输卵管上皮细胞具有中到强的主要是细胞膜染色；
? 两个卵巢癌中大部分的癌细胞具有中到强的显著的细胞膜染色；
? 在间皮瘤中至少有一处局灶性膜染色；
? 上皮细胞或者结肠癌细胞没有染色反应。
8、Run37 2013年最新评价信息（CD3）
材料:为研究CD3而染色的切片主要由以下组成：
1）结肠癌；2）扁桃体；3-4）外周T 细胞淋巴瘤，未另外说明
（NOS ）
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CD3染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 滤泡间的T 区域和扁桃体的原始中心T 细胞具有中到强的细胞膜染色； ? 结肠粘膜上皮内T 细胞具有中到强的细胞膜染色；
? 两个T 细胞淋巴瘤中大部分的肿瘤T 细胞至少具有弱到中度的细胞膜染色； ? 其他细胞没有染色反应，尤其是扁桃体中B 细胞必须为阴性。
Run22 2008年最新评价信息（CD3）
材料:为研究CD3而染色的切片主要由以下组成：
1）结肠癌；2）扁桃体；3）前T 细胞淋巴瘤；4）外周T 细胞
淋巴瘤。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CD3染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 3个T 细胞淋巴瘤中大部分的肿瘤T 细胞具有较强的细胞膜染色；
? 扁桃体和结肠癌中所有的T 细胞具有较强的细胞膜染色
? 其他细胞没有染色反应，尤其是扁桃体中B 细胞必须为阴性。
Run14 2005年最新评价信息（CD3）
材料:为研究CD3而染色的切片主要由以下组成：
1）肝脏；2）处理4小时的扁桃体；3）处理484）处理96小时的扁桃体；5-7）节点T 细胞淋巴瘤。
CD3染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 3个T 细胞淋巴瘤中大部分的肿瘤T 细胞具有较强的细胞膜染色； ? 扁桃体和肝脏中所有正常的T 细胞具有较强的细胞膜染色
? 其他细胞没有染色反应，尤其是扁桃体中B 细胞必须为阴性。
Run5 2001年最新评价信息（CD3）
材料:为研究CD3
4个T 细胞淋巴瘤和1个B 细胞淋巴瘤
右图注释：使用mAb PS1可以获得最佳的染色
效果。所用的T 淋巴瘤细胞染色较深，同时左上角的B 淋巴瘤细胞没有染色。使用Dako 的pAb 获得了同样的染色结果。
9、Run44 2015年最新评价信息（CD4）
材料:为研究CD4而染色的切片主要由以下组成：
1）扁桃体；2）结肠癌；3）肝脏；4）霍奇金淋巴瘤（经典
型）；5）外周T 细胞淋巴瘤，未另外说明（NOS ）。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CD4染色最佳的评价标准包括以下条件：
? T 区域和扁桃体生发中心的几乎所有T 细胞辅助因子/诱导因子具有较强的
细胞膜染色；
? 作为扁桃体巨噬细胞发生中心的巨噬细胞，结肠粘膜固有层的巨噬细胞和
肝脏中的可扑弗氏细胞至少具有中度的细胞膜染色反应能力；
? 肝脏血窦内皮细胞至少具有弱到中度的细胞膜染色反应能力；
? T 细胞淋巴瘤中大部分的肿瘤T 细胞至少具有弱到中度的细胞膜染色； ? 其他细胞没有染色反应，尤其B 细胞，霍奇金/Reled-Sternberg 细胞，扁桃
体鳞状上皮细胞和结肠柱状上皮细胞必须为阴性。
Run29 2010年最新评价信息（CD4）
材料:为研究CD4而染色的切片主要由以下组成：
1）具有转化为经典霍奇金淋巴瘤能力的慢性淋巴细胞白血病
（B-CLL ）B 细胞；2）T 细胞淋巴瘤（Sezary 综合征）；3）T
细胞淋巴瘤（未另外说明（NOS ））；4）肝脏；5）处理24小
时的扁桃体组；6）处理72小时的扁桃体组。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CD4染色最佳的评价标准包括以下条件：
? T 区域和扁桃体生发中心的正常T 细胞辅助因子/诱导因子具有较强的细胞
膜染色；
? 巨噬细胞，尤其是扁桃体巨噬细胞，可扑弗氏细胞和肝窦腔内上表皮细胞
至少具有中度的细胞膜染色反应能力；
? CD4阳性的T 细胞淋巴瘤（Sezary 综合征）肿瘤细胞具有较强的细胞膜染
色反应能力；
? 正常的T 细胞辅助因子/诱导因子具有较强的细胞膜染色并且具有转化为经
典霍奇金淋巴瘤能力的慢性淋巴细胞白血病（B-CLL ）B 细胞具有中度的细胞膜染色反应；
? 其他细胞没有染色，尤其是B 细胞核霍奇金/里德·斯顿伯格细胞染色结果为
阴性。
Run14 2005年最新评价信息（CD4）
材料:为研究CD4而染色的切片主要由以下组成：
1）肝脏；2）处理4小时的扁桃体；3）处理484）处理96小时的扁桃体；5-7）淋巴结T 细胞淋巴瘤。。
CD4染色最佳的评价标准包括以下条件：
? T 细胞淋巴瘤肿瘤细胞5-7具有较强的细胞膜染色。NO.6
为D4阴性并且正常的T 细胞残留需要被证实。
? 在所有扁桃体的T 细胞正常的辅助因子/诱导因子具有较强的，显著的细胞
膜染色反应。
? 在巨噬细胞，尤其是扁桃体生发中心巨噬细胞，肝脏中可扑弗氏细胞和肝
窦腔内上表皮细胞至少具有中度的细胞膜染色反应能力；
? 其他细胞没有染色，尤其是B 细胞应该为阴性；
? 克隆1F6被观察到具有明显的染色反应是可以接受的，因为它并没有影响
对最终结果的解释。
10、Run49 2017年最新评价信息（CD5）
材料:为研究CD5染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2处理48小时的扁桃体；3-4）套细胞
淋巴瘤（MCL ）；5）B 细胞慢性淋巴细胞白血病（B-CLL ）
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CD5色最佳的评价标准包括以下条件：
? T 区域和扁桃体生发中心的几乎所有的T 细胞具有较强的，主要是细胞膜
的染色反应；
? 扁桃体地幔区B 细胞（核心1）和扁桃体地幔区大部分的B 细胞至少具有
中度的，明显的细胞膜染色；
? 在MCL （核心4）中所有肿瘤细胞至少具有弱到中度的，明显的细胞膜染
色反应；
? 所有的T 细胞和MCL 以及B-CLL 的肿瘤细胞混合后均有较强的，显著的细
胞膜染色；
? 生发中心的B 细胞没有染色反应。
Run34 2012年最新评价信息（CD5）
材料:为研究CD5染色的切片主要由以下组成：
1）NBF 处理24小时的扁桃体；2）NBF 处理48小时的扁桃体；
3）套细胞淋巴瘤（MCL ）；4-5）B 细胞慢性淋巴细胞白血病（B-
CLL ）。
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CD5色最佳的评价标准包括以下条件：
? T 区域和扁桃体生发中心的几乎所有的T 细胞具有较强的，主要是细胞膜
的染色反应；
? 扁桃体中次生卵泡地幔区分散的B 细胞至少具有弱到中度的细胞膜染色；
? MCL 的大部分肿瘤细胞和两个B-CLLs 大部分的肿瘤细胞具有中度的明显的
细胞膜染色；
? 生发中心的B 细胞没有染色反应。
Run24 2008年最新评价信息（CD5）
材料:为研究CD5染色的切片主要由以下组成：
1）处理24小时的扁桃体；2）处理72小时的扁桃体； 3-4）B 细
胞慢性淋巴细胞白血病（B-CLL ）；5）套细胞淋巴瘤（MCL ）；
以上组织均被10%福尔马林中性缓冲液处理。
CD5色最佳的评价标准包括以下条件：
? 大部分的扁桃体外周T 细胞具有较强的，明显的细胞膜染色反应，同时分
散的分组的T 细胞需要分别被证明其染色能力；
? 扁桃体中次生卵泡地幔区分散的B 细胞至少具有弱到中度的细胞膜染色； ? MCL 的大部分肿瘤细胞和两个B-CLLs 大部分的肿瘤细胞具有中度的明显的
细胞膜染色；
Run17 2006年最新评价信息（CD5）
材料:为研究CD5染色的切片主要由以下组成：
1）扁桃体；2- 3）B 细胞慢性淋巴细胞白血病（B-CLL ）；4）
外周T 细胞；5-6）套细胞淋巴瘤（MCL ）。
以上组织均被10%NBF 处理。
CD5色最佳的评价标准包括以下条件：
? 大部分的扁桃体外周T 细胞具有较强的，明显的细胞膜染色反应； ? B-CLL 和地幔细胞淋巴瘤大部分的肿瘤细胞具有较强的，显著的细胞膜染色；
? T 细胞淋巴瘤中剩余的正常T 细胞具有较强的，显著的细胞膜染色反应，而肿瘤细胞的染色能力至少也需要被证明。
Run08 2003年最新评价信息（CD5）
材料:为研究CD5染色的切片主要由以下组成：
1）套细胞淋巴瘤（MCL ）；2-3）小淋巴细胞淋巴瘤/ CLL ；4-5）
扁桃体（分别在10%的福尔马林中处理24小时和96小时）；6） 伯基特淋巴瘤。
CD5染色最佳的评价标准包括以下条件：
正常T 细胞和两个处理的扁桃体组织以及地幔区细胞淋巴瘤肿瘤B 细胞和其中的一个小淋巴细胞淋巴瘤细胞具有较强的细胞膜染色能力。在伯基特淋巴瘤中只有正常的T 细胞才会有染色反应。同时，克隆4C7和大的血管平滑肌细胞具有一个微弱的交叉反应是可以接受的。
材料:为研究CD8染色的切片主要由以下组成：
1）肝脏；2）处理4小时的扁桃体 ；3）处理48小时的扁桃体 ；
4）处理96小时的扁桃体 ；5-7）淋巴结T 细胞淋巴瘤。
CD8染色最佳的评价标准包括以下条件：
? NO.6 T 细胞具有强烈的膜质和细胞质颗粒性反应，而另外两个T 细胞中的肿瘤细胞应该为阴性；
? 所有的扁桃体和肝脏中抑制因子/细胞毒性因子 T 细胞具有较强的膜质和细胞质颗粒性染色；
? 没有其他细胞染色，尤其是扁桃体中的B 细胞需要为阴性。
材料:为研究CD10染色的切片主要由以下组成：
1）扁桃体2）肾脏；3）肾透明细胞癌；4）伯基特淋巴瘤；5）滤
泡性淋巴瘤。
所有的组织在中性的10%福尔马林中处理。
CD10染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 扁桃体中几乎所有的生发中心的B 细胞至少具有中度的细胞膜染色反应； ? 肾近端小管和Bowman 囊的顶叶层几乎所有的上皮细胞具有中到强的细胞膜，甚至细胞质染色反应；
? 肾透明细胞癌和伯基特淋巴瘤中几乎所有的肿瘤细胞具有中度的染色反应；
? 大部分的滤泡性淋巴瘤肿瘤细胞至少具有弱的染色反应；
? 所有标本中的嗜中性粒细胞粒细胞至少有弱到中度的染色反应。
材料:为研究CD14染色的切片主要由以下组成：Array 1）阑尾；2）肝脏；3）少年黄瘤肉芽肿；4）骨髓性白血病FAB
M4；5）脑膜瘤。
CD14染色最佳的评价标准包括以下条件：
滤泡性树突细胞（在阑尾生发中心），例如阑尾，脑膜瘤和少年黄瘤肉芽肿以及骨髓性白血病FAB M4中可扑弗氏细胞和巨噬细胞具有较强的细胞质和膜质染色反应，然而其他细胞，肠细胞和脑膜瘤的肿瘤细胞应该为阴
性。
材料:为研究CD15染色的切片主要由以下组成：
1）扁桃体；2）肾脏；3）霍奇金淋巴瘤，经典淋巴瘤； 4）霍奇金淋巴瘤，经典结节性硬化（NS ）。
所用的组织用10%的福尔马林缓冲液处理。
CD15染色最佳的评价标准包括以下条件：
? 扁桃体生发中心的滤泡树突状细胞至少有微弱的但是明显的细胞膜染色反应；
? 肾近端小管衬里上皮细胞具有中到强的细胞膜染色反应；
? 两个霍奇金淋巴瘤大部分的霍奇金和里德 - 斯登伯格细胞具有中到强的细胞膜和点状（高尔基体）染色反应；
? 四个标本中嗜中性粒细胞粒细胞具有较强的细胞质染色反应； ? 没有或者只有一点背景反应。
石蜡切片的基本操作流程
石蜡切片的基本操作流程 一、取材选取目的组织块，修剪到合适的大小； 二、固定 将组织块放入福尔马林固定液（10%甲醛溶液），固定时间由组织块大小而定，一般不少于24h；体积1cm3的组织块，一般为3-7天； 三、冲水自来水洗几下，泡1小时； 四、系列酒精脱水 50%酒精，1h； 70%酒精，1h； 80%酒精，1h； 90%酒精，1h； 100%酒精（I），1h； 100%酒精（II），1h； 五、透明 酒精：二甲苯=1：1溶液，过夜； 二甲苯，1h； 六、包埋 二甲苯：石蜡=1：1，65-70 ℃，2h； 新鲜石蜡（I），65-70 ℃，1h； 新鲜石蜡（II），65-70 ℃，4h； 新鲜石蜡包埋； 七、切片切片厚度为5-7um； 八、展片温水（40-42 ℃）展片； 九、捞片将展好的片子贴于载玻片上； 十、烘片42 ℃将片子上的水烘干； 十一、烤片60 ℃烤片12-24h； 十二、脱腊 二甲苯（I）：2min； 酒精：二甲苯=1：1溶液：2min； 十三、水化 100%酒精（I）：1min； 100%酒精（II）：1min； 95%酒精：1.5min； 80%酒精：1.5min； 70%酒精：1.5min； 50%酒精：1.5min； 自来水洗：2min 十四、H&E染色 Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果)，自来水洗3次，盐酸分化（2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸），10s；自来水洗蓝化，镜下观察染色效果；（伊红）Eosin染色30-50s，直接脱水（90%酒精-----100%酒精I，100%酒精II各1分------酒精：二甲苯=1：1溶液：1-1.5min）；十五、脱水 90%酒精-100%酒精-100%酒精，各1min； 十六、透明 二甲苯：酒精：1-1.5min；二甲苯：2min；
石蜡切片制作标准程序
动物病理组织学 石蜡切片制作标准操作程序（SOP） 一、\器材和试剂准备 （一）载玻片和盖玻片的清洁 1.载玻片和盖玻片清洗方法 (1)锅内倒入适量清洗液（100 mL水+30 m L洗洁精+30 mL 84消毒液）； (2)将玻片逐片放入锅中, 加热至沸腾10 min, 停止加热, 自然冷却; (3)捞出玻片流水冲洗10min,彻底冲净泡沫（弹簧夹上后，单片过水）; (4)将玻片从水中取出, 用蒸馏水冲洗三遍（最好单片过水）; (5)将玻片放入 95%乙醇（分析纯）中浸泡； （6）取出玻片，码在切片盒，自然干燥（或无风适度高温干燥）备用； 注意：由于盖玻片很薄，不能同载玻片放在一起处理；盖玻片从95%乙醇溶液中取出后要放在吸水纸上摊开，干燥后，放在小盒子中备用。 2.粘片剂（蛋白甘油）的制作及载玻片的预处理 （1）蛋白甘油的制作取新鲜鸡蛋，先将其尖端用眼科剪或拨针挑破一小孔，再将蛋的另一端挑破一小孔并稍加扩大，大孔端朝下，使蛋白流入100~200毫升的烧杯中（不要蛋黄），以玻棒打拌蛋白完全变为雪花状泡沫，然后倒入垫有几层纱布的漏斗中过滤而得到透明、清凉的的蛋白液，再加入等量甘油，振摇使之充分混合，加入1%麝香草酚或樟脑防腐。一般将其盛入滴瓶或树胶瓶中备用，不用时盖好防尘。 或1个鸡蛋的蛋清+500mL双蒸馏水，混匀，加10mL浓氨水。 （2）将蛋白甘油倒在小烧杯中，载玻片用弹簧夹夹上后侵入蛋白甘油中，贴壁刮干，放在切片盒内晾干备用。 二、石蜡组织切片的制作 （一）取材 注意事项： 1.材料质量：材料必须新鲜，应争取在死后半小时内处理完毕。 2.取材体积：组织块力求小而薄（厚度不要超过5mm，以2mm最佳） 3.取材力度：取材器具锋利。勿使组织块受挤压，切割时不可来回挫动。夹取组织时，切勿猛压，以免挤压损伤组织。取材时，组织块可稍大一点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。 4.固定形状：固定尽量保持组织的原有形态新鲜组织经固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能雅持原形。对神经、肌肉、皮肤组织等，则可将其两端用线扎在木片上或硬纸片上固定。 5.切向选择：选好组织块的切面应熟悉器官组织的结构并据此决定其切面的走向。纵切或横
术中冰冻与石蜡切片诊断准确性分析
XX医院病理科2010～2012年术中冰冻与石蜡切片诊断准确性分析 肿瘤手术中冰冻切片快速病理诊断具有十分重要的意义，它不仅是鉴别良、恶性肿瘤准确快速的方法，也是指导临床医生决定手术切除范围及制定下一步治疗方案的关键手段。比较冰冻切片快速病理诊断与石蜡切片病理诊断的符合率，分析可能导致误诊的原因。现 对我科2010年１月～2012年5月间所有冰冻切片诊断工作进行回顾性分析。 一、材料与方法 为防止制成的冰冻切片镜下组织形态发生改变，送检标本要求用干纱布包裹或置于不加任何液体的洁净容器内及时送达病理科，病理医师详细检查大体标本后取肉眼确认病变最明显区域1～2块组织，迅速置全自动恒冷切片机（英国产SHANDN ）上制作切片。切片厚4μm，经酒精固定，HE 染色，普通光镜（Olympus BX41）下观察。 二、结果
三、讨论 冰冻切片与石蜡切片诊断的符合率逐年有所提高，说明我科病理医生对冰冻切片诊断的知识面及经验都有所提高。误诊原因分析
1、科外因素： ⑴.术中标本送检时放入生理盐水或其它液体中，或用湿纱布包裹标本，或术者用水冲洗标本等，做冰冻切片时由于骤冷产生大量冰晶使组织呈空网状，使病理医师误认为是粘液或脂肪组织来源的肿瘤，被迫第二次取材。 ⑵.手术医师取材不当或取材错误，可造成冰冻切片诊断的准确率和预测值之间的差异，如滑膜肉瘤送检组织为纤维结缔组织；胰腺癌时切取正常胰腺组织送检；脑胶质瘤送检脓性坏死渗出物，从客观上导致假阴性。 ⑶.有些病变由于组织结构的特殊性，冰冻切片很难确诊，例如：①乳腺硬化性病变，包括某些类型的腺病（硬化性腺病）及放射状瘢痕。有人认为良性硬化性病变与硬癌的鉴别很困难，在冷冻切片中尤其如此。我们曾遇见过乳腺硬化性腺病的假浸润现象而诊断为乳腺癌的病例。②乳腺乳头状病变，包括导管内乳头状瘤与末梢导管的乳头状瘤病。③乳腺导管上皮增生性病变，包括不典型增生。本组有一例导管上皮增生呈“搭桥”样生长，并形成不规则的间隙，误诊为恶性。这些病变有时在石蜡切片中多处取材都可能难以确诊，不能苛求在一张切片短时间内作出确切诊断，必须等待石蜡切片最后确诊，特别是对年轻患者。 2、科内因素：
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处
创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么 1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的 抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。 2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形 态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。 3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程 中可能会对抗原的性质造成影响。 4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。 5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立 即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。 冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。 编辑本段冰冻切片的应用
免疫荧光-石蜡切片
石蜡切片免疫荧光操作规程 试剂 1)二甲苯 2)PBS缓冲液 3)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。 4)goat血清 5)一抗稀释液： 3%BSA in TBS，pH7.4 操作流程 1.脱蜡和水化 脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。 1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min； 2）无水乙醇中浸泡5min； 3）95%乙醇中浸泡5min； 4）70%乙醇中浸泡5min； 2.PBS洗两次各5min。 3.抗原修复，用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。 4.PBS洗5min。 5.滴加5%正常山羊血清，室温封闭30min，甩去多余液体。 ℃小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。 6.滴加一抗，室温1小时或者4℃过夜或者371 7.PBS洗3次每次5min。 8.滴加荧光标记的二抗，室温避光孵育1h。（注意抗体针对的种属，使用浓度：Alexa488、Alexa555为1：1000，Cy3、FITC为1：200，用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。） 9.PBS洗3次每次5min。 10. Hoechst染色：把1000×Hoechst用PBS稀释，50ul/片，染色10min。 11. PBS洗3次每次2 min。 12.封片： Mounting Medium封片，等Mounting Medium凝固后再拍照。
石蜡切片的制作
说明 石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。文档来自于网络搜索 取材 应根据要求选取材料来源及部位。例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。文档来自于网络搜索 固定 用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。固定液可分为单一固定液及混合固定液。前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa 液（配方见有关技术书籍）。因此，应根据所要显示的内容来选择适宜的固定液。10％福尔马林（4％甲醛）或10％磷酸缓冲福尔马林是病理切片常规使用的固定液，不仅适用于常规HE（苏木精-伊红）染色，还可以用于组织学有关的其他技术的切片染色。固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。文档来自于网络搜索 洗涤与脱水 固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗；使用含有苦味酸的固定液固定的则需用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相
冰冻切片与石蜡切片的区别
1．冰冻切片是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。 冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。因此，应尽量降低冰晶的数量。Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33。C,从-30。C降至-43。C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。 （1）速冻，使组织温度骤降，缩短从-33。C43。C的时间，减少冰晶的形成。其方法有二： ①干冰-丙酮（酒精）法：将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。将组织（大小为1cm××）投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。 ②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。取出组织冰块立即置入-80℃冰箱贮存备用，或置入恒冷箱切片机冰冻切片。 （2）将组织置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。 影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。目前冰冻切片机有两类： ①恒慢冰冻切片机（Cryastat）：为较理想的冰冻切片机，型号很多，但其基本结构是将切片机置于-30℃C低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至2-4μm，完全能满足免疫组织化学标记要求。切片时，低温室内温度以-15℃～18℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。 ②开放式冰冻切片机：包括半导体致冷切片机和甲醇致冷切片以及老式的CO2、氯乙烷等冷冻切片机。切片时暴露空气中，温度不易控制，切片技术难度大，在高温季节，切片更加困难，且切片厚8～15μm，不易连续切片，但其优点是价廉，国内有生产。 冰冻切片后如不染色，必须吹干，贮存低温冰箱内，或进行短暂预固定后贮存冰箱保存。 2．石蜡切片其优点是组织结构保存良好，在病理和回顾性研究中有较大的实用价值，能切连续薄片，组织结构清晰，抗原定位准确。用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规制片略有不同：①脱水、透明等过程应在4℃。C下进行，以尽量减少组织抗原的损失。②组织块大小应限于2cm××，使组织充分脱水、透明、浸蜡。③浸蜡、包埋过程中，石蜡应保持在60℃以下，以溶点低的软蜡最好（即低温石蜡包埋）。 组织块脱水、透明、浸蜡时间参考表1-3： 表1-3 组织块处理时间表 1 70%乙醇4℃3～4h 2 80%乙醇4℃3～4h 3 90%乙醇4℃2～3h 4 95%乙醇Ⅰ4℃2～3h 5 95%乙醇Ⅱ4℃1～2h
组织切片石蜡切片过程
石蜡切片过程 一、石蜡包埋: 1.脱水：组织水洗后便可酒精脱水，70% →80% →90% →95%→ 100%酒精（无水乙醇）→100%酒精，各级酒精脱水时间30-45 min。（注意：80%酒精内组织可留之较久，当天如果来不及做完就可以暂时保存一晚上，次日再继续做下去。70%的酒精可作为更久的保存剂。） 2.透蜡：脱水后组织：50%酒精+50%二甲苯30 - 45min. 二甲苯（组织透明即可停止) 15min. 50%二甲苯+50%石蜡20-30min. 纯石蜡1 45min. 纯石蜡2 45min.（透腊之前做好准备工作：准备腊杯，烘箱温度保持55—60℃左右，使石腊熔化，温度不宜过高，以免使组织发脆。） 3.包埋： a.折好纸盒，准备小镊子、酒精灯、解剖针、冷水等。 b.用温热吸管吸取石蜡注入纸盒。等待底稍微凝固，温镊子夹住样品放入盒子中央，面朝底(可以将蜡一次倒入纸盒，然后待蜡表面起膜后，用温镊子夹住样品放入蜡中，待冷却即可，整个操作过程中，切勿让蜡中起气泡)。 c.两手拿着两端，入冷水一半，吹气，使表面石蜡形成移较厚腊层，然后急速全部进入冷水中3分钟。 d.修正蜡块（上下两个面一定要平行并且光滑） e.固着蜡块
二、切片 1.切片（切片时，可以在刀片以及刀片周围涂上一点甘油） 2.贴片烤片（甘油蛋白=1/2甘油+1/2鸡蛋清）（在贴片时，用细吸管取一点点甘油蛋白（越少越好）于载玻片上，然后用手抹匀，手一定要干净。将切片放在载玻片（光亮面朝向下），然后滴几滴冷水使切片悬于水上。接着将载玻片放在37℃上烘烤。 常见问题分析： 1.切片分离不能形成蜡带：?室温过低，蜡过硬。 2.蜡带弯曲：?蜡块口下面不平行，或蜡块不与刀刃平行所致。 3.切片厚薄不一:?切片刀或蜡块未固定紧。 4.切成片后，组织与蜡块脱离：?脱水不干净等。 5.蜡片易粘在切片上或蜡片萎缩：?室温太高或蜡太软或刀的角度 太小。 6.切片破裂：?浸蜡不足或浸蜡温度过高，或在脱水剂、透明剂中 时间过长，引起组织发脆或有杂质，材料脱钙不完全，此种无法补救。 7.蜡片上卷，切过刀口即破裂：?刀口太钝或沾有石蜡或刀的角 度过大或蜡太硬。 *：包埋时，时间长会使标本变质，过短则石蜡不能透进标本。石蜡包埋过程中，注意控制温度保持在58-60℃，石蜡不能融化。
石蜡切片步骤
石蜡切片制作 大致步骤：取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 1、取材 植物材料选择时必须尽可能不损伤植物体或所需要的部分。 取材必须新鲜，尽可能割取所需要的组织块，并随即投入固定液。 取材时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。 切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一般厚度不超过2mm，大小不超过5*5mm2。 2、固定 用适当的化学药液—固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。 固定液的选用：FAA固定液 FAA固定液配制：福尔马林（38%甲醛）5 ml 冰醋酸 5 ml 70%酒精 90 ml 5 ml甘油（丙三醇） 固定时间根据材料块的大小及松密程度而定。 3、洗涤与脱水 固定后的组织材料需要除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗：使用含有苦味酸的固定液固定的则需要用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。 酒精为常用的脱水剂，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30%或50%酒精开始，经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1-数小时，如不能及时进行脱水，材料可以放在70%酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化。 4、透明 选用二甲苯为酒精和石蜡的浸媒液，替换出组织内的酒精。通常组织先经过纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1-2小时，再转入纯透明剂中浸渍。时间根据材料块大小而定。 5、浸蜡与包埋 用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。通常把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1-2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利于石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。如果包埋的组织块数量多，应进行编号，以免差错。石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含有杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。 6、切片 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为 4-7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。 7、贴片与烤片
石蜡切片与冰冻切片
石蜡切片与冰冻切片 一、组织和细胞标本类型： （一）组织标本类： 1、石蜡切片：组织形态保存好 2、冰冻切片：抗原性保存好 （二）细胞标本类： 1、组织印片 2、细胞培养片（细胞爬片） 3、细胞涂片 二、组织取材 1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。 2、组织取材注意事项： （1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。 （2）注意防止人为因素的影响刀和剪要快，避免挤压。 （3）组织块的大小厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。 三、活细胞标本的制备法 （1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。 （2）将细胞直接培养在盖玻片上。 （3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。 四、石蜡切片的制备 1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂，只溶解在二甲苯类试剂中。因而，组织经固定和水洗后含大量水分，需用乙醇类试剂进行脱水，水脱完后，组织内含有大量的乙醇，还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换，最后经浸蜡，组织细胞内被大量石蜡支称，才使组织能用于石蜡切片。 2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间 75%乙醇30min，85%乙醇30min，95%乙醇Ⅰ1h，Ⅱ1h，Ⅲ过夜或2h；无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min；二甲苯Ⅰ15min，Ⅱ10min，Ⅲ10min；石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30min，石蜡Ⅲ1~2h。 五、冰冻切片的保存和使用 1、冰冻切片固定后-80℃保存备用 2 、冰冻切片从-80℃取出，凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。
石蜡切片免疫组化步骤
石蜡切片免疫组化步骤 1.石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟。 2.脱蜡和水化：二甲苯(20min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(10min)→95%乙醇(10min)→90乙醇(10min)→80%(10min) 4.抗原修复：柠檬酸钠缓冲液95度，10分钟. (枸橼酸三钠3g 枸橼酸0.4g然后加水到950毫升左右，然后用NaOH或HCI调pH值6.0，最后定容在1000ml) 5. PBS浸洗2次各5min 6.加3%H2O2孵育5min(室温或37度，避光)。肝组织过氧化物酶含量高。需增加浓度或增长时间。蒸馏水洗2minx3次 8.pbs-曲拉通通透（pv法不需要） 9.与二抗种属一致的血清封闭非特异位点。（pv法不需要） 9.滴加一抗4℃过夜 10.PBS浸洗3次各5min 11.滴加二抗室温或37℃孵育30min 12.PBS洗3次各5min 15.DAB显色5~20min，自来水充分涮洗 16.苏木素复染2~3min，自来水充分涮洗 17.氨水反蓝，过蓝可用盐酸酒精分化2s，自来水充分涮洗.用稀氨水返蓝，自来水里加几滴稀氨水，就行了，返蓝时间5分钟左右，就很好看了;淡氨水有人用50ml自来水＋三四滴的氢氧化铵； 18.脱水、透明80%(5min)→90%(5min)→95%(5min)→100%(5min)→ 100%(5min)→二甲苯(10min)→二甲苯(10min) 19.封片：中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干 二、操作流程 1、脱蜡和水化 脱蜡前，应将组织芯片放在60℃恒温箱中烘烤2h以上，然后按以下流程进行： 二甲苯Ⅰ（1h）、二甲苯Ⅱ（30min）、100%酒精（30min）、95%酒精（15min）、70%酒精（15min）、50%酒精（15min）、蒸馏水（15min） 2、3%H2O2，室温封闭5～10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。 3、甩去H2O2，蒸馏水洗2min×3次。 4、抗原热修复：将切片置于装有抗原修复液的玻璃容器中（耐高温），进入微波炉内，容器内液体温度达到95～100℃后断电，连续三次。 5、PBS冲洗5min×3次。 6、5%BSA封闭液20min，甩去。 7、用0.1mol/L PBS稀释一抗100倍，滴加后4℃过夜。 8、PBS冲洗2min×3次，滴加二抗37℃20min，PBS冲洗2min×3次，滴加SABC 37℃20min，PBS冲洗5min×4次，显色剂显色。 9、自来水冲洗，封片，观察。 注意：如果需要做双标记法，则在操作完步骤8后，重复步骤3～8即可
石蜡切片详细步骤
石蜡切片 1.仪器 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。 2. 试剂 FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。 3.取材 幼嫩的油菜植株叶片和茎 4.方法与步骤(参照) 1．固定： FAA固定液固定48小时以上。 2．脱水： 50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级2h。100%酒精中1.5h。其中70%酒精处可长期保存。 3．透明： 1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) →纯二甲苯(1.5h) →纯二甲苯(1.5h) 4．浸蜡： 将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。 5．包埋： 先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。 6．切片 对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。
7．粘片 将粘贴剂置簿玻片上，再取切片浮置粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃中过夜。 8．脱蜡 脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中：纯二甲苯(10-20min)→纯二甲苯(5-10min) 9．染色 将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→1%番红染色(4h以上) →50％酒精→70％酒精→85％酒精→95％酒精→0.5%固绿(1min)→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min) 10．胶封 滴加加拿大树胶封藏。 11.镜检，拍照
石蜡切片的制作过程(精)
石蜡切片的制作 目的要求:了解生物制片的基本原理和方法;了解石蜡切片制作的基本过程;学会制作石蜡切片。 一、生物制片的基本原理 (一生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法,其目的是提供在显微镜下以适度的样品,有效地对其进行形态和功能观察研究。 (二生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时,除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观察目的外,其余大部分生物体,因为组织较厚,光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求,为了达到此目的,就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片,经过一系列处理,使光线易于透过,即可进行观察。因此,根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。这些方法,各有优缺点,应该适当的配合使用,才能获得比较理想的结果。 1.切片法 (1切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具,将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片,而制成切片标本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一定的硬度,然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下: ⅰ.石蜡切片法
石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um 以下,能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 ⅱ.火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩及变脆,适于精细材料(如脑的切片,也引火棉胶有韧性切片不知有折卷或破裂,适宜于大块组织及多空洞的组织(脑、眼球,硬度较高的组织(骨、肌腱。缺点:手续麻烦、费时间,切片不能切薄,起码在10um以上,不能作连续切片,因此,在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ.冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂(如氯乙烷在变成气体时吸收大量的热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰冻,冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便,组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片,因而可节省很多时间,十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断,银材料不经溶媒处理就可直接进行切片,材料不受试剂的激烈刺激及温度影响,所以组织没有显著的收缩,细胞形态不致有大的改变,也引冰冻切片不需有机溶剂处理,所以能保存脂肪、类脂等成分,所以冰冻切片法常用于组织化学,尤其是神经组织,临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织,经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合冰冻切片,但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片,而用酒精、甘油保存的材料必须充分水洗后才易于冰冻,否则不易切成完整的切片
免疫荧光双标法
免疫荧光双标记在心肌石蜡切片中的应用 陈绪军肖明第吕志前卢成宝薛松袁忠祥徐根兴 作者单位：200080 上海市第一人民医院心血管外科 细胞性心肌塑型术（cellular cardiomyoplasty）用于缺血性心肌病的治疗受到人们越来越多的关注［1］，在证实移植的人干细胞在缺血/损伤的环境中分化为人心肌细胞方面，免疫荧光技术的运用逐渐增多，但多用的是新鲜冰冻切片，在石蜡心肌切片中应用较少，而且多是单一抗原的荧光标记［2］。有研究表明，酪胺信号放大( tyramide signal amplifications, TSA)技术可以提高反应的灵敏性［3］。为此，我们以人心肌石蜡切片标本为例，运用TSA－免疫荧光法与常规间接免疫荧光法分别对人心肌连接蛋白(connexin-43，Cx-43)蛋白及肌凝蛋白（myosin）进行标记，旨在为心肌石蜡切片建立一个免疫荧光双标记的方法。 一、材料与方法 1. 主要试剂：兔抗人肌凝蛋白（myosin）多克隆IgG抗体购自美国Chemicon 公司，标记异硫氰酸酯荧光素（FITC）的驴抗兔多克隆IgG抗体与标记有辣根过氧化物酶（HRP）的驴抗小鼠多克隆IgG抗体均购自美国Jackson Immunity 公司, 小鼠抗人Cx-43单克隆抗体、碘化丙啶(PI)与牛血清白蛋白（BSA）购自美国Sigma 公司，酪胺 (tyramide)-coumrian 结合物试剂盒购自美国PerkinElmer公司。 2．标本的取材、固定、切片及抗原修复: 人心肌取自一例6岁先天性心脏病小孩右房耳，中性福尔马林固定，4°C过夜固定，梯度酒精脱水，石蜡包埋，5 μm石蜡切片。石蜡切片常规脱蜡、梯度酒精浸泡后行抗原修复：浸入0.01 mol/L的柠檬酸缓冲液(pH 6.0)中，95℃，浸泡30 min, 室温冷却10 min。 3．Cx-43的免疫荧光标记：采用TSA-免疫荧光法［4］，按试剂盒说明书进行。磷酸盐缓冲液（PBS）室温洗涤2次，每次5 min。置入3% 过氧化氢/甲醇溶液中，室温，孵育10 min。再室温PBS洗涤3次，每次5 min。 3%的BSA室温孵育30 min。加入小鼠抗人Cx-43单克隆IgG抗体，4℃孵育过夜。TnT缓冲液（0.1 mol/L Tri-HCI, pH 7.5, 0.15 mol/L NaCl, 0.05% 吐温-20）室温洗涤3次，每次5 min。加入标记有HRP的驴抗小鼠IgG抗体，室温孵育1 h。TnT液室温洗涤3次，每次5 min。配制酪胺-coumrian 工作液：将酪氨-coumrian 结合物加入放大缓冲液中配成酪胺-coumrian 工作液（1∶50），避光，室温孵育15 min。再次TnT液洗涤3次。 4． Myosin的免疫荧光标记：接上一步。采用间接免疫荧光法［5］。兔抗人肌凝蛋白多克隆IgG抗体（1∶20）， 37°C孵育1 h，PBS洗涤3次。加入标记FITC的驴抗兔多克隆IgG抗体(1∶100)，避光，室温孵育1 h。PBS室温洗涤3次，每次5 min。 5．PI染细胞核：加入碘化丙啶（PI/PBS，1 μg/ml），室温避光孵育3 min。PBS室温洗涤3次后甘油封片。 6．荧光显微镜观察：运用带有3通道的AX-80型Olympus 荧光显微镜镜检：绿通道中观察FITC信号；蓝通道中观察coumrian信号；红通道中观察PI信号。图像的编辑采用Advanced SPOT 软件。 二、结果 在3通道的AX-80型Olympus 荧光显微镜中红、绿、蓝通道中分别可以观察到PI、FITC 及coumrian的信号，再经Advanced SPOT 软件叠加得到图1~4，红色代表PI标记的人心肌细胞核，绿色代表FITC标记的人心肌肌凝蛋白蛋白，蓝色为coumrian标记的人心肌Cx-43蛋白。图1显示为未加myosin抗体而加Cx-43抗体的人心肌石蜡切片; 图2中均加myosin 抗体与Cx-43抗体; 图3中加myosin抗体而未加入Cx-43抗体；图4均未加入 myosin抗体与Cx-43抗体。 三、讨论 1.心肌石蜡切片的免疫荧光双标记：在本研究中，图1与图2相比，人心肌石蜡切片中，不加myosin抗体的心肌纤维不着色，而加了myosin抗体的心肌纤维呈绿色，这表明心肌纤维被成功地标记上抗人myosin抗体，而且特异性高。Cx-43蛋白位于心肌细胞的周围，在本研究中由图1、图2与图3可以观察到，加Cx-43抗体的人心肌Cx-43蛋白呈
免疫组化与免疫荧光的区别
免疫组化与免疫荧光 一、两者都是蛋白定位的检测（也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜）。 二、区别是： 1、概念和基本原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫酶组织（细胞）化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。 免疫荧光组织（细胞）化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。 2、标本制作： 免疫荧光一般用冰冻切片，减少杂质干扰；而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均可以。 3、实验步骤：免疫荧光染色步骤简单，而酶免疫组化方法较为复杂，多了DAB显色过程。 4、染色后的标本保存：免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照，时间长了荧光衰退；而酶免疫组化染色标本可以长期保存。 5、免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些，还可以用软件做相对定量分析。 6、免疫荧光得到的图片是彩色的，漂亮些，可以发高档次文章。 免疫学三大工具：免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
石蜡切片制作过程
（一）材料与用具 1．材料： 鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。 2．用具： 溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 （二）实验内容与步骤 1．取材及固定 取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过 0.5立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。 组织块取下后，先用 0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。 如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。 材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。 2．冲洗
固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。AFA固定液则不需要水洗。 3．脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下： 30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12小时，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3小时左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不宜过长，一般应在15～30分钟左右。 在脱水瓶中酒精的量与组织块之比约为50：1。 简化步骤如下： 70%（一夜）——80%（1小时）——90%（30分）——95%（30分）——100%（15分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蜡+二甲苯（30分）——石蜡（80分） 4．透明
石蜡切片
石蜡切片制作 一、苏木精-伊红对染法 一、器材及试剂： 1.器材： 切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。 切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 2．试剂： 中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 3.材料： 鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。 二、实验原理： 石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 三、试剂配法： 1．中性甲醛固定液： 甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度）100mL 磷酸氢二钠 6.5
磷酸二氢钾（钠）4g 双蒸水900mL 2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品 3．1%盐酸乙醇液 盐酸1份 70%酒精100份 4．甘油蛋白贴片剂： 蛋白50ml 甘油50ml 水杨酸钠（防腐剂）1g 配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂（水杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。 四、实验步骤： 1．取材 颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。 切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10mm×2mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。 注意事项： （1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 （2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。2．固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30－50min。 注意事项： （1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。 （2）有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。
冰冻切片的免疫荧光
免疫荧光通用操作规程 冰冻切片的免疫荧光 1，动物组织直接OCT包埋，或灌流后的组织30%蔗糖溶液4℃过夜后，OCT包埋。-20℃保存3月，-80℃长期保存。请勿保存于液氮。 2，冰冻切片机切片至少10um，空气干燥2分钟后，-20℃储存 3，切片从-20取出后，在通风橱放10-30分钟以去除水汽，4%PFA固定15分钟，或-20℃丙酮固定15分钟置通风橱2小时 4, 1XPBS清洗玻片，3X5min 从此请保持玻片湿润 5，有时，抗原修复3小时会得到更好的结果。为此请：选用稳定的抗原修复方式（真空负压.微波修复.高压修复.隔水加热.电炉加热）…关注修复的温度，时间（抗原修复时在有效的温度范围内所持续的时间），抗原修复液必须遵循自然降温规律，使用足量的抗原修复液…选择不同PH值的修复液（A液枸盐酸缓冲液PH6.0，B液EDTA-Na缓冲液PH8.0，C液枸盐酸缓冲液PH4.5）
6，室温封闭1小时 封闭液：5%BSA+10%二抗种属来源的正常血清in 1xPBS 条件封闭液：1%BSA+3%二抗种属来源的正常血清in 1xPBS（细胞因子，无需封闭的蛋白 7，一抗4℃过夜 请用封闭液稀释一抗 8, 第二天Wash,1XPBS, 2x1min 9,二抗，1:1000 （alexa系列）1:300（dyelight )in封闭液，避光室温1小时 10, Wash,1XPBS, 3x5min 11, DAPI 染核5min， 12，DDW Rinse 13，抗淬灭剂封片，（避免气泡）避光置于通风橱过夜 14，干片后4℃保存 石蜡切片的免疫荧光 1，动物组织取出后经固定-脱水-包埋（见随后操作步骤)，制成石蜡包块 2，组织学染色切片厚度2um，免疫荧光染色切片厚度至少6um，切片复水：58℃20min-