亲和层析法纯化尿胰蛋白酶抑制剂及部分性质研究
尿激酶治疗急性心肌梗塞的疗效观察
尿激酶治疗急性心肌梗塞的疗效观察 目的探析尿激酶治疗急性心肌梗塞的疗效。方法选取本院收治的急性心肌梗塞患者70例作为研究对象，将其分为试验组和参照组，各35例。参照组应用常规方式进行治疗，试验组在此基础上，应用尿激酶进行溶栓治疗，观察并比较两组患者的疗效。结果试验组的总有效率为97.14%，参照组的总有效率为80.00%，试验组的疗效显著优于参照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论采用尿激酶对急性心肌梗塞患者进行溶栓治疗，疗效显著，值得在临床上应用推广。 标签：尿激酶；急性心肌梗塞；疗效 急性心肌梗塞是一种较为严重的冠心病类型，是因为冠状动脉发生了突然性血液运行阻塞，导致部分心肌因血液供应量不足而坏死所形成的疾病，严重时可能出现心力衰竭、休克，甚至猝死的现象[1]。其病因通常为情绪异常激动、体力劳动强度过大、暴饮暴食、休克或心律失常等[2]，对人们的生命健康产生了极大得负面影响。本文针对急性心肌梗塞患者，在临床上采用尿激酶进行溶栓治疗，获得了较为满意的效果，现做如下报道。 1 资料与方法 1.1 一般资料 選取2015年1月～2016年1月在本院收治的急性心肌梗塞患者70例作为研究对象，将其随机分为试验组和参照组，各35例。试验组男19例，女16例；年龄29～70岁，平均年龄（58.37±5.29）岁；其中，初发型心绞痛有15例，原发性心绞痛有20例。试验组男18例，女17例；年龄30～69岁，平均年龄（59.21±5.48）岁；其中，初发型心绞痛有14例，原发性心绞痛有21例。通过比较，发现两组患者在性别、年龄、心绞痛类型等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 1.2 方法 参照组患者采取常规方式进行治疗，如吸氧、心电监护等治疗手段，并给予肝素钠、硝酸甘油、阿司匹林肠溶片等药物进行治疗。 试验组患者采用尿激酶进行治疗，具体操作过程为：首先给予患者阿司匹林片（江苏平江制药有限责任公司，国药准字H32026317）200 mg口服，然后于100 mL0.9%氯化钠溶液中混入100万U尿激酶（天津生物化学制药有限公司，國药准字H12020492），通过静脉滴注的方式注入患者体内。之后每隔12 h，以皮下注射的方式给予患者4250 U低分子肝素钙，可根据患者的凝血时间随时调整剂量。以上治疗过程需持续7天。于溶栓治疗5天后，再次将阿司匹林片给予患者口服，1次/d，100 mg/次。
尿常规各项指标解读
尿量(Vol) 检查尿液量 一般情况下正常成人一昼夜(24小时)排尿O.8～2.0升。但饮水量、运动、出汗、气温皆可影响尿量 一昼夜尿量>2500毫升为多尿，<400毫升为少尿，<100毫升或12小时内完全内完全无尿为尿闭，如夜尿量>500毫升，尿比重<1.018为夜尿量增多 尿色(Col) 检查尿液颜色 正常尿液为淡黄色至黄褐色.常受饮食、运动、出汗等影响 尿崩症、糖尿病等患者多尿时几乎无色;肝细胞性黄疽、阻塞性黄疸时见桔黄色或深黄色，即胆红紊尿，但如服用核黄素、复合维生紊B、呋喃类药物亦可呈深黄色，应与上述胆红素尿区别;泌尿系统肿瘤、结石、结核或外伤及急性炎症时(如急性膀胱炎)出现血尿，外观呈红色，显微镜下可见大量红细胞，尿中出现大量白细胞、微生物、上皮细胞或有大量非晶形磷酸盐及尿酸盐时呈乳向色。此外还可见酱油色、红葡萄酒色、黑褐色等颜色尿，除外药物影响后，建议去医院进一步检查 透明度(Clr) 检查尿透析透明度 新鲜尿清澈透明无沉淀。放置一段时间后，可出现絮状沉淀.尤其女性尿 尿液排出时即混浊，往往由于白细胞、上皮细胞、粘液、微生物等引起，需作显微镜检查予以鉴别，少数病人尿中非晶形磷酸盐等析出，亦使尿混浊，则无临床意义 比重(SG) 检查尿液的比重 正常人24小时尿的比重在1.015左右.常在1.010～1.025间波动，因受饮食、运动、出汗等影响.随意尿比重波动范围为1.005～1.030. 24小时混合尿比重增高时，见于高热脱水、急性肾小球肾炎、心功能不全。蛋白尿及糖尿病人尿比重亦增高。24小时混合尿比重降低见于尿崩症、慢性肾炎等肾脏浓缩功能减退时。测定任意一次随意尿，尿中无蛋白及糖时，比重≥1.025，表示肾脏浓缩功能正常，比重≤1.005表示肾脏稀释功能正常，如固定在l.010左右，称等张尿.为肾实质受损，肾脏浓缩及稀释功能降低所致 酸碱反应(pH) 检查尿液的酸碱反应 正常新鲜尿多为弱酸性，pH6.O左右，因受食物影响，pH常波动在5.O～8.O之间 在热性病、大量出汗、蛋白质分解旺盛时，特别在酸中毒时，尿液酸性增强呈强酸性，pH下降，服用氯化铵、氯化钙、稀盐酸等药物时，尿亦呈酸性。碱中毒时，尿中混有大量脓、血时，服用苏达等碱性药物时，尿液呈碱性，pH上升 尿白细胞(粒细胞脂酶LEU) 泌尿系统细菌性感染的指标 定性试验：阴性 异常提示有尿路感染的可能性 尿亚硝酸盐(NIT) 泌尿系统细菌性感染的筛选指标 定性试验：阴性 正常人尿中含有硝酸盐.经细菌(主要是肠杆菌科细菌)还原而成。因此当尿路感染时(如膀胱炎、肾盂肾炎)可呈阳性，由于肠杆菌科细菌(如大肠希氏菌、变形杆菌等)为尿路感染的常见菌，所以此项检查常做为尿路感染的过筛试验 尿蛋白定性(PRO) 尿蛋白检查是肾脏疾病诊断、治疗、预后观察重要指标 定性试验：阴性 综合分析检查结果：尿液有形成分显微镜检查、干化学分析仪检查结果和各种细胞化学、免疫化学染色技术检查的结果相互对比、综合分析。①如尿液在膀胱内存储时间过长，中性粒细胞可能破坏，释放酯酶到尿中，导致尿干化学检查结果白细胞阳性，而显微镜检查则为阴性，此种情况应以干化学分析仪检查结果为准。②肾移植患者排异反应可导致尿中出现大量淋巴细胞，淋巴细胞无酯酶，干化学分析为白细胞阴性，而显微镜检查则有白细胞，应以显微镜检查为准。③肾脏疾病尿中红细胞常被破坏而释放出血红蛋白，因此显微镜检查可无红细胞存在，而干细胞分析血红蛋白（隐血）呈阳性，此应以后者结果为准。
(人)胰蛋白酶
重组人胰蛋白酶 Cat.No.:RHT03 CAS:9002-07-7 EC:3.4.21.4 来源：人胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.重组生产，无动物源性 重组人胰蛋白酶，氨基酸序列及性质与人胰蛋白酶完全相同。无动物源性，无病毒污染。可用于干细胞治疗、肿瘤的细胞治疗等过程中，无抗原性。 2.优势 安全性高 重组生产，无动物源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等； 特殊工艺，无内源性病毒污染，无细菌、真菌、支原体污染； 冻干粉，运输及储存安全，活性不易损失； 不含任何蛋白酶抑制剂，如PMSF等。 上海雅心生物技术有限公司
?纯度高 HPLC纯化； 活性特异，无其它蛋白酶活性。 ?活性高 比活性不低于2500USP u/mg。 3.用途范围 胰蛋白酶是一种内肽酶，可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键，从而将大分子蛋白裂解为小肽。 胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中，如：细胞培养各种组织的细胞分离；变性蛋白质的降解；蛋白质的酶解、测序；干细胞、肿瘤的细胞治疗等。 4.特性 纯化HPLC 产品性状白色或类白色冻干粉 纯度（HPLC）≥95% 比活不低于2500USP u/mg 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染及活性 不含任何蛋白酶抑制剂无PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制剂 上海雅心生物技术有限公司
5.信息 产品名称比活包装产地 重组人胰蛋白酶≥2500USP u/mg10mg,100mg,1g上海雅心 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml(1cm光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 6.相关产品 重组猪胰蛋白酶； 重组胰蛋白酶细胞消化液。 上海雅心生物技术有限公司
DNA甲基化
DNA甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。这些方法概括起来可分为三类：基因组整体水平的甲基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。 近15年来，人们越来越认识到DNA甲基化研究的重要性，开发出一系列检测DNA的方法。根据研究目的这些方法分为：基因组整体水平的甲基化检测，特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。根据研究所用处理方法不同可以分为：基于PCR的甲基化分析方法；基于限制性内切酶的甲基化分析方法；基于重亚硫酸盐的甲基化分析方法和柱层法等。 DNA甲基化的分析方法很多，可分为总基因组甲基化的检测和单基因序列特异性甲基化分析的研究。总基因组甲基化的检测又分为全基因组序列特异性甲基化分析和基因组非特异性甲基化水平的研究。前者包括甲基化差异性杂交显示(differential methylation hybridization，DMH)、寡核苷酸微阵列法和基因组限制性酶切扫描法(restriction landmarkgenomescanning，RLGS)；后者包括3H—SAM掺人后液闪检测法和高压液相色谱法。 对单基因序列特异性甲基化分析包括传统的甲基化敏感的限制性内切酶(methylation sensitive restriction endonucleases，MSREs)分析、比较简洁的甲基化特异性PCR(methylation specific PCR，MSP)、全面反映甲基化情况的亚硫酸氢钠变性后测序(bisulfitegenomic sequencing)、甲基化敏感性单核苷酸引物扩增(methylation sensitive single nucleotide primer extension，Ms—SnuPE)、较新颖的甲基化荧光检测(methylight)、结合亚硫酸氢钠变性的限制性酶分析(combined bisulfite restrictionan alysis，COBRA)、酶的区域性甲基化特异性分析(enzymatic regional methylation assay，ERMA)和变性高压液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)。 甲基化敏感的单核苷酸的扩增(Ms—SnuPE) Ms—SnuPE即甲基化特异的单核苷酸扩增，它能对不同甲基化特异位点进行快速定量，是一种快速估计特异性CpG位点甲基化不同情况的定量方法。 先用重亚硫酸盐处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶全部转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。进行PCR扩增，然后取等量扩增产物置于2管中，分别作为Ms—SnuPE单核苷酸引物延伸的模板。设计用于Ms—SnuPE延伸的引物的3’端紧邻待测碱基。同时于2个反应体系中加入等量的Taq酶、引物、同位素标记的dCTP或dTTP。这样，如果待测位点被甲基化，则同位素标记的dCTP会在反应延伸时连于引物末端；若是未被甲基化，则标记的dTTP参与反应。末端延伸产物经电泳分离和放射活性测定后可得出C／T值，即为甲基化与非甲基化的比值，从而分析得到待测片段中CpG位点甲基化情况。 甲基化敏感限制性内切酶(MSRE)法 methylation sensitive restriction endonuclease，MSRE是一类对其识别位点含有甲基化碱基敏感的限制性内切酶，目前至少已发现320种。此类酶如在其切割位点中含有一个甲基化碱基，则它们中的绝大多数就不能切割DNA。MSRE法是基于甲基化敏感Ⅱ型限制性内切酶不能切割含有一个或多个甲基化切点序列的基本原理。用甲基敏感Ⅱ型内切酶及其同工酶(对甲基化不敏感)切割含有一个或多个甲基化CpG序列的片段，然后用DNA印迹法分析。此法
尿常规检查项目及正常值 尿常规参考值
尿常规检查项目及正常值尿常规参考值 尿常规在临床上是不可忽视的一项初步检查，那么尿常规检查有哪些项目？尿常规正常值范围是多少？尿常规检查参考值又是多少呢？下面为您介绍。 尿常规在临床上是不可忽视的一项初步检查，不少肾脏病变早期就可以出现蛋白尿或者尿沉渣中有形成分。一旦发现尿异常，常是肾脏或尿路疾病的第一个指征，亦常是提供病理过程本质的重要线索。近年来有不少人强调，负责医生应自己动手做患者尿常规检查，是有利于医生发现肾脏疾病的一般诊断方法。尿常规检查内容包括尿的颜色、透明度、酸碱度、红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、蛋白质、比重及尿糖定性。尿常规检查是诊断肾炎早期的敏感指标，当尿常规异常尤其是蛋白尿、潜血呈阳性时，则高度怀疑肾炎的发生。尿常规的检查意义在于对泌尿道感染、结石、胆道阻塞、急慢性肾炎、糖尿病、肾病变症状群等疾病有预报性作用。 尿常规检查项目尿常规检查内容包括尿的颜色、透明度、酸碱度、红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、蛋白质、比重及尿糖定性。 (1)尿色：正常尿液的色泽，主要由尿色素所致，其每日的排泄量大体是恒定的，故尿色的深浅随尿量而改变。正常尿呈草黄色，异常的尿色可因食物、药物、色素、血液等因素而变化。
(2)透明度：正常新鲜尿液，除女性的尿可见稍混浊外，多数是清晰透明的，若放置过久则出现轻度混浊，这是由于尿液的酸碱度改变，尿内的粘液蛋白、核蛋白等逐渐析出之故。 (3)酸碱度：正常尿为弱酸性，也可为中性或弱碱性，尿的酸碱度在很大程度上取决于饮食种类、服用的药物及疾病类型。 (4)细胞：在临床上尿中有重要意义的细胞为红细胞、白细胞及小圆上皮细胞。①红细胞。正常人尿中可偶见红细胞，离心沉淀后每高倍镜视野不超过3个。若尿中出现多量红细胞，则可能由于肾脏出血、尿路出血、肾充血等原因所致。剧烈运动及血液循环障碍等，也可导致肾小球通透性增加，而在尿中出现蛋白质和红细胞。②白细胞。正常人尿中有少数白细胞存在，离心尿每高倍镜视野不超过5个。异常时，尿中含有大量白细胞，表示泌尿道有化脓性病变，如肾盂肾炎、膀胱炎及尿道炎等。③小圆形上皮细胞。正常尿液中，有时可发现少数脂肪变性的小圆形上皮细胞。若肾小球肾炎时，尿中上皮细胞增多。若肾小管有病变时，可出现许多小圆形上皮细胞。 (5)管型：正常尿液中仅含有极微量的白蛋白，没有管型，或偶见少数透明管型。若尿中出现1个管型，可以反映至少1个肾单位的情况，是肾脏疾病的一个信号，对诊断具有重要意义。 (6)蛋白质：一般认为正常人每日排出蛋白质量为40～80毫克，最多100～150毫克，常规定性检测为阴性。病理性蛋白尿见于肾小球肾炎、肾盂肾炎、急性肾功能衰竭、高血压肾病、糖尿病肾病、妊娠中毒症、狼疮性肾炎、放射性肾炎及肾内其它炎症病变、中毒、
胰蛋白酶抑制剂的测定.doc - NY
NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1103.2－2006 转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定 Safety assessment of genetically modified plant and derived products Part 2: assay of anti-nutrients pancreatic typsin inhibiter 2006-07-10发布2006-10-01实施 中华人民共和国农业部发布
前言 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、农业部科技发展中心、中国农业大学、天津市卫生防病中心。 本标准主要起草人：杨月欣、王竹、韩军花、李宁、汪其怀、黄昆仑、刘克明、刘培磊、连庆。 本标准首次发布。
转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定 1 范围 本标准规定了转基因植物及其产品中胰蛋白酶抑制剂的测定方法。 本标准适用于转基因大豆及其产品、转基因谷物及其产品中胰蛋白酶抑制剂的测定。其他的转基因植物，如花生、马铃薯等也可用该方法进行测定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 转基因植物genetically modified plant 指利用基因工程技术改变基因组构成，用于农业生产或者农产品加工的植物。 2.2 转基因植物产品products derived from genetically modified plant 指转基因植物的直接加工产品和含有转基因植物的产品。 3 原理 胰蛋白酶可作用于苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺（BAPA），释放出黄色的对硝基苯胺，该物质在410 nm下有最大吸收值。转基因植物及其产品中的胰蛋白酶抑制剂可抑制这一反应，使吸光度值下降，其下降程度与胰蛋白酶抑制剂活性成正比。用分光光度计在410 nm 处测定吸光度值的变化，可对胰蛋白酶抑制剂活性进行定量分析。 4 试验材料 转基因植物及其产品、受体植物及其产品。如果对转基因植物产品中的胰蛋白酶抑制剂进行测定，转基因植物产品和受体植物产品的处理条件应相同。 上述材料的水分含量和种植环境应基本一致。
A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体
摘要：世界首个单克隆抗体（monoclonal antibody，简称单抗）于1986 年，获得美国食品与药品监督管理局的上市批准，拉开了单抗药物发展的序幕，成为生物医药领域中最耀眼的明珠。单克隆抗体纯化过程中a蛋白（protein a）层析介质的选择尤为重要，可以影响抗体的纯度。本文主要阐述单抗纯化过程中a蛋白亲和层析的相关内容。 关键词：a蛋白；耐碱性；动态载量 全球医药行业走向趋势是精准医疗时代，单抗是其中较为成熟的领域，引领了生物制药产业发展最为重要的驱动力。单抗药物主要是由中国仓鼠卵巢细胞（chinese hamster ovary cell，简称 cho 细胞）表达产生，由 cho 细胞分泌的外源蛋白分子，通过纯化过程实现由细胞培养液中回收。随着单抗生产上游改造、培养参数的优化，其产量已达5-10g/l，同时也增加了下游蛋白回收中去除各种宿主杂质的负担。宿主蛋白残留的组成随着培养条件的改变显现出显著的变化，单抗药物杂质主要包括与产品相关的污染物和工艺相关的污染物。 根据终产品纯度、杂质含量的严格要求，单抗目前采用三步纯化策略：粗纯（样品捕获）、中度纯化和精细纯化，该策略工艺复杂、对操作要求严格，导致纯化成本一般占总生产成本的 50%-80%。用a蛋白亲和层析凝胶捕获抗体是大规模单抗纯化的首要步骤，一步纯化可使蛋白纯度达 95%以上。但a蛋白树脂价格昂贵，在大规模生产中，a蛋白纯化步骤的成本占整个抗体纯化成本的 35%以上。因此，蛋白 a 纯化效率的提高是进一步提高产品质量、降低生产成本的关键[1]。 1 a蛋白的性质金黄色葡萄球菌 a蛋白（staphylococal protein a，spa）是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。能特异性地与人或哺乳动物抗体（主要是igg）的fc区域结合。天然的a蛋白是十种氨基酸组成。由于不含有胱氨酸及半胱氨酸，所以无二硫键。紫外光谱和吸收系数为 a275nm %=1.65，等电点为ph5.1。spa十分稳定，用4mol/l尿素、硫氰盐酸、6mol/l的盐酸胍和ph2.5的酸性条件，以及加热煮沸均不影响其活性。分子量：全长的spa 54kd，去掉与细胞壁结合部分的spa 42kd。spa与igg结合的亚类主要是igg1、igg2和igg4。近几年来基因工程的spa出现，解决了天然a蛋白的耐碱性问题，mabselect sure是基因工程的spa，去掉了天然spa的dace 区域，对于b区域进行了修饰，将不耐受naoh的氨基酸去掉。使修饰后的spa可以耐受0.1-0.5m的naoh；这就很好的解决了层析介质cip的问题，同时修饰后的spa也耐受蛋白酶。减少在纯化过程中蛋白酶对spa的作用，使洗脱收集液中spa的脱落更低。 2 结合单抗的a蛋白层析介质的选择 在a蛋白捕获步骤中主要去除的杂质大部分是hcp和基因组dna；由于a蛋白层析介质对聚体没有去除作用，所以在此捕获步骤中应采取尽量减少聚体的形成策略，例如：提高洗脱ph，加入添加剂等；在此捕获步骤中会有a蛋白（配基）的脱落。在a蛋白捕获过程中，培养上清中的蛋白酶会降解层析介质的配基a蛋白，以及a蛋白与介质骨架的偶联方式，这些都是protein a的脱落原因，所以选择a蛋白脱落较低的层析介质是非常必要的[2]。 2.1 a蛋白层析介质相关指标 耐碱性：药物gmp生产最基本的要求是无菌、无热源。naoh 是最好的除菌、出热源的试剂。同时naoh也是公认的cip试剂，使用naoh 可以很好的除去残留在层析介质上的杂质，以确保工艺的稳定性以及层析介质的寿命；?郧?naoh的成本低。naoh是公认的cip试剂，实验表明，naoh的清洗效果高于其他试剂，适合琼脂糖基架的填料。而对照的可控玻璃基架（cpg）填料的清洗结果表明，盐酸胍比磷酸更为有效。cpg填料在高ph下不稳定，不适合用naoh 清洗。传统的a蛋白的清洗试剂，如：尿素，盐酸胍等的清洗试剂效果不理想，?郧以谂渲檬
胸腔积液尿激酶治疗的临床观察
胸腔积液尿激酶治疗的临床观察 【摘要】目的探讨尿激酶在治疗包裹性胸腔积液的作用。方法经过对比分析观察尿激酶治疗胸腔积液的疗效。结果两组患者在强化治疗阶段结束时症状均消失,但在临床症状表现上有显著差异。结论胸腔内注入尿激酶治疗包裹性积液是有效而安全的。 【关键词】胸腔积液;尿激酶;疗效 胸腔积液是结核分支杆菌及其代谢产物进入高敏状态的胸膜腔中所引起的胸膜炎症。病变表现为胸膜充血、水肿和渗出。渗出液即为胸腔积液,量多少不等,为浆液性、浆液纤维素性或纤维素性,少数为血性。渗出液内细胞成分以淋巴细胞为主。胸膜上亦可见结核结节。胸膜常单侧受累,双侧少见。我院采用尿激酶治疗胸腔积液取得的良好的疗效,现报告如下。 1 临床资料 1.1 一般资料把我院自1996年10月至2004年12月共收治胸腔积液患者60例,随机平分为2组。治疗组30例中男22例,女8例;年龄15~60岁,平均年龄39.5岁。对照组30例中,男20例,女10例;年龄13~59例,平均年龄33.5岁。两组一般资料情况对比无显著性差异,具有可比性(P＞0.05)。 1.2 治疗方法所有初治患者均进行规则的四联抗痔治疗,所有复治患者均通过用药史和/或抗痔药物敏感试验进行,规则的五联抗疹治疗,所有患者均进行3~5 d的抗生素治疗。在胸部CT和/或B超的引导下;选择包裹性积液的低位,应用局麻将一次性锁骨下静脉穿刺针或者猪尾巴导管刺入胸腔,放入引导钢丝,方退出导管,顺引导钢丝放入深静脉引流管,退出钢丝后固定,接闭式引流瓶进行胸腔闭式引流,一次性负压吸尽胸腔内液体后注入无菌生理盐水100 ml尿激酶10万U+异烟脐0.3 g,而对照组注入生理盐水100 ml强的松龙125 mg异烟阱0.39 g;关闭引流管4 h,嘱患者反复各方向变动体位,咳嗽,使药物与各个部位的胸膜充分接触,以便药物发挥最大效用。4 h后重新开放引流管,并给予20 cmH2O的负压持续吸引,记录引流量。每天重复上述操作过程,直至无液体流出或者24 h引流量小于10 ml,拔出引流管。 2 结果 两组患者在强化治疗阶段结束时症状均消失,但在临床症状表现上有显著差异:治疗组退热时间为(4±2)d,对照组为(6±2)d,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。治疗组盗汗消失时间为(5±2)d,对照组(9±2)d,两组比较差异有统计学意义(P ＜0.01)。治疗组胸痛及胸部紧缩感消失时间为(20±5)d,对照组为(36±4)d,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。治疗组住院时间为(10±3)d,对照组为(22±5)d,两组比较有显著性差异(P＜0.01)。
常见蛋白酶抑制剂
当前位置：生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期：2012-06-13 来源：互联网 标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;
胰蛋白酶抑制剂对Wnt信号通路的作用
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胰蛋白酶抑制剂对Wnt信号通路的作用 作者：伊凤双， YI Feng-shuang 作者单位：山西大学生物技术研究所,太原,030006 刊名： 国际肿瘤学杂志 英文刊名：JOURNAL OF INTERNATIONAL ONCOLOGY 年，卷(期)：2010,37(5) 参考文献(21条) 1.Fogarty MP;KesslerJD;Wechsler-Reya RJ Morphing into cancer:the role of developmental signaling pathway in brain tumor formation 2005(04) 2.Moon KC;Cho SY;Lee HS Distinct expression pattems of E-Cadherinand beta-cateninin signetring cell carcinoma components of primary pulmonary adcnoesrcinoma 2006(09) 3.Khor TO;Gul YA;Ithnin H A comparative study of the expression of Wnt-1.WISP-1 sundvin and cyclin-D1 in colorectal carcinomas[外文期刊] 2006(04) 4.Luo W;Zou H;Jin L Axin contains three separable domains that confer intramolecular,homodimeric,and heterodimeric interactions involved in distinct fuctions 2005(06) 5.Krieghoff E;Behrens J;Mayr B Nucleo-cytoplasmic distribution of beta-catenin is regulated by retention[外文期刊] 2006(Pt7) 6.Li YY;Zhang Z;Wang ZH rBTI induces apoptosis in human solidtumor cell lines by loss in mitoehondrial transmembrane potential and caspase activation[外文期刊] 2009(02) 7.Kennedy AR;Billings PC;Wan XS Effects of Bowman-Birk inhibitor on rat colon carcinogenesis[外文期刊] 2002(02) 8.李卓玉;袁静明肿瘤抑制蛋白APC的结构与功能[期刊论文]-生命的化学 2006(02) 9.While SR;Williams P;Wojcik KR Initiation of apoptosis by actin cytoskeletal derangement in human airway epithelial cells[外文期刊] 2001(03) 10.Avizienyte E;Wyke AW;Jones RJ Scr-induced deregulation of E-cadherin in colon cancer cdlls requires integrin signaling[外文期刊] 2002(08) 11.Kim PJ;Plescia j;Clevers H Survivin and molecular patho-genesis of colorectal cancer[外文期刊] 2003(9379) 12.Zhang T;Otevrel T;Gao Z Evidence that APC regulates survivin expression:a possible mechanism contributing to the stem cell origin of colon[外文期刊] 2001(24) 13.Hoffman WH;Biade S;Zilfou JT Transcriptional repression of the anti-apoptotic survivin gene by wild type p53 2002(05) 14.Masur K;Lang K;Niggemann B High PKC alpha and low E -cadherin expression contribute to high migratory activity of colon carcinoma cells 2001(07) 15.Le TL;Joseph SR;Yap AS Protein kinase C regulates endocytosis and recycling of E-cadherin 2002(02) 16.Chen CL;Chen HC Functional suppression of E-cadherin by protein kinase Cdelta 2009(Pt 4) 17.Kobayashi H;Suzuki M;Tanaka Y Suppression of urokinase expression and invasiveness by urinary trypsin inhibitor is mediated through inhibition of protein kinase C-and MEK/ERK/c-Jun-dependent
氟尿嘧啶及其衍生物的临床应用原理
氟尿嘧啶及其衍生物的应用原理 1. 氟尿嘧啶（5-FU） 5-FU是尿嘧啶的嘧啶环5-位碳原子上的氢被氟原子取代而得到的，合成的理论基础是发现鼠肝癌组织较正常组织更易利用放射性核素标记的尿嘧啶，说明尿嘧啶存在不同的酶代谢途径。目前在临床上，5-FU主要用于消化道腺癌、乳癌、及头颈部鳞癌的治疗,对5-FU细胞内代谢过程的详细了解促进了与生化调节剂的联合使用，增强了5-FU的细胞毒性。 1.1 5-FU的激活与分解途径 5-FU在细胞内通过一系列的酶促反应作用于核苷酸的形成，其代谢活动可能以以下两条途径中的一条为主： ①5-FU(胸苷磷酸化酶TP) FdUrd(胸苷激 酶TK)→FdUMP→FdUDP→FdUTP（参与DNA合成） ②5-FU（乳清酸磷酸核糖转移酶OPRT） FUMP→FUDP→FUTP(参与RNA 合成) (尿苷磷酸化酶UP) FUrD(尿苷激酶UK) 其中由OPRT酶催化的途径可能是正常组织代谢5-FU的主要途径（Oxo？），因为核苷酸的代谢产物别嘌呤醇对该途径的抑制作用降低了
5-FU对骨髓和胃肠道粘膜的毒性反应。而且发现在一些种类的癌细胞中，代谢5-FU主要通过TP和UP的作用。不过虽然某一类癌细胞中某一代谢途径占优势，但两条途径通常都会被利用。 5-FU的分解途径如下： 5-FU（二氢吡啶脱氢酶DPD） DHFU（二氢嘧啶酶） FUPA FBAL （二氢氟尿嘧啶） (α氟脲基-丙酸) （氟-β丙氨酸）DPD催化5-FU还原成二氢氟尿嘧啶的反应是5-FU分解代谢的初始限速反应，5-乙炔基尿嘧啶是DPD的灭活剂，同时口服时5-FU的生物利用度接近100% DPD的活性影响 5- FU的抗肿瘤活性，但是，大剂量的DPD的缺失与5-FU用药后的严重毒性反应相关。 1.2 5-FU的作用机制 1.2.1 对胸苷酸合成酶（TS）的抑制作用 FdUMP与胸苷酸合成酶(TS)紧密结合阻止dTMP的合成，dTMP是生成dTTP的关键底物，而dTTP是DNA的合成和修复的必需物质。 功能性TS是由两个相同亚基组成的二聚体，每个亚基上有一个核酸结合位点和两个特殊的叶酸盐合成位点。FdUMP与dUMP竞争结合TS 催化位点，在正常由dUMP甲基化生成dTMP的过程中，叶酸（5，10-CHFH4）上甲基基团转移到dUMP是伴随嘧啶第5个碳原子上氢原子丢失过程而发生，但这个丢失过程不可能发生在FdUMP上牢固连接的F原子上，并且 TS被局限在一个可逆性较慢的“三元复合体”中（TS、叶酸、FdUMP），TS的生理功能受阻，随后的“胸嘧啶缺乏状态”对分裂活跃的细胞产生毒性。
蛋白质纯化的一般原则及方法选择
随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆的下游工作显得更难，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白，重复性良好。这就要求应用适应性非常强的方法而不是用能得到纯蛋白的最好方法去纯化蛋白。在实验室条件下的好方法却可能在大规模生产应用中失败，因为后者要求规模化，且在每日的应用中要有很好的重复性。本文综述了蛋白质纯化的基本原则和各种蛋白纯化技术的原理、优点及局限性，以期对蛋白纯化的方法选择及整体方案的制定提供一定的指导。 1 蛋白纯化的一般原则 蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速，颗粒大、粒径分布宽．并可以迅速将蛋白与污染物分开，防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率，此阶段是要把目的蛋白与那些大小及理化性质接近的蛋白区分开来，要用更小的树脂颗粒以提高分辨常用的离子交换柱和疏水柱，应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性，柱效则是指蛋白的各成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。仅有好的选择性，洗脱峰太宽，蛋白照样不能有效分离。 2.各种蛋白纯化方法及优缺点 2.1蛋白沉淀蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸。在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或特别低，蛋白则倾向于从溶液中析出。硫酸铵是沉淀蛋白质最常用的盐，因为它在冷的缓冲液中溶解性好，冷的缓冲液有利于保护蛋白的活性。硫酸
尿常规检查结果解读
尿常规检查结果解读 尿常规检查不仅能反映泌尿系统的问题，更可以看岀全身各系统的代谢情况。读懂尿常规检查报告，对自身健康的管理很有帮助。尽管不同医院的尿常规报告单不一定相同，却大同小异。尿常规化验单怎么看总的来说，检验单上的项目如果出现“+” 号，在医学上称为阳性反应，意味着存在异常，需要进一步判断病因；号则为阴性结果，代表正常。 尿常规检查结果分析如下： 1、颜色：通常正常尿液应为淡黄色，水喝多的时候更清亮, 水喝少的时候会深一些。但如果出现红色、茶色、乳白色等，就必须高度重视了，有许多疾病可引起尿液颜色异常，如肿瘤、肝病、较重的泌尿系感染、乳糜尿等。尤其是老年人如果出现肉眼血尿，必须首先排除泌尿系统肿瘤，即使只有一次，也不可掉以轻心。 建议：尽快去泌尿科进一步检查 2、酸碱浓度：正常尿液应该是弱酸性的，但也可能与饮食情况有关，爱吃肉的偏低，爱吃素的偏高。总的来说，在区间内可以认为是正常。而出现异常的过酸或过碱，意味着代谢出现了问题，可能是泌尿系感染、痛风或者药物影响。 建议：尽快去泌尿科检查
3、透明度：正常尿液多数是清晰透明的，不透明的话就有问题，通常会伴有颜色的改变。 建议：尽快去泌尿科进一步检查 4、亚硝酸盐：尿屮亚硝酸盐含量的多少与进食食物的种类有关，出现“ + ”意味着尿路感染，多数是与大肠埃希菌相关。 建议：尽快去泌尿科检查 5、尿蛋白：有一些是生理性的蛋白尿，正常结果应为阴性或微量。若出现“ + ”多数意味着肾脏或者全身疾病引起的异常。 建议：尽快去肾内科就诊，并做24小时蛋白定量检查。 6、胆红素：胆红素多会使得尿液里泡沫增多，而此项出现 “ + ”通常与黄疸关系紧密，可能存在急慢性肝炎、胆石症、胆道肿物、肝硬化、肝癌等隐患。 建议：到消化科咨询就诊 7、尿酮体：酮体是脂肪酸在肝脏屮氧化生成的，若标本不新鲜会出现“ + ”，肚子太饿了也会出现“ + ”，严重的糖尿病也会出 现“ + ” o
常见蛋白酶抑制剂
蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9; 3)溶液在4℃稳定六个月以上;
4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml); 5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。 胃蛋白酶抑制剂(pepst anti n) l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶; 2)1mg/ml溶于甲醇中; 3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月; 4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。 亮抑蛋白酶肽(leupeptin) 1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B; 2)lOmg/ml溶于水; 3)储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度0.5mg/ml。 胰蛋白酶抑制剂(aprotinin) 1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶; 2)lOmg/ml溶于水，pH7~8 3}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L); 5)避免反复冻融: 6)在pH>12.8时失活。 蛋白酶抑制剂混合使用 35ug/ml PMSF…………………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂 0.3mg/ml EDTA…………………………………金属蛋白酶抑制剂 0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制剂 0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)……………广谱蛋白酶抑制剂
5-Fu尿嘧啶对人体胚胎肾细胞的抑制作用
5-Fu尿嘧啶对人体胚胎肾细胞的抑制作用 摘要： 运用MTT测定细胞活力的方法，检测经过不同浓度的5-氟尿嘧啶培养2天细胞的生长状况，计算不同浓度5-FU对细胞生长的抑制率。实验结果表明，在一定的浓度范围内，随着5-FU 浓度的提高，细胞的抑制率也提高；而10ug/ml的5-FU已经对细胞有比较明显的抑制作用。5-FU浓度达到150ug/ml左右时对细胞的抑制作用趋于最大，浓度再增大对细胞的抑制率基本稳定在75%左右不再上升。 5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)，是尿嘧啶5位的氢被氟取代的衍生物，是以抗代谢物而起作用，在细胞内转化为有效的氟尿嘧啶脱氧核苷酸后，通过阻断脱氧核糖尿苷酸受细胞内胸苷酸合成酶转化为胸苷酸，而干扰DNA的合成。氟尿嘧啶同样可以干扰RNA的合成。常用于治疗肿瘤。但由于5-FU对用药的患者有比较大的毒副作用，为治疗结果带来更多的不利影响，且此药通常用于治疗胃癌[5]，对宫颈癌细胞会有多大疗效，用药的浓度等基本的药理信息还比较缺乏。本实验用宫颈癌细胞做体外药物抑制效果实验，尝试探讨5-FU对细胞的抑制作用大小以及其用药浓度，为临床用药量研究提供基础资料。 关键词：5-氟尿嘧啶、细胞、MTT法、抑制率 引言： MTT法作用原理 MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色（或蓝色）结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中；在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，因此用酶联免疫检测仪在490nm或570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT不会有反应。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。 MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内。同时，利用已知浓度细胞培养后的吸光度可以生成细胞生长趋势曲线，通过该曲线可推测出某一未知浓度细胞的原始接种浓度。 5-氟尿嘧啶抑制癌细胞生长原理 恶性肿瘤患者由于肿瘤细胞无止境地分裂、增殖而不断地消耗宿主的营养物质，以及宿主因荷瘤状态所存在的代谢紊乱，机体常存在不同程度的营养不良，严重者导致恶液质，体质下降。5-氟尿嘧啶能够抑制癌移植瘤的生长并诱导瘤细胞的凋亡。5-氟尿嘧啶能选择性地攻击DNA碱基的氮原子，特别是鸟嘌呤的第7位氮原子，和胞嘧啶的第3位氮原子结合。由于和DNA呈交叉联接，对DNA的构型有明显影响，使双螺旋解旋使分子变短；可与DNA形成链内交联，也可形成链间交联或DNA-蛋白质间的交叉联结，由于其可使DNA的模板作用失活，从而抑制DNA合成而抑制肿瘤的生长。 方法： 主要试剂 细胞培养液、胰酶、1640、MTT溶液、5-FU溶液、二甲基亚砜（DMSO） 实验用细胞： 肿瘤细胞 实验方法