弥散性血管内凝血模型的改进

文章编号:1009-8488(2005)02-0067-03论　著

弥散性血管内凝血模型的改进

王艳春1,吕　莉2　(1.吉林医药学院药理教研室,吉林吉林　132013;2.大连医科大学药理教研室,辽宁大连116023)

摘　要:目的　改进弥散性血管内凝血(DI C)的模型。方法　采用凝血酶(100U/k g×1h)和氨基己酸(50m g/kg×1h)静脉滴注造成家兔急性D I C模型,以凝血酶原时间(PT)、血小板计数(PLT)、纤维蛋白原(FI B)含量和血浆鱼精蛋白副凝固(3P)试验以及肺、肾微血栓形成为观察指标。结果　模型组PT进行性延长、PLT进行性下降、FI B进行性降低、3P试验由阴性转为阳性,且肺、肾病理切片有微血栓形成。结论　采用凝血酶和氨基己酸静脉滴注能够成功地诱发D I C。

关　键　词:凝血酶;弥散性血管内凝血;模型

中图分类号:R554 文献标识码:A

I mprove m ent t he m odel of d isse m i nate d i n travascular coagul ation(DI C) WANG Yan-chun1,LüLi2　(1.Depart m ent o f Phar m aco l o gy,Jilin M edical and Phar m aceu tica lCo llege,Jili n C ity, Jilin Pr ovince,132013;2.Depart m ent o f Phar m aco logy,Da lian M ed ica l Un ive rsit y,Dalian,Liaon i n g Prov i n ce, 116023,Ch i n a)

Abst ract:Obj e cti v e　To i m prove the mode l of disse m inated intr avascu lar coagula tion(DI C).M ethods　D I C w as i n duced by constant iv inf u si o n of thr o m bin plus PAMBA in rabb its.P l a tele t count(PLT),PT and fibri n ogen(FI B) conten t plas m apro ta m ine paracoagu lation(3P)test and path l o gical exa m ina tion of m icr o thr o m bo sis of l u ngs and kid-neys w ere served as diagnostic indexes o f DI C.R esults　PT in m ode l group w as pr o longed,PLT and FI B w ere de-creased,3P testw as changed fro m positive t o nega tive and m icr o t h r o m bosis o f l u ngs and kidneys w ere for m ed.Con-cl u s i o n　I v i n f u si o n of thr o m bin p l u s PAM B A constant in rabbits can succeed in i n duc i n g t h e D I C.

K ey w ords:t h ro m bin;D I C;m ode l

弥散性血管内凝血(disse m inated intravascula r co-agulation,DI C)是临床一种常见病、多发病,是一个以血管内凝血系统激活导致血管内纤维蛋白沉着为特征的综合征。近年来,DI C的诊断和防治研究有了长足的进步,其中重要原因之一是DI C动物模型的不断完善。本研究在经典模型的基础上,用凝血酶建立了家兔急性D I C模型,用时短,效果明显,为DI C 的实验研究提供依据。

1　材料与方法

1.1　实验动物

雄性大耳白兔18只,体重2.0～2.5kg(大连医作者简介:王艳春(1972-),女(汉族),讲师,硕士.科大学动物中心提供),随机分为3组:生理盐水(NS)空白对照组、DI C模型组、DI C+肝素(H eparin, 250μg/kg)组。

1.2　试剂与仪器

凝血酶(天津血液研究所产品);氨基己酸注射液(辽宁省本溪第六制药厂);凝血活酶(兔脑粉,天津血液研究所产品);鱼精蛋白(上海第一生化药业公司上海生物化学制药厂);肝素钠(hepari n,上海生物化学制品厂产品);牛血清白蛋白标准品(中国生物制品检定所)。

显微镜(日本O l y m pus公司);721分光光度计(上海第三分析仪器厂);电热恒温水浴(北京西城区医疗器械厂);LD5-2A型离心机(北京离心机厂); 800型离心沉淀器(上海手术器械厂);血细胞计数板

(上海沪医);50～250μl微量吸液器(上海精益医学仪器厂)。

1.3　DI C模型的建立

参考有关文献[1]并加修改,造成家兔急性DI C 模型:家兔自耳缘静脉注射乌拉坦(5m l/kg)麻醉后,以1m l/m in×60m in自股静脉恒速滴注诱导剂凝血酶100U/k g+氨基己酸50mg/k g或NS,同时自耳缘静脉恒速滴注肝素或NS(1m l/m in×60m in)。于给药前及开始给药后20m in、40m i n和60m i n分别自心取血2.5m l,其中20μl供PLT用,余血离心,得血浆,测定PT、PLT、FI B及3P试验,并与给药前基础值相比,计算给药后上述有关指标的延长或下降百分率以及3P试验阳性率。

给药60m in后处死家兔,取肺、肾做病理切片,以磷钨酸苏木(PAT H)纤维素染色,观察肺毛细血管及肾血管球微血栓形成情况,并计数100个肾小体,计算肾血管球微血栓形成率。

1.4　实验室测定方法

血小板计数(PLT)[2]:试管中加0.38m l许汝和血小板稀释液,毛细管吸取血20μl缓缓吹入试管并混匀,静置5m i n待红细胞完全溶解后摇匀,取少量滴入计数板,计数板置于湿润平皿内15m in,待血小板沉下后显微镜下计数。

凝血酶原时间(PT)[2-4]:将0.1m l血浆与0.1m l 组织凝血活酶浸液(5%兔脑粉生理盐水混悬液置37℃水浴1h,每15m i n摇匀一次,使凝血活酶充分释放,从水浴中取出后离心,取上清液过滤,现用现配)加入小试管混匀,置37℃水浴1m i n,迅速加入已预温(37℃)的0.025m o l/L氯化钙0.1m l,混合并立即记时,将试管轻轻摇动,当管内液体流动缓慢即将停止时记录时间,该时间即为PT。

血浆鱼精蛋白副凝固(3P)试验[2]:取血浆0.5m l置37℃温育3m in,加入1%鱼精蛋白液0.05m l充分混匀,置37℃温育15m in,取出试管观察有无不溶解物质,根据文献方法判断3P试验结果(阴性或阳性)。

纤维蛋白原(FI B)含量[2]:采用亚硫酸钠沉淀考马斯亮兰法测定。

1.5　统计方法

采用配对t检验、方差分析。

2　结　果

凝血酶诱发家兔急性D I C的PT、PLT、FI B的时程变化见表1-3。

各实验组肺、肾病理切片见图1-2。其中NS空白对照组肺、肾病理切片未见微血栓形成;D I C组肺、肾病理切片可见微血栓形成;D I C+H epari n组仅有一只家兔肺病理切片可见微血栓形成,肾病理切片未见微血栓形成。

空白对照组家兔股静脉及耳缘静脉静滴NS后不同时间,共4次心采血,PT、PLT、F I B、3P试验与给药前均无明显变化,说明本实验中的静脉输液和心采血不致影响实验结果。

D I C组,在给予凝血酶和氨基己酸后20m in、40m i n、60m in PT均较造模前明显延长(P<0.01);

表1　凝血酶诱发家兔急性DIC的PT的时程变化(x±S,n=6)

组　别

给药前

PT值(s)

给药后20m i n

PT值(s)延长%

给药后40m in

PT值(s)延长%

给药后60m in

PT值(s)延长%

NS7.23±0.457.12±0.54-1.477.20±0.63-0.047.30±0.390.97

D IC7.25±0.548.82±0.49**21.699.89±0.82**36.3812.37±2.35**70.71

Heparin7.13±0.33　7.29±0.66ΔΔ　2.22　7.39±0.60ΔΔ　3.627.66±0.38*ΔΔ7.51 *与给药前相比:P<0.05;**与给药前相比:P<0.01;ΔΔ与D IC组同一时间点相比:P<0.01

表2　凝血酶诱发家兔急性DI C的PLT的时程变化(x±S,n=6)

组　别

给药前

PT值(s)

给药后20m i n

PT值(s)延长%

给药后40m in

PT值(s)延长%

给药后60m in

PT值(s)延长%

NS407.00±26.56400.83±25.22 1.52402.00±32.40 1.23401.17±19.37 1.43

D IC405.00±78.65314.67±27.45*22.30233.33±58.37**42.3981.17±25.75**79.96

Heparin405.17±23.27406.17±19.30ΔΔ-0.02406.00±24.53ΔΔ-0.02405.67±18.82ΔΔ-0.01 *与给药前相比:P<0.05;**与给药前相比:P<0.01;ΔΔ与D IC组同一时间点相比:P<0.01

表3　凝血酶诱发家兔急性DIC 的FI B 的时程变化( x ±S ,n =6)

组　别给药前PT 值(s )给药后20m i n PT 值(s )延长%

给药后40m in PT 值(s )延长%

给药后60m i n PT 值(s )延长%N S 3.838±0.2783.862±0.303　-0.633.830±0.299 0.023.820±0.266 0.05D I C

3.811±0.5302.948±0.562*22.651.872±0.409**　50.880.962±0.186**　7

4.77

H eparin

3.874±0.200

3.856±0.223ΔΔ

　0.05

3.652±0.221**ΔΔ

5.73

3.446±0.295**ΔΔ11

.05 *与给药前相比:P <0.05;**与给药前相比:P <0.01;ΔΔ与D IC 组同一时间点相比:P <0.

01

图1　各组肺病理切片(HE ×200

)

图2　各组肾病理切片(HE ×200)

PLT 均较造模前明显减少(P <0.01);FI B 均较造模前明显降低(P <0.01)。另外,3P 试验阳性比率在造模前为0/6,造模开始后20m in 、40m in 、60m in 均为6/6。病理切片均可见肺毛细血管、小血管微血栓形成,肾血管球微血栓形成率为100%。此模型经肝素(250μg /k g )治疗后,可得到明显改善,在开始给药后的60m in 测得的肝素对于D I C 的抑制率为89.40%(PT )、100.00%(PLT )、86.02%(FI B )。3　讨　论

通过测定PT 、PLT 、FI B 和3P 试验四项DI C 诊断筛选指标

[5]

的变化,证明采用凝血酶(100u /k g ×

1h )和氨基己酸(50m g /kg ×1h )静脉滴注能够成功的诱发DI C 。国内外曾试用多种外源性物质来制造DI C 动物模型

[6-7]

,如采用凝血酶在大鼠体内诱发

D I C ,采用内毒素在大鼠、兔和猪体内诱发D I C ,同时静滴肾上腺素及凝血酶在狗体内诱发DI C 等。国内曾有报道给犬采用凝血酶60u /kg 和氨基己酸

0.4u /kg 在180m in 内滴注完毕,造成急性D I C 。本次研究所采用的凝血酶剂量为100u /kg ×1h ,加用氨基己酸50m g /kg ×1h ,动物模型建立在家兔身上,给药后1h 已建立典型的D I C 模型,表现为:PT 进行性延长,PLT 、FI B 进行性降低,3P 试验由阴性转为阳性,呈现明显的时效关系。60m in 后无一只动物死亡,应用肝素可有效地治疗。用此种方法建立的D I C 模型,用时短,效果明显,成功率高,且家兔血量丰富,适合做多项指标的检验,适用于抗DI C 药物的药效学研究。

氨基己酸能够抑制网状内皮系统对于凝血酶等活化了的凝血因子的消除作用,所以在造模中加用氨基己酸可辅助凝血酶造成体内血栓形成。

参考文献:

[1]　Z a w ilska K,Zozu linska M,T urow iecka Z,et al.The

effec t of a l ong-ac ting reco m binant h irudi n(PEG-h irud i n)

on expe ri m ental d issem i na t ed intravascu l a r coagu l a tion

(D IC)in rabb its[J].Thro m b R es,1993,69(3):315-

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[2]　叶应妩,李健斋,王玉琛.临床实验诊断学(上)[M].北

京:人民卫生出版社,1991:381-382;976;1112-1164. [3]　张希贤.病理生理学实习指导[M].北京:科学技术文献

出版社,1989:69.

[4]　王永才.确诊化验诊断[M].大连:大连出版社,1994:

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[5]　宋善俊,王鸿利,李家增.弥散性血管内凝血[M].上

海:上海科学技术出版社,2001:146-157.

[6]　M a rk w ard t F,K aise r B,N ow ak G.S t udies on an tithrom-

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1989,54(5):377-388.

[7]　N owak G,M arkw ardt F.H irud i n in dissem ina ted intrava s-

cular coagu l a tion[J].H ae m ostasis,1991,21(Suppl1):

142-148.

(收稿日期:2005-04-05)

文章编号:1009-8488(2005)02-0070-03论　著上、下颌牙麻醉点的应用解剖

彭　东1,韩　锋1,张学军2,王　伟1,牛松青1,常洪贤1,李　雷1,董秦鲁1　(1.吉林医药学院人体解剖学教研室,吉林吉林　132013;2.吉林市第五人民医院,吉林吉林　132001)

摘　要:目的　为临床拔除上、下颌牙的麻醉点定位提供解剖学资料。方法　选用正常成人颅骨标本50个,用游标卡尺、探针等工具观测上颌结节、腭大孔、切牙孔、眶下孔、下颌孔的位置及其对应关系。结果　通过观测,确定了上、下颌牙麻醉点的解剖学定位。结论　准确掌握上、下颌牙麻醉点的解剖学位置,可以减轻病人在诊治过程中的痛苦。

关　键　词:上、下颌牙;麻醉点;应用解剖

中图分类号:R323.1 文献标识码:A

The app li ed anato m y about anest hesia position i n m axillary and m andi bular teet h

PE NG Dong1,HAN Feng1,Z HANG Xue-j u n2,WANG W ei1,N I U Song-qi n g1,CHANG H ong-x ian1,LI Le i1, DONG Q in-lu1　(1.Depart m en t o f H u m an A nato m y,Jilin M ed ica l and Phar m aceutica l C ollege,Jilin C ity,Jilin Prov ince,132013;2.The Fift h Peop l e s H osipita l,Jilin C it y,Jili n Pr ovince,132000,Ch i n a)

Abst ract:Obj e c ti v e　To p r ovide the anato m ica l da ta in choosing anaest h etic locationsw hen extrac ting teeth.M eth-ods　U sing ve r nie r caliper and probe to observe the ane st h esia positions o f t h e m ax illae t u ber,pa latinu m fo r a m en, i n cisivum fo ra m en,infra-orbitale fora m en and m and i b u lae fo r a m en and t h eir corr e lations.Results　The anesthesia positions o fm ax illar y and m andibu lar teeth we r e de ter m i n ed.Conc l u si o n　To grasp accurate l y the anesthesia posi-tions ofm axillar y and m andi b ular t e e t h can decrease the patien t pain.

K ey w ords:m ax illar y and m and i b u lar teeth;anesthesia positions;app lied ana to my

作者简介:彭　东(1969-),男(汉族),讲师,本科. 拔除上、下颌牙成败的关键与麻醉效果有关,临床上麻醉点定位不清而导致失败率较高,以至给病人