三种草莓病毒的多重RT—PCR检测方法

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三种草莓病毒的多重RT—PCR检测方法

作者：史芳芳汪泉

来源：《农业与技术》2013年第03期

摘要：目前，草莓主要有3种病毒侵染，本研究通过改进CTAB法对经过茎尖剥离的组培四季草莓叶片提取总核酸，采用多重RT-PCR技术同时检测草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒和草莓镶脉病毒。电泳结果显示提取的总核酸中可见总DNA条带和完整的RNA条带，并

采用两步法RT-PCR获得了目的条带。本研究建立了多重RT-PCR同时检测草莓病毒的技术体系。

关键词：总核酸；草莓病毒；多重RT-PCR

中图分类号：S668.4 文献标识码：A

研究报道侵染草莓的病毒有25种之多，在我国草莓生产区，分布广泛、危害严重的主要有草莓斑驳病毒（Strawberrymottle virus，SMoV）、草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus，SMYEV）和草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus，SVBV） 3种病毒[1]。目前，在生产上，草莓带病毒株率平均为80.2%，单种病毒侵染株率为41.6%，2种以上病毒复合侵染株率为38.6%。目前，利用分子生物学检测草莓的病毒种类是比较普遍的方法，主要是PCR（聚合酶链式反应）技术，已有利用此技术对这3种病毒进行检测的报道[2～4]。草莓病毒多为混合侵染，综合表现症状，利用单一PCR分别对多种病毒进行系统检测的

工作量较大。近几年发展起来的多重PCR技术可在1次PCR反应中同时检测多种病毒或鉴定病毒的不同株系，既提高了检测效率又降低了检测成本，是病毒检测的1个重要发展方向。本研究在利用单一RT-PCR分别检测SMoV、SMYEV和SVBV病毒的基础上，探索利用多重

RT-PCR同时检测草莓的3种病毒。

1 材料与方法

1.1 植物材料

待检测的四季草莓品种是蒙特瑞保存于组培实验室继代培养的组培瓶中，通过微茎尖培养共获得20个株系，阳性对照草莓为温室大棚中未经处理的蒙特瑞。

1.2 试剂

TaqDNA聚合酶、DNAMarker、dNTPs和反转录试剂盒为上海生物工程公司产品；CTAB 提取液为实验室自配。

1.3 引物