猪瘟病毒及其猪瘟疫苗研究进展

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猪瘟病毒及其猪瘟疫苗研究进展

韩雪清,刘湘涛,赵启祖

(中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃兰州730046)

中图分类号:S 852.65+1;S 858.28 文献标识码:A 文章编号:100725038(2000)022*******

摘　要:猪瘟(HC )是猪的一种高度传染性疾病。它遍布于世界各国,对经济造成巨大的损失。中国猪瘟兔化弱毒疫苗在防治猪瘟中曾起到决定性作用,但近几年来出现免疫效果不理想,应用组织培养弱毒苗也发生免疫失败,究其原因比较多.本文结合多年研究成果,对猪瘟病毒分子生物学特性和猪瘟疫苗研究进展进行了较为系统的综述,以期望寻找出彻底控制猪瘟的办法关键词:猪瘟病毒;疫苗

被国际兽疫局列为A 类传染病的猪瘟已被确诊150多年了,不少国家先后已消灭了猪瘟,目前,该病主要在南美和亚洲地区流行,在欧洲一些国家也时有发生。近几年,随着欧洲经济一体化的加速进行,许多养猪业发达的国家为能使其猪肉制品顺畅销售,无不为扑灭猪瘟在其国家的流行而竭尽全力,其主要措施是,一旦发现疑似猪瘟的病猪便立即捕杀。我国近几年因各种疾病死亡的牲猪占饲养总数的8%～10%,其中1 3以上由猪瘟致死,每年的直接经济损失有数十亿元,造成了巨大的人力和资源的浪费[1～3]。

中国猪瘟兔化弱毒(C 2株)疫苗自问世以来,享誉海内外,许多国家竟相引用。从二十世纪60年代开始,C 2株兔化弱毒苗和其换代产品(细胞苗)在我国被广泛应用。30年来,C 2株疫苗在我国以防为主的猪瘟防治策略的实施中起到了决定性的作用,有效地控制了猪瘟在我国的急性发生和大流行[4]。 二十世纪70年代后期,猪瘟的流行形式发生了很大变化,从频发的大流行转变为无规律的散发性流行,疫点显著减少,病程由急性变为慢性过程,临床症状由典型变为非典型,病原毒力降低,出现持续

收稿日期:2000201206

基金项目:国家攀登计划甘肃自然科学基金储备项目

作者简介:韩雪清(1965-),甘肃兰州人,中国农业科学院兰州兽医研究所工作,副研究员,在读博士,主要从事病毒分子学生物学研究.

感染,胎盘感染,母猪繁殖障碍,出生仔猪先天性感染,表现为死亡、免疫耐受或无明显症状的带毒猪。这些病猪的存在,成为猪瘟发生的祸根,尤其是亚临床感染猪,依靠常规方法很难确诊并剔除此类病猪。近几年来,集体、个体及农村散养发展迅速,仔猪的自繁自育和自由交易,大量牲猪和肉品频繁的供需调动,隐性感染猪在全国范围内流动,致使疫情的发生飘忽不定,防不胜防,猪瘟又开始呈区域性流行。在疫苗接种面越来越广,防疫密度越来越高,免疫剂量加大和免疫次数增加的情况下,并未能控制猪瘟的发生,而且有蔓延全国之势[5～7]。

1　猪瘟病毒分子生物学研究进展

自猪瘟病毒被确认以来,虽然人类为防制该病已投入了巨大精力,仍未能达到预期的效果,而且,该病毒也没有像有些古老的病毒那样自然消亡。究其原因,主要是由于对猪瘟病毒的病原生态学、分子流行病学以及病毒的感染、复制、免疫机制等许多重大基础性问题都未研究清楚,导致了在免疫预防方面存在着盲目性。因此,国内外均投入很大资金和人力致力于病毒分子水平的研究,以寻找出彻底控制猪瘟的办法。

1.1　猪瘟病毒的基因结构与功能

猪瘟病毒(HCV )为黄病毒科瘟病毒属成员,基因组为单股正链RNA ,长度为12.3kb 。随着HCV A lfo rt 株(1989年德国)和B rescia 株(1990年荷兰)

RNA 全序列的发表,对HCV 的研究真正进入分子

水平,其进展速度很快,包括由我国设立并完成的C 2株兔脾组织毒(疫苗种毒)RNA 的全序列,目前已有10余株强毒株和疫苗毒株的RNA 全序列公开发表。

HCV 仅含有一个大的开读框架,编码一个含3898A a 的多聚前体蛋白。HCV 基因组共由11个基因组成,已定位的蛋白有5种:N p ro ,C ,EO ,E 1,

E 2,未明确定位的有6种:N S 2,N S 3,N S 4A ,N S 4B ,N S 5A ,N S 5B ,其中C 为核衣壳蛋白,E 0,E 1,E 2为

结构糖蛋白,其余均为非结构蛋白。在结构蛋白中,最具有免疫防制研究价值的是E 0和E 2基因。

5θN p ro C E0E1E2N S2N S3N S4A N S4B N S5A N S5B 1234567891011

3θ

图1　HCV基因结构

E0(或E rns)的N末端为Glu2268,它由227个A a构成,其甲基化程度很高,分子量约为44～48 kD a,可诱导产生中和谱很窄的中和抗体。E0没有疏水的膜锚定结构,其在由细胞以出芽或胞吐方式分泌出的病毒颗粒的囊膜上并不稳定,在细胞培养HCV的上清液中含有少量的病毒粒子,但却含有大量被分泌出的E0。E0不仅是一种结构蛋白,而且也是一种功能性蛋白,它与HCV对宿主细胞的嗜性以及致病力有密切关系。E rns有RN ase(RNA酶)活性,可降解病毒和细胞的RNA。E rns可导致免疫抑制,引起动物的淋巴和上皮细胞凋亡。HCV的宿主嗜性也与E rns有关,用E rns可有效阻断HCV对易感动物细胞的感染。这表明E rns可能在HCV对细胞的感染过程中以及在细胞中的复制、表达和调控起重要作用。E rns还表现出神经细胞毒性和抗凝集活性,由于E rns没有膜锚定结构,为可分泌蛋白。HCV感染动物后所产生的E rns蛋白在其致病过程中起重要作用[8～11]。

E2的N端为A rg2690,分子量约为53～55 kD a。E2参与病毒对细胞的感染过程,携带有能刺激机体产生保护性免疫的抗原决定簇。E2基因编码的gp55蛋白是猪瘟的主要保护性抗原,其空间构型由三个疏水区和三个N端的链内二硫键构成。靠近C 端的疏水区为gp55锚定结构(TM R),从856位半胱氨酸(Cys)后的第六个氨基酸至C端TM R之间形成有弹性的Α螺旋结构,没有抗原决定簇。从N 端693位至856位Cys之间形成了富含抗原决定簇的两个抗原结构域,这两个结构域由位于737和792位Cys之间的一段Β片层结构隔开。693和737位Cys形成二硫键并组成一个序列保守性(易变)抗原结构域,具有中和性的B、C抗原区位于该结构域中,另一个结构域属序列保守性(不易变),由792和856位Cys形成的二硫键组成,包含中和抗原区A 和非中和抗原区D,而A和D区由其间的一个疏水区和818位、828位Cys形成的二硫键分开。在A、B、C三个中和区中,各有一段与中和性密切相关的高频突变序列或位点,这些序列或位点的突变株将逃脱中和性单抗的中和作用,免疫血清对这类突变株的中和作用也会降低[12～14]。

1.2　猪瘟病毒的分子流行病学分析

弱毒疫苗的普遍使用改变了猪瘟病毒原有的生态环境和病毒群落,从二十世纪70年代末开始,全世界猪瘟流行的特点均发生了重大变化,以温和型猪瘟为主。而近几年在我国又出现了猪瘟疫情的反弹现象,表现出既有区域性大流行,又有零散式发生,既有高死亡率的急性症状,又有顽固的持续发生的温和性症状,使疫情倍显复杂。许多猪场的免疫猪群频繁发病,无论是将免疫剂量增大数倍或数十倍,还是更换使用不同厂家的C2株细胞苗或C2株组织苗,疫情依然存在,有些猪还因注射疫苗引发猪瘟并造成死亡。因此,了解猪瘟流行毒株的遗传变异情况和了解猪瘟疫苗毒与现行流行毒之间的差异,对于防制猪瘟是十分重要的。

瘟病毒属有3个病毒种[15,16],为猪瘟病毒(HCV)、羊边界病毒(BDV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV),分为4个血清型,牛病毒性腹泻病毒有2个血清型,猪瘟病毒和羊边界病毒各有1个血清型。在最新的分类方式中,瘟病毒被分为6个基因型(genetype),其中BVDV有4个基因型:HCV和BDV各有1个基因型。

1996年,L ow ings对世界上20多个国家的115株HCV毒进行了序列比较[3]、中和单抗反应性及内切酶分析后,将115株毒划分成二个群(Group或血清亚型),group l(血清亚型 )有两个亚群(subgroup),主要包括B rescia株,疫苗毒株和60年代流行毒;Group2(血清亚型 )分为3个亚群,主要包括含A lfo rt株和近10年来的流行毒。在此基础上,1999年,Sakoda通过对40余株猪瘟流行毒的序列分析,将猪瘟病毒分为3个群,CSFV21,称为古典猪瘟,以B rescia株为代表。CSFV22,以A lfo rt株为代表。CSFV23,与上述二个群均有较大差异,包括了一些日本、泰国和中国台湾(P97)的70～90年代流行毒株。

我国虽然开展猪瘟病毒分子流行病学的研究工作较迟,但在兰州兽医研究所、解放军军需大学等单位的不懈努力下,可反映我国猪瘟病毒遗传发生关系全貌的系谱图日渐清晰[17～21]。1998年,兰州兽医研究所利用所测的10株1997～1998年甘肃省流行毒和2株代表毒的C2株兔组织毒和C2株细胞疫苗毒E2基因序列,构建出了猪瘟病毒遗传发生关系树。该树的基本结构与L ow ings和Sakoda所构建的树相同(见图1),分为2个群和1个另类。B rescia 株、C2株兔组织毒、C2株细胞疫苗毒(兰州生物药厂疫苗)以及我国二十世纪60年代经典石门强毒属于Group l,即古典猪瘟CSFV21。采自甘肃省的兰州、张掖、武威、临夏、白银、金昌等地区的10个流行野毒与A lfo rt株均属于Group2,即CSFV22,这10个流行毒又分别属于subgroup2.1和subgroup2.2。中国

台湾的P 97毒为另类猪瘟病毒,即CSFV 23。这表明我国和世界其它国家一样,近年来猪瘟流行毒已呈远向疫苗毒的方向演变,近期猪瘟流行毒与古典猪

瘟毒之间有较大差异(核酸和氨基酸同源性分别为82.2%～84.3%和87.9%～90.4%)

。

①CSFV 21　(Group l )包括:1964年以前病毒、疫苗株和近年(1980s )的远东和巴西毒;②CSFV 22　(Group 2)包括:大量1985年以后从欧洲分离的毒,个别是1970年以后分离毒;③CSFV 23是70～90年代亚洲分离毒。

图1　HCV 毒株树形关系及中国毒株在其中的位置

1.3　C 2株疫苗毒的分子变异

在30余年的生产应用中,国内外研究单位和生

产厂家纷纷将C 2株兔毒适应到各种原代和传代细

胞上,用以生产疫苗,由于在传代次数、传代方式,宿

主细胞的种类等方面存在很大的差别,抗原漂移难

以避免。不同厂家、不同种类细胞繁殖的C 2株细胞毒有多个抗原表位存在差别。HCV 病毒颗粒存在不均质性(heterogenocity ),尤其是经典毒株,通过有限稀释法往往可以克隆到单抗反应谱不尽一致的病毒新克隆,用中和单抗可筛选出逃脱中和的C 2株突变株。毒株的不均质性是由于毒株内包含已变异颗

粒,感染细胞后形成交错的可用单抗识别的异质染

色斑,病毒株的不均质是其发生变异的内因,在诸多

环境条件的改变等外因的作用下,毒株内的异质病

毒颗粒可能逐渐增大比率并形成毒株抗原的变异,历经30余年传递500余代(国外已达800多代),其抗原的漂变程度令人关注。

鉴于C2株疫苗毒在国内外的重大影响和防治猪瘟中的重要作用,以及早期使用中的良好效果和近年来在使用中时有发生的免疫失败现象,国家攀登计划设立“中国猪瘟兔化弱毒兔脾组织毒RNA 全序列分析”项目,除达到正本清源之目的外,还可明确一些淤积已久的疑问。

通过分析由兰州兽医研究所和解放军军需大学共同完成的C2株兔脾组织毒5θU TR(非编码区)至N S4A共约7350nt的核苷酸序列,结果是:C2株兔脾组织毒与其适应于SK6传代细胞及犊牛睾丸细胞毒之间在其编码区包括主要保护性抗原E2基因的核酸及氨基酸差异极其细微,而在5θ端非编码区的开读密码前,C2株细胞疫苗缺失一个核苷酸C,这对于细胞毒的感染活性有无影响尚不清楚(见表1,表2)。

表1　C2株兔脾组织毒与另外三个毒株的

核酸序列同源性比较

毒 株5θ27350nt5θU TR长度(nt)编码区

C2株(SK6)细胞毒96%37399%

A lfo rt85%36385%

B rescia90%36093%

表2　C2株兔脾组织毒E2基因与其它

C2毒株的同源性比较

毒株(细胞,方式,来源)N t同源性

(%)

A a同源性

(%)

C2株(SK6细胞,悬浮培养,荷兰)98.8798.95

C2株(犊牛睾丸细胞,原代,长春)98.3497.37

C2株(犊牛睾丸细胞,原代,兰州)98.9098.50

E2基因为中度可变区,其抗原结构分A、B、C、D四个区,A区分为A1、A2、A3三个亚区。具有中和性作用的有:A1、A2相连区,为保守区;B区和C 区为非保守区。分析表明:C2株(脾)和C2株(SK6)毒株间的A12A2、B、C区完全相同,并且其疏水性预测完全一致;而C2株(兔脾)和C2株(犊牛睾丸细胞)毒株间在C区有2～3个氨基酸不同,并且其中一个氨基酸由原来的中性变为酸性氨基酸,其疏水性有一处不同。从上述结果分析,C2株(兔脾)疫苗毒与换代产品C2株(SK6传代细胞)和C2株(犊牛睾丸原代细胞)疫苗毒的抗原差异极小甚至没有差异。

1.4　C2株疫苗毒与流行毒的E2抗原基因差异

C2株疫苗毒在使用了近40年后的今天,其与现代猪瘟流行的主要保护性抗原E2基因的差异程度令人关注。兰州兽医研究所完成了C2株兔脾毒与C2株细胞疫苗毒、经典强毒、流行毒在gp55抗原蛋白的结构及中和性相关位点氨基酸序列的差异比较及利用分析软件作的抗原性、疏水性、电荷数和抗原表位的预测结果。

大多数毒株与C2株兔组织毒的抗原结构框架无差异,仅有甘肃兰州红古毒和甘肃张掖毒在A、D 区中间的疏水区有差异,将会局部影响A、D区的空间结构。除C2株细胞疫苗(兰州.L Z2CV)毒、中国石门(Sh i M en)毒和甘肃定西临洮(GS1t.S1C)三株毒外,其余毒株在B、C或A区三个中和性抗原高频变位点的氨基酸与C2株兔组织毒有性质差异,这些在中和抗原决定簇上的差异可能影响C2株毒对其血清的中和滴度,影响程度估测结果是:有较大影响的毒株为甘肃张掖毒,甘肃榆中(GSYZ)毒,甘肃定西临洮(S1,S2)毒;有一定影响的毒株为甘肃临夏(GS1x)毒,甘肃兰州红古(GShg)毒和A lfo rt株;基本无影响的毒株为B rescia株,甘肃金昌(GSjc)毒,甘肃武威(GS WW)毒,甘肃兰州(GS1Z)毒,甘肃白银(GSby)毒和甘肃武威黄羊镇(GShy)毒;无影响的毒株为C2株细胞疫苗(L Z2CV)毒,中国石门毒(Sh i M en)和甘肃定西临洮(GS1t.S1C)毒。

1.5　E0基因的差异分析

国外新的研究表明,EO与病毒的细胞嗜性(trop is m)及致病力等诸多生物性质相关,HCV的致病力呈现多样性,具有高、中、低毒力毒株和无致病性毒株。从自然界中获取流行毒株的E rns基因,在序列分析的基础上,利用基因重组技术对其相应的生物学活性的研究,将有利于阐明HCV的致病机制。兰州兽医研究所对疫苗毒和流行毒的E0分子差异进行了分析,其分析结果见表6。所有C2毒株(3株)与国内近期流行毒(5株)有较大的差异,其核酸的序列同源性为83%～84%;氨基酸序列同源性为88%～91%。国内近期流行毒与我国二十世纪50～60年代流行的石门毒株也存在较大的差异,核酸的序列同源性为85%;氨基酸序列同源性为89%～91%。5株近期流行毒间的差异较小,核酸序列同源性为91%～98%;氨基酸序列同源性为94%～98%。毒株间的同性与E2的树形关系有一定的对应性。

表3　C2株兔脾组织毒与其它毒株的E0基因的

核酸及氨基酸同源性

毒　株3核苷酸(%)氨基酸(%) C-株疫苗(兰州生药厂)1.199.498.6

3中国石门毒1.195.393.7

3B rescia1.290.691.0

3中国台湾P97385.691.4

甘肃临夏2.183.586.9

甘肃红古2.183.487.4

甘肃金昌2.283.587.8

甘肃黄羊镇2.282.987.4

甘肃武威2.282.688.7

3A lfo rt2.384.889.6

注:“3”表示序列来自Genbank,1.1树中分组。

E rns 的RN ase 活性区已被确认,在其分子的第28位到第88位氨基酸间,其中有两段序列为RN ase 活性的基础序列,每段由8个氨基酸组成,两段间隔38个氨基酸。猪瘟病毒C 2株(C 2E 0,SK 6细

胞)、C 2L Z (兰州疫苗毒)和流行毒的E rns 与真菌

RN ase T 2、R h 及植物RN aseS 2(6)

间在该区段的氨基酸序列比较见图2。在二个基础序列中,C 2株毒与流行毒仅有一个氨基酸不同

。

图2　RN ase 与猪瘟病毒E rns 的序列比较

无论从HCV 感染细胞中提取的E rns 蛋白,还是从昆虫细胞中表达的E rns

蛋白,都证明具有RN ase 活性,只是酶催化活力上有差异。通过破坏E rns 的二

硫键和去糖基实验表明,E rns 蛋白所具有的RN ase

活性,依赖于它的二段各为8个氨基酸的基础序列,

其中的组氨酸(H )最为关键,用其它氨基酸置换后

(灭活的E rns )将失去这种活性。在RN ase 活性基础序列中,C 2株和GS WW 毒有一个氨基酸不同,所有C 2株毒(包括C 2株兔组织毒、C 2株SK 6细胞毒和C 2株犊牛睾丸细胞疫苗毒)是不带电的甘氨酸(G ),GS WW 、GSJC 、GSH G 、GSL X 、GSH Y 都是谷氨酸(E ),经典强毒S M 、A lfo rt 、B rescia 株和TW P 97也都是谷氨酸,而真菌T 2、R h 和植物S 2是天冬氨酸(D ),E 和D 都是带负电荷的氨基酸。不知这一差异对催化活力有无影响。抗E rns

的HCV 中和性单抗又是RN ase 活性抑制剂,以灭活的E rns

免疫产生的抗体仍具有对HCV 的中和性和抑制E rns

的RN ase 活性作用,表明中和抗体的产生及它对RN ase 的抑制作用不单纯决定于活性基础序列。E rns

可抑制伴刀豆蛋白A (Con A )对猪、牛、羊、人等淋巴细胞的促有丝分裂作用,强烈抑制淋巴细胞的蛋白合成,但不损害细胞膜。E rns 可导致淋巴细胞和上皮细胞的细胞毒性效应并形成细胞凋亡。在真核细胞上,普遍存在着可与E rns 结合的细胞受体,E rns 与细胞的结合为不可逆过程,而E 2与细胞的结合是可逆的过程。HCV 的E rns 可有效阻断猪源HCV 、BVDV 对SK 6、PK 15等细胞的感染,却不能有效阻断牛源BVDV 对细胞的感染,表明E rns 宿主嗜性有关。E rns 的这些活性,表明它可能在HCV 对细胞的感染过程以及在细胞中的复制、表达与调

控过程中起重要作用。由于E rns

没有膜锚定结构,表现出神经细胞毒性和抗凝集活性作用的分泌型E rns 蛋白与HCV 的致病性密切相关。C 2株毒与流行毒的E rns 蛋白在氨基酸序列上有多处不同,这些差异对于相应的E rns 蛋白的生物活性以及对于GCV 在复制与表达过程中的影响,有待利用基因重组技术

加以深入研究。

随着对猪瘟病毒的感染、复制和变异机制;致病

及免疫机理;病毒在猪体的存留与排放过程等重大问题的深入研究,将能使我们搞清楚许多目前无法解释的问题的内在原因,并由此从根本上解决猪瘟的防制问题。2　猪瘟疫苗的研究进展由于猪瘟的致死率高,造成的损失大,采用接种疫苗的方式来防制猪瘟是十分重要的。猪瘟灭活苗是40～50年代曾经使用过的传统疫苗,当时该苗就表现出质量不稳定,主要是免疫期短和保护力低等不足。时至今日,组织培养猪瘟毒的产量和灭活所造成的病毒有效抗原的损失仍是制造灭活疫苗的二大障碍。在通常情况下,HCV 对上皮细胞(如SK 6,PK 15等)不产生CPE ,但HCV 感染猪骨髓瘤细胞

(BM SC )后4d ,可使该细胞产生病变(CPE ),培养基

中病毒滴度高达106.3～7.1TC I D 50 mL ,用多抗和中

和单抗可抑制病毒的感染性。M eyers (德国)对分离自持续感染猪的CP 型HCV A TCC V R 2531株进行

了研究,发现该毒为缺陷干扰型病毒(D I ),它致细胞病变的特点是:产生CPE 领域依赖辅助病毒;干扰辅助病毒的复制。随着对HCV 的生物学性质的深入研究,或许有一天能够寻找到提高HCV 产量的细胞培养方法。

猪瘟弱毒疫苗的成功问世,改变了猪瘟防制的窘迫局面,三大品系疫苗(中国的C 2株、日本的CPE 2株和法国的T h iverval 株)的广泛应用,对于控制猪瘟的流行起到了关键作用。但是,弱毒疫苗特有的对保存及运输过程中的温度要求,以及对免疫程序和免疫时机的精确要求限制了该类疫苗的使用,使之并没有充分发挥应有的保护效力。同时,由于用此类疫苗免疫所产生的防护层并没有彻底阻断猪瘟病毒的传递途径,猪瘟野毒仍然存在并以低水平传播,致弱疫苗也存在因突变或与野毒发生重组而造成毒力逆强的机率。另一方面,弱毒疫苗的普遍使用,促使了猪瘟病毒的变异,这一事实为近期流行毒

与疫苗及二十世纪60年代前后的流行毒有着较大的差异所证明。

从未来发展的角度考虑,研制可克服传统疫苗不足之处的新型猪瘟疫苗是十分必要的。在猪瘟的防制工作中,鉴别和剔除猪群中的猪瘟野毒感染猪也是十分重要的。猪瘟弱毒疫苗和猪瘟病毒一样,都是活病毒,以感染方式产生抗体,虽然国外已有可专一性识别C2株病毒的单抗,但鉴别抗体是弱毒疫苗免疫产生的还是野毒感染产生的仍有很大难度,未来对疫苗的重要要求之一就是可通过检测抗体来区分猪瘟病毒感染猪,基因工程亚单位疫苗和DNA 疫苗只诱导产生猪瘟病毒的个别蛋白的抗体,可用检测N S3(P80)蛋白抗体的方法鉴别之[22],将一个容易识别的蛋白基因插入C2株猪瘟感染性c DNA 中,通过检测该蛋白的抗体也可鉴别之。

2.1　基因工程亚单位疫苗

利用真核细胞高效表达系统来表达猪瘟病毒免疫蛋白,并以此表达产物为抗原可制造疫苗。杆状病毒(baculovirus)2昆虫细胞系统可高水平表达外源蛋白,昆虫细胞对蛋白的加工和运转过程与哺乳动物类似,所表达的蛋白“仿真”程度较高。H ulist等将猪瘟病毒E2基因c DNA重组入核型多角体病毒(A c N PV),并在sf21细胞中表达,用20～100Λg的表达蛋白免疫猪,可抵抗100LD50的猪瘟强毒攻击,其诱导产生的中和抗体水平远高于由弱毒疫苗免疫产生的水平[23]。目前,该蛋白的表达已被提高至60Λg mL,并且该疫苗于1998年被列入欧洲药典。由于该疫苗生产技术具有安全、稳定、可规模化等优点,同时又根据流行毒的变化,更换合适的E2基因,因此,具有广阔的应用前景。

2.2　病毒活载体疫苗

以无致病力或低毒力的痘苗病毒(VA C)和伪狂犬病毒(PRV)为载体,将猪瘟病毒E2基因与之重组研制出的基因重组疫苗,免疫动物后可对二种病毒产生良好的保护力。对此类疫苗的安全性和实用价值目前还有争议,因为人类至今还不了解病毒的自然发生及变异机制,也就无法控制这类“人造”病毒和未来走向,一旦将该病毒放入自然界中,将可能衍变出对人、兽有危害的病毒变种。另一方面,伪狂犬病是较为普遍的一种疾病,猪瘟-伪狂犬病毒重组疫苗对于已感染或已免疫的动物不能产生保护力。M oo r m ann等于1996年拼接出了C2株感染性全长c DNA,用强毒E2基因取代原有E2基因,构建出了猪瘟杂交病毒[24],这一技术改变了传统意义上的弱毒疫苗研究程式,并且在研究猪瘟病毒的基因功能和感染、复制、免疫机制方面具有重大意义[25]。2.3　DNA疫苗

DNA疫苗技术是近年发现并形成的一种新的疫苗研制技术,已有许多利用该技术将一些具有药用价值的活性蛋白基因与载体重组,注射动物后成功产生活性蛋白的例子。以配有原核复制元件和真核表达调控元件的质粒为载体,将免疫原基因插入该质粒中,用裸DNA接种动物可产生免疫保护。在保证该重组子在注射动物后不会发生散播,即不具有传染性的同时,该重组子在动物体内对细胞的转染率及细胞内的表达水平将影响该疫苗的免疫效力。由于该重组子可通过发酵培养方式大量制备,又具有较好的稳定性,并且大容量的质粒还可同时容纳多种病毒的免疫原基因[26],因此,这项制苗技术具有很大的研究价值,最近,解放军军需大学已用猪瘟DNA疫苗成功保护了猪瘟强毒对猪的攻击。

在未来的岁月里,随着人口增长和生活水平的提高,对猪肉的需求量也随之增大,控制猪瘟等严重危害养猪业发展的重大疫病显得十分急迫。除了完善猪瘟防、检制度和相关的法律、法规外,必须加强对猪瘟病毒的感染、复制、免疫机制等基础性研究;加速研制适应未来需要的新型猪瘟疫苗和检疫方法,以达到最终控制猪瘟的目的。

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Progress of Study on Sw i ne Fever V irus and itθs Vacc i ne

HAN Xue2qing,L I U X iang2tao,ZHAO Q i2zu

(L anz hou veterina ry R esea rch insitu te,ch inese A cad e my of A g ricu ltu ra l

S ciences,X uj iap ing11,Y anchang bu,L anz hou,Gansu730046)

Abstract:Hog cho lera(HC)is a h igh ly infecti on disease,w h ich cau ses great econom ic lo sses acro ss the w o rld.Ch inese lap in ized vaccine of Hog cho lera viru s(HCV)has been p laying a crucial ro le in carrying ou t the strategy of con tro lling HC.B u t in recen t years,the i m m uno logical effect of the vaccine is undesiab le.T here are m any facto rs that cau se the i m m uno logical fail.In th is paper,review ed latest developm en t in the m o lecu le of HCV as w ell as the vaccine,in o rder to find a w ay to coun tro l HC.

Key words:Hog cho lera riru s;vaccine;study p rogress