新生小鼠genotyping protocol

从小鼠合笼到基因分型

一，小鼠合笼：

1，准备需要合笼的老鼠（要求为性成熟老鼠：8—10周龄），记录老鼠基本信息，包括编号，性别，出生日期，基因型。

2，挑选需要合笼的公鼠，每笼放一只，记录笼号和卡片流水号，并在卡片上标记该老鼠的基本信息（编号，基因型）。

3，挑选需要合笼的母鼠，每笼只，同样在卡片上标记母鼠的基本信息（编号，基因型），注意，同一笼中母鼠的耳号不能相同。

4，合笼时间的选择（具体情况具体分析）。

5，母鼠验栓。合笼次日晨8:00验栓，有阴栓的母鼠更换到仅放有受孕母鼠笼中，在卡片上标记好母鼠信息（包括与该母鼠交配的公鼠的编号），在原鼠笼的卡片上划掉该母鼠信息。6，重复步骤5连续三天，将仍未受孕的母鼠统一分装到不含有公鼠的笼中，标记相应信息卡片，至此合笼结束。

二，新生小鼠基因分型

1，新生小鼠从出生时P0开始计数，到4周龄p28时需要对其进行基因分型且进行分笼。2，对小鼠耳号的编号方式见下图：

背部

3，按照一窝新生老鼠8只（3只Male, 5只Female）为例，按上图耳号的位置打耳号，编号方式为（Male）1-1, 1-2, 1-3, (Female)2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 做好分笼，将打耳号时产生的ear punch biopsy放于对应编号的PCR管中，管上做对应编号。

4，Add 40μl Sol Ⅰ，Heat to 95℃15min，Add 40μl Sol Ⅱ

5，2μl for PCR reaction.

6，PCR结果凝胶电泳，电泳结果拍照并打印，清晰标记每个泳道的对应小鼠编号。

7，按照小鼠编号和电泳结果，在分笼后鼠笼卡片上标记对应小鼠编号的基因型。