TCID50测定方法

病毒感染力的滴定（TCID50的测定）实验操作步骤、计算方法

一、实验目的

了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法

半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测

半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测

半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测

蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测

三、材料

1、长满单层的细胞1瓶

2、胰酶、吸球、吸管、生长液

3、96孔细胞培养板

4、加样器、枪头

5、病毒液（PRV）

四、TCID50的操作步骤

1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1—10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl。

3、在每孔加入细胞悬液100μl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100μl生长液+100μl细胞悬液）

5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法

五、TCID50的计算方法

1、Reed-Muench两氏法

2、Karber法

含义：将该病毒稀释103.875接种100μl可使50%的细胞发生病变。