ABO血型正反鉴定结果不符的原因分析2

ABO血型系统是人类发现的第一个血型系统，也是最重要的血型系统，对临床输血意义重大。ABO血型系统有A、B、O、AB四种表型，也存在A亚型、B亚型、AB亚型。ABO 系统抗原则有A、B、AB、A1抗原，在胎儿的第9周就可以检测出来，这些抗原随着个体基因变异或疾病的影响而改变。ABO血型系统有两个特点：一、红细胞上缺少某个抗原，血清中就存在针对该抗原的抗体，而且是高效价的；二、不仅红细胞上有ABO抗原，分泌型者得分泌液中也存在某抗原[1]，根据这一特性来判断ABO血型。

临床上，当输入ABO血型不相合的血液时，会引起溶血性输血反应[2]，严重时会危及生命。为了保障临床输血的安全，对ABO血型定型规定做正反定型。当正反定型一致时，方可准确确定ABO血型。但实验中，往往会出现ABO正反定型不一致的情况。导致ABO正反定型不符的原因有很多，有试剂、方法、技术等因素的影响，更重要的是血液免疫因素的影响。本文就血液免疫因素方面对ABO正反定型的影响进行研究。现将武汉血液中心2011年1~4月份健康献血者ABO正反定型不一致及1~4月份医院送检的正反定型不符的患者标本进行研究，报告如下。亚型的数字要用下标表示。

一．材料与方法

1.1标本来源

武汉血液中心1~4月份健康献血者ABO正反定型不符标本及1~4月份各医院送检的

正反定型不符而进行疑难血型鉴定的标本。其中健康献血者80例，患者标本35例。

1.2主要试剂与器材

试剂：抗-A、抗-B标准血清、抗-A1、抗-AB、谱细胞、O型试剂红细胞均为上海血

液生物医药有限责任公司，人源性抗-A、抗-B，A、B型试剂红细胞为本输血研究室自制。

器材：离心机（日本久保田KA2200）；恒温水浴箱（HH60）；显微镜（CKTV-2）。

1.3实验方法

1.3.1 ABO正定型实验

取两支试管，分别加入两滴抗-A、抗-B试剂，再各加一滴3-5％受检者红细胞悬液，

混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。怀疑为亚型时，再加做抗-AB、抗-H试验。

1.3.2 ABO反定型实验

取四支试管，先各加入两滴受检者血清，再分别加入一滴A、B、O型试剂红细胞和

受检者红细胞悬液，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。

1.3.3 吸收放散及唾液血型物质检测

吸收放散试验：因为受检者自身红细胞能吸收血清中的特异性抗体，然后再将抗体

放散下来，取放散液用于血型鉴定。用生理盐水将3ml受检者压积红细胞洗涤三次，取

洗后的压积红细胞2ml，加入对应的人源性抗血清，4℃下吸收1小时，吸收后用4℃生

理盐水洗涤5次，再置于56℃放散10min，数次振荡，3500r/min离心1min，取2滴放

散液，加入对应的1滴A、B、O试剂红细胞，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。

唾液血型物质检测：受检者唾液离心去杂质后，煮沸10min，3500r/min离心5min，

以2+凝集强度为标准将抗-A、抗-B标准血清和抗-H标化，取1滴上清液与标化后的1

滴抗-A、抗-B标准血清和抗-H中和，然后加入1滴对应的A、B、O试剂红细胞，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。

1.3.4 抗体鉴定实验

反定型中Oc反应阳性而自身反应阴性标本与谱细胞反应。取十支试管，编号1-10，对应加入一滴1-10号谱细胞，再各管中加入两滴受检者血清，摇匀，500r/min离心15秒，观察结果。

1.3.5 改变反应温度

室温下，反定型Oc管有凝集时，将自身试管和与正定型结果不一致的反定型试管放在37℃水浴箱，放置10min，轻摇试管观察凝集是否消失，再放置于4℃中60min，立即3500r/min离心15秒，观察结果。

1.3.6 病例调查

对于患者的标本调查简要病例，询问有无输血史、妊娠史、近期用药史和患者以前血型。

二、结果

2.1健康献血者ABO正反定型不符结果统计

表-1 健康献血者ABO正反定型不符结果统计

正定型反定型确认血型例数不符原因

O A A 1 冷抗体

AB O AB 5 冷抗体

A O A 10 冷抗体

B O B 6 冷抗体

A A

B A 2 冷抗体

O B O 1 冷抗体

B AB B 1 冷抗体

A O A 6 抗-M

O A O 3 抗-M

AB O AB 2 抗-M

B O B 2 抗-M

A A

B A 1 抗-B抗体减弱

B O B 8 抗-Leb

A O A 1 抗-Leb

AB O AB 1 抗-Leb

B O B 2 抗-Lea

AB O AB 1 抗-Lea

A O A 1 抗-P1

O A O 1 抗-P1

AB O AB 1 抗-JKb

B AB AB 1 AmB亚型：A3B

AB B AB 1 A2B有抗-A1

O A A 1 A亚型：Ael

O B B 1 B亚型：Bel

AB A AB 2 缗钱状凝集

A A

B AB 3 缗钱状凝集

A O A 1 缗钱状凝集

B O B 2 缗钱状凝集

O A O 1 缗钱状凝集

A O A 2 ABO以外抗体

阳性，谱细胞

无法确定其特

异性

B O B 1 同上

AB O AB 2 同上

AB A AB 3 同上

A A

B A 1 同上

AB B AB 1 同上

O B O 1 同上

表-2健康献血者ABO正反定型不符原因在血型分布情况

血型例数冷抗体抗原减弱或缺乏抗体减弱或缺乏不规则抗体缗钱状凝集

A 26 12 1 1 11 1

B 23 7 1 0 13 2

O 8 2 0 0 5 1

AB 23 5 2 0 11 5

表-1表-2中，献血者标本中引起正反定型不符的原因：冷抗体占32.5％（26/80），抗原减弱或缺乏占5％（4/80），抗体减弱或缺乏占1.25％（1/80），不规则抗体占50％（40/80），缗钱状凝集占11.25％（9/80）。

2.2疾病患者ABO正反定型不符结果统计

表-3疾病患者ABO正反定型不符结果统计

不符原因例数正定反定确认血型

A B O AB A B O AB A B O AB

红细胞因素

白血病导致抗原减弱 3 3 1 2 2 1

Bx 1 1 1 1

Ax 1 1 1 1

抗体因素

白血病导致抗体减弱 1 1 1 1

肿瘤患者抗体缺乏 1 1 1 1

抗-M 8 4 2 2 8 4 2 2

抗-D 1 1 1 1

抗-E 5 3 2 5 3 2

抗-e 2 1 1 2 1 1

抗-c 1 1 1

抗-P1 1 1 1 1

抗-Lea 1 1 1

冷抗体 3 1 2 3 1 1 1

混合因素

溶贫 5 2 1 2 1 1 1 2 1 1 1 2

SLE 1 1 1 1

表-4 患者ABO正反定型不符原因在各疾病中分布

原因例数疾病

冷抗体 3 外科手术（孕产史）1例、脓胸1例

血液病1例

不规则抗体 19 外科手术（输血史）4例、外科手术（孕

产史）5例、贫血3例、肿瘤3例、瓣膜

病1例、上消化道出血1例、垂体腺病1

例、肝硬化1例

抗原减弱或消失 5 白血病3例、贫血2例

抗体减弱或消失 2 白血病1例、肿瘤1例

混合因素 6 溶贫4例、自免贫1例、SLE 1例

表-3、表-4中：患者标本中引起正反定型不符的原因：冷抗体占8.57％（3/35），不规则抗体占54.3％（19/35），抗原减弱或消失占14.3％（5/35），抗体减弱或消失占5.71％（2/35），混合因素占17.1％（6/35）。

三、讨论

本文在排除技术因素及试剂因素研究对ABO正反定型不符的影响因素。笔者对80例ABO正反定型不符的健康献血者及35例定型不符的疾病患者进行ABO定型、吸收放散、抗体鉴定等实验，对结果分析如下：

从表-1中可以看出，在健康献血者中，引起ABO正反定型不符的主要原因是冷抗体32.5％（26/80）及不规则抗体50％（40/80）的产生。对于冷抗体，实验中将反应试管分别放在37℃水浴箱及4℃冰箱，改变反应温度来确认冷抗体[3]，当冷抗体存在时，可以将试管放于37℃下孵育，去除冷抗体后再准确定型。在不规则抗体引起的正反定型不符中，最多的是由于抗-M引起不符，占16.25％（13/80），其次是抗-Le b占12.5％（10/80）,这些献血者无输血史及妊娠史，这些抗体属于天然抗体，大多为IgM性质，少数为IgG，会导致ABO血型的正反定型不符和新生儿溶血病[4]。抗-M及抗-Le b都是不规则抗体，都会引起配血的不合，这类抗体如果在37℃盐水介质和抗人球蛋白反应是阳性，输血时则会产生输血反应[5]。对于此类献血者建议今后不宜献血，已献的血液适合做洗涤红细胞。表-1中还有一例是由于A2B产生抗-A1抗体而引起正反定型不符。A型抗原有两种，A、A1，A1型人红细胞上两种抗原都有，A2型人红细胞上只有A抗原，在通常输血前检测试验中，患者与献血者的A1、A2型不必加以区分，除非当A2型或A2B型人血清中有抗-A1抗体存在时[6]。22％--26％的A2B个体血清中可以检出抗-A1[7]，抗-A1抗体在临床上意义不大，多数在25℃以上无活性，也有几例是由于抗-A1引起的溶血性输血反应[8]。对于A2B患者血清中存在抗-A1抗体的输血，应选择A2B亚型血，若无可以选择O型洗涤红细胞。本文还有11例正反定型标本，ABO以外抗体阳性，但上海谱细胞无法确定其特异性，此种情况可以增加谱细胞数，若仍不能确定特异性，可以采用分子生物学的方法来确定抗体的特异性。此外还有9例是由于缗钱状凝集导致正反定型不符，可能与标本使用的抗凝剂有关，EDTA抗凝剂能阻止补体的活化，补体存在时使反定型出现凝集[9]，导致正反定型的不符。4例亚型导致正反定型不符，减弱的抗原可以用吸收放散实验检测出来，它可以将抗原浓缩和粗纯化，灵活运用吸收放散实验可以准确定型[10]。出现亚型时，正定型加做抗-H、抗-AB,亚型红细胞与抗-AB反应是增强的[11]，检测H抗原的量对亚型鉴定是有帮助的。

从表-2可以看出，本文研究的80例健康献血者中，A型中出现ABO定型不符的例数最多，占32.5％（26/80），其次是B型、AB型，出现定型不符最少的血型是O型。可能是由于O血型的人体内无A、B抗原，在抗原方面出现的变异情况少[12]。

在35例患者标本中，从表-3、4得出，抗原因素引起ABO正反定型不符的主要是白血病导致的抗原减弱。这是因为白血病患者体内N-乙酰半乳糖转移酶受抑制，引起抗原的减弱[13]。而在抗体因素中，较多是由于患者体内产生较多的不规则抗体导致定型不符，最多的是抗-M，这些患者多数都有输血史及妊娠史，体内发生同种免疫反应产生的同种抗体，多为IgG类。还有1例肿瘤患者，免疫功能下降导致抗体合成受抑制，抗体缺乏导致定型不符。而自身免疫性溶血性贫血患者，自身抗体与红细胞结合，在高蛋白质溶液中可自发凝集，包被严重的在低蛋白ABO定型试剂中也可以凝集，使定型不符，可以用45℃生理盐水洗去自身抗体后就能准确定型。

综上，排除试剂和技术因素的影响，导致ABO正反定型不符的原因有：（1）抗原减弱此原因引起的定型不符，对健康献血者是由于亚型，而患者则是疾病引起抗原减弱，最多的是白血病引起的减弱。（2）抗体减弱或缺乏抗体水平与年龄有关。新生儿在出生后才产生IgM的ABO抗体，到3个月时才能检测出来，5~10岁时抗体数目最多，随后就

渐渐下降，老年人在65~70岁以后，抗体水平最低。白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制药物及骨髓移植的病人，由于血浆蛋白质中的丙种球蛋白减少从而导致抗体减少，使正反定型不符。（3）冷抗体健康献血者体内的冷抗体效价一般不高，且在4℃温度以下才会产生活性。但自免贫、再障、SLE等患者体内有病理性自身抗体，这些抗体的效价很高，在定型时会出现全凝集现象。（4）假凝集引起的定型不符在健康献血者中与所使用的抗凝剂有关。血样管使用的是EDTA抗凝剂，它可以阻止补体活化，补体存在时反定型出现凝集反应，而血袋辨使用的是ACD-A抗凝剂，它不能阻止补体活化，当补体活化时会产生试管内溶血，观察结果时，容易将溶血误判为阴性。患者则是由于血浆成分异常产生假凝集。（5）种属抗体如A2型中有抗A1抗体和同种抗体都会使正反定型不符。遇到定型不符的情况时，以反定型O试剂红细胞是否凝集为标准，将不符标本分两种情况进行下一步实验。（1）O型试剂红细胞不凝集，则按亚型、抗体减弱情况进一步实验。通过吸收放散、唾液血型物质检测、红细胞与抗-H抗-AB反应来确定亚型。（2）若O型试剂红细胞凝集，按不规则抗体实验步骤去做，先将反定型试管放于37℃下孵育，通过判断凝集是否消失来决定是否是冷抗体。凝集消失且定型相符，说明有冷抗体存在，如果凝集不消失则用谱细胞来确定不规则抗体的特异性。

四、结论

ABO血型对临床输血意义重大，同时ABO血型定型是一项有高度责任感的工作，要求工作人员要有高度的责任心和高超的技术水平及丰富的工作经验。遇到定型不符时，要分析多方面的异常情况，准确的确定血型。有条件的实验室可以通过ABO基因分型对血型进行验证，到目前为止，ABO的基因分型在几个方面应用[14]：（1）用来处理正反定型中存在的矛盾问题；（2）直抗试验阳性或产生多凝集现象的标本进行基因分型，来判断血型；（3）多次输血的患者，外周血中有供者血液，应用血清学方法无法确定血型，PCR能够避免供血者与受血者间DNA的嵌合作用，故用基因分型可以准确定型此类患者；（4）抗原表达较弱的ABO定型，可以用基因分型来避免假阴性结果[15]。PCR-SSP基因分型技术应用较多，通过PCR来特异性扩增相应的基因片段，此方法简单易操作，且结果可靠稳定[16]。从而确保临床用血的安全性。

综上讨论，得出导致ABO正反定型不符的原因有：（1）定型方法相对实验室适宜采用试管法。（2）定型试剂国家卫生部对抗-A、抗-B定型试剂的标准是：抗体效价≥128，抗体亲和力≤15，且必须能够检测出A2、A2B 。（3）技术因素要求工作人员要有高度的责任心和高超的技术水平及丰富的工作经验。（4）血液免疫因素：抗原减弱或缺乏、获得性抗原或改变抗原、抗体减弱或缺乏，冷抗体、假凝集、不规则抗体反应。

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ABO正反定型不符的研究分析

高宇综述沈钢审校

1900年，奥地利Landsteiner发现了人类第一个血型系统，ABO血型系统。随后一百多年，人们又发现了Rhesus，Lutheran，Kell，Duffy，Kidd，Diego等血型系统，目前已发现了30个血型系统，300多个血型抗原[1]。但ABO血型系统仍是临床最重要的血型系统，ABO血型定型的准确性对临床意义是极其重要的。目前ABO正反定型标准主要是通过观察红细胞的凝集来判断，临床上常常会遇到定型不符的情况，给血型定型工作和临床输血带来一定的麻烦。影响因素除了有试剂的因素、技术原因、还有血液的免疫因素及药物的影响等。现就这这些个影响因素的研究进行综述。

一、ABO血型基础

ABO血型系统具有两个显著的特性：（1）红细胞上缺少某种抗原，血清中就存在高效价针对该抗原的天然抗体。（2）许多组织细胞表面都分布着红细胞抗原，同时分泌者分泌液中也存在某个血型抗原。ABO血型基因不直接编码A抗原、B抗原而是编码糖基转移酶，这些糖基转移酶是有特异性的，第4、7外显子编码的氨基酸序列决定A、B糖基转移酶特异性[2]，构成ABO血型分子生物学分型的基础就是这些有序列多态性的等位基因[3]。而且这些糖基转移酶作用的前体物质是H物质，H物质在特异性的A、B糖基转移酶的作用下，它被进一步糖基化，产生A、B抗原。O基因为无效的等位基因，不能编码产生相应的糖基转移酶，故O型人只存在高浓度的H抗原。

二、ABO正反定型不符原因及处理办法

1、定型试剂的影响

国家卫生部对抗-A、抗-B定型试剂的标准是：抗体效价≥128，抗体亲和力≤15，且必须能够检测出A2、A2B[4]。定型试剂的保存不当、过期，影响了抗体的效价、亲和力，使其都达不到规定标准，导致结果的假阴性。

2、定型方法的影响

实验室ABO定型常用的方法有：纸片法、玻片法、试管法、凝胶法等等，采用任何一种方法都不会引起定型不符，而是有的方法会产生弱凝集使结果观察困难或错误，造成正反不符，相对来说实验室最适宜采用试管法。

3、技术因素的影响

ABO定型对工作人员的理论基础、操作技术要求很高。比如配置过浓或过淡的红

细胞悬液，观察结果前离心时间过长过短、速度过高过低，观察结果时手法过重或过轻，抗原抗体反应时间过短，都会造成正反定型结果的不符。所以要规范操作步骤，严格要求实验的技术水平。工作人员要有责任心、尤其是实验人员要有过关的技术及丰富的工作经验。

4、血液免疫因素

4.1、抗原减弱或封闭导致ABO正反定型不符。

遗传基因可以决定红细胞表面抗原减弱或缺乏，这些减弱或缺乏的抗原也可以是获得性的。对于健康献血者来说，亚型最可能导致抗原的减弱，而患者则是由于所患疾病。最多的是白血病患者引起的抗原减弱或消失。白血病患者在疾病活动期抗原减弱，通常情况下抗原减弱是暂时的，但是患者在疾病缓解期又会恢复回原来的血型[5]。为了将抗原减弱与亚型区别，可以通过延长反应时间，在4℃放置后再试验，同时加做吸收放散，有条件的可以进行过唾液血型物质检测。怀疑亚型时，因为亚型红细胞上H抗原数目是增多的，正定型可以加做红细胞与抗-H、抗-AB抗体反应，多数反应比正常同型要强[6]，反定型加做血清与A1c、A2c细胞反应，用吸收放散试验来检测红细胞上是否有弱血型抗原及确定其亚型型别，检测唾液血型物质有助于ABO血型的准确定型。此外，卵巢囊肿、胃癌或肠道阻塞的患者，本身血清中会有大量血型特异性的可溶物质产生，能与抗-A抗-B试剂中和，使抗原被封闭，导致定型困难。这时可以将待检测红细胞用生理盐水洗涤三次后重新试验。自免贫、输血反应、新生儿溶血病及服用抗高血压药物的患者，红细胞由于被抗体致敏，使抗原被封闭，造成ABO正定型的困难，这时用吸收放散法去除致敏的抗体，然后再重复试验来准确定型。

4.2、未知的抗原反应导致正反定型不符

（1）获得性A或B抗原患者红细胞与抗-A试剂反应，在显微镜下观察到混合视野凝集，Tn抗原活化的红细胞，证明有获得性A抗原。获得性B抗原的红细胞反应像AB型，血清内有抗B抗体，多为患肠道阻塞和消化道疾病的患者，病情好转时，获得性B抗原也随即消失。献血者的获得性B抗原，可能是原患疾病产生的，提倡对献血者进行健康调查时注意胃肠道患病史，避免此类献血者[7]。

（2）改变的抗原多凝集细胞是指红细胞能被多数正常人血清所凝集，这种凝集反应叫多凝集反应，产生的原因有：T抗原活化（一般是红细胞受到细菌等污染）、Tn抗原活化（与血液学方面异常有关如溶血性贫血）、Cad多凝集。相对应的解决办法是:对于是由于Tn活化导致的多凝集反应，可用1％无花果酶或木瓜酶处理红细胞，而T活化的多凝集反应，由于其再室温下反应较强，在37℃下反应则较弱，故实验需在37℃下进行。

（3）低频率的抗原抗体反应抗血清试剂抗-A、抗-B中可能存在低频率抗体，通常情况下，献血者或患者红细胞很少与抗血清试剂内的低频率抗体反应，但在有料想不到的极弱抗原存在时应该考虑低频率的抗原抗体反应。

4.3、抗体减弱或缺乏导致ABO正反定型不符

抗体的降低或缺乏，可以引起同族凝集素的减弱或缺乏。见于以下几种情况：（1）嵌合现象此原因导致的抗体缺乏不是很常见。非同卵双胎的个体，双受精引起体内都认为是自己的两种种群的红细胞终生存在，这些人不会产生抗-A或抗-B抗体，从而导致正反定型不符。如骨髓移植后或换血治疗的患者。（2）丙种球蛋白过低血症、丙种球蛋白缺乏血症白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制药物及骨髓移植的病人，由于血浆蛋白质中的丙种球蛋白减少从而导致抗体减少，使正反定型不符。通过在反定型时，增加反应时间，加大血清量，在4℃温度下放置5~10min后再进行试验来准确定型。（3）

年龄正反定型不符情况在新生儿中出现最多。新生儿在出生后才产生IgM的ABO抗体，到3个月时才能检测出来，5~10岁时抗体数目最多，随后就渐渐下降，老年人在65~70岁以后，抗体水平最低。所以一般新生儿不做反定型，如果做反定型，可以加大血清量或实验中使用低离子强度溶液。（4）从正在输液患者一侧静脉采集血液标本，采集血液的部位不规范，导致血液被稀释而抗体反应假性减弱[8]。当非AB型病人大量输注AB型血浆时，血浆被稀释,而血浆中的A型B型血型物质发挥其中和作用，使血型抗体减弱，这些都会导致正反定型不符。

4.4、假凝集反应或不规则抗体反应导致ABO正反定型不符

（1）体内冷自身抗体的存在导致ABO正反定型不符的常见原因是冷自身抗体。冬天温度低时，冷抗体对交叉配血实验影响最大。健康献血者体内的冷抗体效价一般不高，且在4℃温度以下才会产生活性。但自免贫、再障、SLE等患者体内有病理性自身抗体，这些抗体的效价很高，在定型时会出现全凝集现象。这时可将血液标本放在37℃下预温，用自身红细胞反复吸收血清中的冷抗体，当红细胞不凝集时再定型。如果出现标本已经凝固和效价过高的病理性冷自身抗体，这时可用巯基乙醇处理红细胞后再定型[9]。

（2）缗钱状凝集又叫钱串状凝集，是一种假凝集。在健康献血者做血型定型时，会出现血样管与血袋辨定型不符情况，血样管使用的是EDTA抗凝剂，它可以阻止补体活化，补体存在时反定型出现凝集反应，而血袋辨使用的是ACD-A抗凝剂，它不能阻止补体活化，当补体活化时会产生试管内溶血，观察结果时，容易将溶血误判为阴性[10]，出现定型不符。对于患者来说，由于各种疾病导致血浆成分异常，如巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤，淋巴瘤等，血浆扩容剂右旋糖酐的使用，这些异常的免疫球蛋白使红细胞表面的负电荷发生改变，改变了血清蛋白浓度[11]，都会有缗钱状假凝集产生，使血型定型不符。观察到有缗钱状凝集时，加1~2滴生理盐水于试管中，假凝集即可清除。

（3）未知的种属抗体及同种抗体种属抗体能与红细胞上相对应的抗原反应，如A2型或A2B型的人体内会产生抗A1抗体，，定型时能与反定型中的A1试剂红细胞发生强烈的凝集反应，出现正反定型不符的情况。这时，要做吸收放散试验来确定是否存在弱抗原及确定亚型。有些人的血清中除了存在ABO种属抗体外，还有能与反定型中的试剂红细胞发生反应的同种抗体，如反定型中Oc细胞出现凝集而自身细胞无凝集，此时要用筛选细胞或谱细胞对未知的抗体做抗体筛查与鉴定。

三、ABO正反定型不符后果

当患者输入不相合的血液时，会出现严重的输血不良反应。由于ABO正反定型不符导致定型错误而输入ABO血型不合的血液时，会出现免疫性溶血反应，主要是血管内溶血，属于即发性输血反应，是临床上最危险的[12]。此时会出现血管动力障碍、心脏呼吸系统虚脱或弥漫性血管内凝血等症状，这些症状都是致命的。严重的还会导致肾脏功能的衰竭，引发系统性高血压症及肾血管血栓的形成。输注血型的不配合的血量决定溶血反应的程度，同时不配合血型及治疗时间的早晚也会影响反应的严重程度[13]。可见，ABO 血型的准确定型对临床输血的重要性。

四、ABO正反定型技术发展

到目前为止，血型鉴定工作中常用的方法还是血清学方法，采用红细胞与单克隆或多克隆抗体反应来测定红细胞上的抗原或血清中的抗体，鉴定困难的加做吸收放散唾液

血型和不规则抗体检测试验。此方法虽然简单快捷但同时有一定的局限性。Yamamoto 在1990年科龙并测序了人类ABO血型基因，使人们能够从基因水平测定ABO血型。目前ABO基因分型已涉及几个方面：（1）用来处理正反定型中存在的矛盾问题；（2）直抗试验阳性或产生多凝集现象的标本进行基因分型，来判断血型；（3）多次输血的患者，外周血中有供者血液，应用血清学方法无法确定血型，PCR能够避免供血者与受血者间DNA的嵌合作用，故用基因分型可以准确定型此类患者；（4）抗原表达较弱的ABO定型，可以用基因分型来避免假阴性结果。笔者建议研究中国人的ABO基因特点及分子遗传背景，研制出适合我国人群的ABO血型鉴定试剂盒，提高血型鉴定的准确性。

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12~13.席惠君，叶萍,临床输血学.第二版.北京:科学技术文献出版社.2010:151-155.

致谢

感谢我的指导老师沈钢和石小玲老师。在整个实验中，从选题、查资料、写综述，到试验，以及最后统计、分析、攥写论文，他们都倾注了很多心血，给予了我很大的指导和帮助。他们不仅教给了我科研工作的基本的流程和方法，更重要的是，他们教给我科研工作者必须具备的严谨求实的科学态度。

感谢输血研究室的各位老师对我的关怀，感谢武汉市红十字血液中心的领导对我的关爱。