16SrDNA鉴定菌株的标准操作规程
16SrDNA鉴定菌株的标准操作规程
1.适用范围
本标准规定了通过特定引物对细菌的16SrDNA片段进行PCR扩增，然后对扩增片段进行序列分析比对，快速获得细菌种属信息的操作规程。
本标准适用于未知细菌的快速种属分析，以及为细菌的生化鉴定提供指导信息。
2.方法和原理
16SrDNA鉴定是指用利用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。包括细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA 测序、序列比对等步骤。是一种快速获得细菌种属信息的方法。
细菌rRNA（核糖体RNA）按沉降系数分为3种，分别为5S、16S和23S rRNA。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应的DNA序列。16S rDNA由于大小适中，约1.5Kb左右，既能体现不同菌属之间的差异，又能利用测序技术较容易地得到其序列，故被细菌学家和分类学家接受。
在16S rRNA 分子中，可变区序列因细菌不同而异，恒定区序列基本保守，所以可利用恒定区序列设计引物，将16S rDNA片段扩增出来，利用可变区序列的差异来对不同菌属、菌种的细菌进行分类鉴定。
16SrDNA序列的前500bp序列变化较大，包含有丰富的细菌种属的特异性信息，所以对于绝大多数菌株来说，只需要第一对引物测前500bp序列即可鉴别出细菌的菌属。针对科学论文发表或是前500bp无法鉴别的情况，需要进行16SrDNA 的全序列扩增和测序，得到较为全面的16SrDNA的序列信息。
由于测序仪一次反应最多只能测出700bp的有效序列，为了结果的可靠性，通常将16SrDNA全长序列分成3部分进行测序。
16SrDNA
27F519R
设备和材料3.器材1.1；Eppendorf MixMate100μL、10μL）；涡旋振荡
器；μL 移液器（1000μL、200、Veriti 96 Well Thermal 仪：离心机；水浴锅；电泳仪；制冰机；低温冰箱；PCRAB3130 、凝胶成像仪：VersaDoc MP 4000；基因分析仪：AB3500Cycler；
试剂1.2
Taq Taq试剂：酶，10×DNA快速提取试剂：PrepMan Ultra；琼脂糖；PCR2+，ExoSAP-IT；测序试剂：BigDye Terminator，ddHO等；Buffer(MgdNTPs)，2；BigDye XTerminator Purification Kit5×Sequencing Buffer；耗材1.3TM Optical μL；Micro Amp200200、μL、10μL；离心管：1.5mL、移液器吸头：1000μL TM Optical Adhesive Film；Micro Amp96-Well Reaction Plate；1.4引物
扩增长度序列16SrDNA
名称
5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3'
正向引物27F
左右500 bp部分第1
5'- GWA TTA CCG CGG CKG CTG -3' 反向引物519R
5'- CTC CTA CGG GAG GCA GCA G-3'
正向引物357F
左右部分第2750bp5'-AGG GTT GCG CTC GTT GC-3' 反向引物1115R
2 / 9
5'- AAA CTY AAA KGA ATT GAC GG-3'
正向引物926F
560 bp 第3部分左右5'-TAC GGC TAC CTT GTT ACG ACT T-3'
反向引物1492R
, S=G:C. W=A:T; all 1:1
M=C:A, Y=C:T. K=G:T, R=A:G其中操作流程4.
核酸提取产物纯化基因扩增序列比对测序反应
5.实验方法核酸提取：1.5涡旋震荡混匀LPrepMan Ultra的离心管中，挑
取单菌落，然后置于装有100μ10min后，以离心机最大转速离心3min，取10μL10030s左右，然后℃水浴上清液与490μL ddHO（即稀释50倍），混匀作为下步PCR的模板DNA。提取2的DNA于-20℃保存。
1.6基因扩增
3 / 9
1.6.2PCR反应条件
94℃：10min
94℃：30s
58℃：30s 30Cyc
45s ℃：72 5min 72℃：4℃：∞1.6.3电泳℃加热融化，待温度降至60称取
1g琼脂糖置于100mL TAE电泳缓冲液中，100VPCR反应结束后，加样，以左右时，均匀铺板，制成1%的琼脂糖凝胶。电压进行琼脂糖凝胶电泳。电泳结束后，染色，用凝胶成像仪观察，拍照，记录实验结果。产物纯化1.7试剂，混匀。5μLPCR产物加入2μL ExoSAP-IT每1.7.1
15min15min, 80℃温育。1.7.2放入PCR仪中，37℃温育纯化后的PCR产物做为下一步测序反应的模板。1.7.3
30Cyc
4℃：∞(BigDye XTerminator Purification Kit)
测序反应纯化1.8.3 BigDye XTerminator Solution。和6μL5.4.3.1每管加入27μL SAM Solution 。2000rpm震荡30min放在5.4.3.2Eppendorf MixMate 上。g 离心2min5.4.3.3在离心机上以1000×孔板中，放入测序仪中测序。上清液于965.4.3.4每管吸取10μL序列比对1.9
微生物鉴定系统中进行比对，得MicroSEQ基因测序仪得到的测序结果，在到菌种的种属信息。关键说明6.时，对于细胞壁比较薄的革兰氏阴性细菌，可
挑提取细菌基因组DNA1.1
后，10minO μL ddH中，混匀，沸水热变性取一菌环菌株，置于1002确认PCR 模板。必要时做梯度503min分离，稀释倍后做为PCR离心最佳的模板量。及测序反应时，为了保证酶的活性，整个体系应在冰中配置；然后PCR1.2这种冷启仪上进行反应，最后放于3~5min，PCR置于低温冰箱中冷却扩增的特异性。动法可增强PCR包含有丰富的细菌种属的特异序列变化较大，500bp1.3
16SrDNA序列的前500bp性信息，所以对于绝大多数菌株来说，只需要第一对引物测前无法鉴序列即可鉴别出细菌的菌属。针对科学论文发表或是前500bp
的全序列扩增和测序，得到较为全面的别的情况，需要进行16SrDNA5 / 9
16SrDNA的序列信息。具体参照附录。或出现非特异性条带的原因：一
是引物与靶序列不完全互补、PCR离子浓度过高、退火温度过低，及引物聚合形成二聚体。二是Mg2+往往一些来源的酶易出循环次数过多有关。其次是酶的质和量，PCR则不出现，酶量过多有时也会出现非现非特异条带而另一来源的酶
物。减低酶量或调换另特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引数。适当一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次℃左右退火与延伸)。提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65其原因往往由于酶量扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。PCR浓度过高，退火温度过浓度过高，Mg2+差，过多或酶的质量dNTP 或调换另一来源的酶。其对策有：减少酶量，低，循环次数过多引起。度。增加模板量，减少循环Mg2+浓的浓度。适当降低②减少dNTP 次数。
污染。RT阴性对照检测是否被基因组DNA用模板浓度过高
10ul体系100ngDNA6 / 9
附录（资料性附录）结果电泳图三部分的PCR1.细菌16SrDNA
2000b
1000b
750b
500b
250b
100bp
M：DL2000；
1：引物27F和519R的PCR产物（第1部分500bp）
2：引物357F和1115R的PCR产物（第2部分750bp）
3：引物926F和1492R的PCR产物（第3部分560bp）7 / 9
2.细菌16SrDNA鉴定结果
1.1即可反映细菌的种属信息：500bp16SrDNA前菌株TL140924的鉴定结果
8 / 9
.
1.216SrDNA前500bp不足以反映细菌的种属信息：
菌株70528的鉴定结果
1.316SrDNA的全序列信息：
菌株70528的鉴定结果
如附录2.2、2.3所示，当待测菌株的16SrDNA前500bp序列不足以将待测菌株与库中菌株区分时，则需要测其16SrDNA全长序列以将其区分。
9 / 9
菌种鉴定手段
菌种鉴定手段 （1）常规鉴定 常规鉴定内容有形态特征和生理生化特征。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应等。 （2）BIOLOG碳源自动分析鉴定 BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图谱，建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测微生物与数据库参比，得出鉴定结果。 该系统已获美国FDA认可，已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、制药、农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。 BIOLOG是一种微生物菌种快速鉴定系统，涉及革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、厌氧菌、酵母、丝状真菌在内近2000种微生物。 （3）分子生物学鉴定 应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的分类学关系，是目前微生物分类学研究普遍采用的鉴定方法。CICC拥有微生物菌种分类鉴定的分子生物学实验室，配有PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备，以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。目前CICC可采用核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA（D1/D2）序列及丝状真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列，提供科学的鉴定结果。（4）API细菌数值鉴定系统
API鉴定系统涵盖15个鉴定系列，约有1000种生化反应，目前已可鉴定超过600种的细菌。鉴定过程中，可根据细菌所属类群选择适当的生理生化鉴定系列，通过软件将待测细菌与数据库参比，得出鉴定结果。 CICC目前可应用API 50CH系列、API 20 E系列、API Staph系列对乳酸杆菌（Lactobacillus sp.）和相关细菌、芽孢杆菌（Bacillus sp.）、葡萄球菌属（Staphylococcus sp.）、微球菌属（Micrococcus sp.）和库克菌属（Locuria sp.）进行鉴定。 （5）功能性分析及功能基因 CICC不断致力于工业微生物资源的功能及其功能基因研究，目前通过木聚糖酶、纤维素酶、葡萄糖异构酶、β-甘露聚糖酶等功能基因的克隆进行菌种产酶的功能性分析。应用gyrA、atpD及pheS等看家基因于微生物菌种鉴定，在某些种、亚种、株间有较好的分辨效果。 （6）RAPD、SSCP技术 随着微生物菌种应用的进一步发展，在食品安全管理、生物产品出口认证、知识产权保护等行业需求日益增加，微生物菌种株水平的鉴别技术成为一个迫切需要解决的问题。 CICC采用随机扩增多态性DNA（Randomly amplified polymorphism DNA，RAPD）技术和单链构象多态性(Single Strand Conformation Polymorphism，SSCP）技术对微生物菌株进行鉴别。如采用RAPD技术能够对同一菌种原始菌株与诱变菌株进行鉴别，对诱变菌株知识产权保护具有重要意义；采用SSCP技
卷尺内部校准规范
附件6：卷尺内部校准规范 V01 1. 目的： 为确保卷尺的准确度，规范内校校验方式，制订作业指导书。 2. 适用范围： 适用于卷尺的内部校验。 3.校验基准 外校合格的标准卷尺, 校准参考依据JG4-1999钢卷尺检定规程。 4. 环境条件 温度（20±5）℃，湿度45%～75%RH。 5. 校验步骤 5.1外观及各部分的相互作用：目力检查及测试。 5.1.1钢卷尺尺带的拉出和收卷应轻便灵活、无卡阻现象，各功能装置应能有效控制尺带收卷。 5.1.2将尺带平铺在检定台上，加上规定的张紧力，尺面不应有凹凸不平及扭曲现象，尺带两边缘必须平滑，不应有锋口和毛刺，尺带宽度应均匀。尺钩应保持直角，不得有目力可见的偏差。 5.1.3尺带表面应有防腐层，且要牢固、平整光洁，色泽应均匀，无明显的气泡、脱皮和皱纹，无锈迹、斑点、划痕等缺陷。 5.1.4尺带全部分度线纹必须均匀、清晰并垂直到尺边，不能有重线或漏线。个别线纹允许有不大于线纹宽度的断线。 5.1.5钢卷尺各连接部分应牢固可靠，且不易产生拉伸变形。 5.1.6在每一分米(dm)内，厘米(cm)分度线纹应标上以厘米(cm)为计数单位的数值。全长在5m 以下的钢卷尺，分米(dm)和米(m)分度的线纹应自零点线纹算起，标上以厘米(cm)为计数单位的数值。全长在5 m以上的钢卷尺，分米(dm)分度线纹应在每一米(m)内标上以厘米(cm )为计数单位的数值，米分度线纹自零位线纹算起，逐米(m)标上以米(m)为计数单位的量值;10 m 以后可不标注单位ma。 5.1.7钢卷尺的尺带或尺盒卜.应标明全长、型号、制造厂名(或商标)、标志出厂编号和生产年月。数字和文字必须清晰、工整。尺盒(或框架)表面应光洁，不允许有裂纹、锈迹及残缺现象。 5.2示值测量 5.2.1零点测量:将尺端装有尺钩或拉环的普通钢卷尺平铺在钢卷尺检定台上，加上规定的拉力后，与经检定合格的标准钢卷尺进行比较。使表示零位位置的尺钩(或拉环)与标准钢卷尺的零值线纹对准，在10mm处读出误差值。 5.2.3测量时，首先用压紧装置将标准钢卷尺和被检钢卷尺紧固在检定台上，分别在标准尺及被检尺的另一端按规定加上拉力。调整检定台上的调零机构，使被检尺的零值线纹与标准尺的零值线纹对齐，按每米逐段连续读取各段和全长误差。全长不足3m的钢卷尺，受检段应不少于3段，厂内取全长的25%、50%、75%相接近的点进行校验，如实际生产有特殊要求，可增加校准点。
标准菌株的鉴定及其特点
埃希菌属（Escherichia） 1、形态与染色：为革兰阴性短杆菌，多数有周鞭毛，能运动。有菌毛、荚膜及微荚膜。 2、培养特性：兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通营养肉汤中呈浑浊生长。普通营养琼脂上呈灰白色的光滑型菌落。血琼脂平板上，少数菌株产生溶血环。麦康凯和SS琼脂中的胆盐对其有抑制作用，耐受菌株能生长并形成粉红色菌落。 3、生化反应：吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐（柠檬酸盐）试验（IMViC试验）为++--（肠杆菌属多为--++）。克氏双糖铁琼脂（KIA）上斜面和底层均产酸产气，H2S阴性。动力、吲哚、尿素（MIU）培养基的生化反应为++-. 4、致病性大肠埃希菌有下列五个病原群。 （1）肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：引起儿童腹泻和旅行者腹泻（水样泻）。 （2）肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴幼儿腹泻。 （3）肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：可侵入结肠黏膜上皮，引起志贺样腹泻（能产生粘液脓血便）。 （4）肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：又称产志贺样毒素（VT）大肠埃希菌（SLTEC或UTEC），其中O157：H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征（HUS）。严重者可发展为急性肾衰竭。 （5）肠粘附（集聚）型大肠埃希菌（EAggEC）：与世界各地慢性腹泻有关。 5、CDC将大肠埃希氏菌O157：H7列为常规检测项目 沙门菌属（salmonella）
1.形态与染色：为革兰阴性直杆菌，无芽胞，无荚膜。除鸡沙门菌外都有周身鞭毛，能运动，多数有菌毛。？ 2.培养特性：营养要求不高，在普通琼脂培养上即能生长，在液体培养基中呈均匀混浊。在SS琼脂和麦康凯琼脂培养基上35℃～37℃24h可形成直径约2～4mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心。？ 3.生化反应：除亚利桑那菌外均不能发酵乳糖，大多数IMViC试验为-+-+，KIA：K／A、产气+／-、H2S+／-，MIU：动力+、吲哚-、尿素酶-。 4.致病因素有侵袭力、内毒素和肠毒素3种。临床上可引起胃肠炎、肠热症、菌血症或败血症等。其中肠热症属法定传染病。？ （1）肠热症：即伤寒与副伤寒病。由伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状。为法定传染病之一。？ （2）食物中毒：引起食物中毒的沙门菌以鼠伤寒、肠炎、汤卜逊、猪霍乱、乙型及丙型副伤寒沙门菌为常见。？ （3）慢性肠炎：沙门菌可引起老人和儿童的慢性肠炎。？ （4）败血症：多由猪霍乱沙门菌引起。？ （5）沙门菌的局部感染如颈部、腰部等。 血清学诊断：肥达试验：用已知的伤寒沙门菌0、H抗原，甲乙丙副伤寒沙门菌H抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验，以检测患者血清中抗体的含量，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。 志贺菌属（shigella） 1.形态与染色：革兰染色阴性，杆菌，无鞭毛,有菌毛.？ 2.培养特性：在肠道鉴别培养基上形成无色,半透明的菌落.均能分解葡萄糖只产酸不产气,
钢卷尺内部校准技术规范
钢卷尺内部校准技术规范-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
钢卷尺校准方法 本规范适用于新制造和使用中的钢卷尺的校准。 一概述 钢卷尺是一种用途比较广泛的大尺寸测量用的量具，按其结构的不同，可分为自卷式卷尺、制动式卷尺、摇卷盒式卷尺和摇卷架式卷尺四种。 钢卷尺的标称长度：对于10m以下的钢卷尺取0.5整倍数，对于10m以上的钢卷尺，取5的整倍数。 钢卷尺的主要构件为具有一定弹性的整条钢带，卷于金属或塑料等材料制成的尺盒或框架内。尺的首端装有拉环或尺钩，制动式卷尺附有控制尺带收卷的按钮装置，摇卷盒式卷尺和摇卷架式卷尺附有用以尺带收卷的摇柄装置。 二校准项目和校准条件 1．校准条件 1. 1 校准钢卷尺示值误差时的温度：20±5℃。 1.2 钢卷尺检定时的张紧力为40N。 1.3 标称长度小于5m和弧形尺带的张紧力不作规定。 1.4 校准前被校尺在规定温度下恒温时间不得少于4h。 2．钢卷尺的校准项目和校准工具列于表1。 表1 注：表中“+”表示应校准，“-”表示可不校准。 三校准要求和校准方法 3．外观 3.1 要求
3.1.1 钢卷尺尺带的拉出和收卷应轻便、灵活、无卡阻现象，制动式钢卷尺的按钮装置，应能有效地控制尺带收卷。 3.1.2 将尺带平铺在工作台上加上规定的张紧力后，尺面不应有凹凸及扭曲，尺带两边缘必须平滑，不应有锋口和毛刺，尺带宽度应均匀。尺钩应保持直角，不得有目力可见的偏差。 3.1.3 尺带表面应有防腐层且牢固、平整光洁色泽应均匀，无明显的气泡脱皮和皱纹。 3.1.4 尺带全部分度线纹必须均匀清晰并垂直到边，不得有重线或漏线个别线纹允许有不大于线纹宽度的断线。 3.1.5 普通钢卷尺的分度值可分为1mm、5mm和10mm三种。毫米、5毫米、厘米和米的分度线纹的长度，应有明显的区别，同类线纹应等长。 3.1.6 在钢卷尺的尺带或尺盒上，应标明全长、型号、制造厂名（或 标志、出厂编号和生产年月。数字和文字必须清晰、工整。 3.1.7 尺带截面为弧形的普通钢卷尺的挺直度应为：当尺带沿水平方向伸出如表2所规定的长度时，不能出现下折现象。 3.1.8 金属尺盒表面应光洁，不得有裂纹、锈迹等缺陷。塑料尺盒表面色泽应均匀、无缺陷现象。新制的钢卷尺，外观应符合以上要求，使用中的钢卷尺不应有影响使用准确度的外观缺陷。 3.2 校准方法：目力观察， 表2
钢卷尺检定证书
长春质量技术监督局 第 1 页 共 2页 Changchun Quality and Technical Supervision Page 1 of 2 校 准 证 书 委托单位Customer: 长春智圣达交通设备有限公司 地 址Address: _____长春____________________________________ 被校设备Equipment Calibrated: ___钢卷尺 _____________________ 型 号/规 格Type: ________5 M ______________________ ____ 出 厂 编 号 No: ________0100410________________________ 制造商Manufacturer: ___长野 _____________ 校准结论Statement of Compliance: ___合格____________________ 校准日期: 2014 年07月15日 Calibration Date Year Month Day 建议下次校准日期: 2015年 07月14日 The Next Cal. Date Recommended Year Month Day 批准人: 准专用章： Approved by ___孙建__ 审核人: Checked by _____王思默_____ 校准人: Operator _____段畅游_______ 地址Address ：长春市高新技术开发区硅谷大街928号 928 Valley Street, Changchun High-tech Development Zone 邮政编码Post Code ： 传真Fax ：（0431） Email 证书编号：XL0908 第2页 共2页 Page 2 of 2 本站是经“中国合格评定国家认可委员会”认可的实验室。 实验室认可证书号：CNAS L2670 校准中使用的主要测量设备: Certificate of Calibration 证书编号Certificate No: XL0908
钢卷尺千分尺游标卡尺自校规范
1、目的：确保测量和监控结果的有效性 2、范围：公司新购入的钢卷尺、游标卡尺、千分尺及正在使用的钢卷尺、游标卡尺、公法千分尺 自校。 3、职责 3.1品管部负责计量器具的自校、溯源器具的送检、及标识。 3.2各使用部门负责计量器具的保管和标识维护。 4、自校规程 4.1器具采购要求 4.1.1 标志： a.说明性标志：厂名或商标规格型号产品编号制造时间 b.校准标志：在钢卷尺、游标卡尺、千分尺上应有厂家校准标志 4.1.2 性能： a.钢卷尺精确度±1mm b.数显游标卡尺精确度±0.01mm c.机械卡尺精确度±0.02mm d.公法千分尺精确度±0.01mm 以上设备精确度更高不限 4.2校准环境条件 实验室内温度22℃湿度 65％ 4.3校准使用设备：送检过的2000mm钢直尺、量块 4.4 校准项目 4.4.1技术检查和外观检查 a. 技术检查：对新购买的钢卷尺、游标卡尺、公法千分尺审阅其资料是否齐全，审阅其产品说明书 ﹑产品合格证书 b.外观检查：钢卷尺、游标卡尺、公法千分尺应完好无破损，刻度尺刻度均匀清晰，无锈迹断裂现 象 4.5校准方法 4.5.1钢卷尺 a.在经校准的钢直尺上量取2000mm长度，共量3次，记录每次量的数据，算出平均值X，认定X为
该卷尺的读数值。 b.该钢卷尺的误差Z=|2000-X|。 4.5.2游标卡尺 a.在经校准的量块取其中一块长度，共量3次，记录每次的数据，算出平均值X，认定X为该游标 卡尺的读数值 b.该游标卡尺的误差Z=|量块长度-X|。 4.5.3千分尺 a.在经校准的量块取其中一块长度，共量3次，记录每次的数据，算出平均值X，认定X为该千分 尺的读数值 b.该千分尺的误差Z=|量块长度-X|。 4.6 验收标准 钢卷尺允许偏差±1mm 游标卡尺允许偏差±0.02mm 千分尺允许偏差±0.02mm 凡是误差在此范围的计量器具均认定为合格, 凡是误差不在此范围的钢直尺均认定为不合格。 4.7 校准周期钢卷尺、游标卡尺、千分尺校准周期均为2个月。 比对记录 记录编号： 校准工具：精度：校准尺寸：时间：
菌种鉴定方法
1. 菌落形态观察 观察菌落的大小、形状、隆起度、边缘、表面性状、颜色与透明度、质地和干湿度。 2. 革兰氏染色 按照革兰氏染色方法进行制片、初染、媒染、脱色、复染、干燥、镜检；干燥后，用油镜观察。 3. 鞭毛染色 挑取18~30 h新鲜平板培养物制备菌悬液，制片，室温自然干燥。滴加硝酸银染色A液覆盖3~5 min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。自然干燥后用油镜观察。菌体呈深褐色，鞭毛显褐色。 4. 糖类分解试验 将被检菌接种于糖发酵培养基中，37℃培养2－3天。如果培养基变黄，说明产酸；如变黄的同时，还有气泡，说明既产酸又产气。培养基仍呈蓝色，说明未产酸。选取木糖、葡萄糖、半乳糖和蔗糖。 5. 吲哚（靛基质）试验 将待检菌种接种于邓享氏蛋白质的胨溶液中，37℃培养1－2天。于培养液中加入戊醇或二甲苯2－3ml，摇匀，静置片刻后，沿管壁加入试剂2ml，如出现红色沉淀，表示为阳性。 6. 淀粉水解试验 将LB琼脂加热融化，使冷到50℃，加入淀粉溶液，混匀后，倾注平板。将细菌划线接种于平板上，37℃培养24小时，生长后取出，在菌落处滴加革兰氏碘液少许，培养基呈深蓝色，能水许解淀粉的细菌菌落周围有透明环。 9. V－P试验 将被检菌接种于试验培养基中（葡萄糖、K2 HPO4、蛋白胨各5g，溶于1 000ml 水中，分装于试管中，0.075MPa灭菌10分钟），培养2－7天后，于培养物中加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性。 10.甲基红（M.R）试验 接种细菌，于37℃培养2－7天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液（0.1g 甲基经溶于300ml 95%乙醇中，加蒸馏水至500 ml），如呈红色，表示阳性。 11. 柠檬酸盐利用试验 将被检菌接种到Simmons固体柠檬酸盐培养基上，37℃下培养2－4天，能利用柠檬酸盐的细菌表现为有细菌生长，培养基变为蓝色，不能利用柠檬酸盐的细菌不生长，培养基不变色。 12. 硝酸盐还原试验 将被检细菌接种于硝酸盐培养基中，37℃培养1－2天，每管中先加入甲试剂0.1ml，再加乙试剂数滴，如出现红色，表示阳性。 13. 接触酶试验 将1ml 3%的H2O2倾注于生长物（菌落或菌苔）上，有气泡（O2）发生者为阳性。也可于清洁小试管中加少量H2O2（30%），再用清洁无菌的细玻棒（或火焰封口的毛细管或镍铬做成的接种环）醮细菌少许，插入H2O2液面下，有气
钢卷尺检定证书
钢卷尺检定证书 Prepared on 22 November 2020
长春质量技术监督局 第 1 页 共 2页 Changchun Quality and Technical Supervision Page 1 of 2 校 准 证 书 委托单位Customer: 长春智圣达交通设备有限公司 地 址Address: _____长春____________________________________ 被校设备Equipment Calibrated: ___钢卷尺 _____________________ 型 号/规 格Type: ________5 M ______________________ ____ 出 厂 编 号 No: ________0100410________________________ 制造商Manufacturer: ___长野 _____________ 校准结论Statement of Compliance: ___合格____________________ 校准日期: 2014 年07月15日 Calibration Date Year Month Day 建议下次校准日期: 2015年 07月14日 The Next Cal. Date Recommended Year Month Day 批准人: 准专用章： Approved by ___孙建__ 审核人: Checked by _____王思默_____ 校准人: Operator _____段畅游_______ 地址Address ：长春市高新技术开发区硅谷大街928号 928 Valley Street, Changchun High-tech Development Zone Certificate of Calibration 证书编号Certificate No: XL0908
细菌鉴定方法
1.2.1 形态学特征 按照东秀珠和蔡妙英编《常见细菌系统鉴定手册》（1999），中科院微生物所编著《一般细菌常用鉴定方法》（1978）的方法进行鉴定。芽孢杆菌属鉴定到种，参照了蔡妙英等译《芽孢杆菌属》（1980）的方法。 （1）革兰氏染色：挑选少许菌苔，涂布于干净玻片的蒸馏水中，风干固定，结晶紫染色（结晶紫2g，草酸铵0.8g，95%乙醇20 ml，加水至100 ml）1min，水洗后碘液（碘1g，碘化钾2g，水300 ml）作用1min，水洗，脱色，用番红O 液染3min，水洗，风干，光学显微镜观察。 （2）鞭毛染色：将16~24h菌龄的菌苔在载玻片上的水滴中轻蘸几下，将玻片倾斜，使菌液缓慢流到另一端，然后平放在空气中干燥。干燥后滴甲液（丹宁酸5g，FeCl3 1.5g，15%福尔马林2ml，1%NaOH 1ml，蒸馏水100 ml）染6~10min，水洗，干燥后，用乙液（2%AgNO3溶液）加热复染30min，蒸馏水冲洗，干燥，镜检，菌体为深褐色，鞭毛为褐色。 （3）运动性：半固体琼脂穿刺法，将菌种接在可使鉴定菌生长良好的培养基中，其中含0.3~0.6%的琼脂。适温培养，运动性可用透射光目测，如生长菌只生长在穿刺线上，边缘十分清晰，则表明鉴定菌无运动性；如生长菌由穿刺线向四周呈云雾状扩散，其边缘呈云雾状，则表示鉴定菌有运动性。 （4）芽孢染色：孔雀绿染色法。按革兰氏染色涂片后，用饱和的孔雀绿水溶液（约7.6%）染20 min，水冲洗后在用0.5%番红O复染20~30s，水洗，吸干，镜检。芽孢呈绿色，菌体和芽孢囊呈微红色。 （5）抗酸染色：常规涂片，石碳酸复红（10%碱性复红乙醇饱和液10 ml，5%石碳酸水溶液100 ml）加热染色5 min，倾去染液用酸性乙醇脱色，吕氏美蓝（2%亚甲基蓝乙醇饱和液30 ml，0.01%KOH 100 ml。）复染2min，水洗，吸干，镜检。 （6）荚膜染色：在载片一端滴一滴无菌水，取少许菌苔在水滴中制成悬液。取一滴墨汁与菌悬液混合，并用另一载片之一端将此水滴在载片上刮成薄膜风干。用纯甲醇固定1min，加0.5%番红O液数滴滴于涂片上，冲去残余甲醇，并染30s，然后倾去染液，立即吸干，镜检。 1.2.2 培养及生理特性 （1）菌落形态：用划线法将菌种接在平板培养基上，适温培养1~2d，出现单菌落开始观察，包括形状和大小，边缘，表面，隆起形状，透明度，菌落和培养基的颜色等。 （2）生长温度和耐热性：将菌种转接到几支试管中，分别在不同温度下培养，每处理2管，目测生长情况。
钢卷尺操作规程
1 目的 本规程用于规范钢卷尺的检定和校准的操作。 2适用范围： 本规程适用于钢卷尺的检定和校准。 3依据技术规范： JJG4-1999《钢卷尺检定规程》。 4 技术要求及检定条件 4.1 检定温度： 检定Ⅰ级钢卷尺时应为：（20±5）℃ 检定Ⅱ级钢卷尺时应为：（20±8）℃ 4.2 钢卷尺检定时的张紧力 4.2.1 检定普通钢卷尺的张紧力为49N。 4.2.2 标称长度小于5m和弧形尺带的钢卷尺在检定时张紧力不作规定。 4.3 检定前被检尺在规定温度下恒温时间不得少于4h。 5 使用的仪器设备 6 操作方法与步骤： 6.1 将被检钢卷尺置于空调间中定温不少于4h。 6.2 将被检钢卷尺拉出擦净，检查其外观和相互作用。 6.3 检查被检钢卷尺的线纹宽度，如有疑问，用读数显微镜进行检查。 6.4 对被检钢卷尺的零值误差进行检定。将尺端装有尺钩或拉环的普通钢卷尺平铺在钢卷尺检定台上，加上规定的拉力后，与经检定合格的I级标准钢卷尺进行比较。使表示零位位置的尺钩(或拉环)与标准钢卷尺的零值线纹对准，在100mm处读出误差值。6.5 检定钢卷尺的示值误差：首先用压紧装置将标准钢卷尺和被检钢卷尺紧固在检定台上，分别在标准尺及被检尺的另一端按规定加上拉力。调整检定台上的调零机构，使被检尺的零值线纹与标准尺的零值线纹对齐，按每米逐段连续读取各段和全长误差。全长不足3米的钢卷尺，受检段应不少于3段。 任意两线纹间的示值误差是在逐米进行检定的同时在全长范围内任选2~3段进行评
定，其示值误差不得超过相应段允许误差的要求。当被检尺全长大于检定台面长度时，可用分段法进行检定，其全长误差为各段误差的代数和。 毫米和厘米分度示值误差是在发现有疑问时，用分度值为0.0lmm的读数显微镜进行检定。 6.6 在检定的同时，认真做好原始记录。 6.7 收回被检钢卷尺，处理数据，出具检定证书。 6.8 对标准钢卷尺上油、保养，妥善保存。
营养缺陷型菌株的筛选和鉴定
营养缺陷型菌株的筛选和鉴定 mutugenesis and isolation of auxotroph 细菌革兰氏染色法 gram stain 酵母菌的形态结构观察 yeast morphology 培养基的配制和灭菌 types of mddia and sterlization 菌种保藏 preservation of cultures 细胞计数法 conting of cell 凝集反应 agglutination reactions 相差显微镜 phase contrast microscope 细胞融合 cell fusion 质粒DNA的提取 isolation of plasmid DNA 植物DNA的提取 isolation of plant DNA 多肽的末端分析 analysis of terminal of polypeptide PCR扩增DNA PCR amplify DNA fragment SDS-聚丙烯凝胶电泳 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 蛋白质的性质 properties of protein 植物组织培养 plant tissue culture BL-410生物机能实验系统简介 the introduction of BL-410 biofunctional experiment system 青蛙坐骨神经-腓肠肌标本的制备 preparation methods for nerve-muscle specimen of frog 人ABO血型的鉴定 Identification of humankind ABO blood group
钢卷尺检定证书
北京市电子工业中心计量站 第 1 页 共 2页 Electronic Calibration Laboratory of Beijing Page 1 of 2 校 准 证 书 委托单位Customer: _____________________________________________ 地 址Address: _____北京_____________________________________ 被校设备Equipment Calibrated: ___钢卷尺 ______________________ 型 号/规 格Type: ________3M ______________________ ____ 出 厂 编 号 No: _________DL9003 _______________________________ 制造商Manufacturer: ___得力工具 _____________ 校准结论Statement of Compliance: ___合格_____________________ 校准日期: 2010 年 01 月 27 日 Calibration Date Year Month Day 建议下次校准日期: 2011 年 01 月 26 日 The Next Cal. Date Recommended Year Month Day 批准人: Approved by _________ 审核人: 校准专用章： Checked by __________ stamp 校准人: Operator ____________ 地址Address ：北京市崇文区广渠门内大街9号 No.9 Guangqumen Inner Street, Chongwen District, Beijing 邮政编码Post Code ：100062 联系电话：（010）67111794，81620279 传真Fax ：（010）67111794 电子信箱 Email ：MX0616@https://www.360docs.net/doc/ef16592649.html, Certificate of Calibration 证书编号Certificate No: XL0908
标准菌种管理规程
标准菌种管理规程 目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确 保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。 职责： QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员 负责菌种的确认、传代、使用及销毁。 范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传 代、使用及销毁等。 内容： 1术语 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理 中心提供的冷冻干燥菌。 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存 的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养 后，作为日常工作使用的菌种。 菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即 称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。 2.标准： 2.1 检定菌的申购 QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购 买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购
买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制 代数。 2.2 检定菌的接收 菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及 每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表 1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种 的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并 储存于 2-8?C直到需要使用时。储存期最长不超过 5 年。 2.3 检定菌的保存 2.3.1 工作用菌种的保存 工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养 基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。此法仅用于 工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同， 细菌： 1 个月；酵母菌： 2 个月；霉菌及芽胞： 3 个月。 2.3.2 传代用菌种的保存 采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。 2.3.2.1．甘油冷冻管保存法 用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面 的菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到 预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，使其等同于10 号比浊管，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油（浓度 20%），
钢卷尺检定仪技术要求
钢卷尺检定仪技术要求 1.技术参数： 1)有效工作基本长度：5米(可任意接长至50米或者更长) 2)导轨直线度：≤0.2mm/m 3)工作台静摩擦力：≤4N 4)全刻度标准钢卷尺：(0.02+0.02L)mm(优于JJG41-2005《标准钢卷 尺》) 5)读数显微镜：总放大倍率20X，最小刻度值0.01mm 6)光栅位移传感器：最小分辨率0.01mm/20mm 2.配置要求： 微机型配置 1)5米钢卷尺检定台一台(按每5m一段，可任意接长至50m) 2)5m标准尺1支：准确度为(0.02+0.02L)mm 3)5kg重锤2只：工作时对标准尺和被检尺施加拉力 4)尺带夹2只 5)20倍读数显微镜1个：准确度为0.01mm，工作时用于瞄准 6)小滑车1部：带照明，辅助读数显微镜进行测量 7)数显箱1部：采用光栅传感器作为主测量单元工作 8)电源1套：为数显箱提供电源 9)数据库1套 10)两相步进电机一台：绝缘等级B，绝缘电阻100MΩ MIN 500VDC，耐电压500VAC 1min，径向跳动0.025 mm MAX (负载5N），
轴向跳动0.075 mmMAX(负载10N），径向最大负载75N （距离法兰面10mm处），轴向最大负载15N 11)CCD工业相机 钢卷尺检定装置示值误差与数据处理程序是严格按照JJG4-2015《钢卷尺》检定规程编制的，该程序可自行对被测量尺作出是否符合Ⅰ级，Ⅱ级及不合格的判定。该程序同时还可以对纤维卷尺，测绳等计量器具进行检定。 12)计算机：DELL品牌笔记本(此机器随DELL市场营销变动) 13)实现计算机自动控制CCD读数平台至指定检定点位置。 14)检定台标准配制为：按有效工作长度5米设计，可任意接长至 50米 3.交货及验收 1)交货 (1)交货期：合同生效后 30 天内。 (2)交货地点：需方指定的交货地点。 2)安装与培训 (1)需方负责在用户现场对设备行进安装和调试； (2)在设备安装调试时对买方技术人员进行理论、实际操作及维 修等的培训，使用户技术人员掌握设备操作，能熟练使用设备 进行检定工作，保证设备正常运行并能排除设备的一般故障和 特殊保养。 3)验收 (1)验收标准：按现行国家检定规程以及合同技术协议为准。
标准菌株
概述：标准菌株是细菌室室内质控工作必不可少的、重要的生物资源，我室的标准菌株主要来自省临检中心的发放和从卫生部临检中心以及国家菌种保存中心购买所得，为了让标准菌株能够得到合理的应用，特制定以下规定。 1.对每批购买的标准菌株要做好登记，包括菌种的菌名、编号、购买时间、保存地点、记录人等 2.每次使用标准品都应作好使用记录，包括标准品的名称、编号、使用时间等。 3.购买的标准品初次使用时，应大量增殖，然后分装在含10-15%甘油的胰蛋白胨肉汤中，-20℃以下保存。 4.新的标准菌株复苏最多不得超过三次，如超过三次将不在视为标准菌株使用。 5.标准菌株保存管一经溶化使用后，不得再次冻存。 本篇文章来源于检验在线https://www.360docs.net/doc/ef16592649.html,/ 原文链接：https://www.360docs.net/doc/ef16592649.html,/paper/manual/1OMDAwMDAwMDc1OQ.html 目的: 建立检定菌的管理制度。 范围: 检验用菌种的管理。 责任者: 化验员、中心化验室主任。 程序： 1、菌种接收 （1）检定菌由专人保管，此人须受过专业培训，有足够的菌种保存经验。 （2）根据检验品种的需要，由检定菌保管员制定购买计划，报中心化验室主任审核、质量部负责人批准。（3）检定菌保管员在接收标准菌种时，须填写接收记录，并在保存菌种容器外加贴标签（内容为名称、编号、接收日期），妥善保管。 2、菌种的移植传代 （1）长久保存的菌种在启用时，要经移种至适宜的培养基上进行培养，待生长后再行移种，如此连续2—3次，甚至多次，直至出现典型的形态和生化特征为止。 （2）保存的菌种须按规定时间进行传代。 （3）在检查或保存菌种过程中，遇有形态构造上有变异或污染菌等情况，需进行菌种移植分离培养以得到纯菌。 （4）移植传代时须核对编号、传代次数、传代日期、所用培养基等并记录。每次移植传代后，要与原种的编号、名称核对，检查培养特征无误时方可再继续保存。 （5）传代次数必须控制，传代次数越多，突变的机率越大。因此要尽量少传代，必须根据菌种保存情况规定最多传代次数。 第2页共2页 3、菌种原种须按标签或所附说明书妥善保存，并上锁，以保证安全，防止意外。移植传代后的菌种于普通冰箱内2—8℃保存，每周检查一次冰箱温度、湿度，菌种管的棉塞是否松动生霉，有无异常，并逐次记录。 4、菌种的使用和销毁 （1）每次使用的菌种必须是培养后健康、生命力强、无变异的菌种。每次使用菌种均须作记录。 （2）超过传代限度或经鉴定检查不合格的菌种，报中心化验室主任、质量部负责人审核批准后销毁灭活（加
菌种鉴定的分子生物学方法
菌种鉴定的分子生物学方法 ——16S rDNA测序鉴定菌种 一．原理 细菌中包括有三种核糖体RNA，分别为5S rRNA、16S rRNA、23S rRNA。5S rRNA虽易分析，但核苷酸太少，没有足够的遗传信息用于分类研究；23S rRNA含有的核苷酸数几乎是16S rRNA的两倍，分析较困难。而16S rRNA相对分子量适中，又具有保守性和存在的普遍性等特点，序列变化与进化距离相适应，序列分析的重现性极高，因此，现在一般普遍采用16S rRNA作为序列分析对象对微生物进行测序分析。16S rRNA对应于基因组DNA上的一段基因序列称为16S rDNA，rRNA基因由保守区和可变区组成。在细菌的16SrDNA中有多个区段保守性，根据这些保守区可以设计出细菌通用物，可以扩增出所有细菌的16SrDNA片段，并且这些引物仅对细菌是特异性的，也就是说这些引物不会与非细菌的DNA互补，而细菌的16S rDNA可变区的差异可以用来区分不同的菌。因此，16SrDNA可以作为细菌群落结构分析最常用的系统进化标记分子。随着核酸测序技术的发展，越来越多的微生物的16S rDNA序列被测定并收入国际基因数据库中，只要将基因序列放入基因数据库进行对比，便可快速的鉴定所测定的细菌种属，这样用16Sr DNA作目的序列进行微生物群落结构分析更为快捷方便。二．技术路线 该方法包括细菌基因组DNA提取、16S rDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA 测序、序列比对等步骤。具体技术路线如下： 三．方法步骤 （一）细菌基因组DNA提取（酶解法） 1. 挑取单菌落接种到10 mL LB培养基中37℃振荡过夜培养。
计量器具检定规程全
JJG1-1999 钢直尺检定规程Verification Regulation of Steel Rule JJG2-1999 木直(折)尺检定规程V.R. of Wooden Rule (Wooden Folded Rule) JJG4-1999 钢卷尺检定规程V.R.of Steel Tape JJG5-2001 纤维卷尺、测绳检定规程V.R.of Fiber Tapes and Measuring Ropes JJG7-2004 直角尺检定规程V.R.of Squares JJG8-1991 水准标尺检定规程V.R.of Level Rod JJG10-2005 专用玻璃量器检定规程V.R.of Special Glassware JJG13-1997 模拟指示秤检定规程V.R.of Analogue Indication Weighing Instruments JJG14-1997 非自动指示秤检定规程V.R.of Non-self-indication Weighing Instruments JJG16-1987 邮用秤试行检定规程V.R.of Postal Scale JJG17-2002 杆秤检定规程V.R.of Steelyard Scale JJG18-1990 医用注射器检定规程V.R.of Glass Syringes for Medical Use JJG18-2008 医用注射器检定规程V.R.of Glass Syringes for Medical Use JJG19-1985* 量提检定规程V.R.of Volumetric Cylinder With Handle JJG20-2001 标准玻璃量器检定规程V.R.of Standard Capacity Measures(glass) JJG21-1995 千分尺检定规程V.R.of Micrometer JJG21-2008 千分尺检定规程V.R.of Micrometer JJG22-2003 内径千分尺检定规程V.R.of Internal Micrometers JJG24-2003 深度千分尺检定规程V.R.of Depth Micrometers JJG25-2004 螺纹千分尺检定规程V.R.of Screw Therad Micrometer JJG26-2001 杠杆千分尺、杠杆卡规检定规程V.R.of Micrometers with Dial Comparater and Indicating Snap Gauge JJG28-2000 平晶检定规程V.R.of Optical Flats JJG30-2002 通用卡尺检定规程V.R.of Vurrent Calipers JJG31-1999 高度卡尺检定规程V.R.of Height Gauge JJG33-2002 万能角度尺检定规程V.R.of Universal Bevel Protactors JJG34-1996 指示表(百分表和千分表)检定规程V.R.of Dial Gauges(reading in 0.01mm and 0.001mm)[过期] JJG34-2008 指示表（指针式、数显式）检定规程Dial Ganges(dial and digital) JJG35-2006 杠杆表检定规程V.R.of Dial Test Indicator JJG37-2005 正弦规检定规程V.R.of Sine Bars JJG39-2004 机械式比较仪检定规程V.R.of Comparator of Machinery Type JJG40-2001 X射线探伤机检定规程V.R.of X-Ray Flaw Detectors JJG41-1990 三针检定规程V.R.of Thread Measuring Wires[过期] JJG42-2001 工作玻璃浮计检定规程V.R.of Working Glass Hydrometers JJG45-1999 光学计检定规程V.R.of Optimeter JJG46-2004 扭力天平检定规程V.R.of Torsion Balance JJG47-1990 抖晃仪检定规程V.R.of Wow Flutter Meter JJG48-2004 硅单晶电阻率标准样片检定规程V.R.of Standard Slice of Single Crystal Silicon Resistivity JJG49-1999 弹簧管式精密压力表和真空表检定规程V.R.of Bourdon Tube Precision Pressure Gauge and Vacuum Gauge JJG50-1996 石油产品用玻璃液体温度计检定规程V.R.of Liquid-in-Glass Thermometer for Petroleum Products
标准菌株质量控制作业指导书
标准菌株质量控制作业指导书 1、目的： 对微生物标准菌株的验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等进行规定，确保标准菌株符合要求，保证检测结果。 2、职责： 2.1、检测中心主任负责标准菌株资源的配备。 2.2、微生物检测室工作人员负责标准菌株的有效储存和正确的使用。 3、要求： 3.1供应商的选择：选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须有附件的供应商的合格证或检测报告，来证明所采购的标准菌株是合格的。 3.2标准菌株和验收 菌株一到实验室，一定要记录好菌株号和标准菌株来源，确保溯源性清楚。同时，还应尽可能多的菌株信息，如：标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等。 3.3冻干标准菌株的复活： 3.3.1、开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株保藏管上。 3.3.2、复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明）进行复活。冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。挤压并旋转拭子，接种于初级培养平板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为25℃或37℃。多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为F1代。 3.3.3将TSB生长的浓菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出，将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。将平板上生长的良好菌株接种