切胶工作操作手册

切胶工作操作手册

一、目的：通过切胶回收对普通磁珠或者过膜无法纯化的样品进行纯化回收。如拖带、

引物二聚体严重、有非特异性条带等。

拖带且主带能看清

拖带且无法看清主带的直接取消

拖带不严重且主带很亮的先尝试磁珠再考虑切胶

引物二聚体严重的需要切胶，若主带很亮可以先尝试磁珠

有非特异性条带的需切胶

二、工作内容及注意事项：

切胶岗基本工作流程：

上班解冻样品查看处理交接处理特殊样品处理之前的试切合格样品上样电泳拍照切胶回收纯化点鉴定电泳定量补水拼表做好交接清理桌面填写实验记录下班

1、首先按照切胶表把当天的切胶样品从冰箱中拿出来解冻。

2、接着看PCR岗内交接本及系统上的交接（信息平台-客服交接平台-选PCR 过膜），看是否有跟切胶相关的交接并处理。

3、对照鉴定表及切胶表查看胶图，看切胶表上是否有已纯化切胶（YQ）或者条带大小不符等情况，然后看清楚样品编号及电泳鉴定情况后在系统上查找客户电话，致电咨询是否需要切胶或者切多大片段的条带。若联系不上客户，则马上在系统上交接给客服，让她们跟进处理。有疑问的样品暂时先不切，存放至冰箱并做好交接。

4、若前一天有切胶试测的情况，先看系统交接，尚未交接的话直接过去问客服的同事，合格的话就找出客户样品进行解冻，并找出所在的鉴定表对应胶图进行定量，判定符合切胶要求的样品及取消的样品，然后按照定量把需要切胶的样品按照顺序排在当天切胶样品的后面并抄好切胶表，取消样品装到之前的取消袋。若不合格则不用理会。

5、对拍好的切胶样品拍照存档。处理完这些之后就将样品吸到酶标板上（8ul 甲基橙+50ul样品），然后去电泳室点电泳。

6、点电泳之前每个电泳槽都需要换新的切胶专用TAE（每个槽大概

1000ml），有多少板样品就换多少个槽，具体自己计算

7、点电泳的时候用八道的移液器、黄色吸头进行上样（小孔胶每次可点8道，大孔胶由于胶孔间距大，每次只能点4道），切记打出样品的时候要慢慢的打出去，避免样品飘出孔外，损失客户样品，降低回收率。

8、点完之后，调电压150V，跑35-40分钟左右，直到甲基橙跑到尽量接近下一排胶孔的位置就可以停止电泳。（注意若是有小片段100-200bp的样品则稍微减少跑胶时间，尤其当小片段在前两列的时候，避免跑过）

9、跑胶期间核对一下切胶样品是否排序正确，需核对的信息包括样品编号、条带大小及对应的流水号，同时留意一下备注，有些可能需要回收多条带的，这些信息可能就在备注里。时间还充裕的话可以先把合格样品拼好表（鉴定表及鉴定结果表）

10、电泳完之后在成像仪里拍照存档，然后放到切胶台里对应着切胶表把客户需要的目的片段切下来按顺序放在96孔浅孔板上。若有不确定条带大小的，先把所有条带切回来，在切胶表上标记自己所放的位置及片段大小，等全部切完

后再去联系客户确认，没有联系上的话全部先回收回来，同时交接给客服的同事，让她们发邮件咨询，这种样品不要拼表，等客户回复后再作决定。

11、按照SOP回收，回收后用3ul模板加3ul甲基橙再点一次鉴定电泳，点电泳时注意是不是每个孔都点上了样品。

12、在电泳这个时间空隙。若有切多条带的样品，需给多一个流水号，自己不会录入的话就写好订单交给录入的同事录入。（订单上写明样品名字，样品原流水号、对应条带大小，新流水号、对应条带大小）

13、电泳完之后进行定量，拼表，补水。定量的时候顺便核对一下条带大小，以免自己弄错模板位置都不知道；拼表的话首先默认正常正常，其他情况有以下几种：样品无目的条带取消、样品量不足取消、回收无带取消、回收浓度太低取消，回收浓度太低正常。最后需要清切胶表，确认没有遗漏样品。

14、写交接，看交接本、系统交接和切胶表上有哪个客户是需要试切或者合格的，然后在模板表上圈出该客户的名字，标明“试切”或者“合格”的字样。注意有些需要做双向的若只有一向合格需要在模板表上标记清楚。

15、最后计算一下试切客户的样品若合格还剩下多少列需要切胶的，并在岗内交接本上写明（这是给提质粒岗的同事看的，方便他铺多少板胶给你。）

16、最后记得填写仪器使用记录表，将切胶的样品管装袋，在袋上标明当天日期，清理自己的操作桌面。然后下班