硕士论文--变铅青链霉菌和硝吡咯假单胞菌中次级代谢启动的研究
沈阳药科大学
博士学位论文
变铅青链霉菌和硝吡咯假单胞菌中次级代谢启动的研究
姓名：来彩霞
申请学位级别：博士
专业：药物化学
指导教师：姚新生;赵智幸三
2001.5.1
沈阳药科大学博士学位论文摘要
摘要
野生型变铅青链霉菌６６通常不产生蓝色的放线紫红素（Ａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎ），变铅青链霉菌６６的利福平抗性突变株在Ｒ４平板上产生了放线紫红素。我们在含利福平（２００ｕｇ／ｍ１）的ＧＹＭ抗性筛选平板上筛选到了在Ｒ４平板上具有产生放线紫红素表型口ｃｔ３的利福平抗性突变株。从利福平的抗性株中获得Ａｃｔ＋的机率理论上是１００％。此类突变株ＤＮＡ序列分析结果表明，其ｒｐｏＢ基因（编码ＲＮＡ聚合酶ｐ亚单位）的利福平敏感域存在有点突变。变铅青链霉菌ｒｐｏＢ基因置换实验证明，正是ｒｐｏＢ基因点突变激活了蓝色放线紫红素的生物合成。
为确定ｐｐＧｐｐ在变铅青链霉菌抗生素产生启动过程中的作用，我们筛选变铅青链霉菌的ｒｅｌＣ松弛突变株（被认为失去了积累ｐｐＧｐｐ的能力）。ｌ我们从硫链丝菌素抗性（ｔｓｐ８）突变株中筛选得到一个旭ｆｃ松弛突变株５０－－１１。ＸＤＮＡ序列分析发现，在５０—１Ｉ菌株的编码核糖体Ｌ“蛋白的憎Ⅸ基因Ｎ末端区有６ｂｐ缺失。５０—１ｌ菌株的生长受到明显的损伤，它的孢子形成的启动被推迟。在ｔｓｐ８突变株中获得旭圮突变株的机率是３．８％。以ｔａｌＣ松弛突变株为亲株，筛选Ａｃｔ＋利福平抗性突变株（，圹ｒｅｌＣ）。对７个，圹ｒｅｌＣ突变株ＤＮＡ序列分析结果表明在ｒｐｏＢ基因的利福平敏感域中存在点突变。我们考察了在氨基酸缺乏时野生型，，圹突变株，ｒｅｌＣ以及，泸ｒｅｌＣ突变株的ｐｐＧｐｐ积累能力。ｒｅｌ＊菌栋（ｗｉｌｄｔｙｐｅ，ｒ／ｆｍｕｔａｎｔ）快速产生大量的ｐｐＧｐｐ。ｒｅｌ突变株（ｒｉｆａｎａｔａｌＣｒ／ｆｍｍａｎｔ）几乎失去积ｐｐＧｐｐ能力。，我们推断ｒ／ｆ突变株生物合成放线紫红素能力的激活可能与ｐｐＯｐｐ无关。ｙ
从变铅青链霉菌野生型中筛选获得的ｒｉｆ５４（，∽突变株在Ｒ４平板上培养能产生大量蓝色的放线紫红素，其生长速度明显降低，菌落变小：形态分化延迟，产孢能力明显低，孢子颜色发生了变化。序列分析证明在ｆｉｒ５４的ｒｐｏＢ基因上具有一个点突变。牲不含利福平的ＧＹＭ平板上多次传代后，ｒｉｆ５４（ｒ／Ｉ）表型发生了明显的变化。＿｝ｉｆ５４单菌落分离，我们发现一些菌落能产生大量蓝色的放线紫红素，但生长和产孢能力则恢复到接近野生型的水平。对其中两个菌株ｒｉｆ５４－－１和ｒｉｆ５４－－２的ＤＮＡ序列分析表明，在ｒｐｏＢ基因中靠近原来突变位点
鲨堕垄型查兰竖主堂堡堡塞塑墨附近自发产生了第二个点突变。对野生型，ｒ矿单突变株，，矿双突变株的液体培养和固体培养进行了细致的考察，发现ｒ矿双突变株解除了第一个突变所造成的对菌株生长和产孢能力的损伤，具有抗生素产生能力，同时并没有失去利福平的抗性。ｒｐｏＢ基因置换实验证明正是这自发产生的第二个点突变造成了菌株生长和产孢能力的恢复。双向凝胶电泳（２－ＤＰＡＧＥ）对对野生型，ｒ够单突变株，，矿双突变株总蛋白的分析结果说明在他们之间存在着明显差异。Ｙ
在硝砒咯假单胞菌中引入氨基糖甙类抗生素抗性突变以提高硝砒咯菌素的生产能力。分别筛选了链霉素，潮霉素，ＧＥＮＥＴＩＣＩＮ和庆大霉素的抗性突变株。筛选抗生素的抗性突变株，生物测定抗性突变株的抗菌素生产能力，在这４氨基糖苷类抗生素中，链霉素抗性突变株提高硝砒咯菌素的产生能力的效果最好。ＧＥＮＥＴＩＣＩＮ和庆大霉素的ＭＩＣ比较低，但它们的抗性突变对提高抗生素生产能力的效果较低。潮霉素对提高抗生素生产能力也具有一定的效果。
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关键词：链霉菌；基因突变；补偿突变；松弛突变；严格应答；生理分化；形态分化；敏感域；ｒｐｏＢ基因；基因置换；ＲＮＡ聚合酶：核糖体。
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沈阳药科大学博士学位论文摘要
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｔｈｅｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇｏｆｒｉｆａｍｐｉｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ｒ刃ｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｔｏＳｏｌｉｖｉｄａｎｓ６６ｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｌｕｅｐｉｇｍｅｎｔｅｄａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｎＲ４ａｇａｒａｌｔｈｏｕｇｈ＆ｌｉｖｉｄａｎｓ６６ｗｉｌｄｔｙｐｅｕｓｕａｌｌｙｄｏｅｓｎｏｔｐｒｏｄｕｃｅａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎ．Ｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆａｃｔ＊ｍｕｔａｎｔｓａｍｏｎｇｔｈｅ，矿“ｍｕｔａｎｔｓｏｆＳｌｉｖｉｄａｎｓｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｌｙｗａｓ１００％．Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎａｌｙｓｅｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｃｅｒｔａｉｎｒ／ｆｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｓｏｃｃｕｒｒｅｄｉｎｔｈｅｄｆａｍｐｉｃｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｏｍａｉｎｏｆｒｐｏＢｇｅｎｅｃｏｄｉｎｇｆｏｒ１３ｓｕｂｕｎｉｔｏｆＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ．ＧｅｎｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｏｆｒｐｏＢｇｅｎｅｉｎ＆ｌｉｖｉｄａｎｓ６６ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｒｔｆｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｒｐｏＢｇｅｎｅｏｆＳ．，ｉｖｉｄａｎｓ６６ｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．ＡｒｅｌＣｍｕｔａｎｔ５０—１１ｏｆＸｌｉｖｉｄａｎｓ６６ｄｅｖｅｌｏｐｅｄｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｏｎＧＹＭｐｌａｔｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｉｏｓｔｒｅｐｔｏｎｐｏｓｓｅｓｓｅｄａ６－ｂｐｄｅｌｅｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎｔｈｅｒｐｔＫｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇ５０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ１１．ＴｈｅｄｅｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｒｅｌＣｍｕｔａｎｔ５０—１１ｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎｄｅｆｅｃｔｓｉｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅａｎｄｄｅｌａｙｉｎｏｎｓｅｔｏｆｓｐｏｒｅｆｏｒｍａｔｉｏｍＴｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｒｅｌＣｍｕｔａｒｔｔａｍｏｎｇｔｈｅｔｈｉｏｓｔｒｅｐｔｏｎｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ｔｓｐ）ｍｕｔａｎｔｓｗａｓ３．８％．７ｎｆｍｕｔａｎｔｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｆｒｏｍｔｈｅｒｅｌＣｍｕｔａｎｔｏｆＳ．１ｉｖｉｄａｎｓ６６ｃｏｕｌｄｐｒｏｄｕｃｅｂｌｕｅａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｏｎＲ４ａｇａｒ．Ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｅｒｔａｉｎｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｓｅｘｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｒ／ｆｄｏｍａｉｎｏｆｒｐｏＢｇｅｎｅｏｆｔｈｅ７ｒ／ｆｍｕｔａｎｔｓ．ＷｅａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｐｐＧｐｐｐｏｏｌｓｏｆｗｉｌｄｔｙｐｅ，ｒ／ｆｍｕｔａｎｔ，ｒｅｌＣｍｕｔａｎｔａｎｄｒｅｌＣｒｉｆｍｕｔａｎｔａｆｔｅｒｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｓｈｉｆｔ－ｄｏｗｎ．Ｔｈｅｒｅｌ＋ｓｔｒａｉｎｓｃｏｕｌｄａｃｃｕｍｕｌａｔｅａｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｏｆｐｐＧｐｐ．ＴｈｅｒｅｌｓｔｒａｉｎｓｃｏｕｌｄａｃｃｕｍｕｌａｔｅｌｉｔｔｌｅａｍｏｕｎｔｏｆｐｐＧｐｐ０６％ａｎｄ８％ｏｆｗｉｌｄｔｙｐｅ）．ＷｅｃｏｎｃｌｕｄｅｄｔｈａｔｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＳｌｉｖｉｄａｎｓ６６ｍｉｇｈｔｂｅｐｐＧｐｐ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ．１ｆｉｒ５４，ｄｅｖｅｌｏｐｅｄｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｆｒｏｍＳｌｉｖｉｄａｎｓ６６ｗｉｌｄｔｙｐｅ，ｐｏｓｓｅｓｓｅｄａｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎ，ｐ柏ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒｉｆ５４ｃｏｕｌｄｐｒｏｄｕｃｅａｂｕｎｄａｎｔａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｏｎＲ４ａｇａｒ，ｗａｓｄｅｆｅｃｔｉｖｅｉｎｇｒｏｗｔｈｒａｔｅａｎｄｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｓｐｏｒｅｃｏｌｏｒｗａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｗｉｌｄｔｙｐｅｓｔｒａｉｎ．Ｂｙｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇｒｉｆ５４ｏｎＧＹＭｗｉｔｈｏｕｔｒｉｆａｍｙｃｉｎｓｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒｍａｎｙｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｓｔｒａｉｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｈａｎｇｅｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙ．Ｓｏｍｅｏｆｃｏｌｏｎｉｅｓｇｒｅｗａｌｍｏｓｔ
沈阳药科大学博士学位论文摘要ａｓｗｅｌｌａｓｗｉｌｄｔｙｐｅ，ａｎｄｐｒｏｄｕｃｅｄａｂｕｎｄａｎｔａｃｆｉｎｏｒｈｏｄｉｎｏｎＲ４ａｇａｒｗｉｔｈｏｕｔ
ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｌｏｓｓｏｆｒｉｆａｍｐｉｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｔｗｏｃｏｌｏｎｉｅｓ（ｒｉｆ５４－１ａｎｄｒｉｆ５４—２）ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｏｒｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔａｓｅｃｏｎｄｍｕｔａｔｉｏｎｏｃｃｕｒｒｅｄｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙａ由ａｃｅｎｔｔｏｔｈｅ谢ｇｉＪｌａｌｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｒｐｏＢｇｅｎｅ．Ｔｈｅ
ｗｉｌｄｔｙｐｅ，ｒｉｆｓｉｎｇｌｅａｎｄｒｉｆｄｏｕｂｌｅｍｕｔａｎｔｓｗｅｒｅｃａｒｅｆｕｌｌｙｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｔｈｅ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｏｎＧＹＭ，Ｒ４ａｇａｒａｎｄｌｉｑｕｉｄｃｕｌｔｕｒｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒ／ｆｄｏｕｂｌｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｎｔｓｒｉｆ５４??１ａｎｄｒｉｆ５４?－２ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｔｈｅｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅａｎｄｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎｃａｕｓｅｄｂｙｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｒ／ｆｍｕｔａｔｉｏｎａｎｄｓｔｉｌｌｋｅｐｔｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏｐｒｏｄｕｃｅａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｏｎＲ４ａｇａｒ．ＧｅｎｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｏｆｒｐｏＢｇｅｎｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｃｏｎｄｒ／ｆｍｕｔａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｏｆｇｒｏｗｔｈｒａｔｅａｎｄｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ．２－ＤＰＡＧＥｗａｓｅｘｐｌｏｉｔｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆｗｉｌｄｔｙｐｅ，ｍｆｍｕｔａｎｔａｎｄｎｆｄｏｕｂｌｅｍｕｔａｎｔ，ｗｅｃｏｕｌｄｓｅｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｈｅｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓ．
Ｗｅｔｒｉｅｄｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｐｙｒｒｏｌｎｉｔｒｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙｂｙ
ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇａｍｉｎｏｇｌｃｏｓｉｄｅ
ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ｈｙｒｏｍｙｃｉｎ，ｇｅｎｅｔｉｃｉｎａｎｄｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ）ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｓｉｎｔｏＰｐｙｒｒｏｌｃｉｎｉａ．Ｗｅｓｃｒｅｅｎｅｄｔｈｅｍｕｔａｎｔｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｗａｓｔｈｅｍｏｓｔｅｆｆｅｃｔｉｖｅｏｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇｐｙｒｒｏｉｎｉｔｒｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙａｌｔｈｏｕｇｈｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｈａｄｖｅｒｙｌｌｉｇｈＭＩＣ．ＧｅｎｅｔｉｃｉｎａｎｄｇｅｎｔａｍｙｃｉｎｈａｄｌｏｗｅｒＭＩＣｓｔｈａｎｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ．ｂｕｔＷａｓｎｏｔＳＯｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｓｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ．ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＷａＳｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇｐｙｒｒｏｌｎｉｔｒｉｎｐｒｏｄｕｃｄｏｃｉｎｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｔｒｅｐｔｐｍｙｃｅｓ；ｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎ；ｃｏｍｐｅｎｓａｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎ；ｒｅｌａｘｅｄｍｕｔａｔｉｏｎ；ｓｔｒｉｎｇｅｎｔｒｅｓｐｏｎｓｅ；ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｏｍａｉｎ；ｒｐｏＢｇｅｎｅ；ｒｉｂｏｓｏｍｅ；ＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ；ｇｅｎｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ．?
（以字母顺序排列）Ａｃｔ：
Ａｍｐ：
Ａｐｒ：
ＡＰＳ：
ＢＡＰ：
ＢＩＳ：
Ｂｐ：
ＢＰＢ：
ＢＳＡ：
ＣＢＢ：
ＣＨＡＰＳ
ＣＳＰＤ：
Ｄａ：
ＤＩＧ：
ＤＭＳ０：
ＤＴＴ：
ＥＤＴＡ：
ＧＴＥ：
ＩＥＦ：缩写词
放线紫红素
氨苄西林
阿普拉霉素
过硫酸铵
细菌碱性磷酸酶
Ｎ，Ｎ’．亚甲双丙烯酰胺
碱基对
溴酚兰
牛血清白蛋白
考马斯亮兰
３一【（３一氯醛甲酰胺丙基）二甲基氨基］－１一丙磺酸内脂
Ｄｉｓｏｄｉｕｍ３－（４－ｍｅｔｈｏｘｙｓｐｉｒｏ｛１，２一ｄｉｏｘｅｔａｎｅ一３，２’－（５’一ｃｈｌｏｒｏ）ｔｒｉｃｙｃｌｏ
［３．３．１３，７］ｄｅｃａｎ｝．４－ｙ１）ｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ．
道尔顿
Ｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ公司
二甲基亚砜
１，４．二硫苏糖醇
乙二胺四乙酸
葡萄糖．Ｔｒｉｓ．ＥＤＴＡ缓冲液
等电聚焦电泳
ＩＰＴＧ：异丙基一ｌ一硫代－Ｄ—Ｄ－半乳糖苷
ＯＲＦ：开放阅读框
ＰＡＧＥ：聚丙烯酰胺凝胶电泳
ＰＣＲ：多聚酶链式反应
ＰＥＧ：
ｐｐＯｐｐ：Ｒｅｄ：
ｍｆ＝
ＳＤＳ：
ＳＳＣ：
ＴＡＥ：
ＴＥ：
ＴＥＭＥＤＴＥＳ：
Ｔｓｐ：Ｘ—ｇａｌ：
聚乙二醇
鸟苷四磷酸
十一烷基灵菌红素
利福平
十二烷基硫酸钠
ＮａＣｌ．柠檬酸钠溶液
Ｔｒｉｓ－乙酸一ＥＤＴＡ缓冲液
Ｔｒｉｓ—ＥＤＴＡ缓冲液
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四甲基乙二胺
（Ｎ－ｔｒｉｓ［Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ】ｍｅｔｈｙｌ－２一ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ）硫链丝菌素
５－溴－４－氯一３一吲哚．Ｂ．Ｄ．半乳糖苷
沈阳药科大学博士学位论文
第一章绪论
１．１链霉菌
链霉菌（Ｓｌｘｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）是革兰氏阳性好氧性丝状细菌，具有高Ｇ＋ｃ含量（大约７２％）。链霉菌基因组大约８０００ｋｂ，几乎是大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）基因组的两倍大小（Ｋｉｅｓｅｒｅｌａ１．１９９２）。它们能够在土壤中生长，首先生成营养菌丝，然后营养菌丝分化形成孢子，孢子有助于传播和抵抗不良环境。链霉菌在固体培养基上分化时，一个菌落首先是从一个孢子或者是一个菌丝片段开始形成基内菌丝，两天之后菌落的顶部开始形成向上生长的气生菌丝。气生菌丝的顶部分化成孢子。链霉菌孢子抗干燥，孢子可以在空气中传播，但并不特别抗热。除了人工制备的原生质体外，链霉菌孢子是单核结构，菌丝含有极少的细胞横壁，大约八个核共享相同的细胞质。链霉菌的分化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）是一些研究的主题，Ｃｈａｔｅｒ对此进行了总结（Ｃｈａｔｅｒ１９８４）。
链霉菌及与它相关的属因为产生多种多样的次级代谢产物而著名。所有抗生素中多于６０％的抗生素由这类菌产生（ＨｏｐｗｏｏｄａｎｄＣｈａｔｅｒ１９８０）。链霉菌能产生一些有用的抗细菌物质（例如氯霉素，链霉素和四环素），杀真菌剂（例如有效霉素），生长促进剂（例如泰乐菌素），抗寄生虫药物（例如除虫菌素）和抗癌药（例如ａｄｒａｉｍｙｃｉｎ），和酶抑制剂（例如ａｃａｒｂｏｓｅ，棒酸）。它们具有化学结构多样性，但是它们又属于几类次级代谢产物，如聚酮化合物，寡肽，核苷和氨基糖苷类。众所周知，抗生素生物合成基因是成簇排列的，并且抗生素生物合成的调节似乎是和分化的调节相关联。
链霉菌中抗生素生物合成通常是与生长阶段密切相关的。在液相培养中，抗生素生物合成是在培养物进入稳定生长期开始。在固体培养中，抗生素生物合成和形态分化的启动相一致。一些突变株在缺乏抗生素生物合成的同时，缺乏气生菌丝形成的能力，这表明它们受一些共同遗传因素控制（Ｃｈａｔｅｒｅｔａｌ１９９７）。大部分抗生素是由复杂生物途径合成的产物，在这些生物途径中抗生素生物合成的基因几乎总是成蔟排列的。这些基因簇通常含有途径专一性调节
鲨里垫型查堂苎主兰竺望主堕笙基因，这些调节基因起转录激活剂的作用，并受到多效调节基因的控制。抗生
素生物合成的启动受许多生理的和环境的因素所决定和影响（Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉａｎｄ
Ｂｅｐｐｕ１９９４）。
大部分抗生素生物合成调节的遗传研究使用的是天蓝色链霉菌Ａ３（２），它产生
至少四种不同的抗生素。其中包括一个分泌到胞外的兰色放线紫红素
（ａｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎ）和一个包含在菌丝体里的红色的十一烷基灵菌红素
（ｕｎｄｅｃｙｌｐｒｏｄｉｇｉｏｓｉｎ），这两种抗生素由于就有肉眼易于分辨的颜色，是研究抗生素合成调节的好材料。
交铅青链霉菌是天蓝色链霉（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）的一个近亲，它的基因组的主要部分和天蓝色链霉菌相同，己建立的变铅青链霉菌的遗传和物理图谱都能够和天蓝色链霉菌很好的吻合。（Ｌｅｂｌｏｎｄ１９９３）。变铅青链霉菌比天蓝色链霉菌更具有一些优势，如生长速度快，产孢能力强，对外源ＤＮＡ几乎没有限制（Ｈｏｐｗｏｏｄ１９８３，１９８７）。放线紫红素和十一烷基灵菌红素在变铅青链霉菌中通常几乎不被表达，因此变铅青链霉菌是用于抗生素生物合成遗传研究时好的寄主（Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉｅｌａ１．１９９３）。
让我们感兴趣的是尽管它具有和天蓝色链霉菌中相同的全部的生物合成
基因簇，但为什么变铅青链霉菌不能产生放线紫红素。弄清变铅青链霉菌中沉
默的抗生素生物合成基因簇的激活机制，能够为天蓝色链霉菌中抗生素生物合
成的调节提供一些线索。
１．２严格应答（ｐｐＧｐｐ）
链霉菌是丝状的革兰氏阳性菌。它具有复杂的生长周期。在这个生长过
程中产生了各种次级代谢产物（Ｍａｒｔｉｎｅｔａ１．１９８９；Ｃｈａｔｅｒ１９９３），这两个方面通常被称作生理分化Ｑｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｄｉｆｒｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）和形态分化（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）。生理分化和形态分化是被一种复杂而又紧密相互偶联的调节网络所控制（Ｂｉｂｂ１９９６；Ｃｈａｔｅｒ１９９８）。有关生理分化和形态分化启动调节中的最重要方面之一是确定引发分化过程的信号。一个潜在有意义的细菌调节系统是
沈阳药科大学博士学位论文绪论严格应答（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔｒｅｓｐｏｎｓｅ），严格应答是和氨基酸缺乏相偶联．并且造成了ＫＮＡ积累的立刻停止以及其他细胞反应的立刻停止（Ｃａｓｈｅｌｅｔａ１．１９９６）。人们认为在大肠杆菌中鸟苷四磷酸ｐｐＧｐｐ能引起上述的严格应答。
严格应答是有意义的细菌调节系统之一，它是被营养限制所启动。当氨基酸缺乏时，无载荷的ｔＲＮＡ的水平将提高，它占据核糖体上Ａ位点时，ｒｅ／．＇／基因产品（严格控制因子）催化ＰＰＧｐｐ和ｐｐｐＧｐｐ的合成。ｒｅｌＣ基因所编码的５０Ｓ核糖体蛋白Ｌｌｌ（ｒｅｌＣ基因等同于大肠杆菌中ｒｐｌＫ基因）是ＰＰＧｐｐ合成所必须的。
因此，大肠杆菌中旭己４和ｒｅｌＣ基因发生突变的菌株不能合成＠ＰＰＧｐｐ（Ｃａｓｈｅｌｅｔａｌ，１９９６）。对链霉菌中严格应答反应进行的研究表明，ｒｅＩＣ松弛性突变株（ｒｅｌａｘｅｄｍｕｔａｎｔ）通常产生少量的ｐｐＧｐｐ（大约野生型的１５％）（Ｃｈａｋｒａｂｕｒｔｔｙｅｔａ１．１９９６；Ｏｃｈｉｅｌａ１．１９９０ａ）。在对一些链霉菌的ｒｅｌＣ松弛型突变株的筛选和分析基础上，Ｏｃｈｉ建议ｐｐＧｐｐ在引发这些微生物抗生素生物合成启动过程中起着关键的作用（Ｏｃｈｉ，１９８６ｂ；１９８７ｂ；１９９０ａ；１９９０ｂ）。这个想法主要是基于这样一个现象，即ｒｅＩＣ松弛型突变株在氨基酸缺乏时仅仅积累少量的ｐｐＧｐｐ（大约野生型的１５％），并且这些ｒｅｌＣ松弛型突变株缺乏抗生素生物合成能力。根据对ｒｅｌＡ缺失突变株表型的详细分析，Ｂｉｂｂ认为ｐｐＧｐｐ在抗生素生物合成和形态分化中起着一个条件调节控制作用（Ｃｈａｋｒａｂｕｒｔｔｙｅｔａｌ．１９９７）。
ＴａｂｌＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｐｐＧｐｐｉｎｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ
ｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ＯｒｇａｎｉｓｍａｎｄｍｕｒａｔｉｏｎＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｂｏｌｉｓｈｅｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｓ．ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ
ｒｅｌＣ（ｄｅｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｔｉｏｎ）ＡｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｒｅｌＡ（ｇｅｎｅｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）ＡｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎｒｅｌＡ（ｇｅｎｅｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）ＡｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎＯｃｈｉ（１９９７）
Ｂｉｂｂ（１９９６）
ｂｌａｌｐａｒｔｉｄａ（１９９６）
Ｓ．ｇｒｉｓｅｕｓ
ｒｅｌＣ（ｄｅｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｔｉｏｎ）ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎＯｃｈｉ（１９９７）
Ｓ．ａｎｔｉｂｉｏｔｉＣＬＩＳ
翌型ｌｇ塑！ｇｉ！！！鲢ｉ塑２堑！ｉ１２１１１ｉ！』！塑！！！！塑２
沈阳药科大学博士学位论文
１．３ｒｐｏＢ基因突变
大肠杆菌中利福平抗性的突变位点定位于ｒｐｏＢ基因上，ｒｐｏＢ基因编码ＲＮＡ聚合酶Ｂ亚单位。各种研究表明，ＲＮＡ聚合酶是ｐｐＧｐｐ的作用位点，并且ｐｐＧｐｐ结合到大肠杆菌的ＲＮＡ聚合酶Ｂ亚单位上（Ｃｈａｔｔｅｒ］ｉｅｔａ１．１９９８）。根据一些大肠杆菌ｒｐｏＢ基因突变株突变位点的定位资料，Ｉｓｈｉｈａｍａ建议ｐｐＧｐｐ结合到与Ｂ亚单位严格控制区域相关联的ｕ亚单位上，或者ｐｐＧｐｐ与ｕ亚单位结合在Ｂ亚单位的不同区域上，ｐｐＧｐｐ结合位点的暴露需要（－）亚单位的结合。因此推断，成套基因的转录受ＲＮＡ聚合酶启动子选择性的控制。大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶结构调节影响它的启动子的选择性，因而涉及转录的调节（Ｉｓｈｉｈａｍａｅｔａｌ１９９０）。现已经证明，在大肠杆菌中，ＲＮＡ聚合酶的ｐｐＧｐｐ结合位点是靠近利福平敏感区域（ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｏｍａｉｎ）（Ｒｅｄｄｙｅｌ讲．１９９５）。大肠杆菌的利福平抗性突变定位于ｒｐｏＢ基因的三个不同的区域，称为Ｉ，ＩＩ和ｌＩＩＩ（Ｓｉｎｇｅｒｅｔａ１．１９９２）。在天蓝色链霉菌中，ｒｅｌＡ和ｒｅｌＣ松弛型突变所造成的对抗生素生物合成损伤效应可以通过引入利福平抗性突变而解除，ＤＮＡ序列分析表明，这些利福平突变株中突变位点成簇排列于ｒｐｏＢ基因的利福平敏感域上（Ｘｕｅｔａ』．Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄｄａｔａ）。在灰色链霉菌（Ｓｔｘｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅａｓ）ｒｅｌＣ中引入利福平抗性突变，也同样的恢复了链霉素的生物合成（Ｘｕｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄｄａｍ）。因此我们假定在ＲＮＡ聚合酶上有一个ｐｐＧｐｐ的结合域，而某些利福平抗性突变能模仿ｐｐＧｐｐ结合的效果，并且造成ｒｐｏＢ基因构象的改变，最终造成抗生素生物合成的启动。在本文中，我们证明了在变铅青链霉菌野生型和它的ｒｅｌＣ松弛突变株中引入利福平抗性突变激活了放线紫红素的生物合成。表ｌ是已报道的ｐｐＧｐｐ在链霉菌次级代谢启动中的作用。从中可以看出ｒｅｌＣ或ｒｅｌＡ突变造成了抗生素生产能力的丧失。
１．４补偿突变（Ｃｏｍｐｅｎｓａｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎ）
正如我们所知，大部分由质粒或染色体所赋予的抗生素抗性都对细胞生长施加了一定程度的损伤，当然也有例外（Ｂｏｔｔｅｒｇｅｒｅｔａ１．１９９８）。尽管抗生素抗性造成生长的损伤，自然选择仍然能够通过发育形成第二个位点的补偿性突变，快速地恢复生长。第二个补偿突变是通过恢复抗性突变所损害的生理功能，进而
姿里垫型查兰堕主兰堡垒兰堕堕极大的降低了生长的损伤，而同时细胞并不丧失抗生素抗性水平（Ｓｅｈｒａｇｅｔａ１．
１９９６）。Ｂｊｏｒｋｍａｎ和他的合作者们考察了在ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＬＴ２中两种抗生索抗性，由编码核糖体蛋白Ｓ１２的ｒｐｓＬ基因突变造成的链霉素抗性和编码延长因子Ｇ（ＥＦ．Ｇ）的＾ｍ４基因的突变所造成的梭链孢酸抗性。他们发现抗生素的抗性所造成的生长损伤，能被抗性菌株在进化过程中产生的第二个点突变所补偿，并不损失抗生素的抗性。他们的实验结果建议细菌进化能够通过采用寄主内和寄主外的不同的途径来实现降低抗生素抗性所造成的损伤作用（Ｂｊｏｒｋｍａｎｅｆａ１．２０００）。
Ｂｒｕｃｅ和他的同事们用生长较差的大肠杆菌ｒｐｓＬ（链霉素抗性）突变株进行计算机模拟和ＤＮＡ测序研究。实验结果支持这样的一个假设，即生长适中的补偿突变株比生长速率高的回复突变株更占优势，这个现象可能归因于补偿性突变速率比回复突变的更高以及和连续传代相关的瓶颈效应（ｂｏａｌｅｎｅｃｋｓ）（Ｌｅｖｉｎｅｔａｌ．２０００）。
据报道，在枯草杆菌中（Ｂａｃｉｌｌｉｕｓｓｕｂｆｉｌｉｓ），自发产生的利福平抗性所造
成的平均生长损伤是细胞倍增数减少５８％到１０％。一些菌株产生多种多样的利福平抗性等位基因，这些抗性等位基因对生长具有不同的影响。可能通过进化的两种方式之一来改善适应性突变所造成的损伤，（１）通过置换（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）。这种方式中，具有损伤效应的适应性突变被一个赋予相同的适应性但具有较少损伤的突变所取代，或者（２）通过补偿进化（ｃｏｍｐｅｎｓａｔｏｒｙｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）。在这种方式中，自然选择更倾向于在其他位点进行修饰以补偿突变的等位基因所产生的损伤。通过两种方式（一种方式是测量几个菌株中的每一个菌株的一系列自发产生的利福平抗性突变的生长损伤，另一个方式是把一系列不同的利福平抗性等位基因引入多种多样的菌株，并且测量每一个带有不同的突变等位基因菌株的损伤效应），Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ和他的合作伙伴们已经证明利福平抗性的损伤效应能够通过补偿的和置换的方式来改善（Ｃｏｈａｎｅｔａｌ．１９９４）。
根据对Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ的链霉素，利福平和奈啶酮酸（ｎａｌｉｄｉｘｉｃａｃｉｄ）的抗性突变株的研究，Ｂｊｏｒｋｍａｎ和他的同事发现第二个位点的补偿突变
沈阳药科大学博士学位论文绪论比回复突变更普遍，因而推论降低抗生素的使用不可能使己存在于人体和环境中的抗性细菌消失。第二个位点的补偿突变能够提高抗性细菌的生长能力，使它们成功的抵抗不利环境，并且使它们在甚至没有抗生素的环境里与敏感菌竞争ｆＢｊｏｒｋｍａｎｅｔａｌ．１９９８；１９９９；Ａｎｄｅｒｓｓｏｎｅｔａｌ．１９９８）．
在本实验中，同样观察到，利福平抗性突变株在获得利福平抗性突变后造成了对生长的损伤。一些利福平抗性突变株在缺乏利福平的ＧＹＭ平板上多次传代后形态发生改变，对其中两株菌测序分析揭示，在ｒｐｏＢ基因中自发产生了第二个位点的补偿突变，我们命名为ｒｉｆ５４．１和ｒｉｆ５４．２。这两个利福平抗性双突变株恢复了生长，仍然具有产生兰色的放线紫红素的能力，同时不改变利福平抗性水平。基因置换实验表明，第二个位点的补偿突变恢复了利福平突变所造成的生长损伤。
１．５氨基糖苷类抗生素抗性突变对抗生素生物合成的影响
氨基糖苷类抗生素通过结合到核糖体３０Ｓ亚单位上，从而干扰细菌蛋白的合成（Ｄａｖｉｅｓｅｔａ１．１９６４；１９８７）。它们的结合是通过降低ｔＲＮＡ解除的速率，从而稳定ｔＲＮＡ．ｍＲＮＡ在Ａ位点的相互作用（Ｋｉｎｍｉｅｔａ１．１９９４）。氨基糖苷抗生素造成转录精确性的降低和抑制转位，这种损伤效应能够被一些１６ＳｒＲＮＡ上的突变而消除（Ｍｏａｚｅｄｅｌａｌ．１９８７；ＤｅＳｔａｓｉｏｅｔａｌ．１９８９；Ｃｔｍｄｌｉｆｉｅｅｔａｌ．１９９０），或者通过改变某些核糖体蛋白而除（Ｃｕｎｄｌｉｆｆｅｅｔａｌ１９９０；Ｌｉｕｅｔａ１．１９８９；Ｔｉｍｍｓｅｔａ１．１９９３；Ｙｅｈｅｔａ１．１９９４）。已发现这些突变位点被发现或者在１６ＳｒＲＮＡ的５３０位，或者是９１５位核苷酸区域，或者存在核糖体蛋白Ｓ１２上。
据报道，一些链霉素抗性突变能够激活变铅青链霉菌生物合成放线紫红素（Ｓｈｉｍａｅｔａ１．１９９６）。链霉素抗性突变能解除天蓝色链霉菌中ｒｅｌＡ和ｒｅｌＣ对抗生素生物合成的损伤效应，也能够诱导抗生素的过量生产（Ｓｈｉｍａｅｔａ１．１９９６；ＨｅｓｋｅｔｈａｎｄＯｃｈｉ１９９７）。把链霉素抗性突变引入其他的链霉菌中也显示出相同的效应（Ｈｏｓｏｙａｅｔａ１．１９９８；Ｌａｉｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄｄａｔａ）。
１．６总结
抗生素生物合成被称作生理分化，它的启动通常发生在菌株的营养生长
婆塑堕型奎堂竖主兰竺堕塞堕丝和形态分化转换过程中。有关分化启动调节的最重要的方面之一是确定引发分化过程的信号。一个潜在有意义的细菌调节系统就是严格应答。在大肠杆菌中，ｐｐＧｐｐ和ｐｐｐＧｐｐ被认为是造成了严格应答。
在分离和分析几株链霉菌的ｒｅ／Ｃ松弛型突变株的基础上，研究者建议，ｐｐＧｐｐ在抗生素生物合成启动中起着关键的作用。把链霉素抗性突变引入变铅青链霉菌造成放线紫红素生物合成的激活。在ｒｐｓ三基因中，某些链霉素抗性突变解除了天蓝色链霉菌的ｒｅｌＡ突变和灰色链霉菌的ｒｅｌＣ突变所造成的抗生素生产的抑制效应，并不伴随有ｐｐＧｐｐ积累能力的恢复。这些结果表明，在这些链霉菌中次级代谢的启动是在翻译水平上控制。
在本文中，变铅青链霉菌利福平抗性突变株激活了抗生素生物合成，但是生长速率和产孢能力受到明显的损伤。在天蓝色链霉菌和灰色链霉菌当中，利福平抗性突变株具有的现象相同（ＸｕａｎｄＴｏｚａｗａ，Ｐｅｒｓｏｎａｌｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）。我们发现变铅青链霉菌的利福平抗性突变株在传代的过程中变异比例较高。单菌落分离发现了另一类的突变株，它们具有更好的生长和产孢能力，最重要的一点，它们仍然保持着放线紫红素生物合成的能力，同时利福平抗性水平并没有降低，ＤＮＡ序列分析表明，在这些突变株的ｐＤＢ利福平敏感域中存在有第二个点突变，这个自发产生的第二个突变改善了与药物抗性相关的第一个利福平点突变造成的菌体生长和产孢的损伤。实验证明链霉菌中这些现象和大肠杆菌系统中的相同（Ｂｊｏｒｋｍａｎ２０００）。我们怀疑在革兰氏阳性菌和阴性菌中可能存在有相同的机制。
本试验从变铅青链霉菌野生型和ｒｅｌＣ松弛突变株中筛选获得利福平抗性突变株。对具有放线紫红素产生表型的利福平抗性突变株的序列分析表明，利福平抗性突变位点存在于编码ＲＮＡ聚合酶Ｂ亚单位的ｒｐｏＢ基因中一个很窄的区域，这个区域正是天蓝色链霉菌ｒｅｌＣ和ｒｅｌＡ松弛突变株和灰色链霉菌ｒｅｌＣ松弛突变株的利福平抗性突变位点的区域。这个利福平突变位点区域靠近ｐｐＧｐｐ结合区域。这些事实更证实了这个假设，即利福平抗性突变模拟了ｐｐＧｐｐ结合效应，造成了ＲＮＡ聚合酶Ｂ亚单位的构象改变，从而造成抗生素生物合成的启动。变铅青链霉菌ｒｅｌＣ的利福平抗性突变株的筛选也进一步证实了这一点。对野生型，利福平抗性突变株，ｒｅｌＣ松弛突变株和ｒｅｌＣ的利福平抗性突变株中
鎏堕堑型查兰竖主兰竺堡苎堕堡ｐｐＧｐｐ含量的检测证明，抗生素生物合成的启动不需要ｐｐＧｐｐ。
两个利福平抗性双突变株是通过在ＧＹＭ平板上多次传代利福平抗性单突变株的过程中所发现的。利福平抗性双突变恢复了生长速率同时保持了放线紫红素生物合成能力。在这些双突变株中，发现存在有第二个位点的点突变。为了比较引入利福平单突变和双突变对放线紫红素产生以及生长速率的影响，我们对变铅青链霉菌野生型进行基因置换实验，直接证明利福平抗性突变能够激活放线紫红素生物合成，并且自发产生的第二个点突变抑制了第一个利福平抗性突变所引起的生长缺陷。
使用氨基糖苷类抗生素链霉素，潮霉素，ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ和庆大霉素从硝吡咯假单胞菌中筛选硝吡咯菌素的高产菌株。我们从含有抗生素的ＮＢ筛选平板上挑选抗性突变株。实验结果表明，尽管对硝吡咯假单胞菌的ＭＩＣ值最高，链霉素抗性突变的引入造成硝吡咯菌素生产能力的极大提高。虽然Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ和庆大霉素的ＭＩＣ值最低，它们的抗性突变对硝吡咯菌素生物合成影响较小。潮霉素的ＭＩＣ值居中，潮霉素的抗性突变对硝吡咯菌素生物合成的影响较小。从含有十倍的ＭＩＣ浓度的潮霉素筛选平板中，我们没有得到抗性菌落。
第二章材料和方法
２．１细菌菌株和质粒
在本研究中使用的链霉菌菌株列于表２．１。所使用的大肠杆菌菌株和质粒其中包括那些本实验中所构建的质粒列于表２．２。所使用的硝吡咯假单胞菌以及硝吡咯菌素生物检测菌列于表２．３。
Ｔａｂｌｅ２．１．ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｖｉｄａｎｓａｎｄｉｔｓｍｕｔａｎｔｓｕｓｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙＳｔｒａｉｎｓＲｅｌｅｖａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅ８ｓｏｕｒｃｅ（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）
Ｓｆｉｖｉｄａｎｓ６６
１３２６
ｒｉｆ５
ｒｉｆ６
ｒｉｆ８
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一ｆ１８
ｒｉｆ４４
ｒｊｆ５１
ｒｉｆ９６
５０－１１ｒｉｆｃｌｆｉｆＣ２ｒｉ咒３ｒｉｆ℃４ｍＣｌＯｎ圮１２ｒｉｆｃｌ４
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ｒｉｆ５４．１ｒｉｆ５４－２ｒｆｆ５４－３
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ｄｆａｍｐｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｒｅｌＣ（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
ｒｉｆａｍｐｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｒｅｌＣ（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
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ｒｉｆａｍｐｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｒｉｆ５４（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
ｒｉｆａｍｐｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｒｉｆ５４（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
ｔｒｕｅｒｅｖｅｒｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｒｉｆ５４（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
Ｔａｂｌｅ２．２Ｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｐｌａｓｍｉｄｓ
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｕｓｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ
ＳｗａｉｎｓＲｅｌｅｖａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅ。
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Ａｍｐｌ：ｐＳＫｗｉｔｈａ４．３－ｋｂＳａｃＩｆｒａｇｍｅｎｔｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
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ｍｗｔｍｌｔｒｐｏＢｇｅｎｅｏｆｔ／ｔ５４
（１ａｂｓｔｏｃｋ）
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（１ａｂｓｔｏｃｋ）
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（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
————————一Ｔａｂｌｅ２．３Ｓｗａｉｎｓｕ—ｓｅ—ｄ—ｉｎ—ｔｈ—ｅ—ｓ—ｔｕ—ｄ—ｙ—ｏｎ—ｐ—ｙ—ｒｒ—ｏｌ—ｎｉ—ｔｒ—ｉｎ—ｉｍ——ｐｒ—ｏｖ—ｅ—ｍ—ｅｎ—ｔ——————～ＳｔｒａｉｎｓＲｅｌｅｖａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅ。ｓｏｕｒｃｅ（ｒｅ触ｎｃｅ）
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｙｒｒｏｌｃｉｎｉａ
２３２７
ｓ打ｍｕｔａｎｔｈｙｇｍｕｔａｎｔｇｅｎｍｕｔａｎｔｇｅｍｍｕｔａｎｔｗｉｌｄｔｙｐｅ
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（１ａｂｓｔｏｃｋ）
ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ?ｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｓｏｌａｔｅｆｒｏｍｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ（ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ）
Ｃ撕１ｄａｎ伯｛ｃｎｍｔｅｓｔ
ｏｒｇａｎｉｓｍｕｓｅｄｆｏｒｂｉｏａｓｓａｙ（ｐｒｏｖｉｄｅｄｂｙＦｕｊｉｓａｗａｃｏｍｐａｎｙ）——————————————————————————————————一
沈阳药科大学博士学位论文材料和方法２．２化学试剂，酶和缓冲液
抗生素
氨苄西林（Ａｍｐ），Ｓｉｇｍａ公司产品
阿普拉霉素（Ａｐｒ），Ｓｉｇｍａ公司产品
Ｇｅｎｉｔｉｃｉｎ（Ｇｅｎ），Ｓｉｇｍａ公司产品
庆大霉素（Ｇｅｍ），Ｓｉｇｍａ公司产品
潮霉素（Ｈｙｇ）。Ｓｉｇｍａ公司产品
硝吡咯菌素（Ｖｙｒ），Ｆｕｊｉｓａｗａ公司产品
利福平（鼬ｆ），Ｓｉｇｍａ公司产品
链霉素（ｓｔｒ），Ｓｉｇｍａ公司产品
硫链丝菌素（Ｔｓｐ），Ｓｉｇｍａ公司产品
特殊试剂
琼脂糖，Ｓｉｇｍａ公司产品
过硫酸铵，Ｓｉｇｍａ公司产品
溴酚兰，Ｓｉｇｍａ公司产品
ＢＩＳ。Ｓｉｇｍａ公司产品
考马斯亮兰Ｒ－２５０，Ｓｉｇｍａ公司产品
ＣＨＡＰＳ，Ｓｉｇｍａ公司产品
ＤＬ．二硫苏糖醇，Ｓｉｇｍａ公司产品
ＥＤＴＡ，Ｓｉｇｍａ公司产品
聚７，－－醇１０００，Ｓｉｇｍａ公司产品
ＳＤＳ（Ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ），Ｓｉｇｍａ公司产品
ＴＥＭＥＤ。Ｓｉｇｍａ公产品
ＴＥＳ，Ｓｉｇｍａ公司产品
Ｔｒｉｓ，Ｗａｋｏ公司产品
尿素，Ｓｉｇｍａ公司产品
沈阳药科大学博士学位论文材料和方法尼龙膜（Ａ．ｒｎｅｒｓｈａｎｌＨｙｂｏｎｄＮ．０．４５ｕｍｐｏｒｅｄｌａｍｅｔｅｒ）
酶
ＡｐａＩ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＢａｍＨＩ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＣＩＡＰ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＤＮａｓｅ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＥｃｏＲＩ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＬＡ－Ｔａｑ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＬｉｇａｔｉｏｎｋｉｔＶｅｒＩＩ，Ｔａｋａｒａ公司产品
Ｌｙｓｏｚｙｒｎｃ，Ｓｉｇｍａ公司产品
ＮｃｏＩ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＲＮａｓｅ，Ｔａｋａｒａ公司产品
ＳａｃＩ，Ｔａｋａｒａ公司产品
印ｈｌ，Ｔａｋａｒａ公司产品
Ｚ－Ｔａｑ，Ｔａｋａｒａ公司产品
缓冲液和所使用的溶液
２０ｘＳＳＣ，３ＭＮａＣＩ－０．３Ｍｓｏｄｉｕｍｃｉｔｒａｔｅ，ｐＨ７（Ｉ－Ｉｏｐｗｏｏｄｅｔａ１．１９８５）．
Ｇｅｌｌｏａｄｉｎｇｄｙｅｆｏｒａｇａｒｏｓｅｇｅｌｓ（Ｈｏｐｗｏｏｄｅｔａ１．１９８５）．
ＧＴＥ，ｇｌｕｃｏｓｅ－Ｔｒｉｓ．ＥＤＴＡｂｕｆｆｅｒｆｏｒｐｌａｓｍｉｄｉｓｏｌａｔｉｏｎｒＳａｍｂｒｏｏｋｅｔａ１．１９８９）．
Ｐｂｕｆｆｅｒ，ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｉｎｇｂｕｆｆｅｒ（Ｈｏｐｗｏｏｄｅｔａ１．１９８５）．
Ｐｈｅｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（ｐｈｅｎｏｌ６９％）ｐＨ８．０，Ｔａｋａｒａ公司产品
Ｐｈｅｎｏｌ／ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ／Ｉｓｏａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌ（２５：２４：１）（Ｐｈｅｎｏｌ３７％），Ｔａｋａｒａ公司产品
ＴＡＥ，＂Ｉｒｉｓ－ａｃｅｔａｔｅ—ＥＤＴＡｂｕｆｆｅｒｆｏｒｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．
ＴＥ，ＴＨｓ．ＥＤＴＡｂｕｆｆｅｒ，ｐＨ８（Ｈｏｐｗｏｏｄｅｔａ１．１９８９）．
沈阳药科大学博士学位论文材料和方法２．３培养基和生长条件
ＧＹＭａｇａｒ（ｐｅｒｌｉｔｅｒ）：
Ｇｌｕｃｏｓｅ４ｇ，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ４ｇ，ｍａｌｔｅｘｔｒａｃｔ１０ｇ，ｐｅｐｔｏｎｅ（ＮＺ?ａｍｉｎｅ，ｔｙｐｅＡ）１ｇ，
ＮａＣｌ２ｇ，ＯＢｓａｌｔｓｏｌｕｔｉｏｎ０．６ｍｌ，ａｇａｒ２０９（ａｄｊｕｓｔｅｄｔｏｐＨ７．２、】ｌｒｉｔｈＮａＯＨ）（Ｓｈｉｍａｅｔａ１．１９９６）．
Ｒ４（ｐｅｒｌｉｔｅｒ）：
Ｇｌｕｃｏｓｅ１０９，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｌｇ，酪蛋白水解物０．１９，Ｌ?ｐｒｏｌｉｎｅ３９，ＭｇＣｌ２．６ＨｚＯ１０９，ＣａＣｌ２．２Ｈ２０４９，Ｋ２Ｓ０４Ｏ．２９，ＴＥＳ５．６９，Ｔｒａｃｅｅｌｅｍｅｎｔｓｏｌｕｔｉｏｎ２ｍｌ（ａｄｊｌａｓｔｅｄｐＨ７．２ｗｉｔｈＮａＯＨ）（Ｓｈｉｍａｅｔａ１．１９９６）．
Ｒ２ＹＥ（通常称作Ｒ５）：
配制如下溶液：Ｓｕｃｒｏｓｅ１０３９，Ｋ２Ｓ０４Ｏ．２５９，ＭｇＣｌ２．６Ｈ２０１０．１２９，ｇｌｕｃｏｓｅ１０９，酪蛋白水解物Ｏ．１９，ｔｒａｃｅｅｌｅｍｅｎｔｓｏｌｕｔｉｏｎ２ｍｌ，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ５９，ＴＥＳＢｕｆｆｅｒ５．７３ｇ，ｄｉｓｔｉｌｌｅｄｗａｔｅｒｔｏ１０００ｍｌ。．放２．２９ＤｉｆｃｏＢａｃｔｏａｇａｒ进入２５０ｍｌ三角瓶，然后倒入１００ｍｌ配制的溶液，封闭三角瓶进行高压灭菌。在使用时，重新融化培养基，并且在每个含１００ｍｌ培养基的三角瓶中加入Ｏ．５％ＫＨ２Ｐ０４ｌｍｌ，５ＭＣａＣｌ２２Ｈ２００．４ｍｌ，２０％Ｌ－ｐｒｏｌｉｎｅ１．５ｍｌ，１ＮＮａＯＨＯ．７ｍｌ（Ｈｏｐｗｏｏｄｅｔａ１．１９８５）．
ＹＥＭＥ（ｐｅｒｌｉｔｅｒ）：
Ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ３９，ｐｅｐｔｏｎｅ５９，ｍａｌｔｅｘｔｒａｃｔ３９，ｇｌｕｃｏｓｅ１０９，ｓｕｃｒｏｓｅ３４０９．Ａｆｔｅｒａｕｔｏｃｌａｖｅ，ａｄｄ：２．５ＭＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ２ｍｌ／ｌｉｔｒｅ．为制备原生质体，添加２０％ｇｌｙｃｉｎｅ２５ｍｌ／１（Ｈｏｐｗｏｏｄｅｔａ１．１９８５）．
ＳＰＹ（ｐｅｒｌｉｔｅｒ）：
．
Ｓｏｌｕｂｌｅｓｔａｒｃｈ３％，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ０．２％，ｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎｅ３％，ＭｇＳ０４．７Ｈ２００．２％，ＯＢｓａｌｔｓ３ｍｌ／ｌ（ａｄｊｕｓｔｅｄｐＨ７．３ｗｉｔｈＮａＯＨ）（Ｏｃｈｉ１９９０）．
预防孩子铅中毒的方法
如何预防儿童铅中毒_预防孩子铅中毒的方法 2、经常给孩子清洗玩具，尽量少带孩子到铅污染严重的道路、工厂玩耍。 3、少给孩子吃含铅食品，如松花蛋、罐头、油炸薯条、爆米花等。 6、不可让宝宝用含彩色釉的瓷碗，总之入口的东西尽量不要有颜色，也避免宝宝用嘴咬铅笔等。 8、请给孩子补钙，钙会跟铅在身体里争夺吸收，如果钙多了，铅就会减少。每100克虾皮中含钙量高达2克，可以多吃点。 9、清晨起来第一滴自来水最好别食用，也不要用来煮东西，虽然自来水中的铅含量不高，经过一夜的积存，大量的铅就会聚积起来，因此，清晨起来，把自来水放掉3~5分钟也可预防铅中毒。 10、牛奶所含的蛋白质成分，能与体内的铅结合成一种可溶性的化合物，从而阻止人体对铅的吸收，建议让孩子每天喝上1～2杯牛奶。 12、油菜、卷心菜、苦瓜等蔬菜中的维生素C与铅结合，会生成难溶于水且无毒的盐类，随粪便排出体外。猕猴桃、枣、柑等所含的果胶物质，可使肠道中的铅沉淀，从而减少机体对铅的吸收。 1、牛奶 用量：鲜牛奶每日250~750毫升。 2、猕猴桃 作用：生津止渴、消滞，补充大量维生素C。维生素C与铅结合成溶于水而无毒的盐类，随粪便排出体外。 用量：猕猴桃每日2~3个。作水果食。猕猴桃汁，每日饮 100~200毫升。
注意：猕猴桃性寒，脾胃虚寒或胃病者不宜多食。多食冷脾胃。 3、凉瓜黄豆排骨汤 组成、用量：凉瓜300克，黄豆25克，排骨200克，生姜2片。 烹调、食法：凉瓜去瓢切片，排骨斩件飞水去肉腥味。上料同放入锅内，加适量清水，武火煮沸后转文火煲1小时，以盐调味，便 可食用。 4、海带猪腱汤 作用：益气清热，软坚散结，利水，驱铅。 组成、用量：海带50克，猪腱肉150克。 烹调、食法：海带浸泡洗净切丝，猪腱肉切2块，飞水去肉腥味。上料同放入锅内，加适量清水，武火煮沸后转文火煲1小时，以盐 调味，便可食用。 5、凉拌海带 作用：清热散结，降压利尿，治瘿瘤痰火核，驱铅。 组成、用量：海带50克，少许白糖、食盐、醋、麻油。 烹调、食法：海带浸泡，洗净切丝，用开水灼熟，滤干水分，放入碟中，加调味料拌匀，便可食用。 6、卷心菜炒猪肝 作用：清热、开胃、补血、驱铅。 组成、用量：卷心菜300克，猪肝100克，生姜2片，蒜1粒。 烹调、食法：卷心菜洗净切断，猪肝切片，用少许白糖、食盐、油、生粉拌匀，蒜切成蒜蓉。烧锅下油，爆香蒜蓉，炒猪肝，炒至 九成熟时铲起。烧锅下油，爆香姜片，再放入卷心菜，待卷心菜熟透，拌入猪肝，炒片刻，加调味料，便可食用。 1、影响智能和行为发育
铅中毒的诊断治疗
铅中毒的诊断治疗—临床教学查房教案 浙江省金华市中心医院急诊科毛云 教学查房计划书 教案正文： （一）依托病例： 病史简介：患者，男性，34岁，因“腹部胀痛5天”于2013-9-29 15:22收住我科。患者5天前无明显诱因下出现腹痛、腹胀，有里急后重感，无排便。曾在当地医院治疗，症状未见明显好转，腹痛较前加重，遂来我院。予查全腹增强CT示：盆腔少量积液，腹部血管未见明显异常。追问个人病史，在塑化剂厂上班一年，有可疑长期重金属接触史。 既往史：既往体健，否认药物过敏史，否认重大手术、外伤史，否认高血压、糖尿病等病史。 体格检查：T：37.1℃，P57次/分，R19次/分，BP163/84mmHg 神志清，精神稍软，心音适中，律尚齐，未闻及明显病理性杂音。腹平软，剑突下轻压痛，无反跳痛，肝脾肋下未及，墨菲氏征阴性，肠鸣音减弱，移动性浊音阴性，双下肢无水肿，四肢肌力肌张力基本正常，病理征阴性。 辅助检查：2013.9.28本院全腹增强CT（影像号：684785）示：盆腔少量积液，腹部血管未见明显异常；2013.9.28本院腹部B超：肝胆胰脾未见明显异常；2013.9.28腹部X线（R1766967）：腹部未见明显异常。 （二）教学过程： 1.请对该病例的主要特征进行总结。 答：1、青年男性2、有可疑长期重金属接触史，5天前无明显诱因下出现腹痛、腹胀，有里急后重感，无排便3、查体：BP163/84mmHg，神志清，精神稍软，腹平软，剑突下轻压痛，无反跳痛，肝脾肋下未及，墨菲氏征阴性，肠鸣音减弱，移动性浊音阴性。 2．根据上述病例特点，患者的腹痛、腹胀应考虑什么疾病？ 答：首先考虑铅中毒。 3．下一步拟行什么检查？ 答：血清重金属初筛检测、电子胃镜检查、血清淀粉酶检查 2013.9.28本院铅初筛检测：839ug/l，镉初筛检测5.40 ug/l（次日回报） 2013.9.28本院血清淀粉酶检查正常 2013.9.29本院电子胃镜检查提示慢性浅表性胃炎 4.针对该患者，下一步如何治疗？血液净化驱铅治疗？予“EDTA类金属螯合剂、DMSA
“血铅事件”敲响环保警钟
“血铅事件”敲响环保警钟 “血铅事件”敲响环保警钟 2006年10月03日18:28大| 中| 小 今年春天，医生们在治疗一位在严重的电击事故中受伤的五岁男童时，发现了另一个同样严重的问题：男童血液里的铅含量已达到相当危险的水平。这个发现揭开了中国最为严重的的铅中毒事件之一。在中国西部甘肃省群山环抱、与外界相对隔绝的新寺村，一家制造铅锭的工厂已在这里生产了10年。铅锭通常用于生产彩色电视显像管以及电缆，然后这些产品又被销往世界各地。政府官员说，这家工厂排出的有毒气体含铅量是准许排铅量的800倍。迄今为止这个村里所有接受检测的村民（包括来自三所学校的250名儿童）都被查出体内含铅量超标。据中国官方媒体新华社(Xinhua)报导，在这个1,800人的村庄中有10名儿童仍在住院接受治疗，至少有4人的大脑受到了严重损害。村民周翔（音）说，这个村子里面每个人都受到铅中毒的侵害，我孩子的手指都是青一块紫一块的。他的儿子每升血液中的含铅量为488微克，已在医院接受治疗。世界卫生组织(World Health Organization)称，儿童血铅含量超过每升100微克（美国中常用的衡量标准是每分升10微克）就可能带来危害。众多研究表明，血
铅含量略高于这个水平都会导致永久性的神经创伤和智商下降。新寺村的家长们紧紧握着仔细折好的实验室检测结果，并指着304、488甚至是798这样的数字说，他们终于明白了孩子们为什么总说感到恶心、头疼和其它部位疼痛。他们说，孩子们的牙齿都是黑的，有的根本不长牙齿。家长和老师都反映孩子们有记忆力和注意力不好的问题。这场灾难体现了在面对中国飞速经济发展所带来的环境损害时中国民众是多么的脆弱。这些损害最终将引发影响一代人的健康危机。政府官员表示，即使在上海以及广东省等中国相对富裕的城市和地区，环境不断恶化是导致畸形儿出生率上升的元凶之一。污染控制措施的不足已使中国的土壤、水源以及空气受到了铅、汞及其他污染物的侵害，这种现状使数百万儿童血液中有毒金属的含量达到了极其危险的水平。更糟糕的是，曾经污染西方国家的众多制造业在中国找到了新的栖身之地，因为在这里环境法规的执行力度较松。北京大学医学部(Peking University Health Science Center in Beijing)研究人员回顾了过去10年的数据在最近的一份报告中写道，约34%的中国儿童血铅含量超过WHO规定的最高限。新寺村等设有工厂的城镇情况更糟。而在美国，血铅含量超过WHO限制水平的儿童不足1%。上海交通大学医学院(Shanghai Jiaotong University School of Medicine)附属新华医院(Xinhua Hospital)的儿童铅中毒专家颜崇怀说，含铅量高
初级代谢与次级代谢之间的关系
初级代谢 一般将微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢生成维持生命活动的物质和能量的过程，称为初级代谢。 如何区分初级代谢与次级代谢 初级代谢产物是指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。在不同种类的微生物细胞中，初级代谢产物的种类基本相同。此外，初级代谢产物的合成在不停的进行着，任何一种产物的合成发生障碍都会影响微生物正常的生命活动，甚至导致死亡。 为许多主物都具有的主物化学反应，例如能量代谢及氨基酸、蛋白质、核酸的合成等，均称为初级代谢（primary metabolism）。与此不同，只在一定范围内主物的特异的代谢，则为次级代谢。在次级代谢的产物中，对维持生命占有重要地位的并不少，但另一方面，各种动植物和微生物所大量积累的生物碱、类萜（ferpenoid）、酚类、抗菌物质、色素等，其生理意义并不完全清楚。次级代谢产物许多是在胚胎发育的特定时期以及其他特定组织中产生的，所以产物在经济效益上以及对生物体性状表现的调节在研究上都被看成是重要的。 第三节微生物初级代谢和次级代谢的关系 微生物代谢产物的利用。 利用微生物代谢过程中产生的众多代谢产物生产各种发酵产品。 按照积累产物类型：初级代谢产物，如氨基酸、核苷类，以及酶或辅酶； 次级代谢产物，抗生素、激素、生物碱、毒素及维生素等。 按照发酵类型：自然发酵：酒精、乳酸等； 终端产物，赖氨酸、鸟苷酸、腺苷酸等；
中间产物，柠檬酸、α-酮戊二酸、琥珀酸、高丝氨酸、肌苷酸、黄苷酸等； 一、初级代谢与次级代谢产物 微生物的初级代谢：初级代谢是指微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢，生成维持生命活 动所需要的物质和能量的过程。这一 过程的产物，如糖、氨基酸、脂肪酸、 核苷酸以及由这些化合物聚合而成 的高分子化合物（如多糖、蛋白质、 酯类和核酸等），即为初级代谢产物。 由于初级代谢产物都是微生物营养性生长所必需，因此，除了遗传上有缺陷的菌株外，活细胞中初级代谢途径是普遍存在的，也就是说它们的合成代谢流普遍存在。在这途径上酶的特异性比次级代谢的酶要高。因为初级代谢产物合成的差错会导致细胞死亡。微生物细胞的代谢调节方式很多，例如通过酶的定位以限制它与相应底物的接近，以及调节代谢流等可调节营养物透过细胞膜而进入细胞的能力。其中调节代谢流的方式最为重要，它包括两个方面：一是调节酶的活性，调节的是已有酶分子的活性，是在酶化学 水平上发生的；二是调节酶的合成，调节 的是酶分子的合成量，这是在遗传学水平 上发生的。在细胞内这两者往往密切配合、 协调进行，以达到最佳调节效果。
预防铅中毒
一、婴幼儿铅中毒的危险 铅是一种多系统、多亲和性的毒物，铅及其化合物的蒸汽、烟和粉尘主要以呼吸道侵入人体，也可经消化道吸收，主要损害神经系统、造血系统、消化系统、血管和肾脏，对婴幼儿生长发育、心理行为发育、智力发育、潜能发展都会产生不可逆的损伤并保留终身。理想状态下，人体内的含铅量应为零。一般来说，儿童铅中毒诊断标准为血铅水平超过或等于0.483 u mol/L，不管是否有相应的临床症状体征和其他血液生化变化。 血铅水平分五级 Ⅰ级：＜0.483 u mol/L（10 ug/dl） Ⅱ-A级：0.483-0.1676 u mol/L（10-14 ug/dl） Ⅱ-B级：0.724-0.917 u mol/L（15-19 ug/dl） Ⅲ级：0.965-2.123 u mol/L（20-33 ug/dl） Ⅳ级：2.172-3.330 u mol/L（45-69 ug/dl） Ⅴ级：≥3.378 u mol/L（70 ug/dl） 目前认为，I级是相对安全的血铅水平，而Ⅱ一V级属于不同程度的铅中毒。 二、铅的来源 环境中的铅是造成婴幼儿铅中毒的根本原因。 1．大气中的铅的来源 （1）自然来源：自然环境中的铅可能经过地壳侵蚀、火山爆发、海啸和森林山火等自然现象而释放于大气环境中。 （2）非自然来源 非自然来源主要是指来自工业和交通等方面的铅排放。 2．环境媒介中的铅 土壤是自然界中铅的最大储存库。土壤中的铅会在婴幼儿玩耍时被有意无意地摄入，造成婴幼儿的铅中毒。室内铅尘也是婴幼儿铅暴露的重要来源之一。室内铅尘的含量和婴幼儿血铅水平呈非常明显的相关，所以控制室内铅尘能有效降低婴幼儿的血铅水平。 3．水中的铅 一般情况下水中的铅不至于成为婴幼儿铅暴露的主要来源。清晨第一次打开水龙头放出的水往往含铅量较高。热水龙头放出的水含铅往往较冷水龙头为高。但其生物利用度往往较食物中的铅高。 4．食物中的铅 食物中的铅可能来自几个方面：大气中的铅直接沉积到谷物和蔬菜中；室内铅尘污染厨房中的食物；以含铅釉彩器皿储存食物造成污染；铅质焊锡制作的食品罐头对食物的污染等，其中，铅污染罐头食品的危害最大。 食品中的铅污染主要有以下几种：
怎样预防食物中毒与铅中毒
《怎样预防食物中毒与铅中毒》教学设计 一、教学目标： 1、以“安全第一，预防为主”为指导方针，营造安全、文明、健康的育人环境。 2、通过教学生增强安全防范意识，教给学生掌握一些简单的安全常识，会处理日常生活中出现的紧急情况，学会自我保护。 3、让学生从平时点滴做起，养成良好的饮食习惯、卫生习惯等，会预防各种常见的传染病的发生。 二、教学内容： 1、养成良好的饮食习惯 2、注意饮食营养 3、保障饮食安全，预防食物中毒及与铅中毒 4、合理用药，远离不良嗜好 三、教学过程： 导入：同学们已经学习了不少卫生方面的知识，今天老师和同学们一起学习饮食卫生方面的知识。 （一）教学饮食卫生。 1、学生表演小品（音乐） 刚才他们表演精彩吗？大家想一想，刚才那位同学为什么肚子疼？ 拿出塑料小熊演示什么叫暴饮暴食。如果这样肠胃负担过大，容易引起消化不良。 2、说明“一日三餐”的重要性 找学生自由发言。 3、问答题 早晨时间紧，可以不吃早餐吗？ 4、总结。
养成良好的卫生习惯才会有健康的身体。 （二）注意饮食营养 1、合理搭配饮食有哪些好处？（讨论） 2、合理地烹饪，减少营养的损失。 3、食物的感官性指什么？ 饭菜的色、香、味。 4、注意饮食卫生 注意饮食卫生，应从哪些方面做起？ （三）保障饮食安全，预防食物中毒及铅中毒。 1、预防食物中毒； ①选择经过安全处理的食品。； ②彻底烹调食品； ③立即食用做熟的食品； ④精心储存熟食； ⑤彻底再加热熟食； ⑥避免熟食与生食接触； ⑦反复洗手； ⑧精心保持厨房的清洁卫生； ⑨避免昆虫、鼠类和其他动物接触食品； ⑩使用净水 食物中毒是怎么发生的？ 引起中毒的食品有哪些？ 如何预防食物中毒? 食物中毒的应急处理？ 2、预防铅中毒 如何防止铅中毒？ 防止铅中毒应该在饮食、生活习惯等多方面下手。
补充材料-提高初级次级代谢产物产量的方法
第二节提高初级代谢产物产量的方法我们知道，初级和次级代谢产物在遗传控制、合成途径等方面存在差异的，因而获得发酵过量生产的方法也不同。由于次级代谢产物的合成远离初级代谢的主要途径，微生物细胞对其合成控制较弱，因此，改变环境条件易于影响其表达，基因型改变后的产量变异幅度也较大，而初级代谢产物则与此相反。这在选择提高代谢产物方法时应予考虑。提高初级代谢产物产量的方法主要有以下几种： 1.使用诱导物与糖类和蛋白质降解有关的水解酶类大都属诱导酶类，因此向培养基中 加入诱 导物就会增加胞外酶的产量。如加入槐糖（1 , 2-P-D-葡二糖）诱导木霉菌的纤维素酶的生成，木糖诱导半纤维素酶和葡萄糖异构酶的生成等。但诱导物的价格往往比较贵，经济上未必合算。加入廉价的含有诱导物的原料，如槐豆荚等某些种籽皮中含有槐糖，玉米芯富含木聚糖，培养过程中可陆续被水解产生槐糖、木糖，这就是经常采用的方法。但是，玉米芯等这类不溶性聚合物的分解过程缓慢，以其唯一碳源时，培养周期比较长，产品的体积生产率仍难大幅度提高。可考虑先使微生物在廉价的可溶性碳源中迅速生长，形成大量菌体后，再加入诱导物诱导水解酶类生成的方法。 诱导物的浓度过高及能被迅速利用时，也会发生酶合成的阻遏，这在纤维二糖对纤维素酶的产生，对二糖对半纤维素酶生产中都已观察到，这也是使用诱导物时应予注意的。 2.除去诱导物——选育组成型产生菌在发酵工业中，要选择到一种廉价、高效的诱导物是不容易的，分批限量加入诱导物在工艺上也多不便，更为有效的方法是改变菌株的遗传特性，除去对诱导物的需要，即选育组成型突变株。通过诱变处理，使调节基因发生突变，不产生有活性的阻遏蛋白，或者操纵基因发生突变不再能与阻遏物相结合，都可达到此目的。迄今尚未见由于结构基因发生改变而得到组成型的报道。 已设计出多种选育组成型突变株的方法，其主要原则是创造一种利于组成型菌株生长而不利于诱导型菌株生长的培养条件，造成对组成型的选择优势以及适当的识别两类菌落的方法，从而把产生的组成型突变株选择出来。例如把大肠杆菌半乳糖苷酶的诱导型菌株经诱变处理后，先后含乳糖的培养基中培养，由于组成型突变株半乳糖苷酶的合成不需诱导即能产生，因此可较诱导型的出发菌株较早开始生长，在一定时期内菌数的增加便较快，如持续进行培养时，由于诱导酶形成后，原菌株生长速率亦逐渐增加，这种选择性造成的差别就会减少，可用交替在乳糖、葡萄糖培养基中进行培养的方法。两者利用葡萄糖时的生长速率是相同的，乳糖为碳源造成的组成型菌株的优势生长会持续下去，最后由平板分离就易于得到组成型突变株。以乳糖为限制性生长因子进行连续培养时，生长速率较低的诱导型菌株就会被冲洗掉，也是利用了上述原理。诱导型菌株不经诱变处理，利用其自发突变，用连续培
陕西凤翔铅中毒事件
陕西凤翔铅中毒事件始末:政府招商强势征地 2009-08-21 03:23:26 来源: 新京报(北京) 来源：网易新闻：https://www.360docs.net/doc/f810235170.html,/09/0821/03/5H78JB780001124J.html
次日，宝鸡市市长戴征社表示，首要问题是扩大排查铅超标年龄和地域范围，拿出医治方案。 宝鸡市政府承诺，对长青工业园及东岭冶炼公司做出长远环评，不保证群众健康安全，该公司永不能开工。 至此，愤怒的长青镇村民，情绪逐渐平息。 但纵观6年来，身处污染包围的长青镇村民与东岭冶炼公司的拉锯战，这次或许仅是一次小小的胜利。 政府招商强势征地 为项目拆迁，赵县长强调，“不存在商量”，强制手段“一定要有” 时间追溯到2003年3月。东岭集团与长青镇村民第一次“见面”。 东岭冶炼有限公司，为凤翔县设立长青工业园区后进驻的第一家大型企业。 当年一份凤翔县东岭项目建设协调领导小组的材料中说，“这是我县进入新世纪最大的工业项目，是我县招商引资的历史性突破。” 该项目当年被陕西省、宝鸡市确定为省市重点建设项目。 来自项目领导小组的材料中说，长青工业园区所处环境地质条件差，“从长远来看，不是人居最佳环境。” 据凤翔县发改局副局长师平堂介绍，当时宝鸡周边几个县都在争这个项目。而东岭主要看中长青工业园属于河滩区域，地势开阔。并且从长青开车到宝鸡约20分钟。 长青镇马道口村72岁的老人梁忠孝，作为村民代表，曾与项目指挥部展开过数十次谈判。 8月18日，梁忠孝说，以前这个地方全是水浇地，有自流灌溉系统，属于旱涝保收的良田，并非居住条件差。 当时的长青镇马道口村，居民人均耕地5分，这次建东岭公司，又先租后征1300亩地，村民意见很大。 但东岭项目得到凤翔县县委、县政府全力支持。时任县长的赵晓明任东岭项目建设协调领导小组组长。 在2003年7月7日东岭项目专题办公会议纪要中，赵晓明要求，关于拆迁工作，两个月内确保完成，“不存在商量，不存在研究，不能有任何含糊”。
(完整word版)补充材料---提高初级、次级代谢产物产量的方法
第二节提高初级代谢产物产量的方法 我们知道，初级和次级代谢产物在遗传控制、合成途径等方面存在差异的，因而获得发酵过量生产的方法也不同。由于次级代谢产物的合成远离初级代谢的主要途径，微生物细胞对其合成控制较弱，因此，改变环境条件易于影响其表达，基因型改变后的产量变异幅度也较大，而初级代谢产物则与此相反。这在选择提高代谢产物方法时应予考虑。提高初级代谢产物产量的方法主要有以下几种： 1.使用诱导物 与糖类和蛋白质降解有关的水解酶类大都属诱导酶类，因此向培养基中加入诱导物就会增加胞外酶的产量。如加入槐糖（1，2-β-D-葡二糖）诱导木霉菌的纤维素酶的生成，木糖诱导半纤维素酶和葡萄糖异构酶的生成等。但诱导物的价格往往比较贵，经济上未必合算。加入廉价的含有诱导物的原料，如槐豆荚等某些种籽皮中含有槐糖，玉米芯富含木聚糖，培养过程中可陆续被水解产生槐糖、木糖，这就是经常采用的方法。但是，玉米芯等这类不溶性聚合物的分解过程缓慢，以其唯一碳源时，培养周期比较长，产品的体积生产率仍难大幅度提高。可考虑先使微生物在廉价的可溶性碳源中迅速生长，形成大量菌体后，再加入诱导物诱导水解酶类生成的方法。 诱导物的浓度过高及能被迅速利用时，也会发生酶合成的阻遏，这在纤维二糖对纤维素酶的产生，对二糖对半纤维素酶生产中都已观察到，这也是使用诱导物时应予注意的。 2.除去诱导物——选育组成型产生菌 在发酵工业中，要选择到一种廉价、高效的诱导物是不容易的，分批限量加入诱导物在工艺上也多不便，更为有效的方法是改变菌株的遗传特性，除去对诱导物的需要，即选育组成型突变株。通过诱变处理，使调节基因发生突变，不产生有活性的阻遏蛋白，或者操纵基因发生突变不再能与阻遏物相结合，都可达到此目的。迄今尚未见由于结构基因发生改变而得到组成型的报道。 已设计出多种选育组成型突变株的方法，其主要原则是创造一种利于组成型菌株生长而不利于诱导型菌株生长的培养条件，造成对组成型的选择优势以及适当的识别两类菌落的方法，从而把产生的组成型突变株选择出来。例如把大肠杆菌半乳糖苷酶的诱导型菌株经诱变处理后，先后含乳糖的培养基中培养，由于组成型突变株半乳糖苷酶的合成不需诱导即能产生，因此可较诱导型的出发菌株较早开始生长，在一定时期内菌数的增加便较快，如持续进行培养时，由于诱导酶形成后，原菌株生长速率亦逐渐增加，这种选择性造成的差别就会减少，可用交替在乳糖、葡萄糖
职业性慢性铅中毒诊断标准
前言 本标准的第6.1条为推荐性的，其余为强制性的。 根据《中华人民共和国职业病防治法》制定本标准。原标准GBll504—1989与本标准不一致的，以本标准为准。 根据全国范围的调查研究，结合国内外文献进展，本次修订主要有以下几方面： 1．将原标准中的“铅吸收”一项改为“观察对象”。尿铅指标由原 0.39μmol/L(0.08mg/L)调整至 0.34μmol/L(0.07mg/L)，以利于铅中毒的预防。 2．根据临床经验，将尿铅诊断起点值由原0.39μmol/L(0.08mg/L)调整为0.58μmol/L (0.12mg/L)，以减少假阳性。 3．根据3588例的调查中，引进职业接触限值(可接受上限值)与诊断下限值(诊断值)的概念，并以诊断值作为诊断分级的基础，对原标准中的轻度中毒诊断起点作了较大的修改。既体现了单项指标的作用，也突出了多项指标综合诊断的重要性，使诊断更趋合理。 4．在治疗原则中加入了口服络合剂二巯丁二酸。 5．原标准中将多种测定方法列作标准的附录，鉴于多数与现已一致认可的标准化方法相同，故加精简。 本标准的附录A是资料性附录。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准由西安市中心医院负责起草，参加起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、上海市杨浦区中心医院、江西省劳动卫生职业病研究所、沈阳市劳动卫生职业病研究所、湖南医科大学卫生系、广西职业病防治研究所、四川省劳动卫生职业病防治研究所、上海市疾病预防控制中心、株洲冶炼厂职工医院、绍兴市防疫站、甘肃省白银公司劳动卫生研究所、上海市第六人民医院、景德镇市劳动卫生职业病防治所、镇江市卫生防疫站、浙江省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心统计研究室。 本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。 职业性慢性铅中毒诊断标准 Diagnostic Criteria of Occupational Chronic Lead Poisoning
急性铅中毒一例
口服减肥中药致急性铅绞痛一例 邱泽武孙成文王英彭晓波 军事医学科学院附属医院消化科 全军中毒救治专科中心住院病房（100071） 铅中毒导致腹绞痛已有报道，但口服个体中医自制的减肥中药致重症铅中毒性腹绞痛未见报道，本院曾收治一例，现报导如下： 患者女性，25岁，因“恶心、呕吐伴腰髋部疼痛10天，腹绞痛2天”于2006-8-29日入院。既往体健，患者于2006-8-15自服个体诊所配制的减肥胶囊，服用一周后出现恶心、呕吐，同时伴腰髋部疼痛，为持续性钝痛，无放射痛。于当地医院抗炎、止吐治疗后，恶心、呕吐有所缓解后继续服药减肥。28日晚，患者突发剧烈腹痛，疼痛部位不定，发作频繁，约2－3小时一次，每次持续数十分钟，发作时患者蜷曲状、四肢抽搐，先后就诊三家医院，均按胃肠炎或急腹症处理，给予解痉、镇痛治疗后，腹痛无减轻。于8月29日深夜转入我院，查体：血压128/80mmHg，神清，痛苦面容，面色苍白，强迫体位。口唇轻度紫绀，颈软，双肺呼吸音清，心律齐，腹部平坦，腹软，全腹压痛（＋＋＋），无反跳痛及肌紧张，肝脾未及，莫菲氏征（－），移动性浊音（－），肠鸣音减弱。四肢无水肿，双手指感觉减退，四肢肌力Ⅴ级，双膝腱反射正常，病理征（－）。检验：WBC 3.6×109/L，HGB 102g/L, TBIL 22umol/L,ALT 535 umol/L，BUN 3.69mmol/L，淀粉酶35U/L；尿胆原（＋），胆红素（＋），酮体（3＋）；腹平片（－）；腹部超声：胆囊偏大，胆汁少量反流，脾大；盆腔超声（－）。排除急性胰腺炎、泌尿系结石、消化道梗阻等常见疾病。为进一步查找病因，8月30日于我院进行尿毒检：铅11910 ng/ml,砷15160 ng/mL，（正常上限：尿铅80ng/ml，尿砷88ng/ml），同时送检患者口服的减肥胶囊：铅浓度1.3×105ng/ml，砷浓度3.6×105ng/ml。诊断：口服减肥药急性铅、砷中毒。给予血浆置换2次；二巯丙磺钠125mg，3/日及依地酸钙钠1g，2/日，（驱3天停4天为一疗程）；间断静推葡萄糖酸钙及肌注654－2解痉；硫普罗宁、甘舒宁保肝；补充微量元素等治疗，治疗第三日患者腹痛症状完全缓解，可正常进食。查体：全腹无压痛，肠鸣音正常。复查毒检指标：尿铅：5123ng/ml，砷489.6ng/ml，肝功：ALT 103U/L，较前均明显好转。患者完成一周期治疗后，感觉病情好转自动出院，于门诊继续治疗。随访一年半，患者无任何不适。 讨论：铅绞痛在成人中是铅中毒最普遍的首发症状。患者以持续腹部绞痛、阵发性加剧为特点，发作时伴有面色苍白、抽搐，对症解痉、止痛效果差，具有典型的铅绞痛特征。
微生物初级代谢与次级代谢的关系
议微生物初级代谢与次级代谢的关系 摘要： 微生物的代谢，指微生物在存活期间的代谢活动。微生物在代谢过程中，会产生多种多样的代谢产物。根据代谢产物与微生物生长繁殖的关系，可以分为初级代谢产物和次级代谢产物两类。初级代谢产物是指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质。在不同种类的微生物细胞中，初级代谢产物的种类基本相同。此外，初级代谢产物的合成在不停地进行着，任何一种产物的合成发生障碍都会影响微生物正常的生命活动，甚至导致死亡。次级代谢产物是指微生物生长到一定阶段才产生的化学结构十分复杂、对该微生物无明显生理功能，或并非是微生物生长和繁殖所必需的物质，如抗生素。毒素、激素、色素等。不同种类的微生物所产生的次级代谢产物不相同，它们可能积累在细胞内，也可能排到外环境中。其中，抗生素是一类具有特异性抑菌和杀菌作用的有机化合物，种类很多 关键词：微生物初次级代谢初次级代谢产物 一、初级代谢与初级代谢产物 微生物的初级代谢：初级代谢是指微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢，生成维持生命活动所需要的物质和能量的过程。这一过程的产物，如糖、氨基酸、脂肪酸、核苷酸以及由这些化合物聚合而成的高分子化合物（如多糖、蛋白质、酯类和核酸等），即为初级代谢产物。 由于初级代谢产物都是微生物营养性生长所必需，因此，除了遗传上有缺陷的菌株外，活细胞中初级代谢途径是普遍存在的，也就是说它们的合成代谢流普遍存在。在这途径上酶的特异性比次级代谢的酶要高。因为初级代谢产物合成的差错会导致细胞死亡。微生物细胞的代谢调节方式很多，例如通过酶的定位以限制它与相应底物的接近，以及调节代谢流等可调节营养物透过细胞膜而进入细胞的能力。其中调节代谢流的方式最为重要，它包括两个方面：一是调节酶的活性，调节的是已有酶分子的活性，是在酶化学水平上发生的；二是调节酶的合成，调节的是酶分子的合成量，这是在遗传学水平上发生的。在细胞内这两者往往密切配合、协调进行，以达到最佳调节效果。 一般将微生物通过代谢活动所产生的自身繁殖所必需的物质和能量的过程，称为初级代谢，该过程所产生的产物即为初级代谢产物，如氨基酸、核苷类，以及酶或辅酶等。 二、次级代谢与次级代谢产物 一般将微生物与外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢，生成维持生命活动的物质和能量的过程，称为初级代谢。次级代谢是相对于初级代谢而提出的一个概念。一般
幼儿园大班健康教案：防止铅中毒
幼儿园大班健康教案：防止铅中毒 一、教学目标： 1、以安全第一，预防为主为指导方针，营造安全、文明、健康的育人环境。 2、通过教学生增强安全防范意识，教给学生掌握一些简单的安全常识，会处理日常生活中出现的紧急情况，学会自我保护。 3、让学生从平时点滴做起，养成良好的饮食习惯、卫生习惯等，会预防各种常见的传染病的发生。 二、教学内容： 1、保障饮食安全，预防食物中毒及与铅中毒 2、合理用药，远离不良嗜好 三、教学过程： 导入：同学们已经学习了不少卫生方面的知识，今 天老师和同学们一起学习饮食卫生方面的知识。 （一）教学饮食卫生。 1、学生表演小品（音乐） 刚才他们表演精彩吗？大家想一想，刚才那位同学 为什么肚子疼？ 拿出塑料小熊演示什么叫暴饮暴食。如果这样肠胃 负担过大，容易引起消化不良。 2、说明一日三餐的重要性
找学生自由发言。 3、问答题 早晨时间紧，可以不吃早餐吗？ 4、总结。 养成良好的卫生习惯才会有健康的身体。 （二）保障饮食安全，铅中毒。 如何防止铅中毒？ 防止铅中毒应该在饮食、生活习惯等多方面下手。 首先在饮食上不能把报纸等印刷品用作食品包装， 用食品袋盛装食物时，应避免袋上的字画、商标直接与 食物接触，特别是与酸性食品接触；蔬菜水果食用前要 洗净，能去皮的尽量去皮，以防残留农药中的铅成分。 在居住方面，尽量不要采用含铅油漆装饰家中的墙壁、地板和家具等，否则，一旦漆屑剥落，油漆中的铅 极易造成居室铅污染。尽量选用无铅化妆品、染发剂等。 此外，不要在汽车往来多的道路附近散步，因为汽 车尾气和道路周边的土壤中就有大量的铅存在。 膳食中应包含足够量的优质蛋白质，如蛋类、瘦肉、家禽、鱼虾、黄豆和豆制品等应占1/2以上。在膳食调 配时应选择富含维生素的食物，尤其是维生素c较为重要。适量补充维生素c，不仅可补足铅造成的维生素c耗损，减缓铅中毒症状，维生素c还可在肠道与铅结合成
铅中毒历史历史事件
? ?2005年8月，湖南新邵65岁的刘老汉患腹痛及大便异常辗转多处医治无效后来到邵阳市疾控中心就诊，经化验证实为急性铅中毒。 ?2005年2月份，世界卫生组织儿童卫生合作中心在中国十五个城市对17000多名儿童进行了铅中毒调查，其中儿童玩具被列为导致儿童铅中毒的危险因素之一。 ? ?2004年1月1日上午，就上述提到的铅危害，记者在南宁市街头随机采访了20位儿童家长，没有人了解铅危害的严重性，也不清楚铅中毒时会有什么症状表现。 ?因此，2004年8月，鉴于某制造商生产的儿童用五件套折叠组合家具中红色椅子所刷红油漆含铅量超标，可能导致帅童铅中毒，CPSC即与该家具制造商联合发布公告对该产品进行召回。 ?2004年度，按照卫生部该项目五统一（统一设备、统一试剂、统一检测方法、统一操作程序、统一质量控制）的总体要求，内蒙古妇帅保健院儿童保健科在呼和浩特市调查0－6岁儿童1192名，铅中毒率为7〃47％?2004年3月份以来,我市陆续出现铅中毒患者。 ? ?《中医杂志》2003年第10期报道了广州市儿童医院黄援、谭美珍等采用中药治疗儿童早期铅中毒的临床经验。 ?2003年上半年，南宁市妇帅保健院会同广西职业病防治研究所，联合进行了南宁市学前儿童铅中毒流行病调查。 ?2003年8月11日《南宁都市报》报道:南宁市妇帅保健院目前对南宁市700名帅儿园的儿童进行铅中毒调查,发现铅中毒现象普遍存在,个别儿童血铅相对值超标竟达68.4%。 ?观察2003年儿童铅中毒抽样调查结果的分布,所有铅中毒儿童的血铅水帄均属于轻度,与1997年调查结果相比较,血铅水帄有所下降,这可能与近几年来人们对儿童铅中毒有所了解,注意防范有关,但铅中毒的发病率并未下降。 ?2003年底,上海某蓄电池厂接受在岗期间职业性体检的307名铅作业工人中,1人诊断为慢性中度铅中毒,8人诊断为慢性轻度铅中毒。 ? ?据2002年底杭州市对300多名社会儿童进行的血铅水帄检测表明，28〃8％的儿童患有不同程度的铅中毒。 ?为了解目前铅中毒门诊患儿的常见症状及造成铅暴露的主要原因，并摸索铅中毒门诊患儿病史询问和诊疗方案，颜崇淮等对２００２年９月至２０
铅中毒的诊断与预防措施(正式)
编订：__________________ 单位：__________________ 时间：__________________ 铅中毒的诊断与预防措施 (正式) Deploy The Objectives, Requirements And Methods To Make The Personnel In The Organization Operate According To The Established Standards And Reach The Expected Level. Word格式 / 完整 / 可编辑
文件编号：KG-AO-5690-63 铅中毒的诊断与预防措施(正式) 使用备注：本文档可用在日常工作场景，通过对目的、要求、方式、方法、进度等进行具体、周密的部署，从而使得组织内人员按照既定标准、规范的要求进行操作，使日常工作或活动达到预期的水平。下载后就可自由编辑。 1．诊断 根据患者的接触史、临床表现、有关实验室检查、参考接触环境或接触材料的调查检测，进行综合分析，作为诊断对长期在空气中铅超过最高容许浓度环境作业的工人，有临床症状而化验指标仍属正常范围者，可用诊断性驱铅试验，方法同驱铅治疗一日用量，结果按以下诊断标准判定。 （1）铅吸收 有密切铅接触史，尚无铅中毒的临床表现，尿铅≥0.39μmol/L（0.08mg/L）或0.48μmol/24小时（0.1mg/24小时）；或血铅≥2.4μmol/L（50μg/100ml）；或诊断性驱铅试验后尿铅≥1.44μmol/L （0.3mg/L）而＜3.84μmol /L（0.8mg/L）者。 （2）轻度中毒
07海绵共附生微生物次级代谢产物的研究进展_朱伟明
综 述 海绵共附生微生物次级代谢产物的研究进展 朱伟明,张 敏,方玉春,朱天骄,顾谦群 (中国海洋大学教育部海洋药物重点实验室,海洋药物与食品研究所,山东青岛266003) 摘 要: 海绵独特的摄食、滤食系统使其体内体表富集了大量的微生物,这些微生物能够产生多种结构新颖的生物活性物质, 对海绵共附生微生物的研究正在成为开发海洋药物资源的重要内容之一。本文按化合物的生源途径及其结构类型简要介绍近几年来海绵共附生微生物次级代谢产物及其生物活性的研究进展。关键词: 海绵;共附生微生物;次级代谢产物 中图法分类号: S917.1;R282.77 文献标识码: A 文章编号: 1672-5174(2007)03-377-08 海绵属于多孔动物门,是最原始的低等多细胞海 洋动物,全世界约有10000～15000种,我国也有5000种左右。海绵的固着生活方式,缺乏有效的物理性防御,在生存竞争中,海绵积聚或分泌许多对其他生物具有威慑性、攻击性、甚至毒害性的次级代谢产物,这些次级代谢产物往往具有显著的生物活性,包括抗菌、抗肿瘤、抗真菌、抗病毒、抗炎、抗心血管疾病等活性,尤其是具有细胞毒活性的化合物超过10%,明显高于 其他海洋动物(2%)、陆生植物(<1%)[1] 。然而,海绵采集困难、有效成分含量低等因素,制约着开发利用。近年,国外对海绵中次级代谢产物及其生态学作了探讨性研究,结果发现,某些活性物质实际上可能是由与其共附生的微生物产生的,并从海绵共附生微生物中发现许多与其宿主相同或相关的结构新颖、活性独特的次级代谢产物[2-4]。这些发现对运用海洋微生物的发酵工程、基因工程等技术在解决天然海绵资源及活性天然化合物药源问题具有重要意义。因此,对海绵共附生微生物活性次级代谢产物的研究成为国内外研究者的热点。已从海绵共附生微生物次级代谢产物中 发现了含氮化合物(肽类、生物碱类、神经酰胺等)、内酯类、醌类、酮类、聚醚类、萜烯类及甾体等。 作者所在课题组从2003年开始研究海绵共附生微生物及其具有细胞毒活性的次级代谢产物,已从黄渤海及南海海绵中分离获得9株具有细胞周期抑制、细胞凋亡诱导及细胞毒活性的微生物。对其中2株具有强细胞毒活性的微生物的次级代谢产物进行了活性跟踪分离,获得化合物15个(其中新活性化合物3个、高活性化合物2个),结构类型涉及生物碱、甾体、芳香类化合物等。本文将结合本实验室的工作,就近几年来海绵共附生微生物次级代谢产物的研究进展作一综述。 1 含氮类化合物 含氮类化合物主要包括肽类、生物碱,它们大多具有显著的生物活性。 Alteramide A (1),1个新的有细胞毒活性的四环生物碱,是从与海绵Halichondria okadai 共附生的细菌Alteromonas sp .中分离获得的[5]。 从冲绳海绵Halichondria altum 中分离的细菌Vibrio sp .代谢产生1个新的有3个吲哚环聚合的有抗 菌活性的化合物trisindoline (2)[6]。 从采自大西洋的海绵Isodictya setifera 中获得的 通讯作者:guqianq @ouc .edu .cn 基金项目:山东省自然科学基金项目(Z2006C13);国家高技术研究发展计划项目(2003AA624020)资助 收稿日期:2006-07-14;修订日期:2006-11-09 作者简介:朱伟明(1965-),男,教授,博导。E -mail :weimingzhu @ouc .edu .cn 第37卷 第3期 2007年5月 中国海洋大学学报 PE RIODICAL OF OCEAN UNIVERSIT Y OF CHINA 37(3):377～384M ay ,2007
金属加工厂疑似职业性铅中毒案例
某金属加工厂疑似职业性铅中毒案例[目的]调查某金属加工厂铅污染引起的疑似职业性铅中毒案。 [方法]2003年3月12日，对我县某厂工人进行疑似职业性铅中毒检查。[结果]该厂厂房简易，生产设施落后，通风除尘设施简陋，属开放式生产工序，土法提炼铅锭，大量铅蒸汽逸出污染空气，引 起人体中毒，某工人血铅272μmol/L，血锌原卟啉690μmol/L，疑 似职业性铅中毒。 [结论]该厂生产条件落后，铅严重污染空气环境，对工人健康 造成危害，按法律规定对该厂进行行政处罚，限期整改。 铅是一种灰白色质软的重金属，熔点327℃，沸点1620℃，铅 及其化合物在常温下不易氧化，耐腐蚀，加热到400~500℃可大量铅蒸气逸出，并在空气中迅速氧化为氧化亚铅(Pb2O)，凝集为烟尘， 污染空气，铅及其化合物通常以烟尘及粉尘两种形态进入人体呼吸 道→肺胞腔→血循环→症状(中毒)，也可通过消化道进入人体，引 起急慢性铅中毒。
1案情经过 2003年3月12日，我所接韶关市职业病防治院报告，龙归镇某金属加工厂一名工人，因身体不适到该院检查，该工人血铅 272μmol/L(参考值该厂厂房简易，面积约200m2，有拆件、溶解和成品(铅锭)3个车间，生产设施落后，通风除尘设施简陋，属开放式生产工序，生产区和生活区距离只有10m左右，厂内的空气混浊，气味刺鼻，厂方不能提供生产车间的环境卫生监测报告，大部分作业人员没有佩戴个人防护用品。 该厂没有向卫生行政部门申报职业病危害项目。生产流程以废蓄电池为原料，土炼方法提炼铅锭，生产过程大量铅蒸气逸出，在空气中形成铅烟(尘)污染环境，通过呼吸道或消化道进入人体引起铅中毒。 全厂有工人48名，均未进行岗前知识培训，对法律法规及卫生知识知道甚少，个人防护意识差。厂方也未组织工人进行上岗前、在岗期间和离岗时职业健康体检。此次疑似铅中毒的职工黄义荣，男，40岁，以前从没接触过类似的工种，入厂工作5个月后，出现腹痛，纳差，手足麻木等不适感，经医疗部门对症治疗后，症状反
幼儿园大班健康教育活动教案《防止铅中毒》
幼儿园大班健康教育活动教案《防止铅中毒》 Prevention of lead poisoning
幼儿园大班健康教育活动教案《防止铅中毒》前言：本文档根据题材书写内容要求展开，具有实践指导意义，适用于组织或个人。便于学习和使用，本文档下载后内容可按需编辑修改及打印。 一、教学目标： 1、以"安全第一，预防为主"为指导方针，营造安全、文明、健康的育人环境。 2、通过教学生增强安全防范意识，教给学生掌握一些简 单的安全常识，会处理日常生活中出现的紧急情况，学会自我 保护。 3、让学生从平时点滴做起，养成良好的饮食习惯、卫生 习惯等，会预防各种常见的传染病的发生。 二、教学内容： 1、保障饮食安全，预防食物中毒及与铅中毒 2、合理用药，远离不良嗜好 三、教学过程： 导入：同学们已经学习了不少卫生方面的知识，今天老 师和同学们一起学习饮食卫生方面的知识。
（一）教学饮食卫生。 1、学生表演小品（音乐） 刚才他们表演精彩吗?大家想一想，刚才那位同学为什么肚子疼? 拿出塑料小熊演示什么叫暴饮暴食。如果这样肠胃负担过大，容易引起消化不良。 2、说明"一日三餐"的重要性 找学生自由发言。 3、问答题 早晨时间紧，可以不吃早餐吗? 4、总结 养成良好的卫生习惯才会有健康的身体。 （二）保障饮食安全，铅中毒。 如何防止铅中毒? 防止铅中毒应该在饮食、生活习惯等多方面下手。
首先在饮食上不能把报纸等印刷品用作食品包装，用食 品袋盛装食物时，应避免袋上的字画、商标直接与食物接触，特别是与酸性食品接触;蔬菜水果食用前要洗净，能去皮的尽 量去皮，以防残留农药中的铅成分。 在居住方面，尽量不要采用含铅油漆装饰家中的墙壁、 地板和家具等，否则，一旦漆屑剥落，油漆中的铅极易造成居室铅污染。尽量选用无铅化妆品、染发剂等。 此外，不要在汽车往来多的道路附近散步，因为汽车尾 气和道路周边的土壤中就有大量的铅存在。 膳食中应包含足够量的优质蛋白质，如蛋类、瘦肉、家禽、鱼虾、黄豆和豆制品等应占1/2以上。在膳食调配时应选择富含维生素的食物，尤其是维生素c较为重要。适量补充维生素c，不仅可补足铅造成的维生素c耗损，减缓铅中毒症状，维生素c还可在肠道与铅结合成溶解度较低的抗坏血酸铅盐，降低铅的吸收，同时维生素c还直接或间接参与解毒过程，促进铅的排出. 适当吃些驱铅食物很多天然食物都具有一定的防铅和驱 铅功能。牛奶中所含的蛋白质可与铅结合形成不溶物，所含的钙可阻止铅的吸收。茶叶中的鞣酸可与铅形成可溶性复合物随
铅中毒的防治
铅中毒，如何排除最有效？ 在当今众多危害人体健康和儿童智力的“罪魁”中，铅是危害不小的一位。据权威调查报告透露，现代人体内的平均含铅量已大大超过1000年前古人的500倍数！而人类却缺乏主动、有效的防护措施。据调查，现在很多儿童体内平均含铅量普遍高于年轻人；交通警察又较其它行业的人受铅毒害更深。 铅进入人体后，除部分通过粪便、汗液排泄外，其余在数小时后溶入血液中，阻碍血液的合成，导致人体贫血，出现头痛、眩晕、乏力、困倦、便秘和肢体酸痛等；有的口中有金属味，动脉硬化、消化道溃疡和眼底出血等症状也与铅污染有关。小孩铅中毒则出现发育迟缓、食欲不振、行走不便和便秘、失眠；若是小学生，还伴有多动、听觉障碍、注意不集中、智力低下等现象。这是因为铅进入人体后通过血液侵入大脑神经组织，使营养物质和氧气供应不足，造成脑组织损伤所致，严重者可能导致终身残废。特别是儿童处于生长发育阶段，对铅比成年人更敏感，进入体内的铅对神经系统有很强的亲和力，故对铅的吸收量比成年人高好几倍，受害尤为严重。铅进孕妇体内则会通过胎盘屏障，影响胎儿发育，造成畸形等。 有效地防止铅中毒，是当今科学家正在探索、攻克的课题之一。但作为个人，加强防范、进行自我保护是十分重要的。首先不要使用含铅材料做饮食用具，最好不要用彩釉陶瓷制品盛装酸性食物和饮料；尽量少到汽车流量大、铅污染严重的街道或公路旁去，尤其是小孩更应格外注意。汽车驾驶员切勿用嘴吸汽油，在行车中与前车保持一定距离，在拥挤的道路上，最好关上车窗；交通警察、汽车修理工和汽油站工人下班后要及时洗浴、更衣等，定期到医院做检查，以便及时发现和治疗。 总之，要提倡科学、安全用铅，既要在宏观上尽量根除和避免铅的污染源，又要在微观上人人自已保护自己，拒铅于“千里之外”。 铅及其化合物都具有一定的毒性，进入机体后对神经、造血、消化、肾脏、心血管和内分泌等多个系统产生危害。目前常见的铅中毒大多属于轻度慢性铅中毒，主要病变是铅对体内金属离子和酶系统产生影响，引起植物神经功能紊乱、贫血、免疫力低下等。而合理的营养措施能提高抵抗力，增强机体对有毒物质的代谢解毒能力，减少毒物吸收并促使其转化为无毒物质排出体外，有利于康复或减轻中毒症状。