实验四 种子生活力测定
四唑法测定种子生活力
四唑染色法测定种子生活力福建农林大学20**级农学0******* *****一、目的1、了解种子生活力测定方法2、熟悉利用四唑染色法测定种子活力方法及操作方式二、原理有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都发生氧化还原反应，四唑溶液作为一种无色的指示剂，被种子吸收后参与活细胞的还原反应，从脱氢酶接受氢离子，在活细胞里产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲。
化学反应如下：DPNH2 + TTC DPN + TTCH + HCl（辅酶IH2）（四唑）（辅酶Ⅰ）（甲）（氯化氢）HN‐N‐C6H5N‐N‐C6H5∥2H ∥C6H5‐C C6H5‐C +HCl \ \N﹦N+‐C6H5 N＝N‐C6H5无生活力的种子则无此反应。
根据种子的四唑显色的部位，即可区分有活力的部分和死亡部分。
一般鉴定原则是，凡是胚的主要结构及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力的种子。
凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜色和光泽，并且活营养组织部染色成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。
三、试材与设备1、材料大豆种子2、设备烧杯、滤纸、刀片、镊子、恒温培养箱3、试剂 1.0%的四唑溶液四、实验步骤从净度分析后并经过充分混合的大豆种子中，随机抽取30粒，3次重复。
1、种子预湿将选取的大豆种子水浸预湿，室温下浸泡8h，使其充分吸胀。
2、种子处理将吸胀的大豆种子的种皮去除，掰开子叶，露出子胚芽，保持湿润备用。
3、四唑染色将处理好的种子放入烧杯中，加入1.0%的四唑溶液，将种子淹没，然后置于35℃恒温培养箱中避光染色0.5~1 h。
4、观察鉴定将染色后的大豆种子经清水冲洗后进行染色情况的观察鉴定。
胚部全部显成鲜红色、仅子叶远离胚芽部分少量未染色、仅子叶边缘少许未染色，为有生活力的种子。
5、结果计算及处理统计各个重复中有生活力的大豆种子数，并计算其平均值。
五、结果分析根据生活力测定重复间的最大容许差距，得平均生活力百分比在22%的最大容许差距为16%。
种子活力的测定方法
种子活力的测定方法嘿，朋友们！今天咱来聊聊种子活力的测定方法，这可太重要啦！就好像我们要了解一个人是不是活力满满一样，对于种子，我们也得有办法知道它们是不是充满生机呀！你想想看，要是把没活力的种子种下去，那不就白费力气了嘛！就好比让一个病恹恹的人去跑马拉松，那能成吗？所以，学会测定种子活力，那可是相当关键的哦！一般来说，有这么几种常见的方法。
比如说，直观观察法。
咱就直接用眼睛去看呀，看看种子的大小啦、颜色啦、有没有破损啦。
这就像我们看一个人，精神面貌好不好，一眼就能看个大概。
那些饱满、光亮的种子，大概率活力不会差到哪里去。
要是看着就干巴巴、皱皱的，那可得小心咯！还有发芽试验法。
这就像是给种子来一场考试，看它们能不能通过。
把种子放在合适的环境里，看看有多少能发芽。
这就像学校里的考试，能考高分的学生，那肯定是有真本事的呀！如果大部分种子都能顺利发芽，那说明它们活力杠杠的；要是只有寥寥几个发芽，那可就得好好琢磨琢磨了。
还有一种方法是逆境测试法。
啥意思呢？就是给种子来点困难，看看它们能不能扛得住。
比如给它们来点低温啦、高温啦、干旱啦之类的。
这就像让一个人去挑战极限运动，能完成的那肯定是强者呀！如果种子在这些逆境下还能有不错的表现，那这活力绝对是一流的。
再说说活力指数测定法。
这可就有点专业啦，但咱也能搞明白。
就是通过一些指标的计算，来判断种子的活力水平。
就像我们通过各种数据来评估一个人的综合能力一样。
哎呀呀，这些方法都很实用呢！咱可得好好掌握，这样才能选出最有活力的种子，种出茁壮的庄稼、美丽的花朵呀！总之呢，种子活力的测定可不是小事，它关系到我们的种植成果。
就像盖房子得打好地基一样，选对有活力的种子就是成功的第一步。
大家可别小瞧了它哟！以后咱在种东西的时候，都要记得用上这些方法，让我们的种植之路更加顺利，收获满满的喜悦和成果！怎么样，是不是觉得很有意思呀？赶紧去试试吧！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
实验四 种子生活力测定
实验四种子生活力测定一、目的要求应用化学药剂处理和生物化学法快速测定体眠种子生活力并比较不同方法的效果。
二、材料用具（一）材料：水稻和玉米种子（二）药品：2．3—5一氯化三苯基四氮唑和红墨水等。
三、方法步骤（一）四唑盐类法：1．在洁净的水稻种子中，随机数取试样2份，各100粒剥去谷壳，浸入30℃的水中6－8小时。
2．用2．3．5－氯化三苯基四氮唑配制成的溶液，装在棕色玻璃瓶里，保存在黑暗中。
3．将已剥去壳的软化的米粒沿种胚纵切，取其一半浸于已配好的药液中，放于暗处（最好用棕色发芽皿盛放），经24小时可观察结果，如果提高温度可以缩短处理时间（40℃1小时）。
4．观察结果：凡种胚的主要构造染成深红色者为有生活力的种子，凡种胚的主要构造染成浅红色或不染色者为无生活力的种子。
5．具体种子具体做法：取水稻种子样品200粒，去壳，放纸间或水中30℃预湿12h，沿种子侧面胚纵切，放入0.1%四唑溶液35℃染色1-2h，凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。
（二）红墨水染色法：1．从洁净玉米种子随机数取试样二，各100粒，于30℃温水中浸2-3小时。
2．配制红墨水溶液，用红墨水加水配成1：60的溶液。
3．取出软化过的种子，沿胚切成对半，取其半粒种子。
4．浸入红墨水溶液，15分钟后取出，用清水冲洗。
5．观察结果：凡种胚的主要构造不染色或染色浅者为有生活力的种子，凡种胚染色者为无生活力的种子。
四、结果表示与报告计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过附表（生活力测定重复间的最大容许差距）的规定，平均百分率计算到最近似的整数。
种子生活力的测定
欢迎阅读种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1gTTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1染色法测定种子生活力记载表方法种子名称供试粒数有生活力种子粒数无生活力种子粒数有生活力种子占供式粒数的%【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
实验四 种子生活力
③靛红染色
3.方法与步骤
④观察鉴定 将染色后的种子经清水冲洗后立即进行染 色情况的观察鉴定。凡胚部不染色或染成 浅蓝色、胚根尖端或少部分子叶染色的， 为有生活力的种子，凡胚部全部染成蓝色 的，或胚根、胚轴、胚芽、子叶等大部分 染成蓝色的，为无活力种子。 ⑤结果计算与处理 结果计算及容许差距与四唑染色法相同。
（二）靛红染色法
1.原理
有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗 透的物质有选择透性，而无生命力的细胞膜不是半透 性膜，因此无选择透性。靛红能透过死细胞组织使其 染上颜色。因此，染上颜色的种子是无生活力的。根 据胚染色部位和比例大小来判断种子有无生活力。
2.试剂与设备
①材料：玉米、大豆种子 ②设备：烧杯（100ml）、滤纸、刀片、镊子、培养皿
种子生 活力 测定方法
生物化学法
四唑测定法、溴麝香酚蓝法、甲烯蓝法、 中性红法、二硝基苯法
靛红染色法、红墨水染色法、软X射线造影法Fra bibliotek组织化学法
荧光分析法
离体胚测定法
一、实验目的
通过本试验，学习和掌握四唑染色法和靛红染色 法测定种子生活力的原理和方法，比较种子样品生活 力的高低。
二、实验内容
（一）四唑染色法 （二）靛红染色法
①数取试样 从净度分析后并经充分混合的玉米和 小麦种子中，随机数取100粒种子，2 次重复。 将选取的玉米和小麦种子水浸预湿 室温下浸泡24h,使其充分吸胀。 将吸胀后的玉米种子沿胚中线纵向切 开，取半粒，小麦纵切胚和3/4胚乳， 处理后的种子应保持湿润，直到每个重复 都完成为止。
②种子的预湿 ③种子的处理
实验二
种子生活力的测定
实验目的 实验内容与原理 材料及器具 方法与步骤 作业
实验4 种子生活力测定
实验4 种子生活力的测定—红墨水（酸性大红Ｇ）染色法
一、实验原理
有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的酸性大红Ｇ不能进入细胞内，胚部不染色。
而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。
二、仪器与用具
培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
三、试剂
红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。
四、实验方法
1.先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，作为死种子。
2.取浸好的新种子、陈种子和死种子各50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。
3.将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。
4.染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子，直到所染颜色不再洗出为止。
5.对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。
凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子，把测定结果记入表
五、实验操作，实验数据要进行整理，最后要计算结果。
实验四_种子生活力测定
实验四种子生活力测定一、目的要求通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。
二、材料与器具1．材料刺槐种子。
2．器具及药品种子检验板、烧杯、解剖刀、小镊子、手持放大镜、量筒、培养皿、解剖针、玻璃棒、胶匙、四唑等。
三、方法步骤1．靛兰染色法靛兰为兰色粉末，分子式为C16H8N2O2（SO3）2Na2，它能透过种子的死细胞组织染上蓝色，但不能透过活细胞组织，因此活细胞不染色。
所以染成蓝色的种胚是无生活力的种子；未染色的是有生活力的种子。
根据染色部位和比例大小即可判断种子的生活力。
（1）抽取测定样品所需样品从净度测定选出的纯净种子中提取，用四分法随机取出四组种子，每组100粒，此外还要抽取约100粒种子作为后备，以便代替取胚时弄坏的种子。
（2）浸种浸种时间因树种而异。
松属、雪松属的种子在室温下浸3～5天。
刺槐种子可加入沸水不断搅拌至水凉或用锐利的解剖针或小刀等仔细地从胚根后面弄破种皮，然后用室温水浸种24h，浸种过程中更换1～2次水。
（3）取胚以松属树种为例。
浸种后，分组取胚，沿种子的棱切开种皮和胚乳。
取出种胚，种胚取出后放在盛有清水的玻璃皿里，以免种胚干燥萎缩而丧失生活力。
取胚时随时记下空粒、腐烂粒、感染了病害虫害的种粒以及其它显然没有生活力的种子粒数分组记入记录表。
如取胚时由于人为技术而破坏种胚，可以从后备组中任取一粒取胚补上。
（4）溶液的配制及染色用蒸馏水配成浓度为0.05～0.1的溶液。
随配随用，不宜存放过久。
在20℃～30℃条件下约需浸2～3h。
试剂的用量应该能够完全浸没种胚。
将玻璃器皿中清水到出余下种胚，立即注入靛兰溶液，淹没种胚，如有种胚浮在表面，应将其拨沉，（5）观察记载当到达染色所规定的时间之后倒出靛兰溶液。
用清水冲洗种胚，立即将种胚放在垫有潮湿的白纸的培养皿中观察。
根据染色的部位和程度，把胚分为有生活力的和无生活力的两类，记入表5-1。
取胚时受到机械损伤的部分也会染上颜色，但不要把它作为没有生活力的种胚。
种子生活力的测定
种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1 染色法测定种子生活力记载表【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
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实验四种子生活力测定
一、实验目的和要求
了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。
种子生活力：种子潜在的发芽能力。
二、测定原理
四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，为白色粉末，水溶液无色。
染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑发生作用，产生红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。
判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无生活力的种子；不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。
三、材料及器具
材料：刺槐
器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等
四、方法及步骤
1. 测定样品的提取
从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。
3次重复。
同时准备部分种子作为后备。
2. 种子预处理（浸种，同发芽测定）
3. 溶液配制
溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水；
溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水；
缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合;
1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现配现用。
4. 取种胚、染色处理
剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿；
记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。
如取胚时由于人为因素而破坏种胚，可从后备种子中补取；
种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。
置黑暗处，保持30～35℃染色2～3h。
5. 结果鉴定
经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。
有生活力：种胚和胚乳完全着色；
无生活力：种胚和胚乳完全不着色；
根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力（种胚不染色的最大面积不超过1/4子叶末端）。
6. 种子生活力计算
生活力的百分率根据3个重复组计算，不带小数，重复组间最大容许误差与发芽测定的规定相同，最后以3组生活力百分率的平均值为该种子批的生活力。
种子生活力测定记录表。