QuEChERS_高效液相色谱__省略_果中21种植物生长调节剂的残留量_黄何何

１ 实 验 部 分
１．１ 仪 器 与 试 剂
Ａｇｉｌｅｎｔ ６４６０三重四极杆质谱，配 Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ 高效液相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ），Ａｇｉｌｅｎｔ Ｊｅｔ Ｓｔｒｅａｍ 电 喷 雾 离 子 源 （ＡＪＳ ＥＳＩ）；ＩＫＡ Ｔ１８ Ｂａｓｉｃ均 质 器 （德 国ＩＫＡ）；离心机（上 海 安 亭 科 学 仪 器 厂）；固 相 萃 取 装置（美国 Ｓｕｐｅｌｃｏ）；氮吹 仪（美 国 Ｃａｌｉｐｅｒ）；涡 旋 混 匀器（ＩＫＡ３ Ｂａｓｉｃ，德 国ＩＫＡ）；Ｍｉｌｌｉ Ｑ 超 纯 水 系 统 （美国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）。 乙腈 和 甲 醇 （色 谱 纯，德 国 Ｍｅｒｃｋ）；甲 酸 （色 谱 纯，美 国 Ｆｌｕｋａ），乙 酸 铵 （色 谱 纯，美 国 ＴＥＤＩＡ），乙 酸和氢氧化钠为 分 析 纯；实 验 用 水 符 合 ＧＢ／Ｔ６６８２ 规定要求。２１种植物生长调节 剂 标 准 品：氯 化 胆 碱 （ｃｈｏｌｉｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、矮 壮 素 （ｃｈｌｏｒｍｅｑｕａｔ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、 助壮 素 （ｍｅｐｉｑｕａｔ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、丁 酰 肼 （ｄａｍｉｎｏｚｉｄｅ）、 赤霉 素 （ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｃ ａｃｉｄ，ＧＡ３）、６－苄 氨 基 嘌 呤 （６－ ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ，６－ＢＡ）、吲 哚－３－乙 酸 （ｉｎｄｏｌ－３－ ｙｌａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ，ＩＡＡ）、脱 落 酸 （ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ，ＡＢＡ）、１－ 萘 乙 酸 （１－ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ，ＮＡＡ）、噻 苯 隆 （ｔｈｉｄｉａｚｕｒｏｎ）、２，４－Ｄ、调果酸（ｃｌｏｐｒｏｐ）、２，３，５－三 碘 苯甲酸 （２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ，ＴＩＢＡ）、对 氯 苯 氧 乙 酸 （４－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ，４－ＣＰＡ）、氯 吡 脲（ｆｏｒｃｈｌｏｒｆｅｎｕｒｏｎ）、环 丙 酸 酰 胺 （ｃｙｃｌａｎｉｌｉｄｅ）、抗 倒胺 （ｉｎａｂｅｎｆｉｄｅ）、抗 倒 酯 （ｔｒｉｎｅｘａｐａｃ－ｅｔｈｙｌ）、多 效 唑（ｐａｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌ）、烯 效 唑 （ｕｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）和 抑 芽 唑 （ｔｒｉａｐｅｎｔｈｅｎｏｌ）（纯度 均 大 于 ９６％，德 国 Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎ－ ｓｔｏｒｆｅｒ）。 称 取 适 量 标 准 品 ，分 别 用 甲 醇 配 制 成 １００ ｍｇ／Ｌ 的储备液并储存在－４ ℃冰箱中。 根据实验需要用 乙腈稀 释 标 准 储 备 液，配 成 适 当 浓 度 的 标 准 工 作
２０１４ 年 ７ 月 Ｊｕｌｙ ２０１４
研究论文
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ｖｏｌ．３２ Ｎｏ．７ ７０７～７１６
ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１１２３．２０１４．０３００３
ＱｕＥＣｈＥＲＳ－ 高 效 液 相 色 谱 －串 联 质 谱 法 同 时 测 定 水果中２１种植物生长调节剂的残留量
黄何何１，２， 张 缙１， 徐敦明１＊ ， 周 昱１， 罗 佳２， 吕 美 玲３， 陈 树 宾４， 王 连 珠１
（１．厦门出入境检验检疫局，福建 厦门 ３６１０２６；２．福建农林大学，福建 福州 ３５０００２； ３．安捷伦科技（中国）有限公司，北京 １００１０２；４．宁波出入境检验检疫局，浙江 宁波 ３１５０００）
植物生长调节 剂 是 一 类 具 有 植 物 激 素 活 性，可 影响植物生长发育的小分子化合物 。 ［１］ 根据来 源 的 不同，植物生长调节 剂 可 分 为 天 然 植 物 激 素 和 人 工 合成两种。按作用 方 式 可 分 为 生 长 促 进 剂、生 长 延 缓剂和生 长 抑 制 剂。 这 类 化 合 物 在 增 强 植 物 抗 逆 性 、促 进 植 物 细 胞 分 裂 与 生 长 、提 高 产 量 以 及 改 善 品 质等方面发挥着重 要 的 作 用，为 农 业 生 产 和 发 展 做 出 了 巨 大 的 贡 献 。 然 而 ，随 着 科 技 与 农 业 的 发 展 ，植 物 生 长 调 节 剂 的 种 类 越 来 越 多 ，应 用 也 日 益 广 泛 ，盲 目或过量使用的现 象 时 有 发 生，影 响 到 农 产 品 的 品 质 安 全 ，对 公 众 的 健 康 造 成 了 潜 在 的 威 胁 。 因 此 ，针 对植物生长调节剂各国制定了相应的最大残留限量 （ＭＲＬ）标 准，如 日 本 规 定 抗 倒 酯 在 苹 果、西 瓜 中 ＭＲＬ 为０．０２ ｍｇ／ｋｇ，欧盟规定丁酰肼在苹果、西瓜 中的 ＭＲＬ为０．０２ ｍｇ／ｋｇ，中 国 规 定 氯 吡 脲 在 葡 萄 中的 ＭＲＬ为０．０５ ｍｇ／ｋｇ，英 国 规 定 矮 壮 素 在 西 瓜 和葡萄中 ＭＲＬ为０．０５ ｍｇ／ｋｇ等。 目前，国内外有 关 植 物 生 长 调 节 剂 残 留 的 检 测 方法主 要 有 酶 联 免 疫 法 （ＥＬＩＳＡ）［２，３］、气 相 色 谱 法 （ＧＣ）［４－６］、气相色谱－质谱法（ＧＣ－ＭＳ）［７－１１］、高 效 液 相 色 谱 法 （ＨＰＬＣ）［１２－１４］、液 相 色 谱－质 谱 法 （ＬＣ－ ＭＳ）［１５－２２］和离子色谱法（ＩＣ）［２３］。采用 ＥＬＩＳＡ 易 产 生假阳性，运 用 ＧＣ 和 ＧＣ－ＭＳ 时 通 常 要 进 行 衍 生 化的复杂操作，ＨＰＬＣ 的 灵 敏 度 较 低 且 难 以 实 现 确 证分析。 液 相 色 谱－串 联 质 谱 法 （ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）具 有 高 特 异 性 和 高 灵 敏 度 ，是 目 前 广 泛 应 用 的 检 测 方 法 。 国内外已有采 用 ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ 测 定 植 物 生 长 调 节 剂 残 留 的 报 道 ，但 这 些 报 道 所 涉 及 的 种 类 较 少 ，不 能 满 足国内外快速检测样品的要求。本文通过优化质谱 参 数 和 色 谱 条 件 ，考 察 流 动 相 、提 取 方 法 和 基 质 效 应 等因素，建立了 ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ 同 时 测 定 水 果 中 ２１ 种植物生长调节剂残留的分析方法。
＊ 通 讯 联 系 人 ．Ｅ－ｍａｉｌ：Ｘｕｄｍ＠ｘｍｃｉｑ．ｇｏｖ．ｃｎ． 基 金 项 目 ：福 建 省 自 然 科 学 基 金 项 目 （２０１３Ｊ０１０３１）；浙 江 省 公 益 性 技 术 应 用 研 究 计 划 项 目 （２０１２Ｃ３７０７４）． 收 稿 日 期 ：２０１４－０３－０５
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摘要：建立了高效液相色谱－串联质谱法（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）同时测定水果中２１种植物生长调 节 剂 残 留 量 的 方 法。 样 品经 ＱｕＥＣｈＥＲＳ法进行预处理，选用含１％（ｖ／ｖ）乙酸的乙腈 溶 液 提 取，无 水 硫 酸 镁 和 十 八 烷 基 硅 烷 （Ｃ１８）粉 末 净 化，以 Ｃ１８色谱柱分离待测物，采用鞘流电喷雾离子化，正负离子分段扫描和多反应监测模式（ＭＲＭ）检 测，基 质 匹 配标准溶液外标法定量。矮壮素、助壮素、氯化胆 碱、环 丙 酸 酰 胺、氯 吡 脲、噻 苯 隆、抗 倒 胺、多 效 唑、烯 效 唑 和 抑 芽 唑 在０．１０～５００μｇ／Ｌ，丁酰肼和６－苄氨基嘌呤在１．０～５００μｇ／Ｌ，２，３，５－三碘苯甲酸、２，４－Ｄ、调果酸、对氯苯氧乙酸 （４－ＣＰＡ）和抗倒酯在２．０～１ ０００μｇ／Ｌ，赤霉素（ＧＡ３）、脱落酸（ＡＢＡ）、１－萘 乙 酸（ＮＡＡ）和 吲 哚－３－乙 酸（ＩＡＡ）在 １０～ １ ０００μｇ／Ｌ 的 范 围 内 线 性 关 系 良 好，相 关 系 数 均 大 于 ０．９９０。２１ 种 植 物 生 长 调 节 剂 的 方 法 检 出 限 为 ０．０２０～６．０ μｇ／ｋｇ，方法定量限为０．１０～１５．０μｇ／ｋｇ，样 品 添 加 回 收 试 验 的 平 均 回 收 率 为 ７３．０％～１１１．０％，相 对 标 准 偏 差 为 ３．０％～１７．２％ （ｎ＝６）。 该 方 法 快 速 简 便 ，定 量 准 确 ，可 满 足 多 种 水 果 中 ２１ 种 植 物 生 长 调 节 剂 的 残 留 检 测 要 求 。 关 键 词 ：ＱｕＥＣｈＥＲＳ；高 效 液 相 色 谱 －串 联 质 谱 法 ；植 物 生 长 调 节 剂 ；水 果 中 图 分 类 号 ：Ｏ６５８ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１０００－８７１３（２０１４）０７－０７０７－１０
（１．Ｘｉａｍｅｎ Ｅｎｔｒｙ－Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｘｉａｍｅｎ ３６１０２６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｆｕｊｉａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５０００２，Ｃｈｉｎａ；３．Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ （Ｃｈｉｎａ）Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１０２，Ｃｈｉｎａ；
ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｆｒｕｉｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＱｕＥＣｈＥＲＳ；ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏபைடு நூலகம்ａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ （ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）；ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ；ｆｒｕｉｔｓ
４．Ｎｉｎｇｂｏ Ｅｎｔｒｙ－Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｎｉｎｇｂｏ ３１５０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ２１ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｉｎ ｆｒｕｉｔｓ ｂｙ ＱｕＥＣｈＥＲＳ－ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ （ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ） ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １％ （ｖ／ｖ）ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｃｌｅａｎ－ｕｐ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｗｄｅｒ ｏｆ ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ｓｕｌｆａｔｅ ａｎｄ Ｃ１８．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｏｎ ａ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｍｏｎｉ－ ｔｏｒｉｎｇ （ＭＲＭ）ｍｏｄｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐｏｌａｒｉｔｙ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｉｍｅ ｓｅｇｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ－ｍａｔｃｈｅｄ ｅｘ－ ｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒｉｔｉｅｓ ｏｆ ｃｈｌｏｒｍｅｑｕａｔ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｍｅｐｉｑｕａｔ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｃｈｏｌｉｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｃｙｃｌａｎｉｌｉｄｅ，ｆｏｒｃｈｌｏｒｆｅｎｕｒｏｎ，ｔｈｉｄｉａｚｕｒｏｎ，ｉｎａｂｅｎ－ ｆｉｄｅ，ｐａｃｌｏｂｕｔｒａｚｏｌ，ｕｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ ａｎｄ ｔｒｉａｐｅｎｔｈｅｎｏｌ ｗｅｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．１－５００ μｇ／Ｌ，ｄａｍｉｎｏｚｉｄｅ ａｎｄ ６－ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｏｆ １．０－５００μｇ／Ｌ，２，３，５－ ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ，２，４－Ｄ，ｃｌｏｐｒｏｐ，４－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ （４－ＣＰＡ）ａｎｄ ｔｒｉｎｅｘａｐａｃ－ｅｔｈｙｌ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｏｆ ２．０－１ ０００μｇ／Ｌ，ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ（ＡＢＡ），ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｃ ａｃｉｄ （ＧＡ３），１－ｎａｐｈ－