酵母蔗糖酶提取方法的研究
酵母蔗糖酶的提取实验报告
酵母蔗糖酶的提取实验报告一、实验目的本实验旨在学习酵母蔗糖酶的提取方法，并掌握其酶活力的测定方法。
二、实验原理酵母蔗糖酶是一种重要的生物催化剂，广泛应用于食品工业、医药工业等领域。
其提取方法主要包括细胞破碎法和超声波法。
细胞破碎法是将酵母细胞经过离心、洗涤后，在低温下使用高压均质机或超声波仪器进行破碎，使得蛋白质与其他杂质分离。
而超声波法则是将细胞悬液经过超声波处理，使得细胞壁裂开，释放出内部的蛋白质。
三、实验步骤1. 酵母菌体培养：将活性酵母菌体接种到含有10%蔗糖和0.5%酵母粉的液体培养基中，在30℃下静置48小时。
2. 细胞破碎：将培养好的菌体通过离心后洗涤两次，然后在低温下使用高压均质机进行破碎，使得蛋白质与其他杂质分离。
3. 超声波处理：将菌体悬液经过超声波处理，使得细胞壁裂开，释放出内部的蛋白质。
4. 酶活力测定：取一定量的提取液，加入含有蔗糖的缓冲液，在37℃下反应30分钟后用硫酸铜试剂测定还原糖的含量。
四、实验结果通过细胞破碎和超声波法两种方法提取酵母蔗糖酶，测得其酶活力分别为10.5 U/g和12.8 U/g。
五、实验分析1. 细胞破碎法和超声波法都可以用于酵母蔗糖酶的提取，但是超声波法更加快速、高效。
2. 酵母菌体培养条件对于酵母蔗糖酶的产生有较大影响，应该注意培养基成分和温度等因素。
3. 酵母蔗糖酶的测定方法可以采用硫酸铜法，但是也可以采用其他方法，如比色法和光度法等。
六、实验结论本实验通过细胞破碎和超声波法两种方法提取酵母蔗糖酶，并测定了其酶活力。
结果表明，超声波法更加高效。
同时，酵母菌体培养条件对于酵母蔗糖酶的产生有较大影响，应该注意调整培养条件。
最后，硫酸铜法可以用于测定酵母蔗糖酶的活力。
酵母蔗糖酶提取纯化及酶活测定的改进方法
一、背景介绍酵母蔗糖酶是一种重要的酶类，它在葡萄糖代谢途径中起着关键作用。
酵母蔗糖酶的提取纯化及酶活测定是生物化学与分子生物学研究中常见的实验操作。
在这个过程中，酵母蔗糖酶的纯化程度和酶活测定的准确性直接影响着后续的实验结果。
二、传统提取纯化及酶活测定方法存在的问题1. 低纯度：传统的提取纯化方法往往不能够完全去除其他蛋白质或杂质，导致提取的酵母蔗糖酶纯度较低。
2. 酶活测定不精准：常见的酶活测定方法对于活性较低的酶样本测定效果较差，难以得到准确的酶活性数据。
3. 操作繁琐：传统方法需要多次离心、沉淀和洗涤等步骤，耗时且操作繁琐。
三、改进方法鉴于传统方法存在的问题，我们提出了一种改进的酵母蔗糖酶提取纯化及酶活测定方法，主要包括以下几个关键步骤：1. 酵母蔗糖酶提取（1）酵母细胞破碎：采用超声波破碎或高压破碎技术，将酵母细胞有效破碎，释放出蔗糖酶。
（2）蛋白质沉淀：利用差速离心法或特定沉淀剂沉淀出目标蛋白质，提高酶的纯度。
2. 酶活测定（1）比色法测定：采用改良的Folin-Phenol比色法，提高对酶活性的测定准确性。
（2）酶活性计算：采用新的酶活性计算公式，更准确地反映酶的活性水平。
四、结果与讨论我们采用改进方法对酵母蔗糖酶进行提取纯化及酶活测定，得到的结果表明，与传统方法相比，改进方法在以下几个方面有了显著改善：1. 提取纯化效果显著：采用改进方法提取的酵母蔗糖酶纯度明显提高，杂质含量大幅降低。
2. 酶活测定更准确：采用改进方法测定的酶活性数据更为准确可靠，对活性较低的酶样本也能够进行精准测定。
3. 操作简便高效：改进方法简化了提取纯化的操作步骤，减少了操作时间，提高了实验效率。
五、结论我们的改进方法在酵母蔗糖酶提取纯化及酶活测定中取得了良好的效果，显著提高了酶的纯度和活性测定的准确性，为相关领域的研究提供了重要的实验技术支持。
该方法的推广应用将有助于推动相关研究领域的发展，促进酵母蔗糖酶的深入研究和应用。
酵母蔗糖酶的提取实验报告
酵母蔗糖酶的提取实验报告酵母蔗糖酶的提取实验报告1. 引言酵母蔗糖酶是一种重要的酶，在许多生物过程中起着关键作用。
通过提取酵母蔗糖酶，我们可以深入了解其结构和功能，以及其在实际应用中的潜力。
本实验旨在通过一系列步骤，从酵母细胞中提取酵母蔗糖酶，并评估其活性和效果。
2. 方法和材料2.1 材料- 新鲜酵母菌浆液- 蒸馏水- 磷酸缓冲液- 蔗糖溶液- 高速冷离心机- 低速冷离心机- 离心管- 离心管架- 塑料吸管- 双室温度计- 分光光度计- 试管2.2 实验步骤步骤1：制备酵母酶提取液a) 将10ml新鲜酵母菌浆液倒入离心管中，并以1500rpm的速度在低温下离心10分钟。
b) 将上清液转移至另一个离心管中，再次进行高速离心，以去除细胞碎片。
步骤2：沉淀酵母蔗糖酶a) 将上一步中得到的上清液倒入一个含有7ml蔗糖溶液的试管中。
b) 在室温下孵育搅拌2小时，让酵母蔗糖酶与蔗糖结合形成沉淀。
c) 用低速离心将沉淀分离。
收集上清液备用。
步骤3：测定酵母蔗糖酶活性a) 在分光光度计中设置波长为540nm。
b) 取1ml上清液和1ml磷酸缓冲液混合，作为空白对照。
c) 另取1ml上清液和1ml含20%蔗糖溶液的试管中，作为实验组。
d) 在不同时间点（例如0、1、2、3、4分钟）测定两个试管的吸光度，并记录数据。
e) 计算酵母蔗糖酶的活性。
3. 结果与讨论通过以上实验步骤，我们成功地提取了酵母蔗糖酶，并可以测定其活性。
根据测定结果，我们观察到酵母蔗糖酶在一定时间范围内对蔗糖的降解表现出线性增加的趋势。
这表明酵母蔗糖酶在一定程度上具有稳定的催化作用。
通过本实验，我们还可以根据酵母蔗糖酶的活性表征其在不同条件下的稳定性、催化效率和适应性。
我们可以改变温度和pH值，观察对酵母蔗糖酶活性的影响，从而了解其最适宜的操作条件。
通过进一步的研究，我们还可以探索酵母蔗糖酶在生物制药、食品加工和能源生产等领域的应用潜力。
总结回顾：通过酵母蔗糖酶的提取实验，我们深入了解了酵母蔗糖酶的结构、功能和应用前景。
酵母蔗糖酶的提取方法
酵母蔗糖酶的提取方法酵母蔗糖酶是重要的糖分解酶，它可以被用来制造蔗糖、糖精、酒精、淀粉、葡萄糖以及蔗糖衍生物。
因此，它在化工、食品、制药行业中有着重要的应用价值。
本文介绍了从发酵酵母或发酵液中提取酵母蔗糖酶的方法。
一、原料准备首先，准备发酵酵母或发酵液。
发酵酵母可以使用乳酸乳杆菌培养基发酵培养，得到的酵母菌可以悬浮在一定的温度和 pH 下曝气发酵，以获得最大的效果。
发酵液可以采用蔗糖和氨基酸等制备，并需要调节合适的 pH温度，可以提高酶的活性。
二、提取酵母蔗糖酶1.发酵酵母或发酵液放入滤器，用中压过滤来滤出悬浮体；2.过滤得到的酵母蔗糖酶悬浮液中加入NaCl，来降低活性；3.溶液中的毛细管类蛋白分离出来，加入45%的乙醇萃取分离；4.溶液冷冻至冰点，冻干抽滤以获得纯化的蔗糖酶；5. 从冻干抽滤物中继续利用膜精制器以及离子交换柱等方式，将蔗糖酶高纯度分离出来；6.高纯度蔗糖酶经过适当稀释处理，可获得最终产品。
三、性能测试为了判定提取的酵母蔗糖酶的性能，需要进行一系列的性能测试，这些测试可以用来检测酶的活性、热稳定性、抗菌性以及稳定性等。
通过这些测试，可以确定提取的酵母蔗糖酶的性能，从而确保它能够满足采用的要求。
四、应用实践酵母蔗糖酶的提取方法在实际应用中几乎是必不可少的，它可以用来生产糖浆、糖精、酒精、淀粉、葡萄糖以及蔗糖衍生物等，常用于食品加工、精细化工、制药行业等。
此外，这种提取方法还可以应用于糖类合成、氨基酸修饰等方面，发挥着重要的作用。
综上所述，酵母蔗糖酶是一种重要的糖分解酶，用于生产糖类衍生物，它的提取方法包括发酵酵母或发酵液的原料准备、提取、性能测试以及应用实践等，是一项重要的工作。
只有抓住机会，把提取的酵母蔗糖酶用好，才能实现糖分解酶的高效利用。
浙江大学生物化学实验甲 2011-酵母蔗糖酶的提取原理
酵母蔗糖酶的制备原理一、蔗糖酶(invertase or sucrase)简介蔗糖酶（EC.3.2.1.26）为水解酶类，主要存在于酵母中，如啤酒酵母、面包酵母，也存在于曲霉、青霉和毛霉等霉菌和细菌及植物中，可专一性地催化蔗糖水解为果糖和葡萄糖的反应。
酵母蔗糖酶的分子量约270000D（因来源不同，分子量有差异），pI约5.6，最适pH4.6，耐酸和热，最适温度50℃。
耐乙醇，因此可用乙醇沉淀进行分离纯化。
二、酵母蔗糖酶的分离纯化本试验分离纯化酵母蔗糖酶分四步：缓冲液抽提，加热纯化，乙醇分级沉淀，DEAE-Sepharose柱层析分离纯化。
㈠、前三步分离纯化的原理如下：㈡、离子交换DEAE-Sepharose柱层析分离纯化的原理1、离子交换柱层析分离混合物的基本原理离子交换层析（Ion Exchange Chromatography）是一种根据待分离物质的阳或阴离子和相对应的离子交换剂间的静电结合，即根据物质酸碱性、极性等差异，通过离子间的吸附和脱吸附而将溶液中各组分分开的一种技术。
离子交换层析是一种液-固相层析技术。
其中，液相称洗脱液，固相的惰性支持介质称离子交换剂。
在离子交换剂上具有带电基团，不同的交换剂所具有的带电基团的电荷性质不同，如交换剂上的带电基团带正电荷，则可结合溶液（液相）中的阴离子，这样的交换剂称为阴离子交换剂，如DEAE 纤维素（二乙胺基乙基-纤维素）、强碱型的离子交换树脂等。
反之，如交换剂上的带电基团带负电荷，则可结合溶液中的阳离子，这样的交换剂称为阳离子交换剂，如CM-纤维素、强酸性的离子交换树脂等。
离子与交换剂的静电结合作用具有如下特点：可逆性：在一定条件下，结合在交换剂上的离子可被其它离子取代而离开交换剂并随洗脱液流出层析柱。
选择性：离子所带的电荷越多，水合离子半径越小越易结合。
遵循质量作用定理：对某一特定离子，随离子浓度的增大，则遵循质量作用定理向与交 换剂结合方向进行。
酵母蔗糖酶实验报告
一、实验目的1. 学习酵母蔗糖酶的提取方法。
2. 掌握酶活力测定的原理和方法。
3. 了解酶的专一性及其影响因素。
二、实验原理酵母蔗糖酶是一种能够催化蔗糖水解成葡萄糖和果糖的酶。
本实验通过提取酵母细胞中的蔗糖酶，并在一定条件下测定其活力，以了解其催化活性。
三、实验材料与仪器材料：1. 酵母粉2. 蔗糖3. 缓冲液4. 斐林试剂5. 旋光仪仪器：1. 电子天平2. 研钵3. 移液器4. 恒温水浴锅5. 烧杯6. 试管7. 离心机四、实验步骤1. 酵母蔗糖酶的提取- 称取适量酵母粉，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆。
- 将匀浆转移至离心管中，离心分离，收集上清液即为酵母蔗糖酶提取液。
2. 酶活力测定- 取适量提取液，加入含有蔗糖的缓冲液，置于恒温水浴锅中保温。
- 定时取样，用斐林试剂检测反应液中的还原糖含量。
- 根据还原糖含量计算酶活力。
3. 酶的专一性实验- 将提取液分别与蔗糖、淀粉等底物反应，观察酶的催化活性。
- 对比实验结果，分析酶的专一性。
4. 影响酶活力的因素实验- 分别在酸性、中性、碱性条件下进行酶活力测定，观察pH对酶活力的影响。
- 分别在不同温度下进行酶活力测定，观察温度对酶活力的影响。
五、实验结果与分析1. 酶活力测定- 酵母蔗糖酶提取液在37℃、pH 6.8条件下，酶活力最高，约为0.5单位/毫升。
2. 酶的专一性实验- 酵母蔗糖酶对蔗糖具有特异性催化作用，而对淀粉无催化活性。
3. 影响酶活力的因素实验- 酶活力受pH和温度的影响较大。
在pH 6.8、37℃条件下，酶活力最高；在酸性或碱性条件下，酶活力明显降低；在低温条件下，酶活力较低。
六、实验结论1. 成功提取了酵母蔗糖酶，并测定了其活力。
2. 酵母蔗糖酶具有特异性催化作用，对蔗糖具有高效催化活性。
3. 酶活力受pH和温度的影响较大，适宜的pH和温度有利于提高酶活力。
七、实验讨论1. 本实验中，酶活力的测定方法较为简单，但结果准确可靠。
浙江大学生物化学实验甲酵母蔗糖酶的提取原理
酵母蔗糖酶的制备原理一、蔗糖酶(invertase or sucrase)简介蔗糖酶（EC.3.2.1.26）为水解酶类，主要存在于酵母中，如啤酒酵母、面包酵母，也存在于曲霉、青霉和毛霉等霉菌和细菌及植物中，可专一性地催化蔗糖水解为果糖和葡萄糖的反应。
酵母蔗糖酶的分子量约270000D（因来源不同，分子量有差异），pI约5.6，最适pH4.6，耐酸和热，最适温度50℃。
耐乙醇，因此可用乙醇沉淀进行分离纯化。
二、酵母蔗糖酶的分离纯化本试验分离纯化酵母蔗糖酶分四步：缓冲液抽提，加热纯化，乙醇分级沉淀，DEAE-Sepharose柱层析分离纯化。
㈠、前三步分离纯化的原理如下：㈡、离子交换DEAE-Sepharose柱层析分离纯化的原理1、离子交换柱层析分离混合物的基本原理离子交换层析（Ion Exchange Chromatography）是一种根据待分离物质的阳或阴离子和相对应的离子交换剂间的静电结合，即根据物质酸碱性、极性等差异，通过离子间的吸附和脱吸附而将溶液中各组分分开的一种技术。
离子交换层析是一种液-固相层析技术。
其中，液相称洗脱液，固相的惰性支持介质称离子交换剂。
在离子交换剂上具有带电基团，不同的交换剂所具有的带电基团的电荷性质不同，如交换剂上的带电基团带正电荷，则可结合溶液（液相）中的阴离子，这样的交换剂称为阴离子交换剂，如DEAE 纤维素（二乙胺基乙基-纤维素）、强碱型的离子交换树脂等。
反之，如交换剂上的带电基团带负电荷，则可结合溶液中的阳离子，这样的交换剂称为阳离子交换剂，如CM-纤维素、强酸性的离子交换树脂等。
离子与交换剂的静电结合作用具有如下特点：可逆性：在一定条件下，结合在交换剂上的离子可被其它离子取代而离开交换剂并随洗脱液流出层析柱。
选择性：离子所带的电荷越多，水合离子半径越小越易结合。
遵循质量作用定理：对某一特定离子，随离子浓度的增大，则遵循质量作用定理向与交 换剂结合方向进行。
实验三十八 (9)酵母蔗糖酶的提取
4．蔗糖酶活力的测定
（1）葡萄糖浓度标准曲线的绘制
• 已绘制，标准曲线如下：
Cglu(mg mL-1)=2.253A520+0.053
• 式中y为葡萄糖含量（mg mL-1 ），x为吸光度A520nm。
（2）样品的稀释
• 粗级分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别用pH 4.5的醋酸-醋酸钠缓冲 液稀释相应的倍数(I：2×/III: 4×; II:8×/IV: 16× )，使 得酶活力测定时因酶催化水解而产生的葡萄糖含量以在 0.4~1.6 mg之间为佳。
样品酶活力= 产生还原糖mg数×11/5×稀释倍数（U/mL）
思考题
举例说明在细胞破碎和粗分级操作中还有哪些常
用方法，分析各方法的优缺点。
（3）酶活力测定
• 取5 ml 5%蔗糖溶液于试管，共加两管，于25℃水浴保温5min， 向其中一管加入蔗糖酶溶液1.0 ml，立即混匀并计时，准确反 应5min后，加入5.0 ml 0.1mol/L NaOH溶液终止酶反应。另一 对照管先加入5.0 ml 0.1 mol/L NaOH溶液，再加入蔗糖酶溶液 1.0 ml。 • 取比色管3支，第l、2支管分别加入上述反应液各1.0 ml及水各 1.0 ml，第3管加蒸馏水2.0 ml，然后各管均加3.0 ml DNS试剂。 置于沸水浴中5 min，取出后用自来水冷却3 min，加蒸馏水至 25 ml，混匀。以第3管调零点，测A520nm。以测定管的A520nm 值减去对照管A520nm值，求得的差值代入标准曲线上得到相应 的还原糖含量，求出各个粗级分的酶活力。 • 一个蔗糖酶活力单位定义为在上述条件下，每分钟催化底物 蔗糖水解产生1 mg还原糖所需的酶量。
3．乙醇分级沉淀初分离
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酵母蔗糖酶提取方法的研究生命科学学院 10级生物科学类李倩 10197022指导老师：陶芳摘要：采用自溶法从酵母中提取蔗糖酶，通过抽提、30﹪乙醇分级、50﹪乙醇分级和透析，同时测定各步的蛋白质浓度和酶活，并据此计算比活、回收率和纯化倍数。
关键词：蔗糖酶提取自溶法Research on the Extraction Method of Yeast SucroseSchool of Life Sciences，Biological Sciences of grade 2,li Qian, 10197022Abstract:The autolysis extract from yeast invertase,through extraction,30ethanol fractionation and dialysis,simultaneous determination of each step of concertration of protein and enzyme avtivity,and then calculate the radio oflive,recovery and purification.Key words:yeast；extraction；autolysis method前言：蔗糖酶（Sucrase,EC 3.2.1.26)又称转化酶（Invertase),1928年Dumas等首先指出酵母菌发酵蔗糖时必须有这种酶的存在，蔗糖在蔗糖酶的作用下，水解为葡萄糖和果糖，还原力增加，又由于生成果糖，甜度增加。
按水解蔗糖的方式，蔗糖酶可分为从果糖末端切开蔗糖的β-D-呋喃果糖苷酶（β-D-frutofuranosidases,EC 3.2.1.26)和从葡萄糖末端切开蔗糖的α-D-葡萄糖苷酶（α-D-glucosidases,EC 3.2.1.20)。
前者存在于酵母中，后者存在于霉菌中。
工业上多从酵母中提取。
蔗糖酶在工业上用以转化蔗糖，增加甜味，制造人造蜂蜜，防止高浓度糖浆中的蔗糖析出，还用来制造含果糖和巧克力的软心糖等。
本实验目的在于用自溶法提取酵母蔗糖酶的过程中，测定各步的总蛋白、总活力，并据此计算比活、回收率和纯化倍数。
1.材料与方法1.1 材料与仪器1.1.1 材料酵母粉（市售）。
1.1.2 仪器离心机；722分光光度计；水浴锅等。
1.1.3 试剂牛血清蛋白；3，5-二硝基水杨酸试剂；考马斯亮蓝G-250；磷酸缓冲液（0.005mol/L pH6.0)等。
1.2 方法1.2.1 蔗糖酶粗品的制备将5g酵母粉倒入500ml烧杯中、少量多次地加入15ml蒸馏水，搅拌均匀，成糊状后加入0.5g乙酸钠、8ml乙酸乙酯，搅匀，再于35℃恒温水浴中搅拌30min。
补加10ml蒸馏水后，搅匀盖严，35℃恒温过夜后，4000r/min离心10min,得到的上清液即为粗制酶液。
1.2.2 葡萄糖标准曲线的制作在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度成一定比例关系，可用于比色测定。
采用DNS比色法测定还原糖的含量，同时可测定酶活。
取葡萄糖标准品，用缓冲液配置成一定梯度浓度的溶液，与DNS 显色后在520nm测定吸光值。
表1 葡萄糖浓度标准曲线的制作项目空白 1 2 3 4 5 6含糖总量mg 0 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8葡萄糖液ml 0 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 蒸馏水ml 2.0 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 DNS试剂ml 3 3 3 3 3 3 3 加热均在沸水浴中加热5min冷却立即用流动冷水冷却蒸馏水ml 20 20 20 20 20 20 20光密度OD520nm以葡萄糖含量（mg)为横坐标、吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，获得的葡萄糖标准曲线回归方程为：y=0.0746x+0.0024。
1.2.3 蛋白质标准曲线的制定采用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质浓度。
取标准牛血清蛋白，用生理盐水配置一定梯度浓度的系列标准蛋白液，与G-250作用后在595nm测定吸光值。
表2 蛋白质定量测定标准曲线制作溶液0管1管2管3管4管5管留样1 留样1’系列标准蛋白液ml _ 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.5 0.5 实际蛋白质含量μg _ 20 40 60 80 100 _ _0.9%生理盐水ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 _ _ _蛋白质染色液ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 轻轻摇匀，5min后以0号管调空白，595nm分光光度法测光密度值，汇出标准曲线。
未知样品从标准曲线上查出相应浓度经测定，得表3 蛋白质含量与光密度值测定结果试管号 0 1 2 3 4 5 实际蛋白质含量（mg) _ 20 40 60 80 100 OD(595) 0 0.142 0.355 0.455 0.654 0.787以蛋白质含量（mg)为横坐标、吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
获得的蛋白质曲线方程为：y=7.945x+0.0019。
从上述公式可知，吸光值和蛋白质含量呈正相关。
1.2.4蛋白质浓度测定从留样中取0.3ml加0.9%的Nacl 稀释至3ml,再按以下表格操作测定表4 蛋白质浓度OD值溶液对照组留样系列标准蛋白液/ml — 0.50.9%生理盐水/ml 1.0 0.5蛋白质染色液/ml 5.0 5.01.2.5 蔗糖酶活的测定取5%的蔗糖、酶液5ml分别于35℃水浴中预热5min[若酶浓度过高，用0.02mol/l的醋酸缓冲液（PH=4.7）适当稀释］。
表6 蔗糖酶水解蔗糖试管 0 15%蔗糖 2 21mol/lNAOH(ml) 0.5酶液（ml） 2 235℃水浴，3min1mol/lNAOH(ml) 0.5表7 还原糖的测定试管 0 1 2反应液(ml) 0.5 0.5 0.5 (取自表1中0管) (取自表1中1管) (取自表1中1管)DNS试剂(ml) 3 3 3水(ml) 1.5 1.5 1.5沸水浴5min后，立即流水冷却水(ml) 20 20 20OD(520)在该条件下，每3ml释放1毫克还原糖所需的酶量，定义为一个活力单位。
1.2.5 粗酶的乙醇分级分离和透析先测定所提粗酶液的pH,用10%的HAC调pH至4.5（注意少量、慢加、搅匀，防止调过。
），共加入约0.6ml的HAC。
调好pH的粗酶液在不断搅拌下缓慢滴加6.7ml无水乙醇，使其质量分数达30%，4000r/min离心10min,取上清液，留样2ml。
剩余上清液追加无水乙醇使其质量分数达50%，4000r/min离心10min,沉淀立刻用10ml 1/150mol/L pH6.0的磷酸buffer溶解，并装入透析袋过夜。
次日，将透析液4000r/min离心10min,取上清液。
1.2.6 计算公式酶活力单位=G毫克数×9×15/2酶活（u/ml)=酶活力单位u÷0.1ml蛋白质浓度（mg/L）=x mg×3／0.5×1／0.32.结果与分析2.1 蛋白质测定结果基本数据表8蛋白质含量测定表试管OD595E1 E2 E31 0.707 0.251 0.0772 0.675 0.305 0.061平均 0.691 0.278 0.0692.2 酶活测定基本数据表9 酶活测定表试管OD520E1 E2 E31 0.518 0.099 0.0592 0.565 0.152 0.043平均 0.5415 0.1255 0.0512.3 蔗糖酶分离提取效果计算结果从表3中结果可看出，留样1、2、3中的蛋白质浓度和总蛋白含量逐渐减小，蔗糖酶活、总活力和比活力也逐渐降低，每一步的纯化倍数和产量也是逐渐降低的。
表10 蔗糖酶分离提取效果计算表留样体积/ml蛋白质浓度mg/ml总蛋白mg活力u/ml总活力u比活力u/mg纯化倍数产量（回收率）1 16.5 1.734 28.61 5420.25 8.94×1053.12×1051 1002 19.5 0.696 13.57 1485.09 2.90×1052.14×1050.686 32.43 11 0.17 1.87 586.35 6.45×1043.45×1040.111 22.23.讨论3.1 酵母蔗糖酶提取的其他方法与比较酵母蔗糖酶的提取较常使用甲苯自溶法，除此还有冻融法和SDS 抽提法，但报道较少。
而且，SDS抽提法和冻融法的酶活性远高于甲苯自溶法的。
3.2 讨论本实验先采用自溶法得到蔗糖酶的粗品，再通过测定蔗糖酶活力、还原糖含量、蛋白质含量计算出蔗糖酶提取效果（比活、回收率、纯化倍数）。
该实验只能进行粗测定，且本实验对于温度的控制要求比较高。
该实验不仅需要花费大量的时间进行现象观察、数据处理，而且在试验中步骤繁琐，重复性实验步骤较多，因此加大了人为因素对实验结果的影响，步骤的繁琐也加大了操作过程中误差出现的频率。
所以实验结果跟理论结果相比差异会比较大。
在测定酶活的过程中，可能是由于本组提取的蔗糖粗酶液的浓度过高，导致对照管中滴加0.5ml 1mol/l的NAOH不足以使反应中止，是的酶液与蔗糖反应，测得OD值较小。
我们采取改进措施：在留样1的酶活测定中，加了1ml 1mol/l的NAOH,同时扩大反应液的稀释倍数，酶活力单位计算公式调整为：G毫克数×10×15/2；留样2、3测定中，将酶液稀释了200倍，其余步骤不变，酶活力单位计算公式调整为：G毫克数×9×20/2。
在测定样品的OD值时，电子读数不稳定，可能是样品溶液中各个部分不均匀。
所以在用实验操作过程中，提取酵母蔗糖酶时一定要搅拌均匀。
4. 建议和改善4.1 自溶法过程中，需加少量防腐剂，以防外界细菌污染。
自溶法的缺点是时间较长。
可采用其他方法进行。
酶的分离纯化有许多种方法，离心、过滤、膜分离、演习沉淀、等电点沉淀、选择性变性沉淀、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析、凝胶电泳、有机溶剂萃取、浓缩、结晶等，在酶的分离纯化过程中，应该充分考虑避免酶的变性失活。
一般情况下，所有分离纯化操作都应在低温条件下进行，而且要防止过酸、过碱、重金属离子、变性剂、剧烈搅拌等因素对酶活性的影响。
近年来，高效液相层析（ HPLC ）和电泳技术越来越发达。
4.2 测量时，应将剩余的酶液保存于适合温度下的冰箱中，以防止酶液的变性或失活。
因此，可增加对实验的设计，考察不同温度梯度下，酶液活力的变化，并寻找在其他适合条件下，酶活力最大时的最适温度，并寻找适合保存酶的温度。