粗多糖的检验方法 Microsoft Word 文档
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
多糖含量测定方法
多糖含量的测定粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定，还原糖用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定，多糖含量 = 总糖 - 还原糖。
1、总糖含量测定实验原理：多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙黄色溶液，在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
试剂：浓硫酸（分析纯）、5%苯酚溶液（分析纯）、标准葡萄糖。
操作步骤：①制作标准曲线：准确称取105 ℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1 mg/ml 的标准溶液，用蒸馏水分别配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/ml。
1 ml标准液分别加入 5% 苯酚溶液1 ml，并迅速加入浓硫酸5 ml，静置10 min。
摇匀，30℃放置30 min后于490nm测定OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线。
②样品含量测定：吸取1.0ml样品液，按照上述步骤操作测定OD490，并代入标准曲线计算样品的总糖含量。
2、还原糖含量实验原理碱性条件下，DNS可与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
此物质在煮沸条件下成棕红色，且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。
据此可通过测定OD值确定还原糖含量。
试剂及配制：浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
DNS显色液：称取3.25g DNS溶于少量蒸馏水中并转移至500ml容量瓶中，加入2mol/L的NaOH溶液162.5ml，再加入7.5ml的丙三醇，摇匀，加蒸馏水定容至500ml，摇匀。
操作步骤①标准曲线制作：在6支试管中分别加入1mg/ml葡萄糖标准溶液0.00ml，0.10ml，0.20ml，0.30ml，0.40ml，0.50ml，补蒸馏水至0.5ml，然后加入1 / 2DNS试剂1.5ml，充分混匀。
置于沸水浴中煮沸5min，然后迅速流水冷却，并分别向试管中加入4ml蒸馏水，混匀。
在540nm处读OD值。
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1、方法原理粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。
2、主要设备和仪器设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）试剂葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。
3、测定步骤3.1、最大吸收波长的选择精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0 mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。
以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。
用721分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。
3.2、标准曲线的绘制精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。
以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。
用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。
结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3,Y=0.9997(n=6)。
3.3、含量测定3.31、多糖的提取与精制取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。
粗多糖含量测定方法学验证
粗多糖含量测定方法学研究资料一、仪器与试药 (1)二、方法的研究 (2)1.检测波长的测定 (2)2.样品及对照制备方法 (2)三、方法学验证 (3)1.线性 (3)2.精密度实验 (4)3.稳定性实验 (4)4.重复性试验 (5)5.中间精密度实验 (5)6.准确度试验 (6)芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。
主要研究资料如下：一、仪器与试药1、仪器(1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）；(2) 离心管：50ml；(3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）；(4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）；(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计；(6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；(7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；2、试药(1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1；(3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为；(4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。
(6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。
现用现配。
3、试样v1.0 可编辑可修改(1) 样品颗粒：XXXXX 有限公司提供。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
粗多糖的检验方法(卫生部内统法)
粗多糖的检验方法（卫生部内统法）1.方法原理食品中高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中水溶性粗多糖含量。
2.检测设备和材料本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
2.1.乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。
2.2.氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,加入固体硫酸钠至饱和，备用。
2.3.铜储备液：称取3.0gCuSO4 5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解稀释至1L，混匀，备用。
2.4.铜试剂溶液：取铜储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
2.5.洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液：10ml氢氧化钠溶液，混匀。
临用新配。
2.6.硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
2.7.苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存一月。
2.8.葡聚糖标准储备溶液：精密称取相对分子质量5X10²干燥至恒重的葡聚糖标准0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含10.0mg葡聚糖。
2.9.葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含葡聚糖0.10mg。
2.10.分光光度计2.11.离心机（3000r/min)2.12.旋转混匀器3.样品收集和准备3.1.试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100ml容量瓶中,加水80ml左右,于沸水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。
多糖测定
附录C（规范性附录）：多糖含量测定方法
C.1 粗多糖的提取
称取生命PACK产品中棕色胶囊内容物和白色胶囊内容物5g精密至0.0001g，置圆底烧瓶内，加入100毫升的水，回流提取4小时，乘热过滤，再重复上述实验1次，合并滤液，加热浓缩，用80%乙醇醇沉过夜，离心干燥，称重，即得粗多糖样品。
C.2 标准曲线的制备
称取105˚C干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，精密至0.0001g，至100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度（每1ml中含无水葡萄糖0.6mg）。
精密吸取该溶液0.1,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml，分别置50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
精密吸取上述各浓度的标准溶液2ml，于具塞的试管中，加入4%苯酚 1.0ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0ml，摇匀，于40˚C水浴中保温30分钟后，移至冰水浴中，放置30分钟，取出后于490nm处，测定吸光度A（以第一份为空白）。
以吸光度为纵坐标，标准品浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。
C.3 样品多糖浓度的测定
取D.1中制得的样品5mg于5ml容量瓶中，加水并定容，取1ml样品加1ml水于具塞的试管中，以后操作同标准曲线方法，测得的吸收度，由回归曲线（A=0.0444+0.0121C）计算出相当于葡萄糖的浓度。
C.4 样品多糖浓度的计算
F×f×c
多糖含量（%）= ×100
G
F为稀释倍数f为换算因子（f=1）C为样品多糖相当于葡萄糖的含量（μg/ml）G为样品溶液对应的原料的质量。
主要参考标准及文献：
《中华人民共和国药典》2000版
丰朝霞等，分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量。
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
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1、方法原理粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。
2、主要设备和仪器设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）试剂葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。
3、测定步骤3.1、最大吸收波长的选择精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0 mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。
以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。
用721分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。
3.2、标准曲线的绘制精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。
以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。
用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。
结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3,Y=0.9997(n=6)。
3.3、含量测定3.31、多糖的提取与精制取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。
过滤，残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得粗多糖。
3.32、供试液的配制精密称取粗多糖粉末0.2000g，置于50mL容量瓶中，定容，摇匀，即得供试品溶液。
3.33、样品含量测定精密度吸取供试品溶液2.0mL，按“标准曲线绘制”项下方法分别测定吸光度。
结果计算：多糖含量（%）=（C·D）/V×100式中：C－供试液葡萄糖浓度（mg/mL）；D－代试液的稀释因素；V－供试液体积（mL）。
1. 范围本方法规定了保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定方法。
本方法适用于保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定。
本方法最低检出浓度：5.0mg/L。
本方法最佳线性范围：5.0ug/mL—200ug/mL。
2. 原理食品中分子量>10000的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其颜色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖为标准参照物并以此计算食品中水溶性粗多糖含量。
3．试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
3.1乙醇溶液(80%):20mL水中加入无水乙醇80mL,混匀。
3.2氢氧化钠溶液(100g/L):称取100g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1L,加入固体无水硫酸钠至饱和,备用。
3.3铜试剂储备液:称取3.0gCuSO4.5H2O,30.0g柠檬酸钠,加水溶解并稀释至1L, 混匀备用。
3.4铜试剂溶液：取铜储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
3.5洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液，10mL氢氧化钠溶液，混匀，临用新配。
3.6硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
3.7苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存一月。
3.8葡萄糖标准储备溶液:精密称在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖标准0.5000g,加溶解,并定容至50mL,混匀,置冰箱中保存。
此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。
3.9葡萄糖标准使用液:吸取葡萄糖标准储备液1.00mL,置于100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀,置冰箱中保存。
此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。
4．仪器4.1分光光度计4.2离心机4.3旋转混匀器5. 分析步骤5.1标准曲线制备:精密吸取葡萄糖标准使用液0.00,0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00 mL(相当于葡萄糖,0.010,0.020,0.040,0.060,0.080,0.10mg)分别置于25mL比色管中,准确补充水至2.0mL,加入50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋转混匀器上混匀,小心加入浓硫酸10.0mL,于旋转混匀器上小心混匀,置沸水浴中煮沸2min.,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,1cm比色皿测定吸光度值。
以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
5.2试样处理5.2.1试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100mL容量瓶中,加水80mL左右,于水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。
5.2.2沉淀粗多糖:精密取5.2.1滤液5.0mL或液体试样5.0mL,置于50mL离心管中,加入无水乙醇20mL,混匀5min.,以3000rpm离心5min.,弃去上清液。
残渣用80%乙醇溶液数毫升洗涤,离心后弃上清液,反复3—4次操作。
残渣用水溶解并定容至5.0mL,混匀,供沉淀葡聚糖。
5.2.3沉淀葡聚糖:精密取5.2.2溶液2mL置于20mL离心管中,加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL，铜试剂溶液2.0mL,沸水浴中煮沸2min.,冷却后以3000rpm离心5min.,弃去上清液。
残渣用洗涤液数毫升洗涤,离心，弃去上清液,反复3次操作,残渣用100mL/L硫酸溶液2.0 mL 溶解并转移至50mL容量中,加水稀释至刻度,混匀。
此溶液为试样测定液。
5.3试样测定:精密吸取试样测定液2.0 mL置于25 mL比色管中,加入50g/L苯酚溶液 1.0 mL,在旋转混匀器上混匀后,小心加入浓硫酸10.0mL后于旋转混匀器上小心混匀,置沸水浴中煮沸2min.,冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处,以试剂空白为参比,1cm比色皿测定吸光度值。
从标准曲线上查出葡萄糖含量,计算试样中水溶性粗多糖含量。
同时作试样空白实验。
5．4 分析结果表述试样中水溶性粗多糖的含量按式（5.4.1）计算。
5．4．1计算式中: x—试样中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖计),mg/g;m1---试样测定液中葡萄糖的质量,mg;m2---试样空白液中葡萄糖质量,mg;m---试样质量,g;V1---试样提取液总体积,mL;V2---沉淀粗多糖所用试样提取液体积,mL;V3---粗多糖溶液体积,mL;V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积,mL;V5 --试样测定液总体积, mL;V6---测定用试样测定溶液体积,mL。
5．4．2 结果表示计算结果保留两位有效数字。
6. 技术参数回收率：不同食品中不同浓度加标回收的回收率为87.8～110.8%。
精密度：同一试样10次测定结果的RSD为5.8%。
干扰因素：测定过程中避免碳水化合物的玷污干扰。
粗多糖的测定粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4•5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。
5、测定步骤（1）样品处理a、样品提取：取胶囊内容物2.0g混匀，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
b、沉淀粗多糖：准确吸取a项终滤液5.0mL或液体样品以3000r/min 离心5min，弃去上清液。
残渣用80%（体积分数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3~4次。
残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖。
c、沉淀葡聚糖：准确吸取b项终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液。
残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%（体积分数）硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
此溶液为样品测定液。
（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液 1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。