省卫生厅申请书F剖析
申请书卫生部模板
尊敬的卫生部领导：您好！我谨代表我国广大人民群众，向您提交这份申请书，恳请贵部对我国医疗卫生事业的发展给予关注和支持。
在此，我们先对贵部多年来为我国医疗卫生事业所做出的贡献表示衷心的感谢！随着我国经济的快速发展，人民生活水平的不断提高，人们对健康的需求也越来越高。
医疗卫生事业作为关系国计民生的重要领域，其发展水平直接影响到国家的整体实力和人民的生活质量。
然而，当前我国医疗卫生事业仍存在一些突出问题，如资源分布不均、服务质量参差不齐、医疗费用过高等，这些问题严重制约了人民群众的就医体验和健康水平。
为进一步推动我国医疗卫生事业的发展，提高人民群众的健康福祉，我们特提出以下建议：一、优化医疗卫生资源配置。
建议贵部进一步加大对基层医疗卫生机构的投入，提升基层医疗卫生服务能力，使人民群众在家门口就能享受到优质医疗服务。
同时，鼓励和支持社会力量参与医疗卫生事业，形成多元化的投资格局，提高医疗卫生服务的供给质量和效率。
二、加强医疗卫生人才队伍建设。
建议贵部加大对医疗卫生人才的培养和引进力度，特别是针对基层医疗卫生机构，要提高待遇，改善工作条件，吸引更多优秀人才投身医疗卫生事业。
此外，要加强医疗卫生人员的培训和考核，提高医疗服务水平。
三、完善医疗卫生服务体系。
建议贵部推动医疗卫生服务体系改革，构建以人民群众需求为导向的服务体系，提升医疗服务便捷性和满意度。
加强医疗信息化建设，实现医疗资源互联互通，让人民群众享受到更加智能、高效的医疗服务。
四、控制医疗费用过快增长。
建议贵部深化医疗服务价格改革，合理调整医疗服务价格，减轻人民群众看病负担。
同时，加强对药品市场的监管，坚决治理药品不合理价格，确保药品安全、有效、实惠。
五、加强医疗卫生宣传和教育。
建议贵部加大医疗卫生知识的宣传力度，提高人民群众的健康素养，培养健康生活方式。
加强对医疗卫生政策的解读，让人民群众更好地了解和参与医疗卫生事业的发展。
我们相信，在贵部的高度重视和大力支持下，我国医疗卫生事业必将取得更为丰硕的成果，为广大人民群众带来更加美好的生活。
进卫生部申请书1000字左右
进卫生部申请书1000字左右尊敬的卫生部：我是来自某某地区的一名普通民众，特此写信给您申请卫生部的支持和帮助。
作为基层居民，我深知卫生部在维护人民健康和促进社会发展方面的重要作用。
在此，我想就某些问题和困扰向您反映，并希望卫生部能够关注并给予相应的支持。
首先，我想提到的是卫生设施和医疗资源的不足。
由于有些地区基础设施不完善，例如农村地区，医疗资源不足以满足居民的需求。
很多农村地区的卫生站条件落后、设备陈旧，严重制约了基层医疗服务的质量。
此外，一些偏远地区居民很难获得远程医疗服务。
因此，我希望卫生部能够增加对农村地区卫生站的资金支持，改善卫生设施和设备，提高基层医疗服务的水平。
同时，我也希望卫生部能够加大对远程医疗的投入，提供更便捷的医疗服务。
其次，我想关注的是健康教育和疾病预防的不足。
随着社会发展和科技进步，人们对健康的认识越来越重视，但仍存在一些问题。
一方面，很多地区的公共健康意识不够高，对疾病的预防和健康习惯的养成缺乏正确的认识。
另一方面，传统健康教育方式的局限性也限制了信息的传播效果。
因此，我希望卫生部能够增加对地方健康教育的指导和支持，推动建立更加科学、全面的健康教育体系，加强对公众健康知识的普及和宣传。
再次，我想提及的是重大传染病的防控。
近年来，新冠肺炎疫情的爆发给全球造成了巨大的冲击，也对各国卫生体系提出了更高的要求。
我希望卫生部能够进一步加强对重大传染病的防控，提高应对突发疾病的能力和水平。
在这方面，我建议卫生部加强国际合作，与其他国家卫生部门建立更紧密的合作关系，分享疫情防控经验和信息，共同应对全球卫生挑战。
最后，我想谈谈关于药品价格和医疗费用的问题。
近年来，药品价格和医疗费用的上涨使得很多人难以承担医疗费用。
尽管国家已经出台了一些政策控制药价和医疗费用的上涨，但仍然存在一些问题和困难。
我希望卫生部能够进一步加大对药品价格和医疗费用的监管力度，确保人民能够享受到合理的医疗费用。
总之，作为基层公民，我始终关注着卫生部的工作，并希望通过这封申请书，能够对卫生部的工作提出一些建议和期望。
申请书卫生部500字
申请书卫生部500字尊敬的卫生部领导：首先，我向您表示最诚挚的敬意。
我是一名热爱医学事业的大学生，现就读于某医学院，怀着对卫生部工作的无限热爱和渴望，我特此向贵部门申请。
首先，我对卫生部的工作充满了敬意和崇敬。
卫生部是国家卫生事业的最高行政部门，负责制定和执行全国卫生政策，协调卫生资源，推动卫生事业的发展和改革等重要职责。
这是一份充满着责任感和使命感的工作，能够为人民群众的健康事业做出贡献。
作为一名医学生，我深深地感受到健康对于每个人的重要性，我希望能够通过自己的努力，为人民的健康贡献一份力量。
其次，我自认为具备了申请卫生部工作的能力和资质。
作为一名医学生，我在专业知识和技术方面具备了良好的基础。
我在学习期间，在医学院的倡导下，积极参与实践活动，如义诊、送医送药等，提高了自己的综合素质和实践能力。
同时，我还通过临床实习和科研项目的参与，对医疗机构的运作有了更深入的了解，并初步熟悉了公共卫生管理和政策运作等方面的知识。
此外，我性格开朗、待人真诚，善于沟通和协作，这是一名卫生部工作人员必备的素质。
最后，我对卫生部工作充满了激情和渴望。
卫生部作为国家卫生事业的最高领导机构，其工作涉及到全国人民的健康福祉，具有重大的社会影响和责任。
我立志成为一名对社会有所贡献的医务工作者，以国家和人民的健康为己任。
我相信，只有通过在卫生部的工作中，不断提高自己的专业技能和管理能力，才能更好地为人民群众的健康事业服务。
在申请卫生部工作的这一过程中，我深感无比的荣幸和责任。
如果贵部门能给予我一个展示自己才华和担当的机会，我将全身心地投入到工作中，发挥自己的所长，尽一切努力为卫生部工作的发展做出应有的贡献。
再次感谢贵部门给我提供这次申请的机会，期待能够有机会与您共事，为国家和人民的健康贡献自己的一份力量。
谢谢。
此致敬礼！申请人：XXX。
卫生部申请书200
卫生部申请书200卫生部申请书200尊敬的卫生部相关负责人：我是某某医院的医务人员，今向贵部门提交此次申请书，希望得到贵部门的支持与帮助。
我所在的医院是一家市属综合性医院，服务于广大市民，囊括门诊、急诊、住院、手术等多个科室，每天接待大量病患。
然而，我们目前面临着一些困境，急需卫生部的援助。
具体来说，我们存在以下几个方面的问题：首先，医院的设备陈旧落后。
卫生部在过去几年的医院设备更新计划中，我们未能获得相应的资金支持。
目前，大部分设备都已经使用了十几年，技术水平已经无法跟上现代医疗的发展。
这严重影响了医院的诊疗水平和服务质量，也给医务人员带来了艰巨的工作压力。
其次，医院的医疗用品储备严重不足。
由于近年来市场价格飞涨，医疗用品的采购成本大幅上升，我们的财力无法承受这一压力。
经常出现医疗用品短缺的情况，尤其是急需的药品和消耗品，临危受困，给医生和患者带来了巨大的困扰。
卫生部希望能够提供必要的支持，缓解我们的用品短缺问题。
第三，医院卫生环境需要改善。
随着医院工作量的增加，临床床位的使用频率加大，病区维护和清洁工作变得尤为重要。
然而，由于医院的财务困境，无法雇佣足够的清洁人员，导致医院的卫生环境没有得到应有的保障。
我们希望卫生部能够帮助解决这一问题，派遣清洁人员进行定期清洁和消毒工作，确保医院的卫生环境达到标准。
最后，医院的医生培训资金不足。
医学领域的科技更新速度非常快，医生们需要通过参加学术会议、课程培训等方式不断学习新知识、新技术，提高自身的专业水平。
然而，我们的医院经费有限，无法支持医生们参加这些培训活动。
我们希望卫生部能够为医生提供更多的培训资金，帮助他们不断学习、提升。
综上所述，我所在的医院急需卫生部的援助。
我们需要资金更新陈旧设备、增加医疗用品储备、改善医院卫生环境，还需要加大对医生的培训资金支持。
希望卫生部能够审慎考虑我们的申请，并给予我们必要的支持和帮助。
衷心感谢您对我所在医院的关注和支持！此致某某医院申请人：某某医务人员日期：20XX年XX月XX日。
卫生部申请书100字左右
卫生部申请书100字左右尊敬的卫生部领导：您好！我是某某某医院的医务人员，我特此写信申请向卫生部申请经费用于研究与改善医疗卫生设备的申请。
在这封申请书中，我将向您详细阐述我们医院的情况以及我们的需求，并希望能得到卫生部的支持和帮助。
首先，我要感谢卫生部对医疗卫生事业的长期关注和大力支持。
在您的领导下，我们国家的医疗卫生事业取得了长足的发展，我们的医生和护士们也取得了世界级的荣誉。
然而，随着医疗水平的不断提高，我们医院在医疗卫生设备方面也面临许多挑战和困难。
我们医院是一家三甲医院，每天接诊大量的患者，而我们的医疗设备却明显跟不上发展步伐。
例如，我们的手术设备老化严重，无法满足复杂手术的需求，给医生和患者的治疗带来了很大的不便。
此外，我们的实验室设备也需要更新，以便更好地支持医学研究和诊断工作。
此外，由于日益增多的患者需求，我们的病房设备也需要补充和改善。
在当前的医疗卫生环境下，拥有先进的医疗设备对于诊治疾病、提高医疗质量和效率至关重要。
因此，我们非常急切地希望能够得到卫生部的资金支持，用于研究与改善医疗卫生设备。
我们的申请是合理、可行和切实可行的。
首先，我们已经进行了严密的设备需求评估，并与相关厂商进行了有效的合作，以确保设备的质量和性能。
其次，我们医院拥有一支专业的技术团队，他们将负责设备的日常维护和更新，以充分保障设备的正常运行。
最后，我们将定期向卫生部汇报设备的使用情况和效果，并接受卫生部的监督和指导。
希望卫生部能够予以审慎考虑并给予支持。
我们相信，在卫生部的大力支持下，我们的医疗卫生设备将会得到有效的改善和更新，为广大患者提供更好的医疗服务。
谢谢您的关注和支持！此致某某某医院申请人：XXX日期：XXXX年XX月XX日。
山西省卫生厅中医特色专科申报书
附件1：编号：□□□山西省卫生厅中医特色专科申报书申请项目名称：申请单位名称：（盖章）单位负责人：项目负责人：单位通讯地址：单位邮政编码：电话：单位传真：电子邮件：山西省卫生厅中医药管理局二○一三年三月一、医院综合情况二、特色专科基本情况三、申报项目中医特色优势四、专科学术梯队、继续教育及科研情况五、专科建设计划及实施方案（详细内容可做附件七）六、专科建设经费预算七、初审意见附：一、优势病种的中医诊疗方案二、优势病种的中医临床疗效分析与总结三、开展的主要特色疗法四、专科中草药/民族药医院制剂五、专科临床经验整理六、科研课题、科研成果与学术论文情况七、专科建设计划及实施方案填写说明总体要求1.本着实事求是的原则，按照填写说明，认真、仔细填写申报书所列各项内容，表述准确，内容简要。
2.填写内容需打印。
封面部分1.“序号”由省级中医药管理部门填写。
2．申报单位名称——在纸质文本上必须按要求加盖申报单位公章。
3．项目负责人——应填写申报项目所在科室的主要负责人。
专科医院的特色优势重点专科项目，如骨伤科医院的中医骨伤科特色优势重点专科项目、眼科医院的中医眼科特色优势重点专科项目等，项目负责人应是收治重点病种的主要科室或学科带头人所在科室的主要负责人，也可以是医院的负责人。
4．单位负责人——应填写申报单位的主要负责人。
一、医院综合情况部分（一）一般情况1．医院等级——填写通过医院分级管理评审所确定的等级，如三级甲等、二级甲等，等等；如未进行分级管理评审的，填写未评审。
2．人员总数、副高以上人员数、床位总数、医疗设备总值、临床科室数、医技科室数、专科（专病）——填写2012年底的数据。
3．服务量及服务效率——各项数据填写2010—2012年三年的平均数。
4. 主要诊疗和实验设备——填写医院现有主要诊疗、实验设备。
二、特色专科基本情况部分（一）一般情况1．是否是省级重点专科（专病）或建设单位——根据申报项目情况在“是□、否□”的相应栏内“√”，如“是”则在后面填写定点建设时间和/或验收时间。
省卫申请书
省卫申请书申请人信息•姓名：张三•性别：男•年龄：30岁•职业：医生•工作单位：XX医院申请事项本人申请省卫生厅批准开设一家私人诊所，以下是申请事项的详细说明：1. 诊所名称诊所名称为“张三私人诊所”。
2. 诊所地址诊所地址为XX市XX区XX街道XX号。
3. 诊所设备本诊所设备齐全，包括常见的医疗设备、药品、消毒器材等。
4. 诊所人员本诊所将聘请具有相关医疗资质的医生和护士，确保医疗服务的质量和安全。
5. 诊所服务项目本诊所将提供常见的门诊服务，包括但不限于：•一般内科•妇科•儿科•皮肤科•中医科6. 诊所营业时间本诊所将每天营业8小时，具体营业时间为上午8点至下午5点。
申请理由本人作为一名医生，一直以来都有为患者提供更好的医疗服务的愿望。
在XX市，由于公立医院的医疗资源有限，患者看病难、看病贵的问题一直存在。
因此，本人希望能够开设一家私人诊所，为患者提供更加便捷、高效、优质的医疗服务。
同时，本人也深知开设一家私人诊所需要具备一定的资质和条件，因此在设备、人员、服务项目等方面都做了充分的准备，确保诊所能够正常运营，并为患者提供优质的医疗服务。
申请材料清单•申请书•营业执照副本•医疗机构执业许可证•医生执业证书•护士执业证书•诊所设备清单•诊所人员名单及资质证明•诊所服务项目清单结语本人深信，开设一家私人诊所不仅能够为患者提供更好的医疗服务，也能够为社会健康事业做出一份贡献。
因此，希望省卫生厅能够批准本次申请，让本人的医疗梦想得以实现。
卫生部申请书500字左右
卫生部申请书500字左右卫生部申请书尊敬的卫生部领导：我是某某医院的一名医务工作者，特向贵部门申请经费及支持，用于改善我院的卫生条件和提升医疗技术水平，希望您能审慎考虑并给予支持。
我院是一所位于某某地区的三甲医院，担负着该地区医疗救治和健康宣传的重任。
然而，由于经费匮乏和技术力量不足，我们院的卫生条件和医疗水平相对较低，无法有效满足广大人民群众的健康需求，这也是我向贵部门寻求支持的主要原因。
首先，我院的卫生条件亟待改善。
目前，除了部分重点科室外，大部分病房设备老旧，卫生环境不佳。
病房内的床铺、床单、枕头等物品经过多年的使用已经磨损，无法提供舒适和卫生的休息环境。
此外，病房内的卫生设备也需要更新，如洗手盆、浴室等，不仅影响病人的日常生活，同时也容易滋生细菌和病原体。
因此，我们急需贵部门的资金支持，以改善我们的病房设施和卫生条件，为病人提供更好的治疗环境。
其次，我院的医疗技术水平有待提升。
尽管我们拥有一支优秀的医疗团队，但由于长期以来缺乏先进的医疗设备和技术支持，我们无法与国内其他一流医院相比。
目前，我们院在心内科、肿瘤科、儿科等领域的医疗技术还存在较大差距，一些疾病的诊断和治疗难度较大，严重制约了我们的医疗水平和治疗效果。
因此，我们希望贵部门能提供资金支持，购买先进的医疗设备并开展专业培训，以提升我们医院的医疗技术水平。
最后，我还希望贵部门能重视我院的人才培养问题。
目前，我们院的医务人员普遍年轻，经验相对不足。
虽然我们经过专业培训，但在实际工作中仍存在一些不足之处。
我们希望贵部门能提供一些专业培训项目，帮助我们提高专业技能和医疗水平。
同时，我们也希望贵部门能提供一些资金支持，用于人才引进和激励，以吸引一些有经验和实力的医疗专家加入我们的团队，提升我们的整体水平。
综上所述，我院亟需贵部门的资金支持和技术指导，以改善卫生条件、提升医疗技术水平，并加强人才培养。
我们相信，通过贵部门的支持，我们的医院将能够更好地为广大人民群众的健康事业做出贡献。
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湖南省卫生厅科研基金课题申请书(合同书)上 册课题名称: VEGF 反义寡核苷酸抗骨肉瘤血管生成治疗的实验研究申请单位: 课题负责人: 联系电话: 申请日期:计划周期: 2004年 4月至2006 年 12月省卫生厅制一、数据库信息二、课题申请单位、合作单位及分工四、申请单位意见：对申请书的真实性及能否提供基本工作条件等签署意见该课题运用反义基因技术来探寻骨肉瘤治疗的新途径，具有科学创新性，项目负责人同志长期从事骨外科及肿瘤等领域的临床、科研工作，科研水平较高，工作作风严谨，具有良好的科研创新能力，课题组承担过多项研究课题，为本课题打下了良好的科研基础。
该课题如能获得资助，将能按时保质完成。
该项目已列入本部门重点发展项目。
单位负责人（签字）：申请单位（盖章）年月日五、主管部门审核意见：所在市、州卫生局或省直单位审核意见主管部门负责人（签名）：主管部门（盖章）年月日（申请青年基金课题必填）六、专家推荐意见：（两名专家推荐意见）推荐专家（签名）：年月日推荐专家（签名）：年月日七、专家评审意见：专家组负责人（签名）：年月日八、省卫生厅审批意见：主管领导（签章）（公章）年月日九、合同条款订立合同单位：湖南省卫生厅（甲方）课题承担单位（乙方）课题保证单位（丙方）为了保证医学科学研究工作的顺利实施，根据《中华人民共和国技术合同法》及《湖南省医药卫生科学技术研究项目管理办法》的有关规定，商定如下共同条款：第一条本合同一经签定，即具有法律效力。
签约各方应履行本合同规定的义务，不得擅自变更或解除合同。
任何一方提出变更合同原定内容、指标或解除合同，需与签定合同各方共同协商，就变更或解除达成书面协议后，方可执行。
第二条甲方按合同下拨资助经费，检查课题计划执行情况，监督资助经费的使用。
丙方按合同督促乙方按计划实施，并保证乙方按规定使用资助经费，按合同规定偿还经费。
第三条乙方按合同实施课题计划，并于每年十一月底前填报《执行情况报告表》一式二份，向甲、丙方汇报课题执行情况和经费使用情况。
第四条确因客观原因需要调整研究计划或课题负责人者，乙方必须书面报请丙方审查并呈甲方批准后方可调整。
第五条乙方在撰写本课题研究报告、发表论文、申报奖励时，需注明“湖南省卫生厅科研基金资助”字样，重要文件抄报甲方、丙方，课题研究成果的转让须经签约各方协商进行。
第六条本课题属偿资助课题，其偿还经费万元，乙方必须按资助经费偿还计划按期偿还给甲方，逾期不还者，甲方有权追回全部资助经费，并拒绝受理乙方申报的其他课题和成果，扣除或停拨乙方承担课题的资助经费第七条本合同一式四份，甲方、丙方各一份，乙方二份。
本合同自甲、乙、丙三方签字、盖章之日起生效。
合同签署各方：湖南省卫生厅（甲方）部门科技主管：（签章）（公章）年月日课题承担单位（乙方）单位科技主管：课题负责人：财务负责人：开户银行及帐号：（公章）年月日保证单位（丙方）：（系指各附属医院及地市所属单位的主管部门）主管部门负责人（签章）（公章）年月日湖南省卫生厅科研基金课题申请书（合同书）●下册●课题名称：VEGF反义寡核苷酸抗骨肉瘤血管生成治疗的实验研究申请日期：2004-3-2湖南省卫生厅制一．课题研究的科学依据：包括国内研究现状、水平、发展趋势、存在问题、本课题特色、创新之处及立题依据等。
国内外研究现状、水平、发展趋势：反义寡核苷酸能与特定基因杂交，在基因水平干扰致病蛋白的产生过程，即干扰遗传信息从核酸向蛋白质的传递，与传统的化疗药物相比更具有选择性和高效低毒性，是目前抗肿瘤治疗研究的方向。
VEGF反义寡核苷酸（VEGF ASODN）的靶基因VEGF是目前发现的刺激肿瘤血管形成的最关键因子，并与肿瘤的形成和发展密切相关。
研究以VEGF配体系统为靶向的血管生成抑制剂的抗癌新策略已成为热点。
抗血管生成的基因治疗目前还处于实验阶段，主要有以下4条途径：①反义VEGF ②VEGF单克隆抗体③诱导可溶性VEGF受体的产生④阻断VEGF信号传导途径。
骨肉瘤是最常见的骨恶性肿瘤，约占骨原发性肿瘤的20%，传统的截肢和关节离断术，5年生存率仅15%左右，虽然新辅助化疗的运用使骨肉瘤患者的生存率大大提高了，但仍有一定比例的患者对化疗有原发性或继发性耐药，骨肉瘤仍是一种死亡率和致残率高的疾病，因此，寻找更加积极有效的治疗方法十分必要。
Chen等研究了将骨钙素自杀基因治疗与小剂量MTX(40mg/kg)合用的“化疗-基因治疗”方法，为骨肉瘤的治疗提供了新的思路。
近年实验证实，利用特异性抗VEGF单抗或转染VEGF的反义基因能抑制多种肿瘤如脑胶瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、恶性黑色素瘤等的体内生长。
亦有实验表明肿瘤血管生成与骨肉瘤的演进、转移关系密切，抗肿瘤血管生成治疗已成为肿瘤治疗的新模式，为骨肉瘤的治疗提供了新的方向。
迄今为止，国内外关于用反义VEGF抗骨肉瘤血管生成治疗方面的报道甚少。
本研究拟通过反义VEGF对内皮细胞的生长抑制实验、骨肉瘤细胞VEGF的抑制实验，明确不同浓度的反义VEGF对内皮细胞生长的抑制情况及对骨肉瘤VEGF的抑制作用，通过制备人骨肉瘤动物模型，观察VEGF ASODN对骨肉瘤的治疗作用，并与传统化疗药物顺铂（CDDP）进行对照研究，观察裸鼠的一般情况与生存期，肿瘤的转移情况、大小与瘤重、微血管记数、细胞增殖指数、细胞凋亡指数。
明确①反义VEGF抗骨肉瘤血管生成治疗的疗效，和其与传统化疗药物的关系（协同、拮抗），为治疗骨肉瘤寻找新的方法提供可靠的实验依据②反义VEGF抗血管生成作用与细胞增殖、凋亡的关系，从而探讨反义VEGF抗血管生成的机制。
预期具有较高的临床应用价值。
本课题特色、创新之处：（1）设计并合成VEGF的反义、无义寡核苷酸（2）首次采用反义VEGF抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的生长，并探讨了反义VEGF的抑制作用及其与浓度的关系，以寻找最佳的治疗浓度。
（3）应用RT-PCR、Western印迹法检测了不同浓度的反义VEGF对骨肉瘤细胞VEGF表达的抑制情况。
（4）率先采用反义VEGF治疗骨肉瘤，并探讨了其与传统化疗药物合用的疗效（协同、拮抗），可为临床骨肉瘤的抗血管生成治疗提供可靠的实验依据。
（5）首次检测了反义VEGF对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响，从大体形态、细胞水平、超微结构到分子水平，探讨反义VEGF抗血管生成的机制。
立题依据：骨肉瘤是最常见的骨恶性肿瘤，约占骨原发性肿瘤的20%，其治疗是骨科学的一个难题，传统的截肢和关节离断术，5年生存率仅15%左右，虽然新辅助化疗的运用使骨肉瘤患者的5年生存率大大提高了，但仍有一定比例的患者对化疗有原发性或继发性耐药，骨肉瘤仍是一种死亡率和致残率高的疾病。
由于80%的患者在初诊时即已发生转移，20%-30%的患者无论采取何种治疗，预后均极差，故近30年来，骨肉瘤的总体疗效并无很大的提高。
如何进一步提高骨肉瘤患者的疗效和生存率，仍是临床亟待解决的重要课题。
实体肿瘤的增殖和转移依赖于新生血管的产生，如果能够抑制和阻断血管的形成，就可阻止肿瘤的生长和转移，使原发的甚至转移的肿瘤控制在浸润前期。
骨肉瘤是一种富含血管的高度恶性肿瘤，而VEGF是肿瘤血管生成重要的影响因素，VEGF是肿瘤抗血管治疗的一个有效靶点，抗血管生成是一种有潜力的治疗措施。
本课题通过设计与合成VEGF的反义寡核苷酸，探讨不同浓度的反义VEGF 对内皮细胞生长的抑制作用及对骨肉瘤细胞VEGF表达的抑制实验，以寻找最佳的抑制浓度；研究了反义VEGF治疗骨肉瘤的疗效及其与传统化疗药物合用的作用（协同、拮抗），并从形态学到分子水平研究反义VEGF抗血管生成的机制，可为临床骨肉瘤采用反义基因技术抗血管生成治疗提供可靠的实验依据。
二、研究内容：包括研究的具体内容，研究实验方法步骤、主要技术路线（包括工艺流程）、主要技术关键。
1、研究的具体内容：（1）设计并合成VEGF的反义、无义寡核苷酸（2）反义VEGF对内皮细胞的生长抑制实验（3）反义VEGF对骨肉瘤细胞VEGF的抑制实验（4）反义VEGF对骨肉瘤的治疗实验（5）反义VEGF对骨肉瘤微血管密度(MVD)、VEGF表达、细胞增殖指数(PHI)及凋亡指数(AI%)的影响；（6）在光镜下观察不同治疗组骨肉瘤细胞结构的改变，在透射电镜下观察其细胞超微结构的改变。
2、研究实验方法步骤1、根据计算机程序软件设计出互补于VEGFmRNA的反义寡核苷酸序列（AS-ODN），用DNA合成仪合成，电泳纯化，并同时设计与其碱基组成相同，但碱基顺序随机排列的无义寡核苷酸序列（NS-ODN）作为对照。
以上寡核苷酸序列均行硫代磷酸化修饰。
2、内皮细胞生长抑制实验(1) 人骨肉瘤细胞株（OS-723）培养(2) OS-723条件培养液的制备 OS-723细胞常规培养、消化、离心收集后接种至培养板内，待细胞完全贴壁生长后用PBS冲洗，更换无血清培养液，在此无血清培养液中分别加入5、10、15、20μmol/l的反义或无义寡核苷酸；对照组用不含寡核苷酸的无血清培养液。
培养72h后收集各组培养液离心，收集其上清液即为条件培养基，置于-200C低温冰箱中保存。
(3) 人脐静脉内皮细胞原代培养，实验组分反义、无义寡核苷酸组，另设对照组。
实验组分别加入5、10、15、20μmol/l的反义或无义寡核苷酸，并加入各寡核苷酸浓度组相应的条件培养基培养，加照组加入对照培养基与PBS，用MTT 法检测各组内皮细胞的生长情况，计算内皮细胞的生长抑制率（内皮细胞的生长抑制率=[(对照组D值-实验组D值)/对照组D值]×100%）。
3、反义VEGF对人骨肉瘤细胞VEGF的抑制实验（1）人骨肉瘤细胞株（OS-723）培养（2）寡核苷酸的转染采用阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染OS-723细胞。
（3）实验分正常对照组（不进行转染）、脂质体对照组（转染时只加脂质体）、NS-ODN 组（以脂质体转染NS-ODN）、AS-ODN组（以脂质体转染AS-ODN）四组。
取转染后继续培养48h的OS-723细胞，提取总RNA，以紫外分光光度计检验纯度并定量，电泳验证RNA完整性，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测VEGFmRNA表达。
用Western印迹法检测VEGF蛋白的表达。
4、反义VEGF对骨肉瘤的治疗实验(1)建立人骨肉瘤动物模型，实验动物随机分成A、B、C、D、E、F六组，分别用反义VEGF、顺铂（CDDP）、反义VEGF+CDDP、无义VEGF 、无义VEGF+CDDP 、NS进行治疗，观察实验动物的一般情况及生存期、肿瘤的大小、重量及转移情况。
(2) 取肿瘤标本固定、石蜡包埋后行HE染色，光学显微镜下观察；行免疫组织化学染色，检测肿瘤的微血管密度（MVD）、VEGF表达情况、细胞增殖指数和凋亡指数。