抗人羧酸酯酶
抗人羧酸酯酶Ⅱ多克隆抗体、单克隆抗体的制备、鉴定及应用的开题报告
抗人羧酸酯酶Ⅱ多克隆抗体、单克隆抗体的制备、鉴定及应用的开题报告一、研究背景和意义抗人羧酸酯酶Ⅱ(anti-HCE2)是一类可以识别和与人羧酸酯酶Ⅱ(HCE2)结合的抗体，其具有广泛的应用潜力。
HCE2是一种具有羧酸酯酶活性的酵素，其在糖代谢、免疫调节和细胞增殖等生物学过程中发挥重要作用。
因此，anti-HCE2抗体的制备、鉴定及应用可以应用于生物学、医学等领域的研究。
二、研究内容和方法本研究的主要内容为抗人羧酸酯酶Ⅱ多克隆抗体和单克隆抗体的制备、鉴定和应用。
具体方法如下：1. 抗人羧酸酯酶Ⅱ多克隆抗体制备选用HCE2作为抗原，将其纯化并与小鼠、大鼠等动物免疫，通过ELISA等方法筛选得到抗HCE2抗体阳性小鼠。
然后采集小鼠脾细胞并进行融合，最终获得抗HCE2的多克隆抗体。
2. 抗人羧酸酯酶Ⅱ单克隆抗体制备选用HCE2作为抗原，将其用于小鼠的免疫，获得小鼠体内产生的抗HCE2 B细胞，并采用杂交瘤技术将B细胞与骨髓瘤细胞融合，进而获得抗HCE2的单克隆抗体。
3. 抗人羧酸酯酶Ⅱ抗体鉴定利用Western blot、ELISA等方法对抗HCE2抗体进行鉴定，评价其特异性、亲和力等参数。
4. 抗人羧酸酯酶Ⅱ抗体应用利用已获得的抗HCE2抗体开展多种应用，如免疫组织化学染色、细胞免疫荧光等。
此外，也可以利用抗HCE2抗体进行页岩气水力压裂井堵剂剂型的制备研究，探究其在工业方案中的应用。
三、研究预期结果本研究的预期结果如下：1. 成功制备出抗HCE2多克隆和单克隆抗体。
2. 开发出抗HCE2的鉴定方法，评估其特异性和亲和力。
3. 发现抗HCE2抗体的应用潜力，并通过实验验证其实际应用效果。
四、研究可能的不足和解决方法研究可能出现的不足包括：1. 抗体鉴定方面的问题，可能出现假阳性或假阴性结果。
解决方法：增加重复实验，增加鉴定指标检测点，提高操作技能。
2. 抗体制备过程可能出现免疫效果不良等问题。
解决方法：优化免疫方案，适当增加免疫时间和免疫剂量，选择合适的免疫动物。
人羧酸酯酶（CarE）酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书
人羧酸酯酶（CarE）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织等样本中羧酸酯酶（CarE）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人羧酸酯酶（CarE）水平。
用纯化的人羧酸酯酶（CarE）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人羧酸酯酶（CarE），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人羧酸酯酶（CarE）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人羧酸酯酶（CarE）含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
AMPK对脂质代谢调控作用的研究进展
天津医科大学学报Journal of Tianjin Medical University Vol.25.No.5 Sep.2019540第25卷5期2019年9月文章编号1006-8147(2019)05-0540-04AMPK对脂质代谢调控作用的研究进展任静，朱仲玲综述，阎昭审校(天津医科大学肿瘤医院临床药理研究室，国家肿瘤临床医学研究中心,天津市“肿瘤防治”重点实验室,天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津300060)摘要AMPK是能量代谢的中心调控因子，在脂质代谢调节中发挥着至关重要的作用。
本文拟对AMPK调控脂质代谢的作用进行综述，旨在为更好的预防和治疗脂质紊乱相关的代谢综合征及不良反应提供参考。
关键词AMPK;脂质代谢;激活剂中图分类号R969.1文献标志码A脂类是机体储能和供能的主要物质，也是生物膜的重要组成成分。
脂质代谢指生物体内脂类在各种代谢酶的作用下进行多步骤、复杂的生化反应，包括消化、吸收、合成、分解及转运等一系列生理过程,对于维持机体正常的生命活动具有重要意义011。
脂质代谢紊乱是诱发动脉粥样硬化等心血管疾病的重要危险因素。
腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activa ted protein kinase,AMPK)作为能量代谢的调控中枢，能够调节多种脂质代谢相关酶及转录因子，在维持脂质代谢稳态中发挥着极其重要的作用叫本文对AMPK调控脂质代谢的作用做一综述。
1AMPK的结构AMPK是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，以！-,"-和#-亚基组成的异源三聚体的形式广泛存在于真核细胞中031。
!亚基为催化亚基，决定蛋白激酶复合物的活性，其172位苏氨酸(Thr172)为磷酸化激活位点041。
"亚基为AMPK的结构核心，存在"1和"2两种亚型。
当糖原大量储备时，AMPK01糖原结构域与糖原结合,以抑制AMPK活性。
AMP或ATP通过与AMPK的#亚基Bateman 域结合,抑制STK残基Thr172去磷酸化,激活AMPK051。
羧酸酯酶及其在含酯类化合物代谢中的作用
羧酸酯酶（ａ ｏｌ ｔ ａ ，ａｓＥ ． ） 于 ／ Ｃ ｒ ｘ ｓ ｒ ｅＣ Ｅ ，Ｃ３ ． １ ｂ ｅｅｓ １ ．属 折 解老 鼠胰 腺 和 肾中类 固醇 中 的脂 肪 酸酯 『。此外 ， ａ ｓ ４ 】 Ｃ Ｅ 又
叠水解酶家族 ， 在水存在的条件下能够水解代谢带羧基 的 被确 定为 代谢 活化 前药过 程 中的 一个关 键性 酶 ， 可起 到 抑
ｍｅ ｈ ｎ ｓ ｉ ｓ ｃｉ ｉ ｅｍｅａ ｏ ｉ ａ ｄ ｒ ｌ ｎｉ ｓ ｃｉ ｉｅ ｒ ｓｓａ ｃ ． ｎ ａ ｄｔ ｎ ｔ ｅｐ ｓｔ ｅｅ ｆ ｃ ｆ ｈ ｈ ｒ ａ ｅ — ｃ ａ ｉｍ， ｎ ｅ ｔ ｄ ｔｂ ｌ ｍ ｎ ｏ ｅｉ ｎ ｅ ｔ ｄ ｅ ｉｔｎ ｅ Ｉ ｄ ｉ ｏ ， ｈ ｏ ｉ ｖ ｆｅ ｔ ｅｐ ａｍ ｃ ｕ ｃ ｓ ｃ ｉ ｉ ｏ ｔ
维普资讯
第 ４ 卷第 ６期 ６
２０ 年 ６月 Ｏ７
农 药
ＡＧＲｏＣＨＥＭＩ ＣＡＬ Ｓ
Ⅵ）． ６ Ｎｏ ６ １４ ． ．
羧 酸 酯 酶 及 其 在 含 酯 类 化 合 物 代 谢 中 的 作 用
郭 晶 ， 高菊 芳 唐振华 ，
（． 海师范大学 生命与环 境科学学 院 ， １ 上 上海 ２ ０ ２ ； ． ０ １ ３ ２ 中国科学 院 上海生 理生态研究所 ， 上海 ２ ０ ２ ） ００５
ｃ ｔ ｉ ｎ ｄｏ ｎｏ ｎｄ ｅ ｏｎ ａｎｉ ｇ ｅｎ ｇｅ ｕｓａ ｘｏｇ ｎｏ ｍ ｐｏ ｄｓ ｅ ｕｓｃｏ ｕｎ ．Ｔｈｅ ｒ ｎｖ ｖ ｄ ｉ ｅ ｏｘ ｆｃ ｔｏｎ ｏｆｎ ｙ ａ ｅ ｉ ｏｌ ｅ ｎ ｄ ｔ ｉｉ ａ ｉ ｕｍ ｅ ｏ ｎｓ ｃ ｉ ｉ ｓ ｒ ｕｓｉ ｅ ｔｃｄｅ ， ｉ ｃ ｕｄｉ ｙｒ ｔ ｏｉ ，ｏｒ ａｎ ｎ ｌ ｎｇ ｐ ｅｈｒ ｄｓ ｇ ｏｐｈ ｐｈａ ｅｓ ｎｄ ｃａ ｂａ ａ ｅ ．Ｔｈｉ ｅ ｉ ｗ ｏｖｅ ｓ ｅ ｙｍ ｅ ｎｏ ｅｎ ｌ ｔ ｅ ａ ａ ｙｔｃ ｏｓ ｔ ，ａ ｒ ｍ ｔ ｓ ｓｒ ｖ ｅ ｃ ｒ ｎｚ ｍ ｃ ａ ｕｒ ，ｃ ｔ ｌ ｉ
csapase分子量
csapase分子量摘要：一、CASPASE酶简介二、CASPASE酶的分子量三、CASPASE酶在生物学中的应用四、CASPASE酶的研究意义五、总结正文：【一、CASPASE酶简介】CASPASE（Cysteine Aspartate-Specific Protease）是一种半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶，广泛存在于生物体内。
它是一类重要的凋亡调控因子，能够诱导细胞凋亡，参与多种生物过程。
【二、CASPASE酶的分子量】CASPASE酶的分子量因物种和亚型而异。
在人源CASPASE酶中，CASPASE-1、CASPASE-2、CASPASE-4、CASPASE-5的分子量约为35-40kDa，而CASPASE-3、CASPASE-6、CASPASE-7、CASPASE-8、CASPASE-9的分子量约为40-50kDa。
在鼠源CASPASE酶中，分子量也存在类似差异。
【三、CASPASE酶在生物学中的应用】CASPASE酶在生物学中的应用广泛，主要包括：1.细胞凋亡调控：CASPASE酶是细胞凋亡信号通路中的关键执行者，通过激活下游底物蛋白，引发细胞凋亡。
2.免疫调节：CASPASE酶在免疫细胞活化、免疫应答过程中发挥重要作用，如CASPASE-1参与炎症反应。
3.神经系统疾病：CASPASE酶在神经元凋亡过程中发挥作用，与神经系统疾病的发生发展密切相关。
4.肿瘤治疗：CASPASE酶可作为肿瘤治疗的靶点，通过诱导肿瘤细胞凋亡达到治疗目的。
【四、CASPASE酶的研究意义】CASPASE酶的研究意义在于：1.有助于深入了解细胞凋亡及其调控机制，揭示生命现象的本质。
2.为治疗相关疾病提供新思路，如通过调控CASPASE酶活性治疗肿瘤、神经系统疾病等。
3.为生物科学研究提供重要工具，如CASPASE酶抑制剂可用于研究细胞凋亡信号通路。
【五、总结】CASPASE酶是一类重要的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶，具有调控细胞凋亡、免疫反应等多种生物过程的功能。
羧酸酯酶杀虫剂代谢
羧酸酯酶杀虫剂代谢-概述说明以及解释1.引言1.1 概述羧酸酯酶杀虫剂是一类广泛应用于农业和卫生领域的农药，其作用是通过干扰昆虫体内的代谢过程而达到杀虫的效果。
羧酸酯酶作为一种重要的酶类，参与了羧酸酯酶杀虫剂的代谢过程。
因此，对羧酸酯酶杀虫剂的代谢进行深入研究，不仅有助于揭示其作用机制，还能够为农药的合理应用和环境保护提供科学依据。
然而，羧酸酯酶杀虫剂的代谢过程复杂而多样，受到众多因素的影响。
羧酸酯酶杀虫剂既可在昆虫体内经过一系列的反应代谢为无毒的物质以实现解毒，也可被转化为具有更强毒性的代谢产物。
此外，环境因素如温度、湿度、光照等也可能对羧酸酯酶杀虫剂的代谢产生影响，导致其效果不稳定或失去活性。
对羧酸酯酶杀虫剂代谢的认识不仅有助于评估农药的安全性和效果，还能够指导农药的改良和研发工作。
同时，深入研究羧酸酯酶杀虫剂代谢对于环境保护来说也具有重要意义。
通过了解农药在环境中的代谢转化规律，可以更好地预测和评估其在环境中的残留情况，从而采取相应的措施来减少农药对生态系统的影响。
然而，目前对羧酸酯酶杀虫剂代谢的研究还存在一些不足之处。
首先，羧酸酯酶杀虫剂代谢的机制尚不完全清楚，需要进一步深入的研究来揭示其详细的代谢途径和代谢产物。
此外，对羧酸酯酶杀虫剂代谢的影响因素还需要更加全面和系统的研究，以便更好地了解其在不同环境条件下的代谢特点和规律。
综上所述，羧酸酯酶杀虫剂的代谢是一个复杂而重要的研究领域。
通过深入研究羧酸酯酶杀虫剂的代谢机制和影响因素，可以为农药的安全应用和环境保护提供科学依据，也有助于促进农药领域的发展和进步。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分主要介绍了整篇文章的组织结构和各个章节的内容概要。
通过清晰地列举和简述各个章节的主题和目标，读者可以更好地理解整篇文章的逻辑结构和主要内容。
在本篇文章中，结构部分的内容可以按照以下方式编写：文章结构部分的内容：本文主要包含以下章节：引言、正文和结论。
三七总皂苷对羧酸酯酶体外活性的影响
三七总皂苷对羧酸酯酶体外活性的影响QI Qi;WANG Yan;MO Yu-jia;LUO Ju-yuan;YU Xiang-long;LU Yang;DU Shou-ying【摘要】目的:以小鼠肝微粒体为模型,考察三七总皂苷对羧酸酯酶1和羧酸酯酶2活性的影响.方法:采用羧酸酯酶的特异性荧光探针(BMBT,FDA)作为底物,以探针荧光强度变化来表征酶活性变化,并进行抑制动力学评价和体外-体内相关性评价.结果:三七总皂苷对羧酸酯酶1无显著抑制作用,对羧酸酯酶2则为非竞争浓度依赖型抑制,其半数抑制率IC50为17.05 μ,g·mL-1,抑制动力学参数Ki为77.53 μg· mL-1.结论:三七总皂苷对羧酸酯酶2的抑制作用可能造成相关药物体内过程发生变化.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2019(021)006【总页数】5页(P777-781)【关键词】三七总皂苷;羧酸酯酶;非竞争型抑制;药物相互作用【作者】QI Qi;WANG Yan;MO Yu-jia;LUO Ju-yuan;YU Xiang-long;LU Yang;DU Shou-ying【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】R285.5羧酸酯酶(Carboxylesterases，CESs)，属于α/β水解酶超家族成员，是体内重要的Ⅰ相药物代谢酶，在不同种属动物体内普遍存在。
人体内主要为羧酸酯酶1(hCE1)和羧酸酯酶2(hCE2)，这两者氨基酸序列的同源性为48%，在组织分布、底物特异性等方面存在较大差异[1-2]，hCE1在肝脏中高表达[3]，hCE2在小肠和结肠中高表达[4]。
人类与常用实验动物在hCE1和hCE2的分布上也存在显著的种属差异。
羧酸酯酶除参与小分子脂肪酸和胆固醇的运输代谢外[5]，还会直接影响药物的首过代谢(肠、肝)，因药物导致相关羧酸酯酶的表达与活性变化是药-药相互作用的重要原因之一。
烟草甲两个羧酸酯酶基因的克隆及表达模式
第 ４期
朱晓晔等：烟草甲两个羧酸酯酶基因的克隆及表达模式
１３７
ｏｐｍｅｎｔａｌｓｔａｇｅｓａｎｄｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔＣＯ２ ｓｔｒｅｓｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｂｙｕｓｉｎｇｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ （ｑＰＣＲ）． Ｔｈｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｓｏｆｔｗｏｇｅｎｅｓｗｅｒｅ１６９８ｂｐａｎｄ１６９５ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｃｏｍｐｒｉｓｅｄｏｆ５６５ ａｎｄ５６４ａｍｉｎｏａｃｉｄｒｅｓｉｄｕｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅａ ｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｂｏｔｈｏｆｔｈｅｍｈａｖｅｔｙｐｉｃａｌｃｏｎｓｅｒｖｅｄｍｏｔｉｆｓｏｆＣａｒＥｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｂｅｌｏｎｇｔｏβｓｕｂｆａｍｉ ｌｙ，ａｎｄｔｅｒｍｅｄａｓＬｓＣａｒＥＢ１ａｎｄＬｓＣａｒＥＢ２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ：ＭＧ１８９６０１ａｎｄＭＧ１８９６０２），ｒｅ ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｑＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｗｏｇｅｎｅｓｗｅｒｅｂｏｔｈｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｌｌｔｅｓｔｅｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｓｔａ ｇｅｓ，ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｌａｔｅｌｙｌａｒｖａｅｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｅａｒｌｙ ｌａｒｖａｅ，ｐｕｐａｅａｎｄａｄｕｌｔｓ．ＩｎＬ．ｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅｌａｒｖａｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏＣＯ２ｆｏｒ６ｈ，ｔｈｅｍＲＮＡｌｅｖｅｌｓｏｆＬｓＣａｒＥＢ１ ａｎｄＬｓＣａｒＥＢ２ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ． ＷｅｓｐｅｃｕｌａｔｅｄｔｈａｔＬｓＣａｒＥＢ１ａｎｄＬｓＣａｒＥＢ２ｍａｙｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｌａｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏＣＯ２ｓｔｒｅｓｓｉｎＬ．ｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌａｓｉｏｄｅｒｍａｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ；ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ；ｃｌｏｎｉｎｇ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎ；ＣＯ２ｓｔｒｅｓｓ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
作者：武正华, 唐晓波, 王志刚, 纪宏宇, 于磊, 刘慧文, 朱大岭
【关键词】人羧酸酯酶
preparation and characterization of monoclonal antibody against human carboxylesterasesⅱ
[关键词]人羧酸酯酶ⅱ; 单克隆抗体; 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
在蛋白质组学研究中, 单克隆抗体（mab）及其相关技术在蛋白质分子的定性、定量、定位、蛋白翻译后修饰及蛋白蛋白相互研究中具有不可替代的作用。
因而蛋白质组学的研究需要很多特异性好、高质量的mab。
本研究描述了用混合的人肝微粒体蛋白作抗原制备其鼠源性杂交瘤的策略。
mab对应的抗原是用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（malditofms）得到相应的肽质量指纹谱（peptide mass finger print, pmf）, 再通过mascot 在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定的。
人羧酸酯酶ⅱ（carboxylesterasesⅱ, ec 3.1.1.1, hceⅱ）是羧酸酯酶亚家族中的成员, 由550个氨基酸组成, 相对分子质量（mr）为61807。
羧酸酯酶属于b族脂酶, 为一种丝氨酸酶, 在肝脏、小肠、结肠、心脏、脑、睾丸及肾脏等组织中均有表达。
血清中的hceⅱ主要在肝脏中合成, 并通过高尔基体分泌到血循环中[1]。
最近研究表明, hce可作为肝癌的新标志物[2]。
由于目前国际市场上还没有抗hce ⅱ的mab的销售, 为此, 我们应用杂交瘤技术, 制备了抗hceⅱ的mab, 并进行了特性鉴定, 为hceⅱ的纯化, hceⅱ检测试剂盒的研制, 后续制备mab亲和层析柱, 以及肝癌等的研究提供了重要的制剂。
1 材料和方法
1.1 材料 6周龄雌性balb/c小鼠, 由哈尔滨医科大学动物中心提供。
小鼠骨髓瘤细胞系sp2/0为本室保存。
福氏佐剂及3,3,5,5四甲基联苯胺（tmb）购自sigma公司。
即用型sabc免疫组化染色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
hrp山羊抗小鼠igg购自jackson immunoresearch公司。
rpmi1640培养基购自hyclone公司。
peg4000购自北京夏斯生物公司。
ig亚类鉴定试剂盒购自hycult biotechnology bv公司。
免疫沉淀试剂盒购自pierce公司。
硝酸纤维素膜购自biorad公司。
加强化学发光试剂盒（ecl plus）购自amersham biosciences公司。
其他试剂均为国产分析纯。
酶标仪（mk3型）为thermo公司产品。
质谱鉴定由上海基康生物技术有限公司完成。
正常人肝脏组织, 由“人类肝脏蛋白质组计划”基金项目提供。
1.2 方法
1.2.1 人肝脏微粒体蛋白的制备取正常人的肝脏10 g剪碎, 用磷酸钾盐缓冲液反复冲洗除去血红蛋白, 并制成肝匀浆。
将肝匀浆离心3次（依次为10000 g 30 min、 30000 g 60 min及100000 g 60 min）。
取沉淀, 悬浮于含有200 ml/l甘油、 5 g/l胆酸钠、 2 mg/l 抑肽酶、 2 mg/l亮肽素、 1 mg/l胃酶抑素及1 mmol/l苯甲基磺酰氟的磷酸钾盐缓冲液中, 用bradford法进行蛋白定量后, 置-80℃保存备用。
1.2.2 抗hceⅱ的mab的制备采用石晓娟等[3]报道的方法（略有改进）进行免疫。
取1 mg人肝微粒体蛋白加500 μl的去离子水与等量的完全福氏佐剂充分乳化后, 于balb/c小鼠（2只）的背部注射两点, 每点约50 μl, 剩余的腹腔注射。
3周后加强免疫, 剂量同前, 用不完全福氏佐剂充分乳化后, 注射于小鼠腹腔。
以后隔两周加强免疫1次。
从第3次加强免疫起, 每次免疫后7 d, 经尾静脉采血测定抗血清的效价。
共加强免疫4次后, 选择抗血清效价较高的小鼠, 在进行细胞融合前 3 d, 用不加佐剂的人肝微粒体蛋白腹腔注射冲击免疫1次。
细胞融合、亚克隆及腹水的制备均按实验室常规方法进行。
mab腹水的纯化采用proteing免疫亲和层析法[4], 用 amersham aktaprime mab纯化系统进行。
纯化后mab经sdspage分离后, 用biorad quantity one软件分析其纯度。
1.2.4 人肝组织中hceⅱ抗原的免疫组化染色检测载玻片经防脱片剂处理。
将正常人肝
脏的组织冰冻切片于室温风扇吹干后, 用丙酮室温固定10～30 min, 蒸馏水洗。
将切片浸于300 ml/l h2o2甲醇(1∶50)液中, 于室温浸泡30 min灭活内源性过氧化物酶, 以蒸馏水洗3次。
滴加正常山羊血清室温封闭20 min后, 依次滴加mab（37℃ 1 h, pbs洗3次）、生物素化山羊抗小鼠igg（37℃ 20 min, pbs洗3次）及链酶亲和素过氧化物酶复合物（sabc, 同前次）。
加dab显色后, 再加苏木精复染细胞核, 经常规脱水、透明、封片, 观察结果。