细胞凋亡实验技术总结
细胞培养毕业实习报告总结
毕业实习报告总结：细胞培养首先，我要感谢我的导师和实验室的同事们，他们在我的实习期间给予了我无私的帮助和指导。
通过这次实习，我对细胞培养这一领域有了更深入的了解，也积累了宝贵的实践经验。
细胞培养是生物医学和生物技术领域中重要的实验技术，它通过模拟细胞在体内的生长环境，使细胞在体外继续生长和繁殖。
在实习期间，我学习了细胞培养的基本原理和操作技术，包括细胞的复苏、传代、胰蛋白酶消化、细胞计数、铺板等步骤。
我也了解了细胞培养中常用的仪器设备，如二氧化碳培养箱、显微镜、细胞计数仪等。
在实习过程中，我不仅掌握了细胞培养的基本技能，还参与了一些具体的实验项目。
我参与了一项关于细胞凋亡的研究，通过细胞培养技术，我成功地培养了所需细胞，并进行了凋亡实验。
通过观察细胞形态的变化和流式细胞术的分析，我得出了实验结果，并协助导师进行了数据分析和论文撰写。
这个过程中，我不仅学习了实验设计和数据分析的方法，还提高了自己的实验操作能力。
在实习期间，我也遇到了一些挑战和困难。
例如，细胞培养过程中细胞的生长速度较慢，有时需要耐心等待。
另外，细胞的复苏和传代过程中，也有一些技巧需要掌握。
通过请教导师和同事，我逐渐克服了这些困难，并取得了较好的实验结果。
通过这次实习，我不仅学到了专业知识和技能，还锻炼了自己的团队合作和沟通能力。
在实验室中，我与同事们共同合作，互相学习和帮助。
我们也定期进行实验室会议，分享实验进展和心得体会，这让我感受到了团队合作的重要性。
总之，这次细胞培养实习是一次非常宝贵的学习经历。
我不仅掌握了细胞培养的基本技能，还参与了一些具体的实验项目，并取得了较好的研究成果。
同时，我也学会了团队合作和沟通的能力。
我相信这次实习对我未来的学术研究和职业发展将产生积极的影响。
细胞凋亡实验
细胞凋亡Caspase3检测实验小结一．原理Caspase-3在细胞凋亡中起着不可替代的作用，正常细胞中，Caspase-3以32kD的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期，pro-Caspase-3被活化成为具有催化活性的Caspase-3，活化的Caspase-3蛋白，可以激活其他底物蛋白，从而导致凋亡过程。
活化的Caspase-3能够特异性地水解DEVE-X底物。
Ac-DEVE-pNA常用于Caspase-3的检测，细胞凋亡早期产生的Caspase-3可以特异性地水解Ac-DEVE-pNA的肽键，水解后的pNA能够激发发射荧光，根据荧光的强度可以测定Caspase-3，从而反应Caspase-3被活化的程度。
二．试剂配制1.1底物储存液将Ac-DEVE-pNA溶解于DMSO(10mM)1.2底物工作液(2×)50μL底物储存液100μL DTT (1M)400μLEDTA (100mM)10mL Tris Buffer (200mM)调整pH到7.4三．操作方法将经过药物处理的贴壁细胞，用PBS洗两遍，按照6孔板每孔加入100微升裂解液的比例加入Western及IP细胞裂解液裂解液(P0013)，若细胞密度较大可加大裂解液用量。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取20uL 上清用于BCA蛋白定量。
以相同的蛋白上样量，等比例加入Caspase-3底物工作液，室温孵育至少1h，检测混合液405nm波长下的吸光度。
四．STA和CoCl2诱导RGC5细胞凋亡浓度摸索五、流式细胞术检测空白组(不染色) 空白组(单染) 空白组(单染) 空白组(双染) CoCl2+0% FBS CoCl2+2% FBS 凋亡比例：0.65 % 0.29% 3.13 % 16.78% 16.86 % 32.43 %结论：2% FBS+1mM CoCl2处理24h 可以引起RGC5细胞出现较多的凋亡。
细胞凋亡信号通路详细资料与总结
凋亡抑制剂
凋亡促进剂，与 BCL-2 和 BCL-XL 结合 线虫中的凋亡抑制剂，BCL-2 同源物 腺病毒凋亡抑制剂，与 Bax 和 Bak 结合
Bcl-2家族 引自Katja C. Zimmermann等2001
◆当 Caspase8 活化后，它一方面作用 Procaspase3，另一方面使Bid 裂解成 2 个片 段，其中含 BH3 结构域的 C-端片段被运送 到线粒体，与 Bcl-2/Bax 的 BH3 结构域形成 复合物，导致Cyt c释放。Cyt c 与胞质中 Ced4 同源物 Apaf-1（凋亡蛋白酶活化因子 apoptosis protease activating factor）结合并活 Apaf-1，活化的 Apaf-1 再活化Procaspase9， 最后引起细胞凋亡。
解 DNA。 –CAD 为caspase-activated Dnase（脱氧核苷酸酶），存在于胞质中。
细胞色素释 放引起的凋 亡（线粒体 凋亡通路）
死亡受体凋亡通路
fas 又称作 APO-1， TNFR（ 肿瘤坏死因子受体）和 NGF 受体家族。 1993 年人白细胞分型国际会议统一命名为 CD95。 Fas 蛋白（受体）与 Fas 配体组成 Fas 系统，二者的 结合导致靶细胞走向凋亡。
信号转导研究方法
• 免疫共沉淀 • 荧光共振能量转移（FRET） • 荧光漂白恢复 • 荧光相关光谱 • 免疫荧光显微技术 • 电镜显微技术
◆ bcl-2 蛋白，是膜的整合蛋白，主要存在于线粒体外膜、核膜及部分内质 网中。
◆ Bcl-2家族成员都含有1-4个Bcl-2同源结构域（BH1-4），并且通常羧基末 端有一穿膜的结构域 (transmembrane region，TM)。其中BH4是抗凋亡蛋 白所特有的结构域，BH3是与促进凋亡有关的结构域。
细胞凋亡实验报告
细胞凋亡实验报告细胞凋亡实验报告引言：细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，它在维持生物体内部平衡和发育过程中起着关键作用。
本次实验旨在通过细胞凋亡实验，探究不同因素对细胞凋亡的影响，从而进一步了解细胞凋亡的机制和调控。
材料与方法：1. 细胞系：使用人类肺癌细胞系A549作为实验对象。
2. 药物：选择化学药物紫杉醇（Paclitaxel）作为细胞凋亡诱导剂。
3. 细胞培养条件：将A549细胞系在含有DMEM培养基和10%胎牛血清的培养皿中培养，保持在37℃、5% CO2的恒温培养箱中。
实验步骤：1. 细胞培养：将A549细胞系接种于培养皿中，培养至细胞密度达到80%左右。
2. 细胞处理：将培养皿中的培养基抽取，加入不同浓度的紫杉醇处理液，分为高、中、低三个浓度组，每组设置相应的对照组。
3. 细胞观察：将处理后的细胞培养皿放回恒温培养箱中，培养24小时后观察细胞形态和数量的变化。
4. 细胞计数：使用显微镜观察细胞数目，并通过计数室内的细胞数目，计算细胞存活率。
5. 细胞凋亡检测：使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，采用荧光染料标记细胞并进行分析。
结果与讨论：在本次实验中，我们观察到不同浓度的紫杉醇处理后，A549细胞的形态和数量发生了明显变化。
在高浓度组，细胞数量明显减少，细胞形态发生变化，出现细胞收缩和凋亡体的形成。
而在低浓度组，细胞数量减少较少，细胞形态变化不明显。
对照组中，细胞数量和形态均与处理组相似。
通过细胞计数的结果，我们计算出了细胞存活率，并发现随着紫杉醇浓度的增加，细胞存活率逐渐降低。
这说明紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡，并且凋亡率与药物浓度呈正相关。
进一步使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，我们发现在高浓度组中，细胞凋亡率明显增加，而在低浓度组和对照组中，细胞凋亡率相对较低。
这与细胞存活率的结果相一致，进一步验证了紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡的能力。
细胞凋亡是一种高度调控的细胞死亡过程，它在生物体内部平衡和发育过程中发挥着重要作用。
细胞凋亡的检测方法及实验原理
张荣201028010642037 昆明植物研究所一形态学检测1、光学显微镜和倒置显微镜观察法未染色细胞：凋亡细胞体积变小、变形，膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩，变圆，脱落。
染色细胞：姬姆萨染色，瑞氏染色等。
凋亡细胞染色质浓缩，边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状，形成凋亡小体。
2、荧光显微镜检测法—荧光染料例如，碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
选用536nm激发光，细胞核呈红色荧光3、电子显微镜收集细胞，2.5%戊二醛4°C固定24h，1%四氧化锇后固定，丙酮梯度脱水，经包埋剂浸透后环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀和枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察。
凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构。
Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体4、激光扫描共焦显微镜技术FITC-AnnexinV+PI双染，观察凋亡过程中细胞膜PS表面的变化，并区分正常细胞（An-PI-），早期凋亡细胞（An+PI-），晚期凋亡细胞及坏死细胞（An+PI+），细胞收集过程中出现的损伤细胞（An-PI+）二、细胞凋亡的生化及分子生物学检测1、DNA断裂检测法如使用琼脂糖凝胶电泳检测，细胞凋亡时，核染色质凝聚，染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂。
凋亡早期可形成50～300kbp的DNA大片段，晚期核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180～200bp整数倍的寡核苷酸片段。
2、膜联蛋白V法磷脂酰丝氨酸（PS）位于正常细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜表面。
Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与PS高亲和力。
将Annexin-Ⅴ进行荧光素或生物素标记，以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
凋亡实验的结果解读
凋亡实验的结果解读
"凋亡实验"这个术语在生物学和医学领域中并没有一个明确的
定义。
通常情况下，凋亡是指细胞按照程序性死亡的一种形式。
如果你能提供更多上下文或者具体的实验条件和方法，我将更容易帮助你解读实验结果。
在细胞生物学中，凋亡是一种细胞自我毁灭的过程，通常发生在细胞受到损害、寿命到期、或者在发育和组织修复过程中。
实验可能会使用某些指标来检测凋亡，例如：
DNA断裂：凋亡细胞的DNA通常会出现断裂，这可以通过凝胶电泳等技术来观察。
磷脂外翻：在凋亡过程中，磷脂会从细胞内翻转到细胞外，可以通过荧光标记的磷脂来观察。
凋亡相关蛋白：比如凋亡酶千层饼（caspases）、Bcl-2家族等凋亡相关蛋白的表达水平。
在医学研究中，凋亡实验可能会涉及到疾病治疗、药物筛选等方面。
凋亡的增加或减少可能对疾病治疗有重要影响。
要解读凋亡实验的结果，你需要查看实验设计、使用的细胞类型、处理条件以及选择的观察指标。
例如，如果你使用了特定药物，你可
能会观察到药物引起了细胞的凋亡。
这种情况下，你可以评估药物对细胞的治疗效果。
总体而言，解读凋亡实验的结果需要综合考虑实验的多个方面，包括实验设计、技术手段和相关背景知识。
如果你有具体的实验结果或问题，欢迎提供更多信息，我将尽力帮助你解读。
细胞凋亡实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除细胞凋亡实验报告篇一：实验14细胞凋亡的诱导和检测实验14细胞凋亡的诱导和检测20世纪60年代人们注意到细胞存在着两种不同形式的死亡方式：凋亡（apoptosis）和坏死（necrosis）。
细胞坏死指病理情况下细胞的意外死亡，坏死过程细胞膜通透性增高，细胞肿胀，核碎裂，继而溶酶体、细胞膜破坏，细胞内容物溢出，细胞坏死常引起炎症反应。
细胞凋亡apoptosis一词来源于古希腊语，意思是花瓣或树叶凋落，意味着生命走到了尽头，细胞到了一定时期会像树叶那样自然死亡。
凋亡是细胞在一定生理或病理条件下遵守自身程序的主动死亡过程。
凋亡时细胞皱缩，表面微绒毛消失，染色质凝集并呈新月形或块状靠近核膜边缘，继而核裂解，由细胞膜包裹着核碎片或其他细胞器形成小球状凋亡小体凸出于细胞表面，最后凋亡小体脱落被吞噬细胞或邻周细胞吞噬。
凋亡过程中溶酶体及细胞膜保持完整，不引起炎症反应。
细胞凋亡时的生化变化特征是核酸内切酶被激活，染色体DnA被降解，断裂为50～300kb长的DnA片段，再进一步断裂成180～200bp整倍数的寡核苷酸片断，在琼脂糖凝胶电泳上呈现“梯状”电泳图谱(DnALadder)。
细胞凋亡在个体正常发育、紫稳态维持、免疫耐受形成、肿瘤监控和抵御各种外界因素干扰等方面都起着关键性的作用。
1．细胞凋亡的检测方法凋亡细胞具有一些列不同于坏死细胞的形态特征和生化特征，据此可以鉴别细胞的死亡形式。
细胞凋亡的机制十分复杂，一般采用多种方法综合加以判断，同时不同类型细胞的凋亡分析方法有所不同，方法选择依赖于具体的研究体系和研究目的（表？）。
表凋亡的检测方法（引自DL斯佩克特等，20XX）形态学观察方法：利用各种染色法可观察到凋亡细胞的各种形态学特征：（1）DApI时常用的一种与DnA结合的荧光染料。
借助于DApI染色，可以观察细胞核的形态变化。
（2）giemsa染色法可以观察到染色质固缩、趋边、凋亡小体形成等形态。
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
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细胞凋亡实验技术总结
一形态学检测
1、光学显微镜和倒置显微镜观察法
未染色细胞:凋亡细胞体积变小、变形，膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩，变圆，脱落。
染色细胞:姬姆萨染色，瑞氏染色等。
凋亡细胞染色质浓缩，边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状，形成凋亡小体。
2、荧光显微镜检测法-荧光染料
例如，碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。
选用536nm 激发光，细胞核呈红色荧光。
3、电子显微镜
收集细胞，2.5%戊二醛4°C 固定24h，1%四氧化锇后固定，丙酮梯度脱水，经包埋剂浸透后环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀和枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察。
凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构。
Ⅱa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。
4、激光扫描共焦显微镜技术
FITC-AnnexinV+PI双染，观察凋亡过程中细胞膜PS表面的变化，并区分正常细胞(An-PI-)，早期凋亡细胞(An+PI-)，晚期凋亡细胞及坏死细胞(An+PI+)，细胞收集过程中出现的损伤细胞(An-PI+)。
二、细胞凋亡的生化及分子生物学检测
1、DNA 断裂检测法
如使用琼脂糖凝胶电泳检测，细胞凋亡时，核染色质凝聚，染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂。
凋亡早期可形成50~300kbp 的DNA 大片段，晚期核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180~200bp 整数倍的寡核苷酸片段。
2、膜联蛋白V 法
磷脂酰丝氨酸(PS)位于正常细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS 可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜表面。
Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD 的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与PS高亲和力。
将Annexin-Ⅴ进行荧光素或生物素标记，以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
3、细胞凋亡的酶Caspase检测
检测Caspase活力可用免疫杂交技术分析酶原的加工和底物水解的产物，或用人工底物检测酶活力，也可对活化的Caspase做亲和标记。
例如分析底物的水解产物，PARP(多聚ADP-核糖聚合酶)第一个被认识的caspase-3底物，它的相对分子质量为116000，水解后形成相对分子质量为85000 及相对分子质量为25000 的两个片段，用抗相对分子质量为85000 片段的抗体检测细胞是否发生凋亡。
4、线粒体膜势能变化的检测
线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱反映了线粒体内膜电负性的增高或降低流式细胞仪检测细胞的荧光强度或荧光显微镜观察，拍照正常细胞中, Rh123 能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质，荧光强度减弱或消失。
而凋亡时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位的崩溃, Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿色荧光。