实验三 酵母RNA的提取及含量测定
实验三_酵母RNA的提取及含量测定
酵母RNA的提取及含量测定一、实验目的与要求1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法；2、了解测量核酸浓度不同方法的原理；3、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法；4、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理1、RNA提取原理：由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。
一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验是最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。
向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA 达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
2、测定RNA含量的方法：（1）紫外吸收法原理：核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260纳米处有最大吸收，且在一定浓度范围内光吸收值与浓度成正比（0—50微克/毫升），符合朗伯-比尔定律。
优点样品用量少，不用显色，测完后样品可以继续使用。
（2）地衣酚显色法：核酸与浓盐酸共热，放生降解，生成糠醛，后者与地衣酚反应，在三价铁离子或二价铜离子作用下，生成鲜绿色的复合物，670纳米处有最大吸收，且光吸收值与浓度成正比，符合朗伯-比尔定律。
缺点反应特异性差，易受干扰。
（3）定磷法：在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中无机磷酸生成磷钼酸，当有还原剂存在时，磷钼酸立即被还原生成蓝色的还原产物--钼蓝，其最大吸收在660纳米处，当无机磷含量在每毫升1-25微克范围内，光吸收与含磷量成正比。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三是关于酵母核糖核酸（RNA）的提取和测定的实验。
1. 提取酵母RNA：
a. 取一份含有酵母的培养基培养液，将其转移到离心管中。
b. 将离心管在12000转/分钟的速度下离心5分钟，将沉淀（酵母细胞）收集到离心管底部。
c. 弃去上清液，加入适量的稀释RNA保护剂，如TRIZOL 或RNeasy试剂。
d. 快速颠倒离心管以完全溶解酵母细胞，并使RNA与纯化试剂进行结合。
e. 加入氯仿溶液，再次快速颠倒离心管混合，形成水相和有机相层。
f. 离心管在12000转/分钟的速度下离心15分钟，使两个相分离。
g. 将水相（含有RNA）转移到新的离心管中，并加入同等体积的异丙醇。
h. 用洗涤液和乙醚混合洗涤RNA样品，最后用无水乙醚洗涤RNA。
i. 最后，将RNA用无水乙醚洗涤并直接转移到无附加盐的水中得到纯化的RNA样品。
2. 测定酵母RNA：
a. 使用分光光度计在260nm波长下测量纯化的RNA溶液的吸光度。
b. 根据吸光度读数，用以下公式计算RNA的浓度：浓度（μg/mL）= 吸光度读数 ×稀释倍数 × 50。
c. 可选的是用琼脂糖凝胶电泳分析纯化的RNA样品，以确定RNA的完整性和纯度。
这是一个简单的方法，用于提取和测定酵母中的RNA。
根据需要，还可以使用其他提取试剂和测定方法。
酵母RNA的提取及RNA含量的测定(紫外吸收法)
生物化学实验报告题目：酵母RNA的提取及RNA含量的测定（紫外吸收法）姓名：学号：班级：时间：一、实验目的：1.掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
2.掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
3.熟悉紫外分光光度计的使用方法。
二、实验原理：1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
2.核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。
测得未知浓度核酸溶液的A260nm值，即可以计算出其中RNA或DNA的含量。
该法操作简便，迅速，并对被测样品无损，用量也少。
三、实验器材：pH试纸，电子天平，试管1.5cm×15cm（×10），三角瓶200mL（×1），烧杯100mL（×1），量筒50mL（×1）、10mL（×1），吸管，离心机4000r/min，容量瓶100mL（×1），紫外分光光度计。
四、实验试剂：标准RNA溶液（100μg/mL），0.2%NaOH，酸性乙醇（500mL95%乙醇+5mLHCl），95%乙醇，无水乙醇，干酵母粉（市售）。
五、实验步骤：1.称取4g干酵母粉，放入200mL三角瓶中，加入40mL 0.2%NaOH溶液，沸水浴30min后冷水冷却，4000r/min离心15min。
留上清液加入95%酸性乙醇40mL，边加边搅拌，静置5~10min，再4000r/min离心5min，保留沉淀，在每次用10mL 95%乙醇洗涤沉淀，3000r/min离心5min，洗涤两次，再用无水乙醇100mL洗涤两次，每次3000r/min离心5min，收集到沉淀1.36g于滤纸上保存备用。
2.取0.2112gRNA样品，加入2mL 0.2%NaOH溶液和1mL水，溶解呈糊状。
再加40~50mL水，溶解，调pH为7，定容至100mL。
酵母RNA的提取和含量测定
酵母RNA的提取和含量测定一、实验原理1、RNA的提取工业上提取RNA通常选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法，这两种方法提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料，工艺较简单。
酵母细胞富含核酸，且核酸主要为RNA，含量为干菌体的2.7%-10%，而DNA 含量较少，仅为0.3%-0.5%，故常用酵母作提取RNA的原料。
稀碱法是用NaOH使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和。
偏酸性条件下RNA进入水相，而蛋白质和菌体沉淀。
除去蛋白质和菌体的溶液用乙醇沉淀RNA 或调pH至等电点（2.5）附近使RNA沉淀。
2、RNA含量的测定（苔黑酚法）RNA与浓盐酸共热时，即发生降解。
分子中的核糖转变为α-呋喃甲醛（糠醛），后者在氯化铁催化下与苔黑酚（3,5-二羟甲基苯）作用生成绿色复合物，可在670nm下用比色法测定含量。
在RNA浓度为10~100μg/mL范围内，产物浓度与吸光度呈线性关系。
本法特异性较差，凡属戊糖均有此反应。
某些己糖在持续加热后生成的羟甲基糖醛也能与苔黑酚反应，产生显色复合物。
微量DNA无影响，较多DNA存在时，亦有干扰作用。
可以利用RNA和DNA显色复合物的最大吸光吸收不同，且在不同时间显示最大色度加以区分。
反应2min后，DNA在600nm呈现最大光吸收，而RNA在反应15min后，在670nm呈现最大光吸收。
二、实验器材1、仪器：电子天平、抽滤瓶、布氏漏斗、离心机、烧杯若干、量筒(10mL、50mL)、pH试纸（1~14）、5mL吸管；试管*8、紫外分光光度计、水浴锅。
2、试剂：市售干酵母粉、0.2%氢氧化钠溶液、乙酸（A.R）、95%乙醇、无水乙醚（A.R）；标准RNA溶液（100μg/mL）、苔黑酚-三氯化铁试剂。
三、操作记录1、RNA的提取称取8.05g干酵母粉于100mL烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40mL，沸水浴加热30min，加热过程中经常搅拌冷却，加入乙酸数滴，使提取液呈微酸性（pH5~6），离心10~15min（4000r/min）。
酵母RNA 的提取(浓盐法)及成分鉴定
酵母RNA的提取（浓盐法）及成分鉴定一、实验目的：1、掌握浓盐法提取RNA的原理和方法。
2、理解等电点沉淀分离两性物质的原理和基本操作。
3、掌握钼蓝反应的原理，了解戊糖和嘌呤检验的原理。
二、实验原理：1、浓盐法提取酵母RNA：酵母中RNA含量特别多，约占干重的3～10％，DNA含量很少，约占干重的0.5％或更少，且菌体容易收集（即可利用发酵工业的下脚料），因此多采用酵母来提取RNA。
；本实验采用工业上常用的浓盐法，其基本原理是在浓盐加热的条件下酵母细胞壁通透性增加或发生破损，且加热又可使酵母中蛋白质变性沉淀，使RNA以可溶性钠盐的形式游离析出。
离心去除菌体，将上清液调至RNA的等电点（pH2～2.5），使RNA沉淀析出，离心收集沉淀。
2、RNA成分鉴定:RNA酸解，其水解产物含有碱基+核糖+磷酸；碱基（嘌呤）：磷酸：核糖：戊糖在约12％的盐酸中可以发生脱水缩合成为糠醛，糠醛可与5-甲基间苯二酚(又称苔黑酚、地衣酚)缩合生成蓝绿色的物质。
该反应用于检验戊糖的存在。
三、实验步骤：1.浓盐法提取酵母RNA（1）RNA的提取：取干酵母一包（约1～2g）放入100mL锥形瓶内，加入10％NaCl溶液30mL，搅匀后将锥形瓶固定在水浴锅内，于沸水浴中加热40分钟。
（2）RNA的离心分离：将上述锥形瓶从沸水浴中取出，立即用自来水冷却至室温。
然后将锥形瓶内溶液倒入离心管，平衡后3000转／分离心10分钟,收集上清液。
（3）RNA的收集：将上清液小心倾入50mL烧杯内，在冰浴中冷却。
用6mol/LHCl溶液调pH值至RNA的等电点2.0～2.5（一滴一滴的加入，边加边搅拌，随着pH下降，白色RNA沉淀逐渐增加，至等电点时沉淀最多）。
静置冰浴中5分钟使沉淀完全，颗粒变大。
再经3000转／分离心10分钟，收集沉淀。
2.RNA成分鉴定（1）溶解RNA：在离心所得的含RNA的离心管中加入1滴蒸馏水，用玻棒把RNA搅成糊状，再加入蒸馏水至mL，然后一边搅拌一边加入5%氨水1滴，将溶液调至pH=6，使白色RNA沉淀完全溶解，成为RNA溶液。
实验三酵母RNA的提制浓盐法
实验三酵母RNA的提制（浓盐法）一、目的学习和掌握从酵母中提制RNA的原理和方法，以加深对核酸性质的认识。
二、原理酵母含RNA 2.67％～10.0％，DNA很少（0.03％～0.516％），而且菌体容易收集，RNA 也易于分离，所以选用酵母为实验材料。
RNA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去。
再根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，将pH调至2.0～2.5，使RNA沉淀，进行离心收集。
提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
前者利用稀碱溶解细胞壁，使RNA释放出来，这种方法提取时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解；后者在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的透性，使RNA释放出来，此法易掌握，产品颜色较好。
三、仪器、试剂和材料1．仪器（1）量筒（50ml）（2）三角瓶（100ml）（3）烧杯（250ml，50ml，10ml）（4）布氏漏斗（40mm）（5）吸滤瓶（125ml）（6）表面皿（6cm）（7）751型分光光度计（8）离心机（4000r／min）（9）恒温水浴（10）药物天平（11）烘箱2．试剂（l）NaCl（化学纯）（2）6mol／L HCI（3）95％乙醇（化学纯）3．材料鲜酵母或干酵母；pHO.5～5.0的精密试纸。
四、操作步骤1．提取称取鲜酵母159或干酵母粉 2.5g，倒入100ml三角瓶中，加NaCl 2.5g，水25ml，搅拌均匀，置于沸水浴中提取lh。
2．分离将上述提取液用自来水冷却后，装入大离心管内，以4000r／min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。
3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内，并置入放有冰块的250ml烧杯中冷却．待冷至10℃以下时，用6mol／L HCI 小心地调节pH值至2.0～2.5（注意严格控制pH）。
调好后继续于冰水中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
4．洗涤和抽滤上述悬浮液以4000r／min离心10min，得到RNA沉淀。
实验三酵母RNA的提取、测定
实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。
因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。
由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。
工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。
稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。
稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。
浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。
若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。
离心收集。
本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。
加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。
2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。
3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。
待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。
随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。
调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
酵母RNA的提取及鉴定
实验酵母RNA的提取及鉴定一、目的掌握稀碱法提取酵母DNA的原理和方法，从而加深对核酸性质的认识。
二、原理1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA 制品。
三、实验仪器1.离心机2.水浴锅3.电炉4.烧杯5.量筒四、实验试剂1.干酵母粉2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3.乙酸4.95%乙醇5.无水乙醚6.10%硫酸7.氨水8.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
五、实验步骤1.RNA的提取：称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。
然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。
滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。
洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。
2.鉴定：取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。
水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物,有时沉淀出现比较慢,需要静止10几分钟。
六、注意事项：1.离心的时候，要两两对称放置，且离心管中溶液的量基本一样。
否则会遭成离心机转子的损坏。
2.过滤和下一步的洗涤过程中，不能带水。
否则沉淀会黏在滤纸上无法取下。
3.有时絮状物出现较慢，可放置十多分钟。
4.RNA提取时沸水浴不能烧得太干。
保证烧杯中含有NaOH5ml。
5.离心后取上清液可直接倒入烧杯。
6.用无水乙醚洗涤时，需要去通风橱。
7.小心从滤纸上刮取粗DNA，不能带入滤纸屑。
将影响实验结果。
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华南师范大学实验报告
学生姓名吴志军学号20082502046
专业生物工程年级、班级08工程1班
课程名称下游技术实验项目酵母RNA提取
实验类型验证设计综合实验时间2011年10月17 日实验指导老师江学文实验评分
实验三酵母RNA的提取及含量测定
一、实验目的与要求
1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法，
3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。
一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验是最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。
向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（-C=C一C=C-），能够强烈吸收250-280nm 波长的紫外光。
核酸（DNA,RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处。
遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。
所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。
核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以ε（ρ）来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度，或称为光吸收）。
核酸的摩尔消光系数不是一个常数，而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化。
RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700-7 800，RNA 的含磷量为9.5%，含1μg /mL RNA 溶液的光密度为0.022-0.024。
因此，测定未知浓度的DNA（RNA）溶液的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量。
该法简单、快速、灵敏度高，如核酸3μg/mL 的含量即可测出。
对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品，测定误差较小。
蛋白质由于含有芳香族氨基酸，因此也能吸收紫外光。
通常蛋白质的吸收高峰在280nm 波
长处，在260nm 波长处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中的蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。
三、主要仪器和试剂
啤酒酵母粉
0.04M NaOH 溶液
95%乙醇、乙醚、酸性乙醇溶液：30mL 乙醇加0.3mL HCl 。
紫外分光光度计
离心机
真空干燥箱
三角瓶、烧杯
水浴锅
四、实验步骤
1、称5g 干酵母粉悬浮于30mL 0.04M NaOH 溶液中，并在研钵中研磨均匀。
2、悬浮液转入三角烧瓶，沸水浴加热30min ，冷却，转入离心管，3000转/分，离心15分钟后，将上清慢慢倾入10mL 酸性乙醇，边加边搅动。
3、加毕，静置，待RNA 沉淀完全后，3000r/min 离心3min 。
弃去上清液。
用95％乙醇洗涤沉淀两次。
4、再用乙醚洗涤沉淀一次后，用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗抽滤，沉淀在空气中干燥。
称量所得RNA 粗品的重量，
5、纯度测定：将样品配制成含5～50μg 核酸/mL 的溶液，于紫外分光光度计上测定260nm 和280nm 吸收值，计算核酸浓度和两者吸收比值。
五、计算：
260./0.024O D R N A L ⨯⨯=浓度（微克克）稀释倍数
O.D260为260nm 波长处的光密度读数；L 为比色杯的厚度，一般为1或0.5；0.024为1μgRNA/mL 的光密度；0.020为1μgDNA/mL 的光密度。
六、实验结果与分析
其中本小组为第5小组，稀释倍数为12500倍，测得的吸光值（OD260）为0.605。
纯度测定结果为：
RNA 浓度（ug/g ）=
稀释倍数⨯⨯L OD 024.0260=g ug /315104125001024.0605.0=⨯⨯ RNA 纯品的质量（ug ）=RNA
浓度×RNA 粗品的重量=0.101g =g 101463.49u =0.322g ×315104ug/g
故甘酵母粉中RNA 含量（%）=%100⨯）干酵母粉重（）
重（g g RNA =%1005101.0⨯g
=2.02% 分析：实验的结果测出RNA 的含量为2.02%，其RNA 的含量偏低。
造成这种结果的原因主要是由于对物料进行转移的时候损失的，同时测量光度值的时候造成的误差也是造成RNA 含量少的原因。
七、思考题
1.破酵母细胞时为什么要在沸水浴中进行?
答：由于酵母细胞外有一层厚厚的细胞壁，而RNA 存在于细胞质中，所以必需将酵母细胞的细胞壁研磨破碎后才能提取出RNA 。
加入NaOH 之后水浴煮沸30min 的作用是促进细胞壁变性，使类脂、甘露聚糖、葡聚糖等成分部分分解，使蛋白质变性，从而使细胞破裂，RNA 则从细胞中分离出来。
另外细胞中含有多种分解RNA 的酶类（如RNase 等），为了避免RNA 在提取过程中被降解，得到较为完整的RNA 分子，破碎酵母细胞时应在沸水中进行，这样可以使细胞中降解RNA 的蛋白酶类活性受到抑制甚至变性失活，从而起到保护RNA 分子的作用。
2.为什么用酵母作为实验原料？如何使RNA 从酵母中释放出来？RNA 的等电点是多少？ 答：酵母繁殖快，生长周期短；其细胞质中的核酸大部分是RNA ，而DNA 很少；RNA 提取液与菌体分离比较容易，因此酵母是提取RNA 的好材料。
工业上将RNA 从细胞中释放出来主要有三种方法，包括稀碱法、浓盐法和自溶法。
（1）稀碱法是在一定的碱浓度下，使构成细胞壁的蛋白质、脂肪及糖的化合物得到水解，从而破坏细胞壁，使RNA 从细胞中释放出来，该方法属于化学破壁法。
（2）浓盐法是基于改变酵母细胞的渗透压，是细胞自身破裂而释放出RNA ，即利用高浓度的盐（10% NaCl ）在90～100°C 条件下改变了细胞膜通透性，并将核蛋白体解离成RNA 和蛋白质而使 RNA 释放到盐溶液中。
同时，90～100°C 的高温可破坏磷酸单酯酶和磷酸二酯酶的活力，避免RNA 的降解。
该方法属于物理化学破壁法。
（3）自溶法是利用某些酵母菌种在发酵结束后，细胞中的溶酶体膜破裂，使得溶酶体中的水解酶释放到细胞之中，利用菌体自身的酶系将细胞溶解，从而释放出RNA 。
通常自溶法的菌浓度为2%，PH 值9.5～10，自溶温度以60～65°C 为宜。
RNA 的等电点为PH2.5。
根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将溶液在低温下调pH 至2.0～2.5，RNA 则以白色絮状沉淀形式从盐溶液中析出。
再次离心，固液分离，便可获得RNA 粗产品。
3 为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解？
答：酵母菌的细胞壁呈“三明治”结构——外层为甘露聚糖，内层为葡聚糖，中间层为一层蛋白质分子（包括多种酶类），此外细胞壁壁上还含有少量的类脂和几丁质。
稀碱溶液能够对酵母菌细胞壁和细胞膜上的脂类起到抽提作用，脂类发生皂化反应从而被分解，使细胞穿孔。
同时细胞壁的聚糖成分在碱液中会部分水解，蛋白质（包括多种酶类）也会发生变性，从而增加酵母细胞的通透性，酵母细胞原生质膜失去选择透过性，细胞就破裂使RNA流出。
4.核酸的溶解性质是什么?常用什么试剂分离沉淀核酸?
答：核酸是具有极性的高分子物质，根据相似相溶原理，DNA和RNA都是微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。
它们可溶于2-甲氧乙醇，也可溶于10%左右的氯化钠溶液，但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂，尤其是在50%左右的乙醇溶液中溶解度很小。
因此，常用乙醇从溶液中沉淀核酸，当乙醇浓度达50%时，DNA就沉淀出来，当乙醇浓度达75%时RNA也沉淀出来。