免疫组化自动化共41页
全自动免疫组化染色仪工作过原理
全自动免疫组化染色仪工作过原理引言：全自动免疫组化染色仪（Automated Immunohistochemistry Stainer）是一种用于组织学研究和病理诊断的重要设备。
它通过自动化的方法实现对组织标本的免疫染色，为医学研究和临床应用提供了高效、准确的技术支持。
本文将介绍全自动免疫组化染色仪的工作原理及其应用。
一、全自动免疫组化染色仪的组成全自动免疫组化染色仪主要由样本处理模块、试剂盘、染色盘、显微镜、相机和控制系统等部分组成。
其中，样本处理模块负责对组织标本进行预处理，包括脱水、脱脂、抗原修复等；试剂盘用于存放和供应试剂；染色盘用于容纳染色液和组织标本；显微镜和相机用于观察和记录染色结果；控制系统用于控制整个仪器的运行。
二、全自动免疫组化染色仪的工作原理全自动免疫组化染色仪的工作原理可以分为以下几个步骤：1. 样本制备：将组织标本切片后，通过组织学处理方法，如脱水、脱脂、抗原修复等，使组织标本符合染色要求。
2. 抗体染色：将标本放置在染色盘中，通过试剂盘供应抗体溶液。
全自动免疫组化染色仪通过控制系统，精确控制抗体的投放量和时间，确保染色的准确性和一致性。
3. 洗涤：染色后，仪器自动进行洗涤步骤，以去除未结合的抗体。
4. 显色：通过试剂盘供应显色液，使已结合的抗体表现出可见的颜色反应。
5. 去色：洗去多余的显色液，使染色结果更加清晰。
6. 固定：通过试剂盘供应固定液，使染色结果稳定并防止褪色。
7. 观察和记录：将染色结果放置在显微镜下观察，并通过相机记录结果。
全自动免疫组化染色仪的高分辨率相机可以捕捉到细胞和组织的微观结构，为研究和诊断提供准确的图像数据。
三、全自动免疫组化染色仪的应用全自动免疫组化染色仪在医学研究和临床应用中具有广泛的应用价值。
它可以用于研究细胞和组织的免疫表型，帮助科学家了解细胞和组织的分子特征和功能。
同时，全自动免疫组化染色仪在病理诊断中也起到了重要的作用。
通过对组织标本的免疫染色，医生可以确定疾病类型、判断疾病的严重程度和预后，为患者的治疗提供准确的依据。
全自动免疫组化仪免疫组化方案
BenchMark XT IHC/ISH Staining 精品文 个人人认证 机构合作 Module
文VIP个人人中心心医科大学第一附属医院免疫组化方案
troy410 上传于 2015-12-14
Protocol No
1
|
计划/解决方案
Ventana Medical Systems, Inc., 1910 Innovation Park Drive Tucson, Arizona USA 解决方案
Protocol Name
| |
Creation Date
11/01/2011
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Paraffin [Selected] Deparaffinization [Selected] Cell Conditioning [Selected] Conditioner #1 [Selected] Mild CC1 [Selected] Standard CC1 [Selected] Ab Incubation Temperatures [Selected] 37 C Ab Inc. [Selected] Antibody [Selected] Apply One Drop of [HER-2/neu (4B5)] ( Antibody ), and Incubate for [0 Hr 32 Min] Counterstain [Selected] Apply One Drop of [HEMATOXYLIN II] ( Counterstain ), Apply Coverslip, and Incubate for [4 Minutes] Post Counterstain [Selected] Apply One Drop of [BLUING REAGENT] ( Post Counterstain ), Apply Coverslip, and Incubate for [4 Minutes] 2 hbnk 07/28/2012
免疫组化科普
免疫组化科普免疫组化技术是一种通过使用特定的抗体与待检测物发生特异性结合的方法来检测和定位细胞或组织中特定分子的存在和表达情况。
它在医学诊断、疾病研究以及药物研发等领域起着重要作用。
免疫组化技术的原理是利用抗体与抗原间的特异性结合来检测细胞或组织中的分子。
抗体是一种人体免疫系统产生的特异性蛋白质，能够识别并结合到与其具有亲和性的抗原上。
在免疫组化实验中，首先需要选取与目标分子特异性结合的抗体，这些抗体可以通过人工合成或从动物免疫产生。
然后，将这些抗体标记上荧光物质、酶或放射性同位素等，使其具有可检测的特性。
最后，将标记好的抗体与待检测的组织或细胞接触，如果目标分子存在，则标记抗体会与其结合，形成复合物。
通过特定的检测方法，可以观察到这种复合物的存在和定位情况，从而了解目标分子在细胞或组织中的表达情况。
免疫组化技术在医学诊断中有着广泛的应用。
例如，在肿瘤诊断中，通过检测肿瘤细胞中特定蛋白的表达情况，可以帮助医生确定肿瘤的类型和分级。
此外，在病理学研究中，免疫组化技术可以帮助研究人员观察和定位特定蛋白在疾病发展过程中的变化，从而揭示疾病的发生机制。
免疫组化技术还可以用于检测病原体感染、免疫系统疾病以及器官移植等方面的研究。
免疫组化技术的优点在于其高度特异性和敏感性。
由于抗体与抗原的结合具有很高的特异性，因此可以准确地检测和定位目标分子。
而且，免疫组化技术可以使用多种检测方法，如荧光显微镜、酶标仪等，可以对不同类型的样本进行检测。
此外，免疫组化技术还可以进行定量分析，通过测量标记物的强度来评估目标分子的表达水平。
然而，免疫组化技术也存在一些局限性。
首先，免疫组化技术需要合适的抗体来进行实验，因此需要事先知道目标分子的抗原性质。
其次，免疫组化技术对样本的处理要求较高，包括取材、固定、切片等步骤，这些操作容易引入误差。
此外，免疫组化技术在自动化和高通量方面仍存在一定的挑战，限制了其在临床实践中的应用。
免疫组化技术是一种重要的实验方法，可以用于检测和定位细胞或组织中特定分子的存在和表达情况。
免疫组化自动化
免疫组化自动化的优点
保证结果的稳定性和一致性，更加标准化 满足日益增加的染色量要求，释放劳动力 减少人为错误的可能性 便于实验室间的比较及质控
第二部分
免疫组化染色系统的概况
免疫组化染色系统工作原理 免疫组化染色系统的现状
免疫组化染色系统工作原理
Capillary Gap Method 毛细管虹吸原理 Liquid Coverslip Method 液体覆盖膜原理 Universal Open System 通用开放系统
二维码（2D Matrix Barcod）
包含大量信息， 如病人姓名、病 理号、抗体的名 称、种属来源、 孵育时间、有效 期等等
精确定量模块
目前世界上同类机型的最小滴加量为100微升 根据最新微量滴加技术，LabVision免疫组化染 色系统可以实现最小试剂滴加量降低至80微升 根据技术保密协议，该技术仅限迈新使用 微量滴加技术更加符合中国国情，有利于染色 系统在中国的普及推广
自动脱蜡抗原修复模块
PT Module与LabVision Autostainer组成了完整的 免疫组化染色系统，真正 意义上地实现免疫组化全 过程的自动化
LabVision PT模块特点
更简便——脱蜡抗原修复一步完成 更标准——双通道时间和温度精确控制 更环保——非二甲苯水溶性无毒修复液 更完善——与LabVision染色仪实现无缝连接
Liquid Coverslip Method
Oil is used to cover the reagents to prevent evaporation during their incubation. The reactions are allowed to proceed inside a heatequilibrated incubation chamber. This system requires reagents that are specifically optimized to perform best at the raised temperature.
免疫组化的原理及操作规程
免疫组化的原理及操作规程免疫组化，即免疫组织化学染色技术，是一种利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素等）显色，从而确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）的定位、定性及相对定量的研究方法。
该技术广泛应用于临床病理诊断、生物医学研究以及药物开发等领域。
本文将详细介绍免疫组化的原理及操作规程。
一、免疫组化的原理免疫组化的基本原理是抗原与抗体的特异性结合。
抗原是指能够刺激机体产生免疫应答，并能与免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）发生特异性结合的物质。
抗体是机体的免疫细胞在抗原刺激下产生的具有特异性识别能力的免疫球蛋白。
在免疫组化中，通常将目标抗原（如某种蛋白质或多肽）作为待检测物，通过特定的抗体与之结合，再利用标记技术使抗体可视化，从而实现对目标抗原的定位、定性和定量研究。
免疫组化的标记技术主要有直接法和间接法两种。
直接法是将标记物（如荧光素、酶等）直接标记在抗体上，使其与目标抗原结合后直接显色。
间接法则是利用未标记的抗体（一抗）先与目标抗原结合，然后再通过标记的二抗（与一抗特异性结合的抗体）与一抗结合，最终实现显色。
间接法具有更高的灵敏度和灵活性，因此在实际应用中更为常见。
二、免疫组化的操作规程免疫组化的操作规程主要包括以下几个步骤：1. 标本处理：根据实验需求选择合适的组织标本，并进行固定、脱水、包埋等处理，制备成组织切片或细胞涂片。
固定是为了保持组织或细胞的形态结构，防止抗原丢失；脱水则是为了去除组织中的水分，便于后续操作；包埋则是将组织块包裹在支持物（如石蜡）中，便于切片。
2. 抗原修复：由于固定和脱水等处理过程可能导致抗原表位的遮蔽或改变，因此在进行免疫组化染色前，需要对抗原进行修复。
常用的修复方法包括热修复、酶修复和酸修复等。
具体方法应根据实验需求和抗原性质进行选择。
3. 阻断内源性酶活性：为了避免组织内源性酶对后续显色反应的干扰，需要使用相应的阻断剂（如过氧化氢）对内源性酶活性进行阻断。
免疫组化结果判断及常见问题的分析
当前31页，共43页，星期一。
坏死组织着色：AE1/AE3
当前32页，共43页，星期一。
坏死组织着色
当前33页，共43页，星期一。
交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色
当前34页，共43页，星期一。
黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色
当前35页，共43页，星期一。
灶状着色：机械原因着色
当前26页，共43页，星期一。
内源性生物素—肾小管
当前27页，共43页，星期一。
内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌
当前28页，共43页，星期一。
蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色
当前29页，共43页，星期一。
嗜酸性粒细胞中细胞色素显色
当前30页，共43页，星期一。
吞噬细胞内 含铁血黄素
内源性生物素 电荷吸附 抗体不纯
切片制片不当 加试剂后切片干燥
对策 每步冲洗3×5min
3％H2O2封闭 使用生物素阻断试剂盒阻断
非免疫动物血清封闭 采用单克隆抗体 改善取材和制片 防止切片干燥
当前42页，共43页，星期一。
无信号片
CD30
当前43页，共43页，星期一。
当前36页，共43页，星期一。
全片着色
Cyclin D1 套细胞淋巴瘤
当前37页，共43页，星期一。
全片着色
当前38页，共43页，星期一。
边缘着色
当前39页，共43页，星期一。
“阴阳脸”着 色
当前40页，共43页，星期一。
气泡
当前41页，共43页，星期一。
非特异性着色及其对策
非特异性着色原因 操作过程冲洗不充分 内源性过氧化物酶
S-P×400
免疫组化技术课件课件精选课件
色
色
阳性细胞的染色特征：
①阳性细胞的染色分布有三种： 胞浆；细胞核；细胞膜表面
②阳性细胞分布：灶性；弥漫性
③染色强度不一
④切片边缘，刀痕or组织折叠，坏死，挤压区， 胶原结缔组织等常表现为相同的阳性染色强度。
对于阳性结果的定量判断： -，+，++，+++等分级和计数统计
第二十六页，本课件共有45页
第三十七页，本课件共有45页
免疫组化用于病理诊断及鉴别诊断原则： ①免疫组化用于病理诊断及鉴别诊断，必须以HE染色的
形态学为基础，免疫组化只能作为辅助手段。不能把 免疫组化染色作为诊断的“金标准”。
②免疫组化对良、恶性的判断仅供参考。
③免疫组化用于判断组织起源，分型，预后的估计。
④免疫组化染色不好或出现相互矛盾的结果时，以形态学为 准。
第四页，本课件共有45页
显示物： ➢酶标反应：
①碱性磷酸酶（Alkatine phasphotase,AP）
AP与不同的底物（萘酚As-Mx、快蓝、快红）作用， 可形成不同颜色的终产物。用新品红（New fuchsine） 显色，可形成不溶于有机溶剂的红色沉淀，不褪色。
②辣根过氧化酶(Horseradise peroaidase,) HRP：底物为DAB－四盐酸二氨基联苯胺，产生棕色 沉淀，不溶于有机溶剂，不褪色。
前列腺特异性抗原（PSA）： 甲胎蛋白（AFP）：
甲状腺球蛋白（Tg）：
第三十页，本课件共有45页
软组织标记
软组织：全身各处的纤维结缔组织，脂肪组织，
肌肉组织，滑膜组织及血管淋巴组织。
肌动蛋白（Actin）：分布于所有的肌型细胞中
肌红蛋白（Myoglobin）：是骨骼肌肌浆中的一种
免疫组化课件PPT课件
李
三 华
特点
优点
特异性强，定位准；
结果直观；
形态学改变与功能和代谢相结合；
组织标本可用石蜡保存进性回顾性研究。
缺点
步骤多，影响实验成败的因素多；
以定位、定性和半定量研究为主，绝对定量
分析尚需标准化。
第四页，共28页。
中
心
实
验
室 李 三 华
二 免疫组化技术的基本步骤
1.制片
组织切片(石蜡切片、冰冻切片)
IHC,WB,FC,ELISA,IP； 石蜡切片(IHC－P),冰冻切片(IHC－Fr),
甲醛固定冰冻切片（IHC-FoFr）。 (5)与抗原结合的部位
亚型， C-或N-，胞外区域或胞内区域。 （6）公司，价格。
第十七页，共28页。
中
心
实
验 室 李 三
国外主要抗体试剂公司
华
用途
公司
用途
最全 离子通道
李
三
华
常用酶
辣根过氧化物酶（ Horseradise peroaidase，HRP)
底物：DAB(四盐酸二氨基联苯胺)，产物为棕褐色。
碱性磷酸酶（Alkatine phasphotase, AP）
底物：NBT（四氮唑蓝），产物为紫蓝色。
葡萄糖氧化酶（glucoseoxdase,GOD）
底物：葡萄糖，产物为蓝色。
第二页，共28页。
中
心 实 验 室
李
应用
三
华
凡是组织细胞内具有抗原性的物质
（肽类、蛋白质、细胞因子、受体、激素
、神经递质、核酸、表面抗原）或抗体均
可用免疫组织化学方法显示而进行定性、
定位分析或定量研究，进而深入研究其
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SFDA 进口注册及认证
2019年3月18日获得SFDA医疗器械进口注册证 通过国际UL安全认证 通过欧盟CE Mark认证 美国FDA允许标记IVD标记产品
Liquid Coverslip Method
Oil is used to cover the reagents to prevent evaporation during their incubation. The reactions are allowed to proceed inside a heatequilibrated incubation chamber. This system requires reagents that are specifically optimized to perform best at the raised temperature.
免疫组化染色系统现状
200 1500
Universal Open System Capillary Gap Method
4300 Liquid Coverslip Method
免疫组化染色系统的现状
目前世界上免疫组化染色系 统共计6000多台 主要分别在美国、欧洲等发 达国家 中国大陆共计50多台，约占 全球的0.9％
Capillary Gap Method
Tissue specimens on one microscope slide and a cover plate, are placed together to form a gap of defined width between them. This gap is 50 microns wide and will draw and hold a consistent volume, e.g. 150 microliters, thereby contributing significantly to the reproducibility in staining.
LabVision LV-1 Autostainer
LabVision Autostainer360
LabVision iner720
DAKO Autostainer
DAKO Autostainer Plus
BioGenex I-6000
主要内容
免疫组化自动化的背景 免疫组化染色系统的概况 LabVision染色系统简介
免疫组化自动化的背景
临床生化、血液、细胞学检验自动化 技术迅速发展 免疫组化倍受关注与青睐 免疫组化自动化是必然的趋势
免疫组化自动化的难点
免疫组化试剂相对价格较昂贵 免疫组化染色工作量日益增加 免疫组化的自身特点（稳定性、重现性） 对其自动化提出了更高的要求
LabVision 公司简介
2019年，LabVision公司成功收购了NeoMarkers 公司，大大地增强了其在抗体及免疫组化方面的实力。 目前， LabVision公司是国际著名的实验室设备及试 剂供应商Fisher集团的主要成员之一。 LabVision公司 通过了国际ISO 13485:2019 and ISO 9001:2000 双 重质量体系认证。
700
2000
3300
USA EU Other
免疫组化染色系统
LabVision Autostainer DAKO Autostainer Plus BioGenex I-6000 Ventana NexES、Benchmark
第三部分
LabVision 免疫组化染色系统
主要特点及功能 扩展功能模块2019New！
LabVision 自动染色系统独家授权书
LabVision 免疫组化染色系统
LabVision Autostainer LV-1 （48 slides） LabVision Autostainer360 （36 slides） LabVision Autostainer480 （48 slides） LabVision Autostainer720 （72/84 slides）
LabVision 公司简介
LabVision公司成立与1994年，它是一家致力于开 发和生产自动化实验室仪器设备的生物技术制造公司。 座落于加州Fremont的LabVision公司，位于美国高科 技及生物科技的中心。 LabVision公司的工程师涵盖 包括生物技术及计算机软件等专业领域。现在， LabVision公司已在英、德等国家成立办事处，拥有全 球超过50个授权经销商。
Ventana NexES
Ventana Benchmark
Universal Open System
The instruments used for automation mimic manual staining, i.e., the slides are secured in a horizontal position and reagents are dispensed onto the tissue by use of tefloncoated pipettes. Incubations proceed at room temperature. This technology permits use of the same reagents as used for manual procedures.
免疫组化自动化的优点
保证结果的稳定性和一致性，更加标准化 满足日益增加的染色量要求，释放劳动力 减少人为错误的可能性 便于实验室间的比较及质控
第二部分
免疫组化染色系统的概况
免疫组化染色系统工作原理 免疫组化染色系统的现状
免疫组化染色系统工作原理
Capillary Gap Method 毛细管虹吸原理 Liquid Coverslip Method 液体覆盖膜原理 Universal Open System 通用开放系统