石蜡切片制作标准程序

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石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题,写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术,在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。

石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析,能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。

下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定:首先,需要从感兴趣的样本中取得组织样本,并将其进行固定。

固定是为了保持组织的形态结构和化学成分,常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

固定过程中,需要确保样本完全浸泡在固定液中,通常需要数小时至数天的时间,以确保组织被充分固定。

2. 脱水:固定后的组织样本需要进行脱水处理,以去除其中的水分。

脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂,常用的有乙醇、丙酮等。

通常采用递增浓度的有机溶剂,从低浓度逐渐提高到高浓度。

每个浓度的脱水液中,样本需要浸泡一定的时间,以确保脱水彻底。

3. 渗透:脱水后的组织样本需要进行渗透处理,以使其与石蜡更好地结合。

渗透剂通常为石蜡溶液,可以将样本浸泡在石蜡溶液中,以使其逐渐渗透进入组织内部。

渗透过程中,需要注意控制温度和时间,以确保渗透均匀。

4. 包埋:渗透后的组织样本需要进行包埋处理,即将其嵌入到石蜡中。

首先,将组织样本放置在石蜡模具中,并加入适量的石蜡。

然后,将模具放入石蜡包埋机中,利用加热和真空等处理,使石蜡与组织样本充分结合。

包埋过程中需要严格控制温度和时间,以确保石蜡固化完全。

5. 切片:包埋后的组织样本需要进行切片处理,以获取薄片供观察。

首先,使用切片机将石蜡块切割成薄片。

然后,将薄片置于载玻片上,并加热使其与载玻片结合。

最后,使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

6. 然后,对切片进行染色处理,以增强对组织结构的观察。

常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。

染色后,可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。

总结起来,石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和时间,以确保制作出高质量的石蜡切片。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤:
1. 准备样品:选择需要切片的样品,如组织样本、细胞样品等,并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤,以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备:准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料,并进行清洁和消毒处理,以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透:将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂(如正己烷)中,以去除组织内水分和其他溶质,然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备:将石蜡浸透的样品固定于切片盒中,将石蜡块剪碎成适当大小,并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数(如温度、角度、速度等),并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片:将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法,如电离子器、热平台等,以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定:将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理,以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色:根据实验需求,对切片进行适当的染色处理(如组织学染色、免疫组化染色等),以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装:将切片封装至封片盖玻片上,使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片,并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控:对制备好的切片进行质量控制,使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后,制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是,在整个制备过程中,应遵循标准实验操作规程、注意安全,以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片流程范文

石蜡切片流程范文

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术,用于制备生物组织薄片,使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定:首先,需要选择适当的方法将生物组织进行固定,以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中,通常需要固定24至48小时。

2.去水:固定完毕后,需要将组织中的水分除去,以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度(例如70%、80%、95%和100%构成的酒精梯度)来逐步去除水分,通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁:去水后,通常需要对样品进行清洁,以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液(例如100%酒精)浸泡样品数分钟,然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍:在石蜡切片制备过程中,需要将组织样品浸泡在石蜡中,以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡(例如58℃石蜡),在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透:将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中,通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75%酒精中,然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中(例如85%、95%和100%)和石蜡中,每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋:当样品完成渗透后,需要进行包埋,即将渗透后的组织样品放置在切片模型中,并用石蜡封住。

将切片模型倒置,将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中,等待石蜡冷却和固化。

7.切片:当石蜡块完全固化后,可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度(通常为3至5微米),将石蜡块放置在切片机上,并逐渐将刀片与石蜡块接触,以制备薄片。

8.制片:将切好的石蜡薄片静置在温水中,让其自然展开,并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上,以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上,以便胶水干燥。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序石蜡切片是一种常见的制备生物样品的工艺,广泛应用于医学、生物学、病理学等领域。

石蜡切片的主要制备程序包括固定、脱水、浸渍和切片等过程。

本文将从深度和广度两个角度对石蜡切片的主要制备程序进行全面评估,并探讨其在实际应用中的价值。

一、固定固定是石蜡切片制备的第一步,其目的是使生物样品中的细胞和组织结构固定在原位,防止其在后续处理过程中变形或失去形态。

常见的固定剂包括福尔马林、乙醛等。

固定的方法主要有浸渍法、注射法和灌注法等。

浸渍法将固定剂直接浸泡在样品中;注射法将固定剂注入样品内部;灌注法则使用压力灌注固定剂进入样品组织。

选择合适的固定方法取决于样品的性质和研究目的。

二、脱水固定后的样品中仍存在大量的水分,需要通过脱水处理将水分逐渐替换成有机溶剂,如乙醇或异丙醇。

脱水的目的是使样品适应后续的浸渍和渗透操作。

脱水可以采用逐步脱水法或直接脱水法。

逐步脱水法是将样品从低浓度有机溶剂逐渐过渡到高浓度有机溶剂;直接脱水法则是使用高浓度的有机溶剂直接将水分蒸发掉。

在脱水过程中,要注意控制处理时间和控制脱水剂的对样品的渗透力,以避免破坏样品结构。

三、浸渍脱水后的样品中已经没有水分,需要进一步进行浸渍处理,使组织结构与石蜡亲和力增强,以便在后续切片过程中组织块的稳定性。

浸渍的目的是用石蜡浸透样品,并使样品与石蜡变得相容。

浸渍可以采用逐渐浸渍法或直接浸渍法。

逐渐浸渍法是将样品从低熔点的石蜡逐渐过渡到高熔点的石蜡;直接浸渍法则是使用高熔点的石蜡直接浸渍样品。

在浸渍过程中,要注意控制温度和时间,以保证样品完全浸透。

四、切片浸渍后的样品已经与石蜡融为一体,可以进行切片操作。

切片是将浸渍的样品切割成薄片的过程,以便于后续的染色和显微观察。

切片可以采用手工切片法或机械切片法。

手工切片法是使用手持刀片将样品切割成薄片;机械切片法则是使用专用的切片机进行切片。

在切片过程中,要注意操作的轻重和刀片的锋利度,以保证切割的质量和样品的完整性。

石蜡切片步骤

石蜡切片步骤

⽯蜡切⽚步骤⽯蜡切⽚基本步骤(⼀)取材和固定根据实验⽬的选择材料。

将整个⾍体或⾍体的内部器官(如肠道、马⽒管、唾液腺等)取出后,⽴即投⼊固定液。

取材⼤⼩:0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2,厚度不宜超过3mm。

固定液:2.5%的戊⼆醛固定液,Bouin⽒液,10%甲醛等。

固定时间:4oC固定24⼩时。

注意事项:取材:1.勿使组织块受挤压切取组织块所⽤⼑、剪要锋利,切割时不可来回切割。

夹取组织时,镊⼦要轻,切勿挤压,以免损伤组织。

取材时,组织块可稍⼤⼀点,以便在固定后,将组织块的不平整部分修去。

2.选好组织块的切⾯应熟悉器官组织的组成,并根据观察⽬的来确定纵切或横切。

3.保持材料的清洁组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物等,先⽤⽣理盐⽔冲洗⼲净,再⼊固定液。

4.切除(清除)不需要的部分特别是组织周围的脂肪等,应尽可能清除掉,以免影响以后的程序和观察。

固定:1.材料新鲜取出组织后须⽴即固定。

否则时间相隔过久,体积就要收缩变形或发⽣⾃溶现象。

2.抽⽓⽣物组织常有⽓体的存在,使材料不能沉⼊固定液中,抽⽓使得固定液有效渗⼊。

真空泵抽⽓或者⽤空针管抽⽓。

昆⾍整体固定,固定前⽤解剖针刺数个⼩孔,以利⽤固定液渗透。

3.固定剂⽤量⼀般为组织体积的10~20倍。

勿使组织贴于瓶底或瓶壁,以免影响固定剂的渗⼊。

4.避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作⽤。

5.加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗⼊,对长期固定的标本可经常更换固定液。

(⼆)洗涤2.5%戊⼆醛固定液固定的组织:0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次,每次10minBouin⽒固定液固定的组织:直接⼊70%酒精更换数次即可脱⽔,注意苦味酸。

甲醛固定的组织:直接投⼊50%或70%酒精脱⽔,不经⽔洗。

但如果在甲醛中时间过长,则仍应当⽤流⽔冲洗。

陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤,有利于脱⽔、切⽚和染⾊。

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程一、取材选取目的组织块,修剪到合适的大小;二、固定将组织块放入福尔马林固定液(10%甲醛溶液),固定时间由组织块大小而定,一般不少于24h;体积1cm3的组织块,一般为3-7天;三、冲水自来水洗几下,泡1小时;四、系列酒精脱水50%酒精,1h;70%酒精,1h;80%酒精,1h;90%酒精,1h;100%酒精(I),1h;100%酒精(II),1h;五、透明酒精:二甲苯=1:1溶液,过夜;二甲苯,1h;六、包埋二甲苯:石蜡=1:1,65-70 ℃,2h;新鲜石蜡(I),65-70 ℃,1h;新鲜石蜡(II),65-70 ℃,4h;新鲜石蜡包埋;七、切片切片厚度为5-7um;八、展片温水(40-42 ℃)展片;九、捞片将展好的片子贴于载玻片上;十、烘片42 ℃将片子上的水烘干;十一、烤片60 ℃烤片12-24h;十二、脱腊二甲苯(I):2min;酒精:二甲苯=1:1溶液:2min;十三、水化100%酒精(I):1min;100%酒精(II):1min;95%酒精:1.5min;80%酒精:1.5min;70%酒精:1.5min;50%酒精:1.5min;自来水洗:2min十四、H&E染色Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果),自来水洗3次,盐酸分化(2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸),10s;自来水洗蓝化,镜下观察染色效果;(伊红)Eosin染色30-50s,直接脱水(90%酒精-----100%酒精I,100%酒精II各1分------酒精:二甲苯=1:1溶液:1-1.5min);十五、脱水90%酒精-100%酒精-100%酒精,各1min;十六、透明二甲苯:酒精:1-1.5min;二甲苯:2min;十七、封片中性树胶封片;十八、镜下观察并拍照。

石蜡切片的步骤2021.7.21

石蜡切片的步骤2021.7.21

石蜡切片的步骤2021.7.21(1)取材:选取生长良好、有代表性的目标材料,洗净。

用锋利的双面刀片截取材料,动作要迅速。

材料的大小不超过0.5~lcm。

(2)固定:将选取的材料放人固定液中,固定液的体积大约是材料的20倍。

固定剂有FAA固定液。

FAA既是良好的固定剂,也是保存剂,材料可以在其中长久保存。

而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料,固定后,使用70%的乙醇尽快清洗2~3次,转人70%乙醇中保存。

若材料含有空气,固定时需要抽气。

(3)脱水:固定好的材料经各级乙醇脱水至纯乙醇。

各级乙醇的浓度为:30%、50%、70%、85%、95%和l0O%、l0O%,每次脱水40min,材料可浸泡二甲苯保存在4℃冰箱 (4)透明:。

由于石蜡溶于二甲苯而不溶于乙醇,因此透明的作用除了使材料变得透明外,另一方面是将材料中的乙醇除去。

采用3/4乙醇+1/4二甲苯, 2/4乙醇+2/4二甲苯, 1/4乙醇+3/4二甲苯,纯二甲苯两次,每次透明时间为40min,透明完成后材料可浸泡纯乙醇保存在4℃冰箱。

(5)浸蜡:使石蜡慢慢溶于透明剂中,然后完全取代透明剂进人植物组织中。

一般将透明好的材料换入新的二甲苯中,然后加入等体积的碎蜡,置于65℃左右的温箱中。

随着碎蜡的溶解,不断加入碎蜡使石蜡饱和为止,时间大约l~2天。

(6)包埋:浸蜡后,在60℃的温箱中浸蜡后,在60℃的温箱中,换两次已溶解的纯蜡,每次约2h,新石蜡然后将材料和石蜡一起倒应先融一次增加密度,凝固后再融才能使用,小纸盒中,用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐,再将小纸盒平放于冷水中,使其很快凝固。

(7)修块:将包埋好的材料切割成小块,每个小块包含一个材料。

然后按需要的切面将蜡块切成梯形,切面在梯形的上部,注意上部矩形的对边平行。

梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。

(8)切片:用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。

切片时,把切片刀夹在刀架上,再把木块夹在固定装置上,调整固着位置,使材料的切与面刀口平行。

石蜡切片制备基本步骤

石蜡切片制备基本步骤

石蜡切片制备基本步骤一、准备工作(一)(一)洗涤实验所需器皿:(玻璃器皿的清洗)1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注:一般情况下,经以上步骤后,用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用,如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时,再经自来水彻底冲洗,再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

(二)配制:硫酸洗液的配制清洁液(洗液)的配制:成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸(ml)1000200100重铬酸钾(mg)63120100蒸馏水(ml)2002001000重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中,边倒边用木棒轻轻搅拌(三)载玻片与盖玻片的处理1.将所需载玻片与盖玻片清洗后,放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2.流水冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍3.95%~100%酒精浸泡24小时,用绸布擦干备用注:在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时,要一片片地投入,使其不致重叠。

二、准备工作(二)常用液体的配制(一)缓冲溶液:1.磷酸盐缓冲液A液:0.1mol/L磷酸二氢钠B液:0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(3:7≈PH7.0)2.枸椽酸缓冲溶液A液:0.1mol/L枸椽酸B液:0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(6.2:42.8≈PH6.2)(二)固定剂:1.甲醛:10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注:实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2.10%中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后,放置24小时取上清液使用。

3.4%多聚甲醛:8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右,不时搅拌,成为乳白色溶液。

滴加1N NaOH,并不停搅动至液体清明。

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动物病理组织学
石蜡切片制作标准操作程序(SOP)
一、\器材和试剂准备
(一)载玻片和盖玻片的清洁
1.载玻片和盖玻片清洗方法
(1)锅内倒入适量清洗液(100 mL水+30 m L洗洁精+30 mL 84消毒液);
(2)将玻片逐片放入锅中, 加热至沸腾10 min, 停止加热, 自然冷却;
(3)捞出玻片流水冲洗10min,彻底冲净泡沫(弹簧夹上后,单片过水);
(4)将玻片从水中取出, 用蒸馏水冲洗三遍(最好单片过水);
(5)将玻片放入 95%乙醇(分析纯)中浸泡;
(6)取出玻片,码在切片盒,自然干燥(或无风适度高温干燥)备用;
注意:由于盖玻片很薄,不能同载玻片放在一起处理;盖玻片从95%乙醇溶液中取出后要放在吸水纸上摊开,干燥后,放在小盒子中备用。

2.粘片剂(蛋白甘油)的制作及载玻片的预处理
(1)蛋白甘油的制作取新鲜鸡蛋,先将其尖端用眼科剪或拨针挑破一小孔,再将蛋的另一端挑破一小孔并稍加扩大,大孔端朝下,使蛋白流入100~200毫升的烧杯中(不要蛋黄),以玻棒打拌蛋白完全变为雪花状泡沫,然后倒入垫有几层纱布的漏斗中过滤而得到透明、清凉的的蛋白液,再加入等量甘油,振摇使之充分混合,加入1%麝香草酚或樟脑防腐。

一般将其盛入滴瓶或树胶瓶中备用,不用时盖好防尘。

或1个鸡蛋的蛋清+500mL双蒸馏水,混匀,加10mL浓氨水。

(2)将蛋白甘油倒在小烧杯中,载玻片用弹簧夹夹上后侵入蛋白甘油中,贴壁刮干,放在切片盒内晾干备用。

二、石蜡组织切片的制作
(一)取材
注意事项:
1.材料质量:材料必须新鲜,应争取在死后半小时内处理完毕。

2.取材体积:组织块力求小而薄(厚度不要超过5mm,以2mm最佳)
3.取材力度:取材器具锋利。

勿使组织块受挤压,切割时不可来回挫动。

夹取组织时,切勿猛压,以免挤压损伤组织。

取材时,组织块可稍大一点,以便在固定后,将组织块的不平整部分修去。

4.固定形状:固定尽量保持组织的原有形态新鲜组织经固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全变形。

为此可将组织展平,以尽可能雅持原形。

对神经、肌肉、皮肤组织等,则可将其两端用线扎在木片上或硬纸片上固定。

5.切向选择:选好组织块的切面应熟悉器官组织的结构并据此决定其切面的走向。

纵切或横
切根据观察目的而定。

6.材料冲洗:保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,先用生理盐水冲洗,然后再入固定液。

7.组织清除:切除(清除)不需要的部分特别是组织周围的脂肪等,应尽可能清除掉,以免影响以后的程序和观察。

(二)固定
1.固定液体积为固定组织的20倍为宜,在固定的初期,注意间断性的轻轻摇动。

2.固定时间,至少24h。

3.对肺组织
附件:双固定液即多聚甲醛—戊二醛混合固定液:(光镜和电镜均可)
(I)0.2M (mol/L),pH=7.4 PB(磷酸盐缓冲液)
每1升0.2M PB中含
NaH2PO4·2H2O (Mr= 156) …………………………… 3g
Na2HPO4·12H2O(Mr=358 ) ………………………… 29g
先加1种盐溶解后再加入另一种。

如果要求较高,可以灭菌。

(II)10%多聚甲醛溶液的配制
多聚甲醛10 g,加入100mL去离子水中,加1N氢氧化钠溶液5滴,水浴锅加热到70℃,边震荡边加入1N氢氧化钠溶液直至溶液澄清(约需5滴),冷却备用。

1N(=1mol/L)氢氧化钠溶液:4g氢氧化钠,溶于100mL去离子水,用硬质塑料广口试剂瓶装。

(III)2.5%戊二醛+2%多聚甲醛混合固定液 1L
10%多聚甲醛 200mL
25%戊二醛 100mL (如果为50%戊二醛时,用50mL)
0.2M PB 500mL
去离子水补致 1000mL
(三)修快和洗涤
1.修块之前(或之后),需要用自来水对组织块进行洗涤。

最好将块修好后,标记好,放在密闭的镂空铁盒中微流水冲洗。

一般新固定的组织冲洗6-8h,长期固定的组织24-48h。

2.修快厚度2-3mm X15mmX15mm。

修块的目的是为了,后面的包埋,特别要注意切向和切面问题,切面要平整,以方便在包埋时能立在纸盒中。

一定要至少保留将来的切片中至少能见到有一面为组织器官的被摸面,其他面如需要修整,最好取直角,方便展片。

(四)脱水
程序:50%酒精(1h)→70%酒精(1h或过夜)→80%酒精(45min)→95%酒精I(0.5h)→
95%酒精II(0.5h)→纯酒I(20min) →纯酒I(20min)
注意:(1)高于80%的酒精不能时间过长,否则组织易脆。

(五)透明
程序:纯酒-二甲苯(1:1)(20min)→二甲苯I(10-20min) →二甲苯II(10-20min)
注意:透明时间一般取短(10min),以组织块刚透明为宜。

(六)浸蜡
程序:石蜡(52-58℃)I(30min)→石蜡(52-58℃)II(30min)→石蜡(52-58℃)III(30min)
注意:(1)温箱温度一般高于蜡的熔点5℃,设定在65-70℃。

(2)蜡必须提前加热融化后,放入温箱内保温平衡2-4h。

(3)尽量将透明的二甲苯控净。

(七)包埋
1.切面向下,每个蜡块可以包2-4个组织,每个纸盒可以包多个蜡块。

2.先将热包埋蜡(可以加适当比例蜂蜡)倒入纸盒内,用小镊子摆好组织块,全过程有电热吹风机吹热分,以保证蜡处于融化态。

3.迅速冷却,等表面凝固后轻轻将蜡盒转移到冷水,加速凝固。

(八)切片、展片和烤片
1.修块:修成正方形、长方形或梯形,受刀面一定要平行,组织周围留约2 mm的石蜡边。

2.粘块:有时要将蜡块牢固地粘到小木块上,注意切面和受刀面平直。

如果气温高粘好块后,可以放在4℃冰箱里,先预冷。

3.刀要锋利,刀口要与切面(约25度角)和受刀面平行。

先20-50微米的粗切修面,然后调到5微米。

为连成带状,需要哈气,增加水汽表面张力,使切片展开。

毛笔转入干净硬纸上。

4.水浴40℃左右。

先用拨针将蜡片分开,光面贴水,在水浴中展开后拨去多余的蜡。

5.用载玻片(注意标记和记录)捞取组织,并调节到最佳位置。

一张载波片上可以放1-3块蜡片。

将玻片水平放在玻片板上,放在空气中或37℃烘箱内晾干。

6.烤片:60℃烤箱,30-60min烤片。

烤好的切片就可以进行下面的染色。

(十)染色
将烤好的切片,用弹簧夹夹好,(注意有组织面方向要朝向一面,边上的一块保证组织面向里。

常规石蜡切片HE染色程序简介
注意:二甲苯脱蜡和酒精脱水时,如果温度低可以考虑延长时间。

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