第十一章 紫外可见光谱
《紫外可见光谱》课件
发射光谱法
通过测量样品ห้องสมุดไป่ตู้射出的光谱，来分析样品中存在的 元素。
紫外可见光谱的仪器设备
1
分光光度计
常用的仪器，用于测量样品在不同波长
荧光光谱仪
2
下的吸收光强度。
用于测量样品发射的荧光光谱，可用于
化学分析和材料研究。
3
紫外可见光谱仪
专门用于测量紫外和可见光区域的样品 吸收或发射光强度。
总结和要点
1 紫外可见光谱用于分析物质的吸收或发射
《紫外可见光谱》PPT课 件
欢迎来到《紫外可见光谱》的课程！在本课件中，我们将介绍紫外可见光谱 的基本概念、原理和应用领域，以及分析方法和仪器设备。让我们一起探索 这个精彩的领域！
紫外可见光谱的基本概念
紫外可见光谱是一种测定物质吸收或发射可见光和紫外光的技术。通过测量样品在不同波长下的吸收或发射， 我们可以了解其化学特性和浓度。
紫外可见光谱的原理
1
电子跃迁
当分子或原子受到能量激发时，电子会跃迁到更高的能级。这种跃迁会导致特定 波长的光的吸收或发射。
2
光谱仪
紫外可见光谱仪用于测量样品在不同波长下吸收或发射的光强度，从而绘制出样 品的光谱图。
3
色谱图
通过分析光谱图中的吸收或发射峰，我们可以获得有关样品的化学特性以及浓度 的信息。
通过测量样品在不同波长下的光强度，我们可以获得有关样品化学特性和浓度的信息。
2 应用广泛
紫外可见光谱在药物分析、环境监测和食品安全等领域有着重要的应用。
3 各种分析方法和仪器设备
吸光度法、发射光谱法，以及分光光度计、荧光光谱仪和紫外可见光谱仪。
紫外可见光谱的应用领域
药物分析
紫外可见光谱原理
紫外可见光谱原理
紫外可见光谱是一种常用的分析技术，它利用物质对紫外可见光的吸收特性来
进行定性和定量分析。
在紫外可见光谱中，紫外光谱和可见光谱是两种不同的谱区，分别对应着不同的波长范围。
紫外光谱通常指的是波长在200-400纳米范围内的光谱，而可见光谱则是指波长在400-800纳米范围内的光谱。
紫外可见光谱的原理是基于物质分子的电子结构和能级跃迁规律。
当物质受到
紫外可见光照射时，部分分子中的电子会发生跃迁，从低能级跃迁到高能级，这个过程会吸收一定波长的光。
而吸收的波长与物质的分子结构和电子能级密切相关，因此可以通过检测物质对不同波长光的吸收情况来推断物质的成分和结构特征。
在紫外可见光谱仪中，光源会发出一定波长范围内的光，经过样品后，检测器
会测量透射光的强度。
通过比较样品前后光的强度差异，可以得到样品对不同波长光的吸收情况。
根据吸收峰的位置和强度，可以推断出样品中存在的化学成分以及它们的浓度。
紫外可见光谱在化学、生物、药物、环境等领域都有着广泛的应用。
在有机化
学中，可以通过紫外可见光谱来确定化合物的结构和纯度；在生物学中，可以用于蛋白质和核酸的定量分析；在药物研发中，可以用来监测反应过程和产品纯度；在环境监测中，可以用来检测水和大气中的污染物。
总的来说，紫外可见光谱原理简单易懂，操作方便快捷，是一种非常有用的分
析技术。
通过对样品吸收光谱的测量和分析，可以获取大量有关样品成分和结构的信息，为科研和生产提供重要的数据支持。
在今后的研究和实践中，紫外可见光谱技术将继续发挥重要作用，为不同领域的分析问题提供解决方案。
紫外可见吸收光谱法
紫外可见分光光度计的校正
当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移， 因此需要对其进行校正。 波长标度校正：
光源法校正：氘灯（486.00 nm；656.10 nm） 使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行
校正 吸光度标度校正： 采用 K2CrO4 标准液校正（在25oC时，于不同波长处测定 含0.0400g/L K2Cr2O7的0.05mol·L－1 NaOH溶液的吸光度A， 调整光度计使其A与标准值对应。
（带孤对电子的杂原子与其他π键共轭）
化合物
CH3COOH CH3CONH2 CH3N＝NCH3 CH3－NO2
CH3COCH3
饱和醛酮
max/nm
204 214 339 280 186 280 280～300
41 60 5 22 1000( n→σ*) 16 ( n→π*)
备注
在乙醇中 在H2O中 在乙醇中 在异辛烷中
第十一章 紫外可见吸收光谱法
Ultraviolet-visible Absorption Spectrometry
1
化妆品安全吗？
化妆品中含重金属并不罕见，不过加拿大近期一项对49个知 名品牌化妆品的测试结果还是足以令人大吃一惊，所有化妆品中 几乎都“潜伏”着砷、镉、铅等有毒物质。其中，倩碧的幻真控 油粉底液含有砷、铍、镉、镍、铅和铊6种有毒物质，睫毛膏 “Bare Naturale”，也被检测出含有和倩碧一样的6种有毒物。
和强度。
30
物质对光的选择性吸收
当光束照射到 物质上时，光与 物质发生相互作 用，于是产生反 射、散射、吸收 或透射，如图所 示。
31
物质对光的选择性吸收（1）
当一束光照射到物质或其溶液时，物质的分子、 原子或离子与光发生“碰撞”，光子的能量就转 移到分子、原子上，这些粒子由最低能态（基态） 跃迁到较高能态（激发态），这个作用叫物质对 光的吸收。 物质对光的吸收有选择性：
有机化学基础知识点紫外可见光谱与共轭体系的分析
有机化学基础知识点紫外可见光谱与共轭体系的分析在有机化学中，紫外可见光谱（UV-Vis光谱）是一种常用的分析方法，可以用于研究物质的电子结构和化学性质。
而共轭体系是有机分子中的一种特殊结构，具有很强的紫外可见光吸收性质。
本文将介绍紫外可见光谱的基本原理以及共轭体系在紫外可见光谱中的应用。
一、紫外可见光谱的基本原理紫外可见光谱是通过测量物质对紫外光和可见光的吸收来研究物质的电子结构和化学性质的方法。
根据分子的电子能级理论，当分子受到光的辐射作用时，电子会从基态跃迁到激发态。
而分子的激发态和基态之间的能量差正好对应紫外光和可见光的能量范围，因此可以通过测量物质对紫外光和可见光的吸收情况来获取有关分子的信息。
在紫外可见光谱中，常用的量化参数是吸光度（A），用来表示溶液或物质对光的吸收强度。
吸光度与物质的摩尔吸光系数（ε）、溶液的浓度（c）以及光程长度（l）有关。
根据比尔-估尔定律，吸光度与摩尔吸光系数、浓度和光程长度之间成正比关系。
二、紫外可见光谱中的共轭体系共轭体系是指分子中存在着连续的多个单键和双键的交替排列。
共轭体系中的π电子系统能够形成一个共轭π电子体系，具有较低的能量。
这使得共轭体系具有吸收紫外光和可见光的能力。
共轭体系中，当分子受到光的激发时，π电子会跃迁到更高的能级。
共轭体系的π电子能级分布与电子能带结构密切相关，可通过紫外可见光谱来研究和解释。
在共轭体系中，能级之间的跃迁能够产生吸收峰，吸收峰的位置与共轭体系的结构和电子密度分布有关。
通过对共轭体系的紫外可见光谱进行分析，可以得到很多有关分子结构和性质的信息。
例如，共轭体系的分子通常会表现出较大的摩尔吸光系数，即吸光度较高。
此外，共轭体系中的共轭程度越高，吸收峰的波长越长。
这使得紫外可见光谱成为研究共轭体系的有力工具。
三、共轭体系的应用共轭体系在有机化学和材料科学中具有广泛的应用。
通过对共轭体系的紫外可见光谱进行分析，可以研究和判断新合成的有机化合物的结构和性质，例如共轭聚合物、染料分子等。
第十一章紫外可见分光光度法第十一章紫外
第十一章紫外-可见分光光度法第十一章紫外-可见分光光度法第一节概述1．电磁辐射和电磁波谱在仪器分析中，根据物质发射的电磁辐射或物质与辐射的相互作用所建立起来分析方法，统称为光学分析法。
根据物质与辐射能间作用的性质不同，光学分析法又分为光谱法和非光谱法。
当物质与辐射能相互作用时，物质内部发生能级跃迁，根据能级跃迁所产生的辐射能强度随波长变化所得的图谱称为光谱(spectrum)。
利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光谱分析法(spectroscopic analysis)，简称光谱法。
光谱分析法从不同的角度分为不同的类别。
如按作用物是分子或原子，可分为分子光谱法和原子谱法；物质与辐射能间的转换方向(能级跃迁方向)，可分为吸收光谱法和发射光谱法；按辐射源的波长不同，可分为红外光谱法、可见光谱法、紫外光谱法、X-射线光谱法等。
非光谱分析法是物质受辐射线照射时，改变电磁波的传播方向、速度等物理性质所建立起来的分析方法。
这种方法不涉及能量转移和物质内部的能级跃迁，如折光分析法、旋光分析法、X-射线衍射法等。
2．物质对光的选择性吸收当辐射能通过某些吸光物质时，物质的原子或分子吸收与其能级跃迁相应的能量由低能态跃迁至较高的能态，这种由物质对辐射能的选择性吸收而得到的原子或分子光谱称为吸收光谱。
几种常用的吸收光谱是：原子吸收光谱、分子吸收光谱、核磁共振光谱等。
各种色光的波长范围在可见光中，紫色光的波长最短能量最大，红色光的波长最长能量最小。
除此之外，波长小于400nm 的光称为紫外光，波长大于760nm 的光称为红外光。
如果适当选配两种颜色的光按一定的强度比例混合，也可以获得白光，则这两种色光称为互补色光。
如图11-1所示，处于直线相连的两种色光互为补色光，如绿色光与紫色光互补，蓝色光与黄色光互补等等。
第二节 基本原理1．吸收光谱光照射某物质，物质能够吸收光，使原有的基态转为激发态，只有当分子红橙黄绿青青蓝蓝紫白光的能量(hν)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(∆E)相等时才能被吸收。
紫外可见光谱分析法PPT讲稿
• 具有共轭双键的化合物，相间的π键与π键形成大π键，由于大π键各能
级间距离较近，电子容易激发，吸收波长向长波长方向移动。
• （4）n→π＊跃迁 • 所需能量最低。 • 凡有机化合物中含有杂原子氮、氧、硫等同时又具有双键，吸收紫外
光后产生n→π＊跃迁，吸收带在200-400nm之间，为弱吸收，ε在10100之间。
• （2）n→σ＊跃迁 • 所需能量较大。 • 饱和碳氢化合物中氢被氧、氮、硫、卤素等取代后（单
键），其孤对电子 n较σ键电子易于激发，使电子跃迁所需 能量减低，吸收波长较长，一般在150-250nm范围内。
• （3）π→π＊跃迁 • 所需能量较小。 • 含有π电子的基团如烯类、炔类都能发生π→π＊跃迁，非共轭的π→π＊
ν——频率，Hz;
•
C——光速，3×1010cm·s-1;
•
λ——波长，nm。
•
二、光的种类
• 1、单色光和复合光 • 具有同一种波长的光，称为单色光。激光接近单色光。 • 含有多种波长的光称为复合光，例如日光、白炽灯光等。 • 2、可见光和互补光 • 凡是能被肉眼感觉到的光称为可见光，其波长范围为
标准系列
未知样品
光电比色法(分光光度法）
• 通过滤光片得一窄范围的光(几十nm)
光电比色计结构示意图
二、紫外-可见分光光度法的特点
• 1.具有较高的灵敏度和一定的准确度，适用于微量组分的测定。
• 2.适用范围广 • 近年来，由于分光光度法的选择性和灵敏度都有所提高，几乎所有的
无机物质和许多有机物质的微量成分都能用此法进行测定。
色团吸收峰向长波方向移动并提高吸收强度的一些官能团，称之为助 色团。
• 如—OH、—OR、—NH２、—NHR、—X等
紫外可见吸收光谱分析课件PPT
目录
• 引言 • 基础知识 • 紫外可见吸收光谱分析原理 • 实验技术 • 应用实例 • 展望与未来发展
01
引言
课程目标
掌握紫外可见吸收光谱的基本原理和应用 学会使用紫外可见分光光度计进行实验操作 了解光谱分析在各个领域的应用和前景
课程大纲
第一章紫外可见Βιβλιοθήκη 收光谱的基本原理化学计量学
紫外可见吸收光谱在化学计量学中用于多元校正和模型构建，提高分析的准确 性和可靠性。
在生物学研究中的应用
生物分子相互作用
利用紫外可见吸收光谱可以研究生物分子之间的相互作用和结合 方式。
蛋白质结构分析
通过对蛋白质的紫外光谱进行分析，可以推断蛋白质的二级结构。
生物活性物质检测
紫外可见吸收光谱用于检测生物活性物质，如维生素、氨基酸等。
定量分析
通过测量物质在特定波长下的吸光度，可以计算 物质的浓度或含量。
吸收光谱的应用
01
有机化合物的鉴定
02
金属离子的测定
03
生物大分子的研究
通过比较已知化合物的吸收光谱， 可以鉴定未知有机化合物的结构。
通过测量金属离子在特定波长下 的吸光度，可以测定金属离子的 浓度。
通过分析生物大分子在紫外可见 区的吸收光谱，可以研究其结构 和功能。
第二章
紫外可见分光光度计的原理及使用方法
第三章
实验操作及数据分析
第四章
光谱分析的应用及前景
02
基础知识
光的性质
01
02
03
光的波动性
光是一种电磁波，具有波 动性质，包括振幅、频率 和波长等特征。
光的粒子性
光同时具有粒子性质，光 子是光的能量单位，可以 与物质发生相互作用。
紫外可见光谱
-胡罗卜素
咖啡因 阿斯匹林
几种有机化合
物的分子吸收光 谱图。
丙酮
2、分子吸收光谱跃迁类型 可能的跃迁类型
有机分子包括：成键轨道：、 ；反键轨道：*、*；非键轨道：n
••••C••
o
O
o
o o
•= =
o=n
各轨道能级高低顺序： n**；
可能的跃迁：-*；-*；-*；n-*；-*；n-*
（3）含有杂原子的有机化合物
杂原子（O、N 、S、Cl等）上有未成键的电子容易被激发产生n—*
n—π*跃迁。
分子可产生的跃迁：
n—π*、n—*、 π—π*、π—*、 —π*、 —*
-*，-*，-* 和n-* 跃迁能量较高，跃迁产生的吸收
谱位于真空紫外区，在此不加讨论。
-*和n-*两种跃迁的能量小，相应波长出现在近紫外区甚
助色团（Auxochromous group） ：
含有孤对电子，可使生色团吸收峰移动并 提高吸收强度的一些官能团，称之为助色团。
红移或蓝移（Redshift or blueshift）：
在分子中引入的一些基团或受到其它外界因素影响， 吸收峰向长波方向（红移）或短波方向（蓝移）移动的 现象。
分子发生红移或蓝移的因素:
（1）饱和烃类化合物
饱和烃类分子中只含有б健电子，因此只能产生 --- *跃迁。 —*：C—H共价键，如CH4（125nm）；
C—C键，如C2H6 (135nm)，处于真空紫外区。
（2）不饱和烃类化合物
不饱和烃类分子中既有 键电子，又有π键电子，其电子能级图如图所示。
—* 和—*跃迁：所需能量比—*跃迁能量小，波长处于真空紫外区。
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Chapter 11Ultraviolet and VisibleSpectrophotometry2017/3/2219.1 紫外-可见吸收光谱9.2 吸收光谱的测量---Lambert-Beer 定律9.3 紫外-可见光度计仪器组成9.4 分析条件选择9.5 UV-Vis分光光度法的应用UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射的吸收特性。
UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160~780nm.UV-Vis主要用于分子的定量分析，但紫外光谱(UV)为四大波谱之一，是鉴定许多化合物，尤其是有机化合物的重要定性工具之一。
9.1 紫外-可见吸收光谱一、分子吸收光谱的形成✡1. 过程：运动的分子外层电子---吸收外来外来辐射---产生电子能级跃迁---分子吸收谱。
✡2. 能级组成：除了电子能级(Electron energy level)外，分子吸收能量将伴随着分子的振动和转动，即同时将发生振动(Vibration)能级和转动(Rotation)能级的跃迁！据量子力学理论，分子的振-转跃迁也是量子化的或者说将产生非连续谱。
因此，分子的能量变化∆E 为各种形式能量变化的总和：其中∆Ee 最大：1-20 eV; ∆Ev 次之：0.05-1 eV; ∆Er 最小：<0.05 eV 可见，电子能级间隔比振动能级和转动能级间隔大1~2个数量级，在发生电子能级跃迁时，伴有振-转能级的跃迁，形成所谓的带状光谱。
ννh *M h M t 0I I −→−−→−+rv e ΔΕΔΕΔΕΔΕ++=不同物质结构不同或者说其分子能级的能量(各种能级能量总和)或能量间隔各异，因此不同物质将选择性地吸收不同波长或能量的外来辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。
定性分析具体做法是让不同波长的光通过待测物，经待测物吸收后，测量其对不同波长光的吸收程度(吸光度A)，以吸光度A为纵坐标，辐射波长为横坐标作图，得到该物质的吸收光谱或吸收曲线，据吸收曲线的特性(峰强度、位臵及数目等)研究分子结构。
-胡罗卜素咖啡因阿斯匹林丙酮几种有机化合物的分子吸收光谱图。
二、分子吸收光谱跃迁类型有机分子能级跃迁1. 可能的跃迁类型有机分子包括:✡成键轨道σ、π；✡反键轨道σ*、π*✡非键轨道nC ⨯⨯∙∙∙∙∙∙O o o oo ∙=σ⨯=πo=n各轨道能级高低顺序：σ<π<n<π*<σ*；可能的跃迁类型：σ-σ*；σ-π*；π-σ*；n-σ*；π-π*；n-π*✡σ-σ*：C-H共价键，如CH4（125nm）；C-C键，如C2H6(135nm)，处于真空紫外区；✡σ-π* 和π-σ*跃迁：尽管所需能量比上述σ-σ*跃迁能量小，但波长仍处于真空紫外区；✡n-σ*：含有孤对电子的分子，如H2O(167nm)；CH3OH(184nm)；CH3Cl (173nm);CH3I(258nm)；(CH3)2S(229nm)；(CH3)2O(184nm) ;CH3NH2(215nm)；(CH3)3N(227nm)，可见，大多数波长仍小于200nm，处于近紫外区。
以上四种跃迁都与σ成键和反键轨道有关（σ-σ*，σ-π*，π-σ*和n-σ*），跃迁能量较高，这些跃迁所产生的吸收谱多位于真空紫外区，因而在此不加讨论。
只有π-π*和n-π*两种跃迁的能量小，相应波长出现在近紫外区甚至可见光区，且对光的吸收强烈，是我们研究的重点。
2. 几个概念：✡生色团（Chromogenesis group）：分子中含有非键或π键的电子体系，能吸收外来辐射时并引起n-π* 和π-π*跃迁，可产生此类跃迁或吸收的结构单元，称为生色团。
✡助色团（Auxochromous group）：含有孤对电子，可使生色团吸收峰向长波方向移动并提高吸收强度的一些官能团，称之为助色团。
✡红移或蓝移（Redshift or blueshift）：在分子中引入的一些基团或受到其它外界因素影响，吸收峰向长波方向（红移）或短波方向移动（蓝移）的现象。
促使分子发生红移或蓝移的因素1）共轭体系的存在---红移如CH 2=CH 2的π-π*跃迁，λmax =165~200nm ；而1,3-丁二烯，λmax =217nm2）异构现象：使异构物光谱出现差异。
如乙酰乙酸乙酯在溶液中存在酮式与烯醇式的平衡，烯醇式中的共轭双键使π-π*跃迁能量降低，λmax 红移至243nm.3）空间异构效应---红移如CH 3I(258nm), CH 2I 2(289nm), CHI 3(349nm) 4）取代基：红移或蓝移。
✡取代基为含孤对电子，如-NH 2、-OH 、-Cl ，可使分子红移；取代基为斥电子基，如-R ，-OCOR 则使分子蓝移。
✡苯环或烯烃上的H 被各种取代基取代，多产生红移。
5）pH值：红移或蓝移苯酚在酸性或中性水溶液中，有210.5nm及270nm两个吸收带；而在碱性溶液中，则分别红移到235nm和287nm（p-π共轭）.6）溶剂效应：红移或蓝移由n-π*跃迁产生的吸收峰，随溶剂极性增加，形成H 键的能力增加，发生蓝移；由π-π*跃迁产生的吸收峰，随溶剂极性增加，激发态比基态能量有更多的下降，发生红移。
随溶剂极性增加，吸收光谱变得平滑，精细结构消失。
无机物分子能级跃迁一些无机物也产生紫外-可见吸收光谱，其跃迁类型包括p-d 跃迁或称电荷转移跃迁以及d-d, f-f 跃迁或称配场跃迁。
✡1. 电荷转移跃迁(Charge transfer transition)一些同时具有电子予体(配位体)和受体(金属离子)的无机分子，在吸收外来辐射时，电子从予体跃迁至受体所产生的光谱。
✧εmax 较大(104以上)，可用于定量分析。
SCN Fe SCN Fe L M L M h b n h b n -−→−--−→−-++--+--+23)1()1(νν2. 配场跃迁(Ligand field transition)过渡元素的d 或f 轨道为简并轨道(Degeneration orbit)，当与配位体配合时，轨道简并解除，d 或f 轨道发生能级分裂，如果轨道未充满，则低能量轨道上的电子吸收外来能量时，将会跃迁到高能量的d 或f 轨道，从而产生吸收光谱。
吸收系数较小(102)，很少用于定max量分析；多用于研究配合物结构及其键合理论。
d轨道电子云分布及在配场下的分裂示意图无配场八面体场四面体场平面四面形场9.2 吸收光谱的测量-----Lambert-Beer 定律一、几个术语的入射光束(Incident beam) 通过装有均当强度为I匀待测物的介质时，该光束将被部分吸收，未被吸收的光将透过(Emergent)待测物溶液以及通过散射(Scattering)、反射(Reflection),包括在液面和容器表面的反射)而损失，这种损失有时可达10%，那么，I0=I e+ I s+I r +I a✪因此，在样品测量时必须同时采用参比池和参比溶液扣除这些影响！二、Lambert-Beer 定律 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A 与其浓度和液层厚度成正比，即✡k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。
当浓度以g/L 表示时，称k 为吸光系数，以a 表示，即 当浓度以mol/L 表示时，称k 为摩尔吸光系数，以ε表示，即ε比a 更常用。
ε越大，表示方法的灵敏度越高。
ε与波长有关，因此，ε常以ελ表示。
)1.4(kbcA =)2.4(abc A =)3.4(bcA ε=三、偏离L-B 定律的因素样品吸光度A 与光程b 总是成正比。
但当b 一定时，A 与c 并不总是成正比，即偏离L-B 定律！这种偏离由样品性质和仪器决定。
✡1. 样品性质影响a）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射的吸收能力发生变化--- 变化；b）试液中各组份的相互作用，如缔合、离解、光化反应、异构化、配体数目改变等，会引起待测组份吸收曲线的变化；c）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位臵产生影响；d）胶体、乳状液或悬浮液对光的散射损失。
2. 仪器因素仪器因素包括光源稳定性以及入射光的单色性等。
✡a ）入射光的非单色性：不同光对所产生的吸收不同，可导致测定偏差。
假设入射光由测量波长λx 和干扰λi 波长组成，据Beer 定律，溶液对在λx 和λi 的光的吸光度分别为：)4.4(lg )(0)(0bc i x x i x x x e I I bc I I A εε===或)5.4(lg )(0)(0bc i i i i i i i e I I bc I I A εε===或综合前两式，得❶当λx =λi 时，或者说当εx =εi 时，有A=εx bc , 符合L-B 定律；❷当λx ≠λi 时，或者说当εx ≠εi 时，则吸光度与浓度是非线性的。
二者差别越大则偏离L-B 越大；❸当εx >εi ，测得的吸光度比在“单色光”λx 处测得的低，产生负偏离；反之，当εx <εi ，则产生正偏离。
)6.4(1010lg lg )(0)(0)(0)(0)(0)(0bc i bc x i x i x i x i x I I I I I I I I A εε--++=++=b）谱带宽度与狭缝宽度：“单色光”仅是理想情况，经分光元件色散所得的“单色光”实际上是有一定波长范围的光谱带(即谱带宽度)。
单色光的“纯度”与狭缝宽度有关，狭缝越窄，它所包含的波长范围越小，单色性越好。
9.3 紫外-可见光度计仪器组成紫外-可见光度计仪器由光源、单色器、吸收池和检测器四部分组成。
一、光源对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。
✡1. 钨及碘钨灯：340~2500 nm，多用在可见光区；✡2. 氢灯和氘灯：160~375nm，多用在紫外区。
二、单色器(Monochromator)与原子吸收光度仪不同，在UV-Vis光度计中，单色器通常臵于吸收池的前面！（可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解）三、吸收池(Cell，Container)：用于盛放样品。
可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和可见光区；后者只适于可见光区。
有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。
四、检测器：硒光电池、PMT、PDA二、紫外可见光度计仪器分光光度计分为单波长和双波长仪器。
✡ 1. 单波长分光光度计单光束双光束（空间分隔）双光束（时间分隔）✡特点：因光束几乎同时通过样品池和参比池，因此可消除光源不稳产生的误差。
2. 双波长分光度计通过切光器使两束不同波长的光交替通过吸收池，测得吸光度差∆A 。
∆S B1和∆S B2分别为在λ1和λ2处的背景吸收，当λ1和λ2相近时，背景吸收近似相等。