盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的研制

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盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检验方法的简化与验证

“瘦肉精”是一种特定的可用来减少被饲养动物脂肪、增加其瘦肉比例的药物的俗称。

传统型瘦肉精一般是指β－受体激动剂，是一类人工合成的苯乙醇胺类物质，包括克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、异丙喘宁、氯丙那林、西马特罗与非诺特罗等，其中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺最为常见。

该类药物在动物性食品中的残留会对消费者的身体造成不同程度的影响，对于易感人群危害更为严重[1-2]。

2002年，β－受体激动剂被列入《食用动物禁用兽药及其他化合物清单》[3]。

现阶段，对β－受体激动剂和喹乙醇及其代谢物的检测方法较多。

刘佳等[4]建立了一种检测猪肝中26种β2-受体激动剂药物残留的反相液相色谱-串联质谱方法；金玉娥等[5]也采用液相色谱—串联质谱测定了猪肉和猪肝中11种β2-受体激动剂，上述检测方法取得了比较理想的结果。

但上述研究的前处理过程都比较复杂，一般包括酶解、提取、固相萃取的过程，比较费时费力。

GB/T 21313-2007[6]的检验方法中用高氯酸溶液进行提取，众所周知，高氯酸为强氧化易爆品，具有较高的危险性，在实验室使用具有较大的安全隐患。

本研究对GB/T 21313-2007的检验方法进行调整，用盐酸溶液代替高氯酸溶液进行提取，简化过柱净化程序，提高实验效率，降低上机液杂峰干扰。

1　材料与方法1.1　试验原理试样中β-受体激动剂残留经酶解后，再用盐酸溶液提取，经过滤和离心后，上清液用MCX固相萃取柱净化，液相色谱/串联质谱仪测定，外标峰面积法定量。

1.2　试验仪器液相色谱Agilent1200；二级串联质谱Agilent6410；万分之一分析天平；水浴锅。

1.3　试剂甲酸（99%）；乙腈，色谱纯；甲醇，色谱纯；乙酸，分析纯，乙酸钠（NaAc·4H2O）；盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液：准确称取0.010 0 g标准品（色谱纯≥99.5%），用甲醇溶解并定容至10 mL，即可得浓度为1 000 mg/L的标准储备液，-18 ℃保存，有效期12个月。

尿液中盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定—胶体金免疫层析法编制说明

广西地方标准《尿液中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定》（征求意见稿）编制说明1．任务来源根据广西壮族自治区质量技术监督局桂质监函[2010]342号文件，关于下达2010年第二批广西地方标准制定（修订）项目计划的通知，由广西兽药监察所承担《尿液中盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定—胶体金免疫层析法》（编号：2010-2032）地方标准制定工作，起草了征求意见稿，已完成大量的实验研究和验证工作。

现将征求意见稿的说明汇报如下。

2. 本标准制定的目的和意义盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇快速筛选检测常用的酶联免疫法（ELISA方法）由于对检测设备、环境条件、操作技能要求高，同时受检测周期长、小批量检测成本高等因素的限制，在基层推广应用较为困难。

快速检测卡（以下简称检测卡），是以胶体金技术和免疫层析技术相结合生产的一种简便、快速、准确，可进行现场操作的快速检测方法。

它利用抗盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇单克隆抗体、胶体金技术和免疫层析技术，不需要仪器和设备，在10 min内就能检测出结果，可以为畜产品质量安全监管提供方便、快速、低成本的检测方法。

3. 制定本标准的依据本标准编写格式上依据以下标准：GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则》GB/T2001.4-2001《标准编写规则第四部分：化学分析方法》4. 本标准主要技术内容盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇都属于ß-2兴奋剂，易溶于水。

本方法采用胶体金技术和免疫层析技术进行检测。

我们通过大量实验对检测卡的检测限，重现性，影响因素进行了实验, 盐酸克伦特罗检测限为3μg/L, 莱克多巴胺检测限为3μg/L, 沙丁胺醇检测限为5μg/L。

4.1检测卡最低检测限试验将不同浓度的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准液分为5组，每组10个样，各组浓度分别为2、3、4、5、6、7 ng/ml，分别用检测卡检测，实验室温度为24 ℃，相对湿度60%，10 min内观察结果（见表）。

检测盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的三联试纸卡[实用新型专利]

专利名称：检测盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的三联试纸卡
专利类型：实用新型专利
发明人：冯才伟,赵正苗,杨学林,扶胜,杨昌松,刘琳,李海静,尚朋朋
申请号：CN201320128922.1
申请日：20130320
公开号：CN203178284U
公开日：
20130904
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本实用新型提供了一种检测盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的三联试纸卡，其特征在于三联试纸卡是由三个试纸卡联排形成的，包括检测盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三种药物的三个试纸卡，能够快速同时检测β-兴奋剂盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇。

构成三联试纸卡的每个试纸卡包括底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫，结合物释放垫的部分区域覆盖于样品吸收垫之下。

本实用新型试纸卡样品吸收垫可以将检测液体充分吸收，与结合物释放垫上喷涂的金标抗体完全接触充分反应，再层析至反应膜上进行反应，可以有效的减少误差，操作简便快速、结果显示形象直观准确、成本低，灵敏度高。

申请人：北京勤邦生物技术有限公司
地址：102206 北京市昌平区回龙观国际信息产业基地高新四街8号
国籍：CN
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肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定

(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003.
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.025ng～2. 5ng
2 瘦肉精的测定方法
备注在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
2 瘦肉精的测定方法
2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法
(1) 原理：试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节PH值，沉淀蛋白质后离心，上清液用异丙醇-丁酸丁酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。 (2)实验方法与步骤：遵照GB-T22286-2008
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
1 瘦肉精知识概述
早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就发布公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克仑特罗和莱克多巴胺等7种 “瘦肉精”。
2008年，最高人民检察院、公安部规定新的刑事案件立案追诉标准，对使用“瘦肉精”养殖生猪，以及宰杀、销售此类猪肉的，将以生产、销售有毒、有害食品罪追究刑事责任。
2 瘦肉精的测定方法
2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)
(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003 如果采用快速检测卡，则根据检测卡操作要求开展检测。
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng

盐酸克伦特罗,莱克多巴胺,沙丁胺醇联合检测卡.

瘦肉精三联检测卡(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇联合检测卡说明书【简介】瘦肉精是一类人工合成的β-受体激动剂,根据结构差异分为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。

因该类药物可以提高瘦肉率,减少脂肪沉积和促进动物生长,被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。

人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后,残留的瘦肉精可引起食物中毒,牲畜产品中瘦肉精残留已成为公众关注的社会问题。

因此,世界许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精。

瘦肉精三联快速检测卡可同时测定猪尿中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇,提供生猪饲养时是否使用瘦肉精的依据。

【检测原理】瘦肉精三联快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂,可同时检测尿液样品中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三类瘦肉精。

具有简单、快速、无需特殊的仪器设备等特点,既可以在实验室进行,也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。

由于样本需要量少、简便快速、适用于大量样本的筛查。

结果准确,检测盐酸克伦特罗灵敏度为3ppb、莱克多巴胺灵敏度为5ppb、沙丁胺醇的灵敏度为10ppb,准确率大于95%。

【样品处理】尿液可直接用于检测。

若尿样呈浑浊状,需先用滤纸过滤或离心,取清亮部分用于检测。

【操作步骤】1、从检测卡袋中取出所需的检测卡,放置室温复温,在卡上做好样品编号标记。

2、用一次性取样滴头吸取样品,滴入加样孔,每孔3滴(75ul,在加液过程中勿使液体溢出加样孔。

3、5-10分钟内观察结果,15分钟后的结果无效。

【结果】对照线(C和检测线(T同时出线,表明尿液样品中【储存条件】1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存,忌冷冻。

2、在4-30℃下的环境温度操作。

3、有效期见包装盒侧面。

4、保存期间应避免光照、潮湿和过热。

检测卡保质期为12个月。

5、检测线T出现,产品失效。

【结果判断】泳道1:克伦特罗泳道2:莱克多巴胺泳道3:沙丁胺醇阴性(-:质控线出现、检测线清晰出现,表示样品中不含有瘦肉精或其浓度低于检测限。

瘦肉精双拼检测卡说明书(完整版)

盐酸克伦特罗-莱克多巴胺金标检测双拼卡使用说明书【产品简介】本产品运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技术进行动物尿样、组织和饲料中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺残留的快速定性检测，不需要任何仪器，整个检测过程只需要3-5分钟左右，灵敏度为盐酸克伦特罗：5 ng/mL（5 ppb），莱克多巴胺：5ng/mL（5ppb）。

【适用范围】适用于动物尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的测定。

检出限为盐酸克伦特罗：5 ng/mL（5 ppb），莱克多巴胺：5ng/mL（5ppb）。

【一、尿样收集】尿液标本必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。

若不能及时送检，尿样标本在2ºC-8ºC冷藏可保存48小时。

长期保存需冷冻于-20ºC，忌反复冻融。

【二、组织样本收集】组织样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。

若不能及时检测，样本在2-8℃冷藏可保存24小时，-20℃冷冻保存1周，冷冻时忌反复冻融。

将组织样本剪碎，称取0.5g 组织样本装入我公司提供的配套组织提取液中。

充分混匀，然后将离心管放入90℃以上沸水浴加热10min 便有液汁浸出，取出此离心管放至室温，（如条件具备，将离心管放入小离心机中，4000转离心5分钟后，取上清为待检液），如果没有离心机，需将离心管静置15分钟，此离心管中的样本渗出液为待检样品，检测时应尽量取上清液。

【试剂盒组成】1、瘦肉精双拼卡快速检测卡40根2、说明书1份3、一次滴管40根4、一次性手套5双【操作步骤】1．在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和尿样标本恢复至室温。

2．从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1小时内应尽快地使用。

3．将试剂盒置于干净平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加2-3滴无空气泡的尿样（约60ul-80ul）于加样孔(S孔)内。

4．结果应在3~5分钟读取，且30分钟内结果不会有任何改变，根据示意图判定结果。

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

（广东省食品质量安全重点实验室，华南农业大学食品学院，广东广州５１０６４２）
摘要：为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（ＣＬ）的胶体金免疫层析方法，用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金，将
其标记抗ＣＬ单克隆抗体，制备了金标抗体；以ＣＬ一人血清白蛋白（ＨＳＡ）为包被抗原、羊抗鼠ＩｇＧ为质控线二抗，制成胶体金试纸。
ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｌａｂｅｌｅｄＭＡｂ．ＴｈｅＣＬ－ｈｕｍａｎｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ（ＨＳＡ１ｎｄｇａｏａｔｎｔａｉ－ｍｏｕｓｅＩｇＧｗｅｒｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｏｎｔｈｅｌａｔｅｒａｌｌｆｏｗｍｅｍｂｒａｎｅｔｏ
优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和ｐＨ值等各项参数，最终确定胶体金粒径为１５ｎｌＴｌ、每毫升胶体金溶液中添加２０抗体、胶体金溶液ｐＨ值为７．４、金标抗体稀释液为添加０．１％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的０．０５ｍｏＵＬ磷酸盐缓冲液（ｐＨ７．４）、金标抗体喷涂量
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅａｒｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＣｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌ（ＣＬ），ｃｏｌｌｏｉａｌｄｇｏｌｄｗａｓ

盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测卡(试纸条)质量验证试验

中图分类号：８１４文献标识码：￥５．３Ａ
文章编号：０８０１（１）９０６－３１０ — ４４２１－０００００
摘要３前，－＂国内生产盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测卡（试纸
条）厂家众多，荆条的质量参差不齐，的试同一厂家不同批次的产品质量差异很大．致
理．严重的高温处理后出场较
５主要寄生虫病（颈囊尾蚴细
病鉴定与处理的细颈囊尾蚴又名细颈囊虫：俗称
水铃当、泡虫，寄生在犬及其他野水是
盐酸克伦特罗、克多巴胺、丁莱沙
胺醇检测卡（试纸条）由于具有灵敏度
（河南省鹤壁市畜产品质量监测检验中心，南鹤壁河
４８０）５００
猪肺疫、猪副伤寒等感染和背部冷热空气、械刺激等有关。的伴有皮肤机有
发红．此时应注意内脏和淋巴结的检验。理：处内脏和淋巴结有典型病变的
械性损伤引起的红膘肉．轻者不作处
患。如何在使用前进行质量验证是确保试纸条检测结果准确有效的重要手段。文章探讨了快速检测试纸条的质量验证试验，出三个验证参数 ” 测阅值、阴性率、阳提检假假性率” 。指出“ 测阈值 ” 个重要参数检是关键词试纸条质量验证方法

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假阳性率和假阴性率均为０。关键词：盐酸克伦特罗；莱克多巴胺；胶体金免疫层析；联检速测卡文章篇号：１６７３．９０７８（２０１３）１．１９７．２００
ＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＳｙｎｃｈｒｏｎｉｚａｔｉｎｇＲａｐｉｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈＣｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌａｎｄＲａｃｔｏｐａｍｉｎｅ
现代食品科技
ＭｏｄｅｒｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ，１
盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的研制
罗奕铭
（广州瑞森生物科技有限公司，广东广州５１１４００）
ＲＡＣ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｉｔｏｎｔｉｍｅｗａｓ３ｍｉｎａｎｄｉｎｔｒａ－ｎｄｉａｎｔｒ－ｅｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｙＷａｔｓ１００％．Ｆａｌｓｅｐｏｓｉｉｔｖｅｒａｔｅａｎｄｆａｌｓｅｎｅｇａｉｔｖｅｒａｔｅｓｗｅｒｅ０．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｌｎｂｅｕｔｅｒｏｌ；ｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅ；ｃｏｌｌｏｉａｌｄｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｉｔｏｎｃａｒｄ
ｗｅｒｅａｓｓｅｍｂｌｄａｅｎｄｃｕｔｉｎｔｏＡｒｔｉｃｌｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｌｔｕｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙｏｆｈｅｔｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｉｔｏｎａｒｔｉｃｌｅｗａｓ３ｎｇ／ｎ￣ｆｏｒＣＬＥＮａｎｄ５ｎｇ／ｍＬｆｏｒ
摘要：本文研究建立了一种检测盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的方法。应用胶体金免疫层析技术，采用柠檬酸钠还原
法制备胶体金颗粒，标记盐酸克伦特罗与莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上，盐酸克伦特罗与莱克多巴胺偶联ＯＶＡ抗原和羊
抗鼠ＩＵＧ分别结合于硝酸纤维膜上，依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡。试验结果表明，该联检圭测卡的灵敏度分别为ＣＬＥＮ３ｎｇ／ｍＬ、ＲＡＣ５ｎｇ／ｍＬ，检测时间为３ｍｉｎ，批内和批间重复陛为１００％，
ｃｏｍLeabharlann ｎｅｉｄｉｔｗｈｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅｍｅｍｂｒａｎｅｒｅｓｐｅｃｉｔｖｅｌｙ．Ｔｈｎ，ｅｈｅｔｓａｍｐｌｅｐａｄ，ｃｏｌｌｏｉａｌｄｇｏｌｄｐａｄ，ｉｔｎｒｃｅｏｌｌｌｏｕｓｅｍｅｍｂｒａｎｅｎｄａａｂｓｏｒｂｅｎｔｐａｐｅｒ
ＬＵＯＹｉ－ｍｉｎｇ
（ＧｕａｎｇｚｈｏｕＲｕｉｓｅｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１１４００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｍｅｔｈｏｄｏｆｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚａｔｉｎｇｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｉｔｏｎｗｉｔｈｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌａｎｄｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅｂｙｕｓｉｎｇｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｓｏｄｉｕｍｃｉｔｒａｔｅｒｅｄｕｃｉｔｏｎｆｏｒｐｒｅｐａｒａｉｔｏｎｏｆｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｐａｒｔｉｃｌｅｓ．Ｔｏｍａｒｋｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌｎｄａｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅｍｏｎｃｌｏｏｎａｌａｎｉｔｂｏｄｙ，ａｎｄｓｐｒａｙｅｄｏｎｇｌａｓｓ助％ｔｈｅａｎｉｔｇｅｎｏｆｃｌｎｂｅｕｔｅｒｏｌｎｄａｒａｃｔｏｐａｍｉｎｅｃｏｕｐｌｅｄＯＶＡｎｄａｓｈｅｅｐｎｔａｉ－ｍｏｓｅｕＩｇＧｗｅｒｅ
进入２１世纪以来，食品安全问题受到越来越多