癌胚抗原特异性寡核苷酸适配子的体外筛选及其意义

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寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用

寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用作者：邹雪梅周佳伟宋尚红陈冠华来源：《分析化学》2019年第04期摘要适配体是一类从随机寡核苷酸文库中筛选出来的可对特定靶分子具有高亲和性和特异识别性的单链短脱氧核糖核酸或核糖核酸序列。

自从指数富集配体系统进化（SELEX）的筛选方法问世以来，相继出现了各种基于SELEX的改进筛选方法，以及基于毛细管电泳分离手段的SELEX或非SELEX筛选方法。

作为类似于抗体作用的分子识别元件，适配体在与食品和环境安全相关的农兽药残留检测领域中已得到一定的应用。

在这些应用中，适配体通常与其它可以产生信号的材料如纳米金、量子点等构成复合探针，或与电化学电极等构成传感器。

本文对适配体的筛选方法以及适配体在农兽药残留检测中的应用进行了概括和总结，以期为该研究提供有益的参考。

关键词适配体; 筛选; 农兽药残留; 检测; 评述1 引言食品安全和環境问题被发达国家和许多发展中国家高度重视，各国制定了严格的强制性法规来强化对包括农兽药残留在内的各种有害物质的监管。

例如，美国规定在牛奶中不可检测出抗生素残留，欧盟限定了鸡蛋中四环素类抗生素的最大残留限量（MRL）为200 μg/kg。

因此，对食品和环境样品中农兽药残留进行有效快速检测始终是相应领域的重要研究课题。

适配体是一类从人工构建的随机寡核苷酸文库中筛选出来的单链短脱氧核糖核酸（ssDNA）或核糖核酸（RNA）序列，通常由20～80个碱基组成，库中寡核苷酸序列数可达1013～1015个。

适配体可以与靶分子高特异性、高亲和性结合，适配体与各类靶分子的解离常数可低至nmol/L～pmol/L水平，而高特异性则体现为适配体可以区分仅有一个甲基区别的两种靶分子，可被适配体识别的靶分子范围十分广泛，大的分子或者颗粒等包括疟疾诊断蛋白恶性疟原虫乳酸脱氢酶（PFLDH）[1]、穿孔素蛋白[2]等蛋白质，甚至是产肠毒性大肠杆菌k88[3]、金黄色葡萄球菌[4]等微生物，以及HepG2肝癌细胞[5]、AGS胃癌细胞[6]等细胞，小分子可包括一般意义上的各种小分子化合物，如双酚A[7]、L-色氨酸[8]、黄曲霉毒素[9]等。

寡核苷酸适配子在分析化学中的应用

寡核苷酸适配子在分析化学中的应用唐吉军邵宁生#谢剑炜*(军事医学科学院月份毒物药物研究所#基础医学研究所北京 100850)摘要指数富集配基的系统进化(SELEX)技术是一种新的组合化学技术，应用人工合成的随机寡核苷酸文库，通过筛选、分离、富集获得能与氨基酸、蛋白、药物、有机小分子、无机离子等靶物质特异性结合的寡核苷酸适配子，且具有高亲和力。

随着SELEX技术的发展，寡核苷酸适配子作为一种分析工具，在生物传感器、流式细胞检测、毛细管电泳、亲和色谱等分析化学领域的应用越来越广泛。

本文介绍了寡核苷酸适配子作为生物识别元件在生物传感器中的应用以及作为色谱固定相的应用。

关键词指数富集配基的系统进化适配子生物传感器毛细管电泳亲和色谱Applications of Oligonucleotide Aptamers in Analytical ChemistryTang Jijun, Shao Ningsheng#, Xie Jianwei*(Institute of Pharmacology Toxicology, #Institute of Basic Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850)Abstract Systematic Evolution of Ligand by Exponential enrichment (SELEX) is a new combinational chemistry methodology for in vitro selection of specific aptamers. Aptamers are artificial nucleic acid ligands that are capable of high-affinity binding to target molecules, such as amino acids, drugs, proteins and other small molecules or ions etc. They are isolated from combinational libraries of synthetic nucleic acid by an iterative process of adsorption, recovery and reamplification. The use of aptamers as tools in analytical chemistry is on the rise due to the development of the SELEX technology. These aptamers have been used in biosensors, flow cytometry, capillary electrophoresis, and affinity chromatography. In this review, were discussed the applications of aptamers as biocomponents in biosensors, and the applications of aptamers as chromatographic stationary phases.Key words SELEX, Aptamer, Biosensor, Capillary electrophoresis, Affinity chromatography上世纪90年代初，美国的Joyce[1]、Szostak[2]和Gold[3]三个研究小组分别报道了一种寡核苷酸体外筛选(in vitro selection)、扩增(amplification)技术，通过这项技术可以得到能与非核酸靶分子具有高亲和力、高特异性结合的寡核苷酸序列。

癌胚抗原是什么 (2)

癌胚抗原是什么引言癌胚抗原（Carcinoembryonic Antigen，简称CEA）是一种常见的肿瘤标志物，主要存在于胎儿组织和某些癌细胞中。

它是一种糖蛋白，属于细胞表面粘附分子的家族成员。

本文将对癌胚抗原的定义、结构、功能以及其在临床诊断和治疗中的应用进行详细介绍。

定义癌胚抗原最早是在1932年由Gold和Freedman在肠癌组织中首次发现。

它是一种由细胞外基质依赖性生长的肿瘤细胞分泌的蛋白质，以其在胎儿期上皮组织和恶性肿瘤组织中的表达而得名。

癌胚抗原的基因分布在人类基因组中的19号染色体上，它是一个复杂的基因家族，包含多个亚种。

结构癌胚抗原是一种糖蛋白，在结构上具有复杂性和多样性。

它由511个氨基酸残基组成，具有一个N端信号肽序列、一个胞外结构域、一个跨膜域和一个C端胞浆域。

胞外结构域是癌胚抗原的特征性部分，含有多个重复的基序。

这些重复基序的数量和序列差异导致了癌胚抗原的多样性。

功能癌胚抗原在正常生理条件下并没有明确的功能。

然而，在某些疾病条件下，癌胚抗原的表达显著增加。

在胚胎发育过程中，癌胚抗原在维持细胞间黏附、细胞迁移和细胞信号传导等方面发挥重要作用。

在癌症发展过程中，癌胚抗原的过度表达与细胞的侵袭、转移和血管生成等恶性行为密切相关。

临床应用癌胚抗原在临床上被广泛应用于肿瘤的早期筛查、诊断和评估疗效的监测。

通过检测患者的血清癌胚抗原水平可以辅助癌症的诊断和分期。

此外，癌胚抗原还常用于观察治疗效果、预测复发和预后，并作为一些特定癌症的治疗靶点。

然而，癌胚抗原作为肿瘤标志物并不具备100%的特异性和敏感性，因此单独的癌胚抗原水平并不能作为诊断肿瘤的唯一依据。

结论癌胚抗原是一种常见的肿瘤标志物，广泛应用于肿瘤的早期筛查、诊断和治疗的监测中。

它的结构复杂多样，具有重要的细胞黏附和信号传导功能。

然而，在临床应用中需要综合考虑其他临床检测指标，并结合病理学和影像学等信息进行综合判断。

未来，随着科学技术的发展，对癌胚抗原的深入研究将有助于提高癌症的早期诊断和治疗效果。

肝癌早期检测的生物标志物筛选与实验研究

肝癌早期检测的生物标志物筛选与实验研究肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其高度侵袭性和易转移性使之成为难治性疾病。

据统计，全球每年约有75万人死于肝癌，我国更是肝癌的高发地区之一。

与许多其他癌症一样，肝癌早期发现和治疗是预防和控制该疾病的关键。

因此，研究肝癌早期检测的生物标志物是当前的热点和难点问题之一。

生物标志物是指能够说明生物体内某种生理或病理状态的物质或指标。

在肝癌的早期检测中，生物标志物可以作为一个重要的参考。

目前，临床上用于肝癌早期筛查的生物标志物有AFP、PIVKA-II、ALT、AST、GGT、TB、ALB等。

然而，这些检测指标的特异性和敏感性都存在较大的局限，存在误诊和漏诊的风险。

在分子生物学技术不断更新的今天，通过对患者血液样本、组织样本和体液样本中生物标志物的高通量筛选，以发现能够早期和准确诊断肝癌的生物标志物，已成为研究的重点和热点。

以下将介绍目前常用的一些生物标志物筛选技术和肝癌生物标志物的研究情况。

一、基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量筛选生物标志物的方法，其通过分析组织或细胞中的RNA或DNA来获取分子水平的信息。

通过将数以万计的基因序列固定在一个晶片上，检测样本中的RNA或DNA与芯片上的基因序列的杂交程度，可以快速地得到许多生物标志物的表达情况，为寻找肝癌早期生物标志物提供了重要的依据。

目前，该技术已被广泛应用于肝癌的研究，如对比肝癌与正常肝组织的基因表达谱、对比不同肝癌患者的基因表达谱、对比肝癌早期与晚期患者的基因表达谱等。

例如，研究表明，在肝癌组织中，FAM19A4、TMEM106B、AP1S2、IGHG1等基因的表达显著下调，而DSC2、SLC25A13、KRT6C等基因的表达显著上调，这些基因可以作为评估肝癌预后和治疗效果的生物标志物。

二、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是一种用于分析大量蛋白质表达水平的高通量生物芯片技术。

该技术通过将数千个蛋白质固定在晶片上，将样本中的蛋白质与晶片上的蛋白质发生特异性的相互作用，以确定不同生物样本中的蛋白质表达量和表达模式，可以为肝癌早期诊断和治疗提供重要的生物标志物。

胃肠道癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸的检测及其临床意义

胃肠道癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸的检测及其临床意
义
胃肠道癌是世界上最常见的癌症之一，其通过肠道粘膜的组织形态和生物学行为的不同而被分类为多种类型。

虽然早期胃肠道癌可能没有症状，但当癌症扩散到淋巴结和其他器官时，就会产生类似消化系统疾病的症状，如胸痛、腹痛、食欲减退、消瘦等。

癌胚抗原（CEA）是一种具有胚胎发育表达特异性的蛋白质，是大肠癌患者的重要肿瘤标志物。

随着分子生物学和遗传学技术的不断发展，现在人们已经能够检测癌胚抗原信使RNA （CEA mRNA），从而提高胃肠道癌的早期发现率和诊断准确性。

在胃肠道癌中，CEA mRNA通常是在转录和翻译的过程中产生的。

在这个过程中，基因会转录成信使RNA，而信使RNA 则会进一步被翻译成蛋白质（癌胚抗原）。

因此，检测CEA mRNA水平可以提供更加精确的胃肠道癌诊断和治疗监测信息。

最近的一些研究证明，CEA mRNA的检测在胃肠道癌的诊断和治疗方面具有很高的诊断价值。

首先，CEA mRNA检测可以提高肿瘤早期诊断的精度，同时也可以检测到那些CEA水平较低的患者。

其次，CEA mRNA检测有助于胃肠道癌的分期和预后预测。

例如，当CEA mRNA的水平明显升高时，通常表明肿瘤可能
已经扩散到淋巴结和其他器官，并且其预后往往会更加不良。

此外，CEA mRNA可以在手术切除肿瘤之前检测到癌细胞的
存在，这可以帮助外科医生决定肿瘤的范围，提高手术切除率，从而提高治愈率。

总之，CEA mRNA的检测为胃肠道癌的早期诊断、分期、预
后预测和治疗监测提供了有力的手段，其检测还可以帮助患者和医生更好地决定治疗方案，避免不必要的治疗和手术切除。

肺癌患者血清特异性核酸适配体的筛选及鉴定

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MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究共3篇

MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究共3篇MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究1MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究肿瘤是人类面临的一大健康难题，目前治疗肿瘤的方法有很多，但由于肿瘤的复杂性和异质性，治疗效果并不理想。

因此，需要更有效的治疗方法来应对肿瘤。

靶向治疗是一种有前途的肿瘤治疗策略，它基于肿瘤细胞表面的特异性分子来实现特异性作用，从而避免影响正常组织和器官。

MUC1是一种重要的高分子糖蛋白，它在肿瘤细胞上过度表达，在正常组织中则很少表达。

因此，MUC1成为了肿瘤靶向治疗中的重要靶点。

MUC1核酸适配体是一种能够识别MUC1的锁定分子，是一种有潜力的靶向肿瘤治疗药物。

本文旨在介绍MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究。

MUC1核酸适配体的筛选MUC1核酸适配体研究的关键在于筛选出能够与MUC1高亲和力结合并实现特异性作用的核酸序列。

分子进化联合体（SELEX）是一种经典的核酸适配体筛选技术。

它基于核酸亲和力，通过循环筛选、放大等步骤，筛选出适合特定靶点的核酸适配体序列。

在MUC1核酸适配体的筛选中，首先要选择MUC1作为锁定分子，然后设计适合SELEX技术的实验方案，如选择适当的核酸库，筛选条件等。

在实验中，我们进行了多个循环筛选，逐步筛选出与MUC1高亲和力结合的核酸适配体。

通过质谱、荧光共振能量转移（FRET）等技术验证了所筛选出的核酸适配体序列的能力。

MUC1核酸适配体的初步应用研究在筛选出MUC1核酸适配体后，我们对其在靶向治疗肿瘤方面进行了初步应用研究。

实验中，我们将MUC1核酸适配体序列修饰到载荷纳米粒子上，然后将其加入肿瘤细胞培养基中，观察其对肿瘤细胞生长的影响。

实验结果显示，与未加入载荷纳米粒子的对照组相比，MUC1核酸适配体修饰的载荷纳米粒子更能够特异性地作用于过度表达MUC1的肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的增殖和转移。

癌胚抗原的实验报告

癌胚抗原的实验报告1. 引言癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA）是一种产生于癌胚组织及恶性细胞中的糖蛋白，广泛存在于许多癌症类型的细胞表面。

CEA在临床上常用作肿瘤标志物，用于辅助肿瘤的诊断、预测预后以及监测治疗效果。

本实验旨在确定CEA在肿瘤细胞株中的表达情况，并通过免疫组织化学染色和ELISA方法对其进行定性和定量分析。

2. 材料与方法2.1 实验材料- 人肺癌细胞株A549- 兔抗人CEA抗体- 辅助抗体：羊抗兔IgG-HRP- DAB染色盒- 免疫组织化学染色常用试剂- 细胞培养基- 96孔ELISA板- CEA标准品- 人CEA酶联免疫吸附试剂盒2.2 方法2.2.1 免疫组织化学染色1. 培养肺癌细胞株A549至密集细胞层，并用PBS洗涤细胞。

2. 使用PFA固定细胞片，冷冻切片。

3. 样品脱脂：用xylene处理、以乙醇递降浓度处理、最后用PBS洗涤。

4. 阻断非特异性结合：在切片上滴加5%的牛血清白蛋白，静置30分钟。

5. 兔抗人CEA抗体处理：将兔抗人CEA抗体稀释至适当浓度，在切片上滴加抗体，室温孵育2小时。

6. 三次PBS洗涤：每次5分钟。

7. 辅助抗体处理：将羊抗兔IgG-HRP稀释至适当浓度，并在切片上滴加。

室温孵育1小时。

8. 三次PBS洗涤：每次5分钟。

9. 使用DAB染色盒按说明书进行染色。

10. 用水清洗切片，封片后显微镜观察。

2.2.2 酶联免疫吸附实验（ELISA）1. 培养肺癌细胞株A549至密集细胞层，并在96孔ELISA板上接种细胞悬液。

2. 收集细胞上清液，离心去除细胞碎片。

3. 在ELISA板上设置标准品组和待测组。

4. 将标准品和待测样品加入板孔中，孵育一段时间后洗涤孔。

5. 加入辅助抗体孵育，再次洗涤。

6. 加入底物，反应一定时间后停止反应。

7. 用ELISA酶标仪测量吸光度。

3. 结果与讨论3.1 免疫组织化学染色结果通过免疫组织化学染色，观察到肺癌细胞株A549中CEA的表达情况。

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癌胚抗原特异性寡核苷酸适配子的体外筛选及其意义
王立峰，魏嘉，殷海涛，钱晓萍，禹立霞，刘宝瑞
（南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心南京大学临床肿瘤研究所，江苏南京２００）１０８
摘要：目的：通过体外筛选获得癌胚抗原（Ｅ特异性适配子，ＣＡ）为高表达ＣＡ肿瘤的靶向奠定基础。方法：ＣＡ特异性适配子，Ｅ通过配体介导的靶蛋白纯化实验检测经筛选的适配子与纯化蛋白结合；提取Ｌ１４Ｓ７Ｔ细胞总蛋白，免疫共沉淀检测经筛选的适配子与细胞总蛋白的结合。结果：经体外７轮筛选富集及筛选条件的优化，配体介导的靶标分离实验证实了筛选出的适配子与纯化ＣＡ蛋白Ｅ的结合；免疫沉淀及Ｗｅｔｌ证实了其识别并特异性结合天然状态的ＣＡ结论：ｓｍｂｏｅｔＥ。经过体外７轮筛选，证实了所获得的ＣＡ适配子可特异性地与纯化ＣＡ和天然状态的ＣＡ蛋白结合，ＥＥＥ为后续高表达的ＣＡ肿瘤的靶向诊断Ｅ
ｉｂｎｉｇｏｈｐａｒｔｈｕｆｄａｄｎｔｅｐｏｅｎｓｐａｅｙＲｅｕｔＷｅｏｔｉｅｈＥｃｉｄｎｆｔｅａｔｍｅｔｅｐｒｅｎａｉｒｔｉｅａｔｌ．ｏｉｉｖｒｓｌｓ：ｂａｎｄｔｅＣＡ—
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９３・０
第２０卷
第９期
医学研究生学报
ＪｕｎｌｏｄｃｌＰｓｇａｕｔｓｏｒａｆＭｅｉａｏｔｒｄａｅ
Ｖ１０ｏｏ２．Ｎ．９
Ｓｐ２０ｅ．０７
著・
２００７年９月
ｍｏｅｕｅｆｒｃｎｅａｇｔｔｅａｙａｄｉｇｎ．ＴｉａｅｃｓｓｏｈｃｅｎｎｆｈＥＡ－ｐｃｆｌｃｌｏａｃｒｔｒｅｈｒｐｎｍａｉｇｈｓｐｐｒｆｕｅｎｔｅｓｒｅｉｇｏｅＣｏｔｓｅｉｃｉ
和治疗奠定了初步的实验基础。
关键词：适配子；癌胚抗原；靶向治疗中图分类号：Ｒ３．３７０５文献标识码：Ａ文章编号：１０ —１９２０）９００－５０８８９（０７０－９３０
／／ｏｓｅｔｎｏｅｉｃｂｄｇＤＡａｔｒｔｈｍａｒｉｅｂｙｎｃｎｉｎｎｖｒｅｃｏｆｐｃｉｉＮ ห้องสมุดไป่ตู้ａｕｎｃｃｏｍｒｏｉａｔｅｔｌｉｓｆｎｎｉｍｅｏａｎｇ
ｔｅａｅｔｎｏｅｃｌｐｌａｉｓｄｒｇｔｅｐｓｄｃｄｓａｃｎｅｒｏｉａｔｅＣＡ）ｏｅｈｒｐｕｉａｄｃｍｍｒｉｐｉｔｎｕｎａｔｅａｅ．Ｃｒｉｏｍｂｙｎｃｎｉｎ（Ｅ，ｎｃａａｃｏｉｈｇｏｅｍｓｗｄｌｓｄｅｕａｍｏ—ｓｏｉｅｎｉｎ（Ａ，ａｅｎｃｎｉｅｅｓｎａｒｃｉｆｈｏｔｉｅｔｉｈｍｎｔｒｓｃａｄａｔｅｓＴＡ）ｈｓｅｏｓｒｄａｔａｔｅｔｙｕｄｕａｔｇｂｄａｔｖ
ＣａｎｅｎｔｔｏＮｎｎｎｅｉ，ａｉ１０８Ｊｎｓ，ｈａｃｒＩｉｅｓｔａｊｇＵｉｒｔＮｎｎ２００，ｉｇｕＣｉ）ｕｆｉｖｓｙｊｇａｎ
ＡｂｔａｔＯｊｃｖ：Ｇｖｎｍｎｄａｔｇｓｏｅｎｉｏｉ，ｔｅａｔｍｒｈｓｓｏｎｉｏｅｔｌｎｓｒｃ：ｂｅｔｅｉａｙａｖｎａｅｖｒｔｄｅｈｐａｅａｈｗｔｐｔｎｉｉｅａｂｓｓａｉ
ａｔｍｅｎｖｔｏ．Ｍｅｈｏｓ：ＳｖｎｒｕｄｆｉｉｏｓｌｃｉｎｗｅｅｐｅｆｒｄａａｎｔｔｅｐｒｆｄＣＥＡｐａｒｉｉｒｔｄｅｅｏｎｓｏｎｖｔｅｅｔｏｒｒｏｍｅｇｉｓｈｕｉｒｉｅｐｒｔｉＬｇｎｍｅａｅａｇｔｐｒｆｃｔｏｎＯｉｏｅｎ．ｉａｄ－ｄｉｔｄｔｒｅｕｉａｉｎａｄＣ－ｍｍｕｐｅｉｉａｉｎｗｅｅａｏｅｏｖｒｆｈｐｃｂｉｎｏｒｃｐｔｔｏｒｄｐｔｄｔｅｙｔｅｓｅｉｉ