LC-Q-TOF-MS
基于UPLC-Q-TOF-MS
·4437··论著·退行性疾病专题研究·基于UPLC-Q-TOF-MS/MS 结合网络药理学的壮腰通络方延缓腰椎间盘退行性病变的化学成分及作用机制研究孙凯1，朱立国1，2*，魏戌1*，银河1，李秋月1，秦晓宽1，杨博文1【摘要】 背景 壮腰通络方是临床治疗腰椎间盘退行性病变（LIDD）的有效方剂，但该方化学成分及具体作用机制尚不明确。
目的 明确壮腰通络方水提液中的主要化学成分，并进一步探讨其延缓LIDD 的潜在作用机制。
方法 2020年采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术分析壮腰通络方中的化学成分，并在此基础上采用网络药理学方法，获取基于质谱分析的壮腰通络方化学成分的作用靶点。
同时，通过疾病靶点数据库获得LIDD 疾病靶点。
采用韦恩图分析获得壮腰通络方治疗LIDD 的交集靶点。
通过STRING 11.0数据库获得交集靶点蛋白与蛋白互作（PPI）网络信息，并提取其网络中的核心靶点。
最后，对核心靶点进行基因本体论（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。
结果 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS 技术获得壮腰通络方中129种化学成分。
随后，将203个药物靶点与LIDD 疾病靶点映射共获得96个交集靶点。
PPI 分析发现丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT1）、胰岛素蛋白（INS）、白介素6（IL-6）、原癌基因蛋白（FOS）、胱天蛋白酶3（CASP3）等是核心靶点。
GO 富集分析确定了1 022条生物过程信息、28条细胞组成信息、51条分子功能信息。
KEGG 通路富集分析确定了98条相关信号通路，主要包括：HIF-1 signaling pathway、JAK-STAT signaling pathway、Relaxin signaling pathway、p53 signaling pathway、MAPK signaling pathway 等。
UPLC—Q—TOF／MS法分析鉴定对叶百部碱在大鼠体内的代谢产物
UPLC—Q—TOF／MS法分析鉴定对叶百部碱在大鼠体内的代谢产物目的：分析鉴定大鼠灌胃对叶百部碱后血浆、尿液和粪便中的代谢产物，阐明对叶百部碱的代谢途径。
方法：将大鼠随机分为空白组（0.3%羧甲基纤维素）与给药组（灌胃给予对叶百部碱，50 mg/kg），每组6只。
分别采集大鼠灌胃给药后0.25、0.5、1、2、4、6、12 h的血浆以及给药后0～12 h、12～24 h的尿液和粪便并制备样品，采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法和Triple TOFTM高分辨率质谱自带的软件联合分析、鉴定各样品中代谢产物的化学结构。
结果：从大鼠血浆中检测到4个化合物，包括1个原型化合物和3个代谢产物，在尿液中检测到4个代谢产物，在粪便中被检测到2个代谢产物，且代谢产物主要为Ⅰ相的水合代谢产物和羟基化代谢产物，未检测到Ⅱ相代谢产物。
结论：对叶百部碱灌胃后在大鼠体内主要经水合、羟基化等途径代谢。
ABSTRACT OBJECTIVE：To analyze and identify the metabolites of tuberostemonine in rats plasma，urine and feces，and to clarify metabolic pathway of tuberostemonine. METHODS：Rats were randomly divided into blank group （0.3% carboxymethyl cellulose）and medication group （tuberostemonine 50 mg/kg，i.g.），with 6 rats in each group. The plasma of rats was collected 0.25，0.5，1，2，4，6，12 h after intragastric administration to prepare samples. Urine and feces were collected 0-12 h and 12-24 h after administration to prepare samples. UPLC-Q-TOF/MS and software of Triple TOFTM high resolution mass spectrometry were used to analyze and identifiy chemical structure of metabolites in samples. RESULTS：A total of 4 compounds were detected in rat plasma，including one prototype compound and 3 metabolites. 4 metabolites were detected in urine and 2 metabolites in feces. Phase Ⅰmetabolites of tuberostemonine mainly included hydration and hydroxylation. Phase Ⅱmetabolites were not found. CONCLUSIONS：Hydration and hydroxylation are the major metabolic transformation forms of tuberostemonine in rats in vivo.KEYWORDS Tuberostemonine；UPLC-Q-TOF/MS；Metabolite；Identification百部为我国传统的常用中药材，始载于《名医别录》，2015版《中国药典》（一部）共收载有直立百部[Stemona sessilifolia（Miq）Miq.]、蔓生百部[Stemona japonica（BL）Miq.]和对叶百部（Stemona tuberosa Lour.）3个品种[1]。
基于UPLC-Q-TOF-MS
热带作物学报2022, 43(4): 693 702 Chinese Journal of Tropical Crops收稿日期 2021-08-24；修回日期 2021-12-02基金项目 国家自然科学基金青年科学基金项目（No. 31901649）；海南省重点研发计划项目（No. ZDYF2020218）；中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金（No. 1630142022009）。
作者简介 马之原（1997—），女，硕士，研究方向：食品加工与功能评价。
*通信作者（Corresponding author ）：朱科学（ZHUKexue ），E-mail ：*******************。
基于UPLC-Q-TOF-MS/MS 技术分析菠萝蜜多糖小鼠肠道代谢产物及代谢途径马之原1,2,3，陈玉子1,2,3，谭乐和1,3，张彦军1,3，吴 刚1,3，朱科学1,3*1. 中国热带农业科学院香料饮料研究所，海南万宁 571533；2. 华中农业大学食品科技学院，湖北武汉 430070；3. 海南省特色热带作物适宜性加工与品质控制重点实验室，海南万宁 571533摘 要：菠萝蜜在我国海南、广东、广西、云南、福建和台湾等地大量栽种，其果实营养丰富，含有糖类化合物、蛋白质、氨基酸、多酚、脂肪酸、维生素、矿物质等多种营养成分。
其中，菠萝蜜多糖是一类由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和半乳糖醛酸组成、分子量约为1668 kDa 的生物大分子；具有促进小鼠脾淋巴细胞增殖、提高免疫细胞抗氧化活性及诱导细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-1β分泌等生物活性；可被人体肠道菌群酵解利用，产生丰富的SCFAs 等代谢产物，有益于人体肠道健康。
然而，有关菠萝蜜多糖的肠道代谢鲜有报道，本文旨在利用UPLC-Q-TOF-MS/MS 技术研究菠萝蜜多糖的小鼠肠道代谢产物及其可能代谢途径。
健康小鼠分为4组：50 mg/kg 小鼠体重菠萝蜜多糖组（低剂量组）、100 mg/kg 小鼠体重菠萝蜜多糖组（中剂量组）和200 mg/kg 小鼠体重菠萝蜜多糖组（高剂量组）以及同等体积蒸馏水（空白对照组）。
LC—Q—TOF—MS及LC—IT—MS分析酸枣仁汤的化学成分
LC—Q—TOF—MS及LC—IT—MS分析酸枣仁汤的化学成分采用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）及液相色谱-离子阱质谱（LC-IT-MS）系统剖析了酸枣仁汤中化学成分。
色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18，Rapid Resolution HT（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）；以乙腈（A）-0.05%甲酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱；流速0.6 mL·min-1；柱温30 ℃。
共鉴定了酸枣仁汤中48个化合物，并对化合物的药材来源进行了归属，首次报道了方剂中的31个化合物。
LC-Q-TOF-MS结合LC-IT-MS可以简便、快速地对酸枣仁汤中化学成分定性分析，本研究结果为酸枣仁汤质量控制和药效物质基础研究提供了一定的理论依据。
标签：LC-Q-TOF-MS；LC-IT-MS；酸枣仁汤；化学成分目前对酸枣仁汤化学成分研究报道有LC-MS鉴定了27个化合物[9]和液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）鉴定了24个化学成分[10]。
为了更深入研究酸枣仁汤的化学物质基础，本文采用LC-Q-TOF-MS和高效液相色谱-离子阱质谱（LC-IT-MS）对酸枣仁汤中化学成分进行定性分析。
1 材料1.1 仪器LC-IT-MS系统：Agilent1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），配二元梯度泵、PDA检测器、柱温箱和自动进样器；Finnigan LCQ-DECA XPPlus离子阱质谱仪（美国Thermo公司），配电喷雾离子源及Xcalibur l.3控制系统；LC-Q-TOF-MS系统：AcquityTM ultra型高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；Triple TOF 5600+型飞行时间质谱，配有电喷雾离子源（美国AB SCIEX公司）；Eppendorf minispan离心机（德国Eppendorf公司）；METTLER TOLEDO XS105分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Agilent Zorbax SB-C18 Rapid色谱柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm），前置Agilent C18预柱；MilliPore超纯水器（美国Millipore公司）。
UPLC-Q-TOF-MS
第43 卷 第 4 期2024 年4 月Vol.43 No.4511~522分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO （Journal of Instrumental Analysis ）UPLC-Q-TOF-MS/MS 法分析鉴定鸡血藤中药复方提取物的化学成分谢灿辉1，贾德政1，胥爱丽2，邬旻珊1，肖观林2，毕晓黎2，张素中3，曹颖男3*（1．广州中医药大学 第五临床医学院，广东 广州 510405；2．广东省中医药工程技术研究院 广东省中医药研究开发重点实验室，广东 广州 510095；3．广州新华学院 药学院，广东 广州 510520）摘要：应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS ）技术定性鉴别鸡血藤中药复方提取物的化学成分。
采用Waters ACQUITY UPLC BEH C 18色谱柱（100 mm×2.1 mm ，1.7 µm ），以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，电喷雾离子源正、负离子模式扫描。
通过质谱数据库、化合物裂解规律，并结合相关文献进行鉴别。
共鉴别出82种化合物，以黄酮类、苯丙素类、萜类化合物为主，包括黄酮类22种、苯丙素类24种、萜类25种、酚酸类4种、甾体类6种、氨基酸类1种，各药材组成复方后首次发现的新化学成分有10种。
UPLC-Q-TOF-MS/MS 技术为鉴别鸡血藤中药复方中化学成分提供了简便、快速、准确的方法，鉴定得到的各个化学成分涵盖了组方中各味药材的主要成分，可为该复方的质量标准及药效物质研究提供实验依据和理论基础。
关键词：UPLC-Q-TOF-MS/MS ；鸡血藤中药复方提取物；化学成分；裂解规律中图分类号：O657.63；R282.6文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2024）04-0511-12Analysis of Chemical Constituents in Jixueteng Formula Extract byUPLC-Q-TOF-MS/MSXIE Can -hui 1，JIA De -zheng 1，XU Ai -li 2，WU Min -shan 1，XIAO Guan -lin 2，BI Xiao -li 2，ZHANG Su -zhong 3，CAO Ying -nan 3*（1．School of the Fifth Clinical Medicine ，Guangzhou University of Chinese Medicine ，Guangzhou 510405，China ；2．Guangdong Provincial Key Laboratory of Research and Development in Traditional Chinese Medicine ，Guangdong Provincial Engineering Technology Research Institute of T.C.M.，Guangzhou 510095，China ；3．School of Pharmcy of Guangzhou Xinhua University ，Guangzhou 510520，China ）Abstract ：The chemical components of the Jixueteng formula extract were qualitatively identified us⁃ing ultra -high performance liquid chromatography-quadrupole time -of -flight tandem mass spectrome⁃try （UPLC-Q-TOF-MS/MS ） technology. A Waters ACQUITY UPLC BEH C 18 chromatographic col⁃umn （100 mm×2.1 mm ，1.7 µm ） was employed ，with a mobile phase consisting of 0.1% formic ac⁃id solution-acetonitrile using a gradient elution. The flow rate was set at 0.3 mL/min and the column temperature at 30 ℃. MS analysis was based on electrospray ion source with positive and negative ion mode scanning. The identification of compounds was conducted through the mass spectrometry data⁃base ，compound fragmentation patterns ，and relevant literature. In this experiment ，a total of 82 compounds were identified ，mainly including flavonoids ，phenylpropanoids ，and terpenoids. Among them ，there were 22 types of flavonoids ，24 types of phenylpropanoids ，25 types of terpe⁃noids ，4 types of phenolic acids ，6 types of steroids ，and 1 type of amino acids. Additionally ，10 new chemical components were discovered for the first time when the herbal ingredients were com⁃bined to form a compound. UPLC-Q-TOF-MS/MS technology provides a convenient ，fast ，and ac⁃curate method for identifying chemical components in the Jixueteng formula extract. The identifieddoi ：10.12452/j.fxcsxb.23120738收稿日期：2023－12－07；修回日期：2024－01－31基金项目：2021年度广东省重点建设学科科研能力提升项目（2021ZDJS143）；2021年省属科研机构稳定性支持项目（粤财科教［2021］113号）；广州市科技计划项目（202102080588）∗ 通讯作者：曹颖男，博士，教授，研究方向：中药药理学，E -mail ：85394092@研究报告512分析测试学报第 43 卷chemical constituents can cover the main active ingredients of the herbal compound，providing exper⁃imental evidence and theoretical foundation for quality standardization and pharmacological researchof the compound.Key words：UPLC-Q-TOF-MS/MS；Jixueteng formula extract；chemical constituents；fragmen⁃tation pattern近年来癌症的发病率逐年上升，肿瘤的发生发展与机体的免疫功能低下密切相关。
布鲁克-LC-ESI-MS(Q-TOF)操作流程及注意事项
LC-ESI-MS(Q-TOF)操作流程及注意事项一、前期处理及注意事项1、流动相需现用现配且需是进口、色谱级，使用前需抽滤、超声至少30min排除气泡。
2、色谱柱需冲平(压力持平、无杂质信号峰）方可连接质谱。
3、样品使用前需用流动相稀释1-2次，且根据相似相容原理，流动相需与样品兼容（即样品在流动相中不沉淀析出。
）4、样品使用前需过膜以去除不溶性杂质。
5、浓度需稀释为普通液相的50-100倍，防止污染离子源。
6、流速最大0.2-0.4ml/min（流速过大会导致压力过高损坏仪器）。
二、软件功能1、Chromelon Xpress（变色龙软件）：编辑液相相关参数2、Otocontrol:编辑质谱参数及方法3、Hystar：将变色龙及Otocontrol兼容4、Compass DataAnalysis：数据处理软件5、Otof Acquisition Engine:数据采集三、操作步骤1、换流动相：A、C：水相；B、D：有机相。
2、排汽泡：打开1、Chromelon Xpress软件——〉Home（左上角第一个键）——〉connect——〉take control（断开液相与Hystar的连接，并将其与Chromelon Xpress连接，连接上后方可在变色龙软件操作）——〉HPG-3400RS（左偏上）——〉 purge(打开排汽泡开关，默认流速4ml/min).3、洗进样针、注射器、及缓冲循环器：Chromelon Xpress——〉Sampler——〉Start up——〉分别点击Prime syringe、wash Buffer loop、Wash Needle Externally下方的START键，系统开始自动清洗。
4、温度控制：Temperature control(根据实验需要设置)。
5、DAD：根据实验需要设置波长、温度、紫外、可见光控制器等。
6、设置方法7、冲洗色谱柱8、进样Note：为防止污染离子源，前5分钟液相管路不要与质谱连接）9、结束：断开液相与质谱的连接，禁止样品进入离子源10、冲洗色谱柱11、更换流动相（切记先将流速设为0，否则色谱柱会进气泡）12、让负责该仪器同学检查仪器、关掉液相模块，结束实验并用格式化的U盘拷贝数据。
UPLC-Q-TOF-MS
·方与药 ·福建中医药2023 年11 月第54 卷第11 期Fujian Journal of TCM November 2023，54（11）UPLC-Q-TOF-MS/MS法定性和HPLC法定量分析菟丝子饮片成分欧余航1*，张宽2，周菲1，许榕倩1，吴金栋1（1.福建中医药大学附属第三人民医院，福建福州 350108；2.福建中医药大学附属第二人民医院，福建福州 350003）摘要：目的分别采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）法和高效液相色谱（HPLC）法对菟丝子饮片成分进行定性与定量分析。
方法采用UPLC-Q-TOF-MS/MS法对菟丝子饮片成分进行定性分析，质谱条件：Acclaim UPLC RSLC 120 C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.2 µm）；流动相乙腈（A）-0.01%甲酸水溶液（B）；流速0.3 mL/min；进样量2 µL；柱温30 ℃；质电喷雾离子源（ESI）。
分别在正、负离子模式下采集数据，鉴定出分离度高、含量较大的成分。
并采用HPLC法进行定量分析，色谱条件：大连依利特Sino⁃Chrom ODS-BP C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 µm）；乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱；流速1 mL/min；紫外检测波长360 nm；柱温25 ℃。
结果UPLC-Q-TOF-MS/MS法鉴定出菟丝子饮片中5个分离度高、含量较大的成分，分别为绿原酸、咖啡酸、异槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷。
HPLC法定量分析上述5个成分分离度良好；具有较好的线性关系（r≥0.999 1），精密度、稳定性、重复性良好；加样回收率为98.31%～100.6%，RSD为1.36%～2.23%（n＝6）。
结论UPLC-Q-TOF-MS/MS法专属性好，HPLC法简便、可靠，可用于菟丝子饮片成分的定性分析与定量检测，为菟丝子饮片质量评价提供参考。
川芎吸收入脑成分的UPLC—Q—TOF—MS分析
川芎吸收入脑成分的UPLC—Q—TOF—MS分析目的：对大鼠灌胃川芎提取物后的吸收入脑成分进行分析鉴定。
方法：采用UPLC-Q-TOF-MS 对给药脑组织和空白脑组织进行分析，分析总离子流图寻找差异峰，然后根据保留时间、精确分子量、一级和二级质谱数据等鉴定差异峰。
结果：川芎提取物给药后，发现3个化合物能透过血脑屏障进入脑组织，经鉴定为洋川芎内酯I， A 和藁本内酯。
结论：本研究将有助于川芎药效物质基础的阐明。
标签：川芎；脑组织；化学成分；鉴定川芎为伞形科植物Ligusticum chuanxiong Hort干燥根茎，味辛，性苦温，入肝、胆、心包经，具有活血行气、祛风止痛之功效。
川芎辛香善升，能上行头目巅顶，是治疗头痛良药，尤以疗理风寒、风热、血虚之头痛著称，已在临床上得到广泛的应用[1]。
但是其治疗头痛的药效物质基础尚不明确，目前研究主要集中在阿魏酸和藁本内酯等单体化合物脑内含量的测定上[2-3]，仅袁莹等[4]探讨了川芎药效组分在靶组织脑脊液中的移行成分，结果发现洋川芎内酯I为川芎效应组分，是即入血又入脑的化学成分。
本研究从血清药物化学角度出发，以川芎为整体，分析并鉴定灌胃川芎提取物后吸收进入大鼠脑组织中的成分，为川芎治疗头痛药效物质基础的阐明提供一定依据。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂Agilent 1290 超高效液相色谱仪，Agilent 6520 Q-TOF 质谱仪。
乙腈（色谱纯，Fisher chemicals 公司）；甲醇（色谱纯，中国禹王公司）；冰醋酸（色谱纯，天津科密欧试剂）；Millipore 超纯水（美国Millipore 公司）。
川芎购于四川成都，由四川中医药科学院易进海教授鉴定为伞形科植物L. chuanxiong干燥根茎。
藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯I 由本实验室从川芎中分离制备得到，经HPLC峰面积归一化法计算纯度均在95%以上。
1.2 色谱和质谱条件色谱条件：Proshell C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，2.7 μm），柱温60 ℃。